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麥冬 組織培養 方法
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摘要
申請專利號:

CN200910049969.7

申請日:

20090424

公開號:

CN101869061B

公開日:

20120104

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 上海上房園林植物研究所
發明人: 陳建華,黃建榮,沈勤
地址: 201114 上海市閔行區浦江鎮浦江村
優先權: CN200910049969A
專利代理機構: 上??剖⒅恫ù磧邢薰? 代理人: 林君如
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200910049969.7

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及黑麥冬的組織培養方法,包括無菌材料的獲得,芽的分化和增殖,不定芽壯苗培養,生根培養,煉苗與移栽等步驟。與現有技術相比,本發明大大提高了黑麥冬的繁殖速度和苗的整齊度,并提高了其性狀的穩定性,可實現育苗的工廠化大批量生產。

權利要求書

1.黑麥冬的組織培養方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:(1)無菌材料的獲得春季取萌發的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺上,依次利用質量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s,體積濃度為0.5‰的汞浸泡10-30min,再用無菌水沖洗4-6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的節段,節段接種于芽誘導培養基上;(2)芽的分化和增殖節段接種于芽誘導培養基上2-4周后,腋芽部位開始膨大,出現綠色突起,4-6周后見芽分生組織,再培養1-3個月,小芽長到1-2cm,將小芽切下轉入芽的增殖培養基中進行增殖培養,小芽基部的愈傷組織較多,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化的不良現象,在培養基中生長發育良好;(3)不定芽壯苗培養在芽的增殖培養基上,誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長,其余的處于矮化狀態,將叢生芽分成小叢后,轉至壯苗培養基上生長,不定芽迅速伸長,30-45天后長至3-4cm;(4)生根培養取3-4cm的不定芽小植株,轉接入生根培養基中誘導生根,25-40天后幼苗基部分化出白色的根原基,40-60天后長至2-4cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為90-100%;(5)煉苗與移栽生根培養40-60天,根系長至2-4cm時,選擇根系發達、生長健壯的無菌苗,于室內開瓶煉苗1-4天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內的苗床中馴化20-40天,即移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為90-100%;所述的芽誘導培養基包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L;所述的芽的增殖培養基包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L;所述的壯苗培養基包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L;所述的生根培養基包括MS+NAA0.3mg/L。2.根據權利要求1所述的黑麥冬的組織培養方法,其特征在于,各培養基還分別包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L,培養基pH5.5-6.0,培養溫度24-26℃,光照1500-2500lx。

說明書

技術領域

本發明涉及一種植物的組織培養方法,尤其是涉及黑麥冬的組織培養方法。

背景技術

黑麥冬為百合科麥冬屬植物,原產于我國亞熱帶地區,生于山地、山谷的密林下潮濕處。葉片呈線形,頂端呈鈍狀或逐漸變尖,葉緣粗糙,葉片呈紫黑色,具有較高的觀賞價值。是一種良好的花鏡與地被材料。但是,作為新品種,黑麥冬引種數量較少,分株也較慢,因此種苗供應受到一定的限制。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速度和苗的整齊度,并提高性狀穩定性的黑麥冬的組織培養方法。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現:

黑麥冬的組織培養方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:

(1)無菌材料的獲得

春季取萌發的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺上,依次利用質量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s,體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min,再用無菌水沖洗4-6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0.5-2cm長的帶腋芽的節段,節段接種于芽誘導培養基上;

(2)芽的分化和增殖

節段接種于芽誘導培養基上2-4周后,腋芽部位開始膨大,出現綠色突起,4-6周后可見芽分生組織,再培養1-3個月,小芽可以長到1-2cm,將小芽切下轉入芽的增殖培養基中進行增殖培養,小芽基部的愈傷組織較多,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象,在培養基中生長發育良好;

(3)不定芽壯苗培養

在芽的增殖培養基上,誘導出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長,其余的處于矮化狀態,將叢生芽分成小叢后,轉至壯苗培養基上生長,不定芽迅速伸長,30-45天后可以長至3-4cm;

(4)生根培養

取3-4cm的不定芽小植株,轉接入生根培養基中誘導生根,25-40天后幼苗基部分化出白色的根原基,40-60天后可以長至2-4cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為90-100%;

(5)煉苗與移栽

生根培養40-60天,根系長至2-4cm時,選擇根系發達、生長健壯的無菌苗,于室內開瓶煉苗1-4天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內的苗床中馴化20-40天,即可移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為90-100%。

所述的芽誘導培養基包括MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。

所述的芽誘導培養基優選MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。

所述的芽的增殖培養基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.4mg/L。

所述的芽的增殖培養基優選MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述的壯苗培養基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。

所述的壯苗培養基優選MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。

所述的生根培養基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。

所述的生根培養基優選MS+NAA0.3mg/L。

所述的培養基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L,培養基pH5.5-6.0,培養溫度24-26℃,光照1500-2500lx。

