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巴萨维戈塞尔塔直播: 人參皂苷RD透皮吸收滲透促進劑及其應用.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201110075514.X

申請日:

20110329

公開號:

CN102716487B

公開日:

20160309

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K47/22,A61K31/704,A61P9/00,A61P25/00,A61P25/04,A61P29/00,A61P37/02,A61K47/10 主分類號: A61K47/22,A61K31/704,A61P9/00,A61P25/00,A61P25/04,A61P29/00,A61P37/02,A61K47/10
申請人: 蘭州大學,廣東泰禾醫藥科技有限公司
發明人: 吳勇杰,程軍軍,劉霞,梁健儀,余劍橋,范富林
地址: 730000 甘肅省蘭州市東崗西路199號蘭州大學醫學校區
優先權: CN201110075514A
專利代理機構: 上海一平知識產權代理有限公司 代理人: 雷芳;祝蓮君
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201110075514.X

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了人參皂苷-Rd透皮吸收滲透促進劑及其應用。具體地,本發明公開了可有效促進人參皂苷-Rd透皮吸收的滲透促進劑及其組合,該滲透促進劑適用于制備人參皂苷-Rd的透皮吸收劑型或經皮吸收劑型。本發明還涉及含有所述滲透促進劑的人參皂苷-Rd的藥物制劑。

權利要求書

1.一種用于促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑,其特征在于,所述的滲透促進劑由氮酮、薄荷醇和月桂醇組成,且所述的滲透促進劑中各組分的含量如下:1-5重量份數的氮酮;0.5-10重量份數的薄荷醇;0.5-10重量份數的月桂醇。2.如權利要求1所述的滲透促進劑,其特征在于,所述的滲透促進劑中各組分的含量如下:1.5-4重量份數的氮酮;0.75-7.5重量份數的薄荷醇;0.75-7.5重量份數的月桂醇。3.一種物質的用途,所述物質由氮酮、薄荷醇和月桂醇組成,其特征在于,所述的物質被用于制備促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑或藥物組合物,其中,各組分的含量如下:1-5重量份數的氮酮;0.5-10重量份數的薄荷醇;0.5-10重量份數的月桂醇。4.一種藥物組合物,其特征在于,所述的藥物組合物含有(a)人參皂苷-Rd;(b)藥學上可接受的載體;和(c)權利要求1所述的人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑。5.如權利要求4所述的藥物組合物,其特征在于,所述的藥物組合物的劑型為透皮吸收劑型或經皮吸收劑型。6.如權利要求4所述的藥物組合物,其特征在于,所述的藥物組合物的劑型包括:軟膏、硬膏、貼劑、巴布劑、涂劑或氣霧劑。7.如權利要求4所述的藥物組合物,其特征在于,所述的滲透促進劑選自下組:(i)1.5-2.5wt%氮酮+2.5-7.5wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇;(ii)2-4wt%氮酮+0.5-2wt%薄荷醇+2.5-7.5wt%月桂醇;或(iii)2-4wt%氮酮+2-4wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇;以所述藥物組合物的總重量為基準計。8.一種制備人參皂苷-Rd的體外透皮吸收藥物的方法,其特征在于,所述的方法包括:向人參皂苷-Rd或含人參皂苷-Rd的制劑中添加權利要求1所述的滲透促進劑形成所述的藥物。

說明書

技術領域

本發明涉及藥物制劑技術領域,更具體地,本發明涉及人參皂苷-Rd透皮吸收滲透促進劑及其應用。本發明還涉及含有所述滲透促進劑的人參皂苷-Rd的藥物制劑。

背景技術

人參皂苷-Rd是從三七總皂苷中分離提取出來的單體,三七總皂苷是五加科植物三七的有效成分。人參皂苷-Rd還廣泛存在于五加科植物人參的根、花蕾、葉、蘆頭、莖中。同時人參皂苷-Rd也是二醇型人參皂苷在人體腸道內的主要代謝產物。

人參皂苷-Rd(GinsenosideRd)是四環三萜類衍生物,屬原人參二醇型皂苷。它的中文化學名為20-(S)-原人參二醇-3[O-β-D-吡喃葡萄糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷]-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,英文化學名為20(S)-Protopanaxadiol3-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranosyl]-20-O-β-glucopyranoside,分子式:C48H82O18·3H2O,相對分子量1001.20;外觀為白色至微黃色粉末,無臭,易溶于甲醇、乙醇、丙二醇及正丁醇,溶于丙酮、氯仿及熱水。主要理化常數為:熔點206-209℃,在甲醇介質中紫外吸收λmax=203nm。人參皂苷-Rd的結構式見圖1。

已有的研究表明,人參皂苷-Rd具有多種醫藥功效,其中包括:

(a)?;ば哪匝艿淖饔?。已通過微循環、血漿復鈣試驗證實人參皂苷-Rd是三七等中藥具有活血化瘀作用的有效成分。廣東泰和醫藥科技有限公司所做的藥效學實驗也證實,人參皂苷-Rd是一種血管平滑肌受體操縱Ca2+通道抑制劑,與三七總皂苷具有相同的作用靶點,即能通過受體操縱途徑特異性地阻斷受體操縱Ca2+通道,是活血化瘀藥的有效單體。動物實驗也表明,人參皂苷-Rd能明顯抑制高血壓腦血管重構,降低易卒中型自發性高血壓大鼠(SHR-SP)中風率及死亡率,?;つ韻赴?。

(b)免疫調節作用。人參皂苷-Rd可以顯著提高刀豆蛋白A(ConA)誘導的小鼠脾細胞白細胞介素-2(IL-2)、干擾素、IL-4和IL-10mRNA表達,表明人參皂苷Rd有免疫佐劑活性。動物試驗還證實人參皂苷-Rd有免疫抑制作用,能明顯抑制小鼠遲發型超敏反應、ConA誘導的人T淋巴細胞增殖及大鼠同種異體皮膚移植后的免疫排斥反應。

(c)抗炎作用。人參皂苷-Rd(100μg/ml)可以誘導環氧合酶COX-2的表達。動物試驗證實,人參皂苷-Rd靜脈和肌肉注射均有顯著的抗炎作用,能顯著抑制角叉菜膠引起的大鼠及小鼠足腫,使足腫脹度明顯下降。

(d)鎮痛作用。人參皂苷-Rd具有抗傷害性感受能力,并且呈現劑量依賴性關系,但不會影響到運動功能;且人參皂苷-Rd抗傷害性感受不被阿片受體阻斷劑納洛酮阻滯,說明其主要抑制化學成因疼痛,而對非阿片受體引起的熱痛無效。

(e)抗自由基作用。缺血再灌注體內外實驗中發現,人參皂苷-Rd可以?;は喙孛趕?,對氧化應激有抑制作用,具有抗氧化活性。已發現人參皂苷-Rd可以修復損壞的自由基清除系統,減少自由基誘導的損傷。

(f)神經系統?;ぷ饔?。人參皂苷-Rd對突變型模型神經干細胞球分化為星形膠質細胞有顯著的促進作用,從而?;ぶ惺嗌窬低?。此外,人參皂苷-Rd能夠改善運動系統功能,減小紋狀體損傷面積,具有神經?;ぷ饔?。

藥物應用于皮膚上后,穿過角質層,擴散通過皮膚,由毛細血管吸收轉運至局部靶組織或全身血液循環的過程稱為透皮吸收或經皮吸收。經皮給藥系統(transdermaldrugdeliverysystem,TDDS)一般是指經皮膚給藥而起全身治療作用的控釋制劑,是經皮給藥的新劑型,包括軟膏、硬膏、貼劑、巴布劑,還可以是涂劑和氣霧劑等。

經皮給藥系統具有超越一般給藥方法的獨特優點:(1)提高藥物在體內的預見性,可避免口服給藥可能發生的肝臟首過效應和藥物在胃腸道的降解,藥物吸收不受胃腸道影響,比口服給藥更穩定地直接進入血流,減少用藥的個體差異,也可減少藥物對胃腸道的刺激作用,提高制劑的生物利用度和治療效果;(2)一次給藥可以長時間使藥物以恒定速率進入體內,減少給藥次數,延長給藥間隔;(3)可按需要的速率將藥物輸入體內,維持恒定的血藥濃度,避免口服給藥等引起的血藥濃度峰谷現象,降低了毒副作用,是具有更好性能的藥物制劑;(4)使用方便,可以隨時中斷給藥,去掉給藥系統后,血藥濃度下降,減少了口服或注射給藥的危險性,特別適合于嬰兒、老人或不宜口服的病人。

但是,并不是所有的藥物都適于開發成經皮給藥系統,選擇經皮給藥所考慮的最主要因素是臨床的合理性。藥物在胃腸道的降解、通過肝臟的首過效應、生物半衰期短和需長期給藥等都是應考慮的因素。其次,由于皮膚(特別是角質層)對藥物透皮吸收的屏障作用,除了少數劑量小和具有適宜溶解性的小分子藥物,大部分藥物的透皮速率都滿足不了治療要求,因此克服皮膚屏障作用,提高藥物的透皮速率,促進藥物在一定時間內透皮滲透達到治療量也是開發經皮給藥系統的關鍵。

促進藥物經皮滲透主要是通過提高藥物通過皮膚的能力、降低皮膚的屏障性能和利用微粒載體幫助藥物穿透皮膚等途徑而實現的。根據不同藥物,促進藥物經皮滲透的方法有多種,但主要有:(1)滲透促進劑法;(2)超聲波滲透法;(3)離子電滲法。

應用滲透促進劑是目前研究最多的降低皮膚屏障性能的方法。滲透促進劑是指能夠透入皮膚降低藥物透過皮膚阻力的材料,作用原理可能是通過增加類脂骨架無序性二增加皮膚的非均勻性,打開新的滲透途徑。

理想的滲透促進劑應具備的條件包括:(1)對皮膚及機體無藥理作用、無毒、無刺激性及無過敏反應;(2)起效快,應用后立即起作用,具有預期作用時間,能可逆地降低皮膚的屏障性能,而又不損害皮膚的其它功能,去除后皮膚能恢復正常的功能;(3)不引起體內營養物質及水分通過皮膚損失;(4)理化性質穩定,與制劑中所有組分不出現配伍禁忌;不與藥物及其他附加劑產生物理化學作用;(5)無色、無臭、無刺激性氣味。

滲透促進劑種類繁多,化學結構不同,對不同有效成分的促滲透作用也不相同。例如,尿素是一種常用的滲透促進劑。已報道,1%尿素可使氟比洛芬經皮滲透速率提高1.1倍(田薇,王茂義,楊亞惠,等.促滲劑對布洛芬透皮吸收速率的影響.中國醫藥工業雜志,1996;27(4):161-162)。

目前,雖然人參皂苷-Rd的藥物組合物有多種劑型,常見劑型是口服劑型和注射劑型。然而,這些劑型也存在一些缺點。

例如,人參皂苷-Rd臨床現有制劑只有注射劑,規格較小,僅10mg/支,且限制于靜脈滴注,不能直接靜脈注射給藥。肌肉注射刺激性大,且有一定副作用。此外,人參皂苷-Rd作為三七中活血化瘀藥的有效成分,主要用于腦出血、腦血栓形成、腦梗塞等腦血管疾病的治療。若人參皂苷-Rd用于腦梗塞等腦血管疾病的治療,靜脈滴注給藥途徑只能用于此類疾病的急性期,而在疾病的預防和恢復期,靜脈滴注的給藥方式難以長期應用。

此外,對于口服而言,研究表明,三七提取物及人參皂苷-Rd等18種單體純品對大鼠灌胃,發現結腸內有大量脫糖基皂苷存在,血漿中的主要皂苷是Ra3、Rb1和Rd,但血漿中藥物濃度很低,平均口服生物利用度僅0.1%-0.2%(LiuHF,etal.AbsorptionanddispositionofginsenosidesafteroraladministrationofPanaxnotoginsengextracttorats.DrugMetabDispos,2009;37:2090-8)。因此人參皂苷-Rd口服生物利用度低,不宜通過口服途徑給藥治療全身性疾病。

經皮給藥制劑具有超于一般給藥方法的獨特優點,可以避免口服給藥生物利用度低和注射給藥的一系列問題,而且可以長期給藥,尤其適用于腦血管疾病預防和恢復期的長期治療,但是,目前本領域未見令人滿意的透皮吸收或經皮吸收劑型。

因此,本領域迫切需要開發新的能夠有效通過透皮給藥或經皮給藥的人參皂苷-Rd的制劑。

發明內容

本發明的一個目的就是提供適用于制備人參皂苷-Rd經皮給藥制劑的滲透促進劑及其組合。

本發明的另一個目的就是提供有效的人參皂苷-Rd經皮給藥制劑或透皮給藥制劑的制備方法。

本發明的另一個目的就是提供有效的人參皂苷-Rd經皮給藥制劑或透皮給藥制劑及其應用。

在本發明的第一方面,提供了一種人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑,其中所述的滲透促進劑選自下組:氮酮、薄荷醇、月桂醇或其組合。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑含有氮酮、薄荷醇、月桂醇中的兩種或三種物質。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑同時含有氮酮、薄荷醇和月桂醇。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑中各組分的含量如下:

0-10重量份數的氮酮;

0-15重量份數的薄荷醇;

0-15重量份數的月桂醇;

附加條件是至少一種組分的含量不等于0重量份數。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑中各組分的含量如下:

1-5重量份數的氮酮;

0.5-10重量份數的薄荷醇;

0.5-10重量份數的月桂醇。

在本發明的第二方面,提供了一種物質的用途,所述物質選自下組:氮酮、薄荷醇、月桂醇或其組合,其中所述的物質被用于制備促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑或藥物組合物。

在本發明的第三方面,提供了一種藥物組合物,所述的藥物組合物含有(a)人參皂苷-Rd;(b)藥學上可接受的載體;和(c)本發明第一方面中所述的人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑。

在另一優選例中,所述的藥物組合物的劑型為透皮吸收劑型或經皮吸收劑型。

更佳地,所述的藥物組合物的劑型包括:軟膏、硬膏、貼劑、巴布劑、涂劑或氣霧劑。

在另一優選例中,所述的藥物還含有丙二醇作為人參皂苷-Rd的藥物溶媒。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑選自下組:

(i)1.5-2.5wt%氮酮+2.5-7.5wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇;

(ii)2-4wt%氮酮+0.5-2wt%薄荷醇+2.5-7.5wt%月桂醇;或

(iii)2-4wt%氮酮+2-4wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑選自下組:

(i)1.5-2.5體積%氮酮+2.5-7.5wt%薄荷醇+0.5-2體積%月桂醇;

(ii)2-4體積%氮酮+0.5-2wt%薄荷醇+2.5-7.5體積%月桂醇;或

(iii)2-4體積%氮酮+2-4wt%薄荷醇+0.5-2體積%月桂醇。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑選自下組:

(i)2體積%氮酮+5重量%薄荷醇+1體積%月桂醇;

(ii)3體積%氮酮+1重量%薄荷醇+5體積%月桂醇;或

(iii)3體積%氮酮+3重量%薄荷醇+1體積%月桂醇。

在本發明的第四方面,提供了一種提高人參皂苷-Rd或含人參皂苷-Rd的制劑中的人參皂苷-Rd的體外透皮吸收的方法,所述的方法包括:向人參皂苷-Rd或所述制劑中添加選自下組的滲透促進劑:氮酮、薄荷醇、月桂醇或其組合。

在另一優選例中,所述的制劑是藥物制劑,更佳地所述的制劑包括:軟膏、硬膏、貼劑、巴布劑、涂劑或氣霧劑。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑選自下組:

(i)1.5-2.5wt%氮酮+2.5-7.5wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇;

(ii)2-4wt%氮酮+0.5-2wt%薄荷醇+2.5-7.5wt%月桂醇;或

(iii)2-4wt%氮酮+2-4wt%薄荷醇+0.5-2wt%月桂醇。

在另一優選例中,所述的滲透促進劑選自下組:

(a)2體積%氮酮+5重量%薄荷醇+1體積%月桂醇;

(b)3體積%氮酮+1重量%薄荷醇+5體積%月桂醇;

(c)3體積%氮酮+3重量%薄荷醇+1體積%月桂醇。

在本發明的第五方面,提供了一種由氮酮、薄荷醇和月桂醇構成的混合物,所述混合物中各組分比例如下:

1-5重量份數的氮酮;

0.5-10重量份數的薄荷醇;

0.5-10重量份數的月桂醇。

在另一優選例中,所述的混合物中各組分如下:

1.5-4重量份數的氮酮;

0.75-7.5重量份數的薄荷醇;

0.75-7.5重量份數的月桂醇。

在另一優選例中,所述的混合物的配方如下:

(a)2體積份數氮酮+5重量份數薄荷醇+1體積份數月桂醇;

(b)3體積份數氮酮+1重量份數薄荷醇+5體積份數月桂醇;

(c)3體積份數氮酮+3重量份數薄荷醇+1體積份數月桂醇。

在本發明的第六方面,還提供上述混合物的用途,它被用于制備促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的藥物組合物;或者用于制備或用作促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑。

在本發明中,當1重量份數=1克時,則1體積份數=1毫升。因此,1體積份數氮酮可對應于1毫升氮酮,1重量份數薄荷醇可對應于1g薄荷醇,而1體積份數月桂醇可對應于1毫升月桂醇。其他各重量份數或體積份數可依次類推。

應理解,在本發明范圍內中,本發明的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合,從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅,在此不再一一累述。

附圖說明

圖1顯示了人參皂苷-Rd的化學結構。

圖2顯示了人參皂苷-Rd的標準曲線。

圖3顯示了溶劑(甲醇/生理鹽水,1/1,v/v)的HPLC圖。

圖4顯示了人參皂苷-Rd在溶劑(甲醇/生理鹽水,1/1,v/v)中的HPLC圖。

圖5顯示了不加滲透促進劑時接受液的HPLC圖。

圖6顯示了滲透促進劑為2%氮酮時接受液中人參皂苷-Rd的HPLC圖。

圖7顯示了滲透促進劑為3%薄荷醇時接受液中人參皂苷-Rd的HPLC圖。

圖8顯示了滲透促進劑為3%月桂醇時接受液中人參皂苷-Rd的HPLC圖。

圖9顯示了滲透促進劑2%氮酮單用和聯合應用(2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)促進人參皂苷-Rd體外經皮滲透吸收的曲線。

圖10顯示了本發明一個實例中,人參皂苷-Rd貼劑制備工藝I的流程圖。

具體實施方式

本發明人經過廣泛而深入的研究,考察和篩選了各種不同種類的滲透促進劑以及滲透促進劑聯合應用對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響,篩選出了能夠有效促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的滲透促進劑,并且確定了滲透促進效果最好的滲透促進劑組合。在此基礎上完成了本發明。

具體地,本發明人采用改良的Franz擴散池,在體外透皮吸收試驗裝置上,以離體小鼠皮膚為滲透屏障,生理鹽水為接收液,高效液相色譜法測定各時間點接受液中人參皂苷-Rd的含量,考察不同種類滲透促進劑以及滲透促進劑聯合應用對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響。

與對照比較,5%松節油、3%丁香油、5%N-甲基吡咯烷酮、1%尿素、3%冰片沒有滲透促進作用,2%氮酮、3%薄荷醇、5%月桂醇對人參皂苷-Rd體外透皮吸收有較好的促進作用,促進強度依次為2%氮酮>3%薄荷醇>3%月桂醇。

此外,氮酮、薄荷醇、月桂醇以一定比例組合時,可以提供更佳的促進滲透作用。例如,將這三種滲透促進劑以一定百分濃度聯合應用(2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇、3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇或3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇)時,可產生協同促進作用。2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇組合、3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇組合以及3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇組合,12h時單位面積累積滲透量分別為3404.18μg/cm2、2832.54μg/cm2、2932.53μg/cm2。

為了驗證,本發明采用角叉菜膠所致小鼠足腫脹的急性非感染性炎癥模型,觀察人參皂苷-Rd經皮吸收給藥的抗炎作用。即以聚丙烯酸酯EUDRAGITE100為壓敏膠、2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇為滲透促進劑,配以交聯劑(琥珀酸)、增塑劑(葵二酸二丁酯),制備人參皂苷-Rd貼劑,并采用角叉菜膠誘發小鼠足腫脹模型,設立模型對照組,陽性對照組,人參皂苷-Rd肌肉注射組以及人參皂苷-Rd經皮給藥組,考察人參皂苷-Rd經皮吸收給藥的抗炎活性。

結果表明,人參皂苷-Rd肌肉注射(小鼠劑量為50mg/kg)和經皮吸收給藥(小鼠劑量約為1mg/只,50mg/kg)均能顯著抑制角叉菜膠誘發的小鼠足腫,腫脹抑制率分別為41.49%和26.78%,與模型對照組比較,均有顯著性差異)(P<0.01)。因此,人參皂苷-Rd經皮吸收給藥與肌注給藥一樣,均是有效的,均具有顯著的抗炎作用。

主要成分

如本文所用,術語“氮酮”指1-正十二烷基氮雜環庚-2-酮,分子式:C18H35NO,分子量約281,外觀為無色透明油狀液體。比重為約0.904-0.914。

如本文所用,術語“月桂醇(laurylalcohol)”指1-十二烷醇,分子式C12H26O,其分子量約186。淡黃色油狀物或低熔點固體。有特殊氣味,比重0.8309(24/4℃),熔點24℃,沸點259℃,不溶于水,溶于乙醇、乙醚。

如本文所用,術語“薄荷醇(1-menthol)”指[1R-(1α,2β,5α)]-5-甲基-2-(1-甲基乙基)環己醇;分子式:C10H20O;分子量約156,比重0.890(15/15℃)。中文名稱還包括薄荷腦;薄荷冰;萜醇-[3];對烷-3-醇等。

人參皂苷-Rd和丙二醇水溶液

本發明中,術語“人參皂苷-Rd”、“本發明的藥物活性物質”和“活性藥物”可互換使用,均指具有圖1所示結構式的化合物。

本發明所用的人參皂苷-Rd,可自中藥五加科植物(例如三七、人參)中經多步分離得到、可通過化學合成的方法合成,也可由其他人參皂苷(如Rb1、Rb2、Rc、Re)轉化而來,或由絞股藍皂苷-5經絞股藍皂苷-α-鼠李糖苷酶轉化得到。在本發明中,優選使用純度為90%以上的人參皂苷-Rd,優選純度為95-99.99wt%,更優選純度為95-99wt%。

本發明中,術語“丙二醇”是指1,2-丙二醇,“丙二醇水溶液”是指由丙二醇和水組成的復合溶劑。

藥物組合物

在本發明中提供了一種藥物組合物,其含有本發明的人參皂苷-Rd、藥學上可接受的載體、以及本發明上述的滲透促進劑。

本發明中,術語“含有”表示各種成分可一起應用于本發明的混合物或組合物中。因此,術語“主要由...組成”和“由...組成”包含在術語“含有”中。本發明中,術語“藥學上可接受的”成分是指適用于人和/或動物而無過度不良副反應(如毒性、刺激和變態反應),即有合理的效益/風險比的物質。

本發明中,術語“藥學上可接受的載體”指用于治療劑給藥的載體,其本身不誘導產生對接受該組合物的個體有害的抗體,且給藥后或給予保健品后沒有過分的毒性。在《雷明頓藥物科學》(Remington’sPharmaceuticalSciences,MackPub.Co.,N.J.1991年)中可找到關于藥學上可接受的載體的充分討論。

在本發明的一個實施方式中,以所述藥物組合物的總重量為基準計,所述藥物組合物中包含0.01~100wt%本發明的人參皂苷-Rd溶液,優選0.1~99.9wt%,更優選1-99wt%。(此處wt%指人參皂苷-Rd溶液在藥物組合物中所占的重量百分比,重量單位為克)。在本發明的一個實施方式中,所述藥物組合物中包含0.5-7.5g%(W/V)的本發明的人參皂苷-Rd溶液,優選0.5-7.5g%(W/V),更優選0.5-2.5g%(W/V)。(其中的單位(W/V)是指每100ml藥物組合物中含有的人參皂苷-Rd溶液的克數)。在本發明的另一實施方式中,以藥物組合物總體積為基準計,所述藥物組合物中所含人參皂苷-Rd的量為5-100mg/ml,更優選5-75mg/ml,最優選5-25mg/ml。

本發明的藥物組合物為外用制劑形式,包括透皮吸收劑型或經皮吸收劑型。代表性的劑型包括(但并不限于):軟膏、硬膏、貼劑、巴布劑、涂劑或氣霧劑。

在本發明的另一實施方式中,所述藥物組合物還包含其它活性物質或可與這些活性物質聯用,所述其它活性物質選自(但并不限于):抗炎藥、免疫抑制劑、急性缺血性腦卒中治療劑、抗器官移植排斥劑、抗潰瘍性結腸炎藥、抗血小板藥、纖維蛋白溶解藥、抗凝血藥、腦?;ひ?。

本發明的藥物組合物可用常規方法和設備進行制備。

本發明的主要優點包括:

(a)本發明的滲透促進劑可以有效促進人參皂苷-Rd的透皮吸收;

(b)本發明的透皮或經皮給藥制劑可以避免口服給藥生物利用度低,適合長期給藥,尤其適用于腦血管疾病預防和恢復期的長期治療;

(c)本發明的透皮吸收滲透促進劑的組合物有使人參皂苷Rd釋放緩慢,在血漿中存在時間長而使其作用持續時間長的特點,可用于慢性炎癥及自身免疫性疾病的長期治療,如可用于潰瘍性結腸炎、器官移植排斥的長期治療,以及風濕性關節炎、類風濕性關節炎、紅斑狼瘡、風濕與類風濕性脊柱炎的長期治療。

(d)本發明的另一個特點是透皮或經皮給藥制劑臨床用藥方便,病人的依從性更好。

下面結合具體實施例,進一步闡述本發明。應理解,這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,例如Sambrook等人,分子克?。菏笛槭沂植?NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件。

在本申請和實施例中,除非另外說明,否則氮酮和月桂醇的百分比和份數為體積百分比和體積份數,薄荷醇的百分比和份數為重量百分比和重量份數。

除非另行定義,文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外,任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。

實施例1

人參皂苷-Rd的體外透皮吸收的滲透促進劑的篩選

1材料與儀器

1.1動物

昆明種小鼠,,體重18-22g,購自蘭州大學實驗動物中心,合格證號:SCXK(甘)2005-0007。

1.2藥品與試劑

人參皂苷-Rd,由廣東泰禾生物藥業有限公司提供,批號:080312。

氮酮,上海元越化工有限公司,分析純;

薄荷醇,上海中秦化學試劑有限公司,分析純,批號:20081225;

N-甲基吡咯烷酮,天津市博迪化工有限公司,分析純;

月桂醇,天津市光復精細化工研究所,分析純;

尿素,上海建信化工有限公司試劑廠,分析純;

松節油,天津市紅巖化學試劑廠,分析純,批號:20060602;

丁香油,國藥集團化學試劑有限公司,分析純,批號:F20060403;

冰片,四川青神康華制藥有限公司,分析純;

1.3儀器

TT-6(B)透皮吸收試驗儀(包括HC-188加熱水循環器、MSE-1600磁力攪拌器、TT-6(B)有機玻璃水箱、Franz擴散池),由天津市正通科技有限公司提供;島津公司高效液相色譜儀LC-10AT,SPD-M10AvP二極管陣列檢測器,SIL-HT自動進樣器,DGU-HA在線脫氣機,LC-10ATvP輸液泵,CTO-10AvP柱溫箱,Solution色譜工作站。722s可見分光光度計,上海精密科學儀器有限公司產品。XW-80A渦旋混合器,江蘇海門市麒麟醫用儀器廠產品;電子天平,型號:FA1604S,上海天平儀器廠制造。

2方法

2.1人參皂苷-Rd測定方法的建立

2.1.1測定條件

色譜柱:島津VP-ODSC18柱(150×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-乙腈-10mM乙酸胺(70/10/20,v/v/v);流速0.450ml/min;檢測波長:203nm;柱溫:25℃;室溫:20-23℃;進樣量:10μl;保留時間:11.40-12.20min。

2.1.2標準曲線

用甲醇/生理鹽水(1/1,v/v)準確配制濃度為1mg/ml的人參皂苷-Rd貯備液。進一步用該溶劑稀釋成濃度為5、10、100、300、500μg/ml的標準工作液。標準工作液經0.22μm濾膜過濾,取10μl進樣,按上述色譜條件測定相應的人參皂苷-Rd色譜峰面積。以測得的人參皂甙-Rd色譜峰面積(A)對濃度(C)進行線性回歸,得人參皂苷-Rd在溶劑(甲醇/生理鹽水,1/1,v/v)中的標準曲線方程為A=3678.9C+28603(r=0.9995,n=5,圖2),表明人參皂苷-Rd濃度在10-500μg/ml范圍內線性關系良好,而且,從圖3和圖4中可明顯看出,在203nm處,人參皂苷-Rd在溶劑(甲醇/生理鹽水,1/1,v/v)中的色譜吸收峰不會受到溶劑色譜吸收峰的干擾。

2.1.3方法精密度和回收率

按2.1.2項下配制方法配20、100、400μg/ml的人參皂苷-Rd樣品溶液,連續測定其峰面積,依據標準曲線方程換算,得回收率分別為102.60%、102.56%和98.56%(n=6),日內RSD分別為4.11%、4.17%、2.09%(n=3),日間RSD分別為3.42%、7.76%、1.50%(n=3)。

2.2體外透皮吸收實驗接受液中蛋白質的定量研究

2.2.1蛋白質試劑

稱取考馬斯亮藍G-25025mg溶于12.5ml95%的乙醇,加入25ml85%(W/V)磷酸,將溶液用雙蒸水稀釋到250ml,濾紙過濾,4℃保存備用。

2.2.2蛋白質溶液標準曲線

準確配制濃度為1mg/ml的牛血清白蛋白貯備液,分別取上述溶液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml加雙蒸水至1ml,即得0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的標準蛋白質溶液。取標準蛋白質溶液0.1ml,加入5ml蛋白試劑,充分振蕩混合,以0.1ml雙蒸水加5ml蛋白試劑作為空白對照,595nm測定光吸收值Y,以光吸收值(Y)對標準蛋白質溶液濃度(c)進行直線回歸,得標準曲線方程為Y=0.5998c+0.0058(r=0.9995,n=8)。

2.2.3接受液中蛋白質的定量研究

依2.4.2.1項下方法,供給體中只加入1,2-丙二醇溶液,在相同條件下于12h收集樣品,按蛋白質溶液標準曲線項下方法,取待測樣品0.1ml,加入5ml蛋白質試劑,充分振蕩混合,595nm處測定溶液吸光度,代入蛋白質溶液標準曲線計算蛋白質含量。測得接受液中蛋白質含量分別是37.07、45.42、60.44、10.35、27.05、7.01、15.36μg/ml,可見接受液中蛋白質含量很低,表明各個時間點所取的樣品不除蛋白質,可以直接采用高效液相色譜進行藥物的檢測和分析。

2.3藥物溶媒的選擇依據

人參皂苷-Rd難溶于水,易溶于甲醇、乙醇及丙二醇,在丙二醇中可溶解達150mg/ml,丙二醇是有機溶劑類滲透促進劑,作用原理為溶脹角質層中的類脂,增加藥物的溶解度,并且丙二醇用作親脂性藥物的溶劑所產生的滲透促進作用往往比用于親水性藥物好,在體外透皮吸收試驗中,丙二醇單獨應用時促進作用不明顯,常作為一種優良的助滲劑,與月桂氮酮、油酸、月桂醇等合用,可發揮協同作用,產生顯著的滲透促進作用,從而減少滲透促進劑的用量,降低毒性反應,又可使主藥發揮最佳效能,所以選擇丙二醇為藥物溶媒。

2.4體外經皮透過實驗

2.4.1離體皮膚的制備

將松香-石蠟按1∶1(w/w)在沸水浴中溶解、混勻,放置至室溫,配制成脫毛劑。脫毛劑在每次臨用前于沸水浴中重新溶解,置室溫到即將凝固時使用。取健康昆明種小鼠,,體重18-22g,乙醚麻醉,固定,用脫毛劑脫去腹部皮膚的毛。然后用生理鹽水擦拭干凈,處死后迅速剝取腹部皮膚(2cm×1cm),去除皮下組織及脂肪,用生理鹽水反復沖洗干凈后檢查皮膚是否有破損,無破損則置生理鹽水中,4℃保存備用(1d內用完)。

2.4.2實驗方法

2.4.2.1體外透皮吸收實驗裝置

采用改良的Franz擴散池做滲透裝置,從冰箱中取出備用鼠皮,恢復至室溫,用生理鹽水沖洗,濾紙吸干表面液體,取適當面積(1cm×1cm)的鼠皮夾在擴散池蓋(供給體)與擴散池(接受體)之間。擴散面積為0.636cm2(擴散池內徑為0.900cm),接受體容積為500ml,皮膚角質層面向供給體,用生理鹽水作接受液,皮膚內表面沉浸在接受液中。以20mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液為對照(經測試無藥物透過),在擴散池中分別加入對照溶液以及不同的樣品1ml,(37+0.1)℃恒溫水浴,400r/min恒速磁力攪拌,分別于不同時間點取樣05ml,同時加入同體積生理鹽水。每次取樣05ml,加甲醇05ml稀釋至1ml,渦旋震蕩混勻,置4℃保存待測。待測樣品經0.22μm濾膜過濾,取10μl進樣分析,將所測得的藥物峰面積代入人參皂苷-Rd標準曲線求人參皂苷-Rd濃度,乘以稀釋倍數即得接受液中人參皂苷-Rd的濃度,并計算單位面積累積滲透量。而且,從圖5、圖6、圖7和圖8中可明顯看出,在203nm處,接受液中人參皂苷-Rd的色譜吸收峰不會受到接受液以及滲透促進劑色譜吸收峰的干擾。

2.4.2.2滲透促進劑的初步篩選

依2.4.2.1項下方法,擴散池中分別加入20mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液(其中分別含5%松節油、3%丁香油、2%氮酮、3%薄荷醇、5%N-甲基吡咯烷酮、3%月桂醇、1%尿素、3%冰片),在4h、8h、12h取樣測定。每個樣品重復兩次,從中初步篩選有促進作用的滲透促進劑。

2.4.2.3氮酮、薄荷醇、月桂醇單用時滲透促進效果的比較

依2.4.2.1項下方法,根據初步篩選結果,擴散池中加入樣品為20mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液(其中分別加入不同百分濃度的2%氮酮、3%薄荷醇、3%月桂醇),在4h、8h、12h取樣測定。每個樣品重復三次,比較氮酮、月桂醇、薄荷醇單用時的滲透促進效果。

2.4.2.4氮酮、薄荷醇、月桂醇聯合應用時滲透促進效果的比較

依2.4.2.1項下方法,根據初步篩選結果,采用正交試驗方法,擴散池中加入20mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液(其中分別含氮酮、薄荷醇和月桂醇不同百分濃度的正交組合,見表1和表2),在4h、8h、12h取樣測定。每個樣品重復三次,比較氮酮、月桂醇、薄荷醇以不同百分濃度聯合應用時的滲透促進效果。

表1正交試驗因素水平表

表2L9(34)正交試驗表

2.4.2.5最佳滲透促進劑的滲透參數計算

依2.4.2.1項下方法,擴散池中加入的樣品為20mg/l人參皂苷-Rd丙二醇溶液(其中分別含2%氮酮和2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇),在2h、4h、6h、8h、10h、12h取樣測定。每個樣品重復五次,求算各自的滲透參數。

2.4.3數據處理

2.4.3.1人參皂苷-Rd單位面積累計滲透量的的計算

因為接受池連續取樣并每次加入空白接受液,使各測得值較真實值偏小,故測定每個樣品含量后,要進行濃度校正,根據Fick擴散定律,校正公式為:

C r = C n + V i V Σ i = 1 n - 1 C i ]]>

則單位面積累積滲透量按下式計算:

Q = C r × V A = C n V + V i Σ i = 1 n - 1 C i A ]]>

式中Q為單位面積累積滲透量(μg/cm2);Cr為校正的濃度(μg/ml);Cn為n時間點的接受液中人參皂苷-Rd的濃度(μg/ml);V為取樣體積(ml);V0為接受體中接受液的總體積(ml)。本實驗中,A=0.636cm2,V=05ml,V0=5ml。

2.4.3.2透皮吸收曲線的繪制

以單位面積累積滲透量為縱坐標,時間為橫坐標,繪制人參皂苷-Rd透皮吸收曲線。

2.4.3.3滲透速度與滲透系數的計算

將透皮吸收曲線尾部直線部分的Q-t數據進行線性回歸,求得直線斜率即為滲透速率J(μg/cm2/h)。將滲透速率除以給藥池的藥物初始濃度(C0=20mg/ml)得滲透系數P(cm/h)。曲線尾部的直線部分外推與橫坐標相交,求得滯后時間Tlag(h)。

2.4.3.4統計學處理

采用Excell2003軟件進行統計學分析,所得數據用均值±標準差表示。

3實驗結果

3.1滲透促進劑的初步篩選

人參皂苷-Rd體外透皮吸收實驗,加入對照溶液和分別含不同的滲透促進劑的人參皂苷-Rd溶液,不同時間點(4h、8h、12h)接受液中的藥物含量見表3。

結果顯示:不加滲透促進劑的情況下,人參皂苷-Rd體外經皮不能透過;5%松節油、3%丁香油、5%N-甲基吡咯烷酮、1%尿素、3%冰片對人參皂苷-Rd體外透皮吸收沒有促進作用。2%氮酮、3%薄荷醇、3%月桂醇有不同程度的滲透促進作用,促進強度依次為2%氮酮>3%薄荷醇>3%月桂醇。

表3幾種滲透促進劑促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的初步篩選結果(n=2)

3.2有效的滲透促進劑單用時的滲透促進效果

人參皂苷-Rd丙二醇溶液中分別含2%氮酮、3%薄荷醇、3%月桂醇,不同時間點(4h、8h、12h)接受液中人參皂苷-Rd濃度見表4,不同時間點的單位面積累計滲透量見表5。

結果顯示,2%氮酮、3%薄荷醇、3%月桂醇,滲透促進效果為:2%氮酮>3%薄荷醇>3%月桂醇,與初步篩選時的結果一致。

表4滲透促進劑單用時對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=3)

表5滲透促進劑單用時對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=3)

3.3滲透促進劑聯合應用時的滲透促進效果

按正交試驗,氮酮、薄荷醇和月桂醇以不同濃度進行組合,不同時間點(4h、8h、12h)接受液中人參皂苷-Rd的濃度見表6,單位面積累計滲透量見表7。

結果顯示,氮酮、薄荷醇和月桂醇三者聯合應用時,具有明顯的滲透促進作用。

以12h接受液中人參皂苷-Rd單位面積累積滲透量計,1%氮酮+1%薄荷醇+1%月桂醇,1%氮酮+5%薄荷醇+5%月桂醇,2%氮酮+1%薄荷醇+3%月桂醇的滲透促進效果不如2%氮酮,1%氮酮+3%薄荷醇+3%月桂醇,2%氮酮+3%薄荷醇+5%月桂醇,3%氮酮+5%薄荷醇+3%月桂醇的滲透促進效果和2%氮酮相當,而2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇,3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇,3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇的滲透促進效果遠優于2%氮酮。

其中,2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇組合的滲透促進效果最好,12h時單位面積累積滲透量為3404.18μg/cm2,3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇組合和3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇組合滲透促進效果次優,12h時單位面積累積滲透量分別為2832.54μg/cm2、2932.53μg/cm2。

表6滲透促進劑聯合應用時對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=3)

注:A1B1C1:1%氮酮+1%薄荷醇+1%月桂醇;A1B2C2:1%氮酮+3%薄荷醇+3%月桂醇;

A1B3C3:1%氮酮+5%薄荷醇+5%月桂醇;A2B1C2:2%氮酮+1%薄荷醇+3%月桂醇;

A2B2C3:2%氮酮+3%薄荷醇+5%月桂醇;A2B3C1:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇;

A3B1C3:3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇;A3B2C1:3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇;

A3B3C2:3%氮酮+5%薄荷醇+3%月桂醇

表7滲透促進劑聯合應用時對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=3)

注:A1B1C1:1%氮酮+1%薄荷醇+1%月桂醇;A1B2C2:1%氮酮+3%薄荷醇+3%月桂醇;

A1B3C3:1%氮酮+5%薄荷醇+5%月桂醇;A2B1C2:2%氮酮+1%薄荷醇+3%月桂醇;

A2B2C3:2%氮酮+3%薄荷醇+5%月桂醇;A2B3C1:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇;

A3B1C3:3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇;A3B2C1:3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇;

A3B3C2:3%氮酮+5%薄荷醇+3%月桂醇

3.42%氮酮和A2B3C1滲透參數的計算

人參皂苷-Rd丙二醇溶液分別含2%氮酮、或2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇,滲透促進劑單用(2%氮酮)和聯合應用(2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)促進人參皂苷-Rd體外透皮吸收的曲線見圖9;不同時間點(2h、4h、6h、8h、10h、12h)接受液中人參皂苷-Rd的濃度見表8,單位面積累計滲透量見表9,它們各自的滲透參數見表10。

結果顯示:滲透促進劑聯合應用(2%氮酮和2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)的滲透速率314.575μg/cm2/h,單用(2%氮酮)的滲透速率是144.495μg/cm2/h,聯合應用的滲透速率是單用的2.18倍,滲透促進劑聯合使用(2%氮酮和2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)的滯后時間是0.925h。

表82%氮酮和A2B3C1對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=5)

注:A2B3C1:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇

表92%氮酮和A2B3C1對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響(n=5)

注:A2B3C1:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇

表102%氮酮和A2B3C1的滲透參數

注:A2B3C1:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇;Q:單位面積累計滲透量;t:時間;J:滲透速率;P:滲透系數;Tlag:滯后時間

4討論

為了便于理解,本發明人提供對滲透促進劑作用機理的說明。然而,應理解,本發明的?;し段Р⒉皇芤韻祿硨吞致鄣南拗?。

滲透促進劑的主要作用部位是角質層,角質層的細胞間途徑是藥物透過的主要途徑。角質層由類脂分子的雙分子層組成,角質層中的脂肪酸、膽固醇、神經酰胺和神經酰胺糖苷元等的極性頭區結合水分子形成水性區,而類脂分子的碳氫鏈組成疏水區。

滲透促進劑主要作用于類脂分子的雙分子層,通過增加類脂骨架無序性而增加皮膚的非均勻性,打開新的滲透途徑,產生滲透促進作用。滲透促進劑促進透皮吸收的機制主要有以下幾種假說:(1)改變皮膚角質層類脂排列:滲透促進劑滲入皮膚中,改變皮膚角質層中類脂雙分子層的有序排列,增加它們的流動性,促使藥物分子順利通過;(2)影響皮膚角質層水合作用:滲透促進劑能提高角質層角蛋白中含氮物質與水的結合能力,提高水合作用,便于藥物分子穿透,從而促進藥物的透皮吸收;(3)溶解皮脂腺管內皮質:滲透促進劑滲入皮膚皮脂腺管內,溶解皮質或腺腔壁上皮脂性分化細胞,從而降低皮脂腺管內的疏水性,使皮脂腺成為離子型藥物透過皮膚的主要通道;(4)擴大汗腺和毛囊開口:滲透促進劑通過膨脹和軟化角質層,使汗腺、毛囊的開口變大,有利于藥物通過從而促進藥物透皮吸收。

本發明的結果顯示:

(1)在不用滲透促進劑(20mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液)的情況下,人參皂苷-Rd體外經離體小鼠皮膚不能透過,這可能是由于人參皂苷-Rd分子量大(1001.20),使藥物分子很難通過皮膚表面角質層向內滲透。丙二醇對不同藥物的經皮吸收促進作用有最適濃度,主要是作為藥物的溶劑和助滲劑在制劑中被應用,一般認為單獨使用滲透促進效果不好,有時反而阻滯藥物透過。而且,丙二醇隨著濃度的提高,黏性增加,阻滯藥物擴散。本實驗用丙二醇作為人參皂苷-Rd的溶媒,可能由于丙二醇黏性較高,使人參皂苷-Rd通過細胞內途徑轉運的阻力增加,從而未能促進藥物經皮滲透。適合人參皂苷-Rd的溶劑包括:甲醇、乙醇、丙二醇、正丁醇及二甲基亞砜,但符合對人參皂苷-Rd溶解度高而又低毒條件的溶媒以丙二醇最佳。

(2)在經皮給藥系統及制劑的研發過程中,通常用到的滲透促進劑種類繁多,根據其化學結構的不同,可以簡單分為以下幾類:(I)有機溶劑類,主要有乙醇、丙二醇、醋酸乙酯、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺等;(II)脂肪酸與脂肪醇類,主要有油酸、亞油酸、月桂醇、月桂酸等;(III)月桂氮酮及其衍生物;(IV)角質保濕與軟化劑:尿素、水楊酸、吡咯酮類;(V)萜烯與植物揮發油:薄荷醇、丁香油、松節油等;(VI)表面活性劑;(VII)環糊精類。但是,對不同藥物的經皮吸收,具有最佳滲透促進作用的滲透促進劑也不盡相同。所以,在特定的藥物的經皮給藥制劑的研發過程中,需要篩選出最優的滲透促進劑及其最佳組合,才能使藥物通過經皮給藥吸收而發揮作用。例如在本發明中,對8種滲透促進劑的篩選實驗證明,這種理論推測對多種滲透促進劑的促滲透效果的推測是錯誤的(表3),在滲透促進劑單用時,只有氮酮、薄荷醇、月桂醇對人參皂苷-Rd的體外透皮吸收有一定的促進作用(表3)。

(3)滲透促進劑單獨使用時效果往往不是很好,故經常以水溶性滲透促進劑與脂溶性滲透促進劑聯合應用以起到較好的促滲透作用。滲透促進劑聯用可能對藥物的滲透產生協同作用,這樣既可減少滲透促進劑的用量,降低毒性反應,又可使藥物發揮最佳效能。但即使有效的滲透促進劑也隨比例不同,效果也不盡相同,需實驗加以篩選以確定最佳比例。本實驗結果顯示,當氮酮、薄荷醇、月桂醇聯合應用時,并不是以任何濃度組合都能產生協同促進作用,而是只有當以恰當的濃度組合時,才能發揮協同作用。在本實驗中,氮酮、月桂醇以及薄荷醇聯合應用時,2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇的滲透速率是單用2%氮酮時的2.18倍,可能是因為氮酮、薄荷醇、月桂醇三者以恰當百分濃度合用,能從不同方面影響角質層的屏障功能,產生近似相加的效果,也可能由于藥物溶媒丙二醇增加了氮酮、薄荷醇、月桂醇在角質層中的分配,從而使滲透促進作用更強。本實驗結果提示滲透促進劑聯合使用時,要以恰當的濃度組合,才能發揮協同促進作用。

(4)這些人參皂苷-Rd透皮