與現有技術相比,本發明通過組培技術,極大提高了黑麥冬的繁殖速度和苗的整齊度,并提高了其性狀的穩定性,可實現育苗的工廠化大批量生產。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行詳細說明。

實施例1

(1)無菌材料的獲得

春季取萌發的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗1h后于超凈工作臺上,依次利用質量濃度為70%的乙醇浸泡10s,體積濃度為0.5‰的汞浸泡10min,再用無菌水沖洗4次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成0.5cm長的帶腋芽的節段,節段接種于包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽誘導培養基上;

(2)芽的分化和增殖

節段接種于芽誘導培養基上2周后,腋芽部位開始膨大,出現綠色突起,4周后可見芽分生組織,再培養1個月,小芽可以長到1cm,將小芽切下轉入包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養,小芽基部的愈傷組織較多,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象,在培養基中生長發育良好;

(3)不定芽壯苗培養

在芽的增殖培養基上,誘導出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長,其余的處于矮化狀態,將叢生芽分成小叢后,轉至包括MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的壯苗培養基上生長,不定芽迅速伸長,30天后可以長至3cm;

(4)生根培養

取3cm的不定芽小植株,轉接入包括MS+NAA0.1mg/L的生根培養基中誘導生根,25天后幼苗基部分化出白色的根原基,40天后可以長至2cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為90%;

(5)煉苗與移栽

生根培養40天,根系長至2cm時,選擇根系發達、生長健壯的無菌苗,于室內開瓶煉苗1天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內的苗床中馴化20天,即可移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為90%。

上述各種情況的培養基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L,pH=5.5,培養溫度24℃,光照1500lx。

實施例2

(1)無菌材料的獲得

春季取萌發的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗2h后于超凈工作臺上,依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡30s,體積濃度為1‰的汞浸泡15min,再用無菌水沖洗5次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成1cm長的帶腋芽的節段,節段接種于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的芽誘導培養基上;

(2)芽的分化和增殖

節段接種于芽誘導培養基上3周后,腋芽部位開始膨大,出現綠色突起,5周后可見芽分生組織,再培養2個月,小芽可以長到2cm,將小芽切下轉入包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養,小芽基部的愈傷組織較多,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象,在培養基中生長發育良好;

(3)不定芽壯苗培養

在芽的增殖培養基上,誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長,其余的處于矮化狀態,將叢生芽分成小叢后,轉至包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L的壯苗培養基上生長,不定芽迅速伸長,40天后可以長至4cm;

(4)生根培養

取4cm的不定芽小植株,轉接入包括MS+NAA0.3mg/L的生根培養基中誘導生根,30天后幼苗基部分化出白色的根原基,50天后可以長至4cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為100%;

(5)煉苗與移栽

生根培養50天,根系長至4cm時,選擇根系發達、生長健壯的無菌苗,于室內開瓶煉苗3天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內的苗床中馴化30天,即可移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為100%。

上述各種情況的培養基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L,pH=5.8,培養溫度25℃,光照2000lx。

實施例3

(1)無菌材料的獲得

取萌發的幼嫩的芽,去除外面包裹的葉片后,用自來水沖洗3h后于超凈工作臺上,依次利用質量濃度為75%的乙醇浸泡50s,體積濃度為1‰的汞浸泡30min,再用無菌水沖洗6次,利用無菌濾紙吸干芽表面的水分后,將芽切成2cm長的帶腋芽的節段,節段接種于包括MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L的芽誘導培養基上;

(2)芽的分化和增殖

節段接種于芽誘導培養基上4周后,腋芽部位開始膨大,出現綠色突起,6周后可見芽分生組織,再培養4個月,小芽可以長到1.6cm,將小芽切下轉入包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.4mg/L的芽的增殖培養基中進行增殖培養,小芽基部的愈傷組織較多,但不影響不定芽的增殖,不定芽生長迅速且無玻璃化等不良現象,在培養基中生長發育良好;

(3)不定芽壯苗培養

在芽的增殖培養基上,誘導出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長,其余的處于矮化狀態,將叢生芽分成小叢后,轉至包括MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L的壯苗培養基上生長,不定芽迅速伸長,45天后可以長至3.5cm;

(4)生根培養

取3.5cm的不定芽小植株,轉接入包括MS+NAA0.3mg/L的生根培養基中誘導生根,45天后幼苗基部分化出白色的根原基,60天后可以長至3cm,根系粗壯,須根眾多,生根率為93%;

(5)煉苗與移栽

生根培養60天,根系長至3cm時,選擇根系發達、生長健壯的無菌苗,于室內開瓶煉苗4天,然后將苗取出,洗凈根部的瓊脂,栽于溫室內的苗床中馴化40天,即可移栽室外,給予肥水管理,最終的移栽成活率為95%。

上述各種情況的培養基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L,pH=6.0,培養溫度26℃,光照2500lx。

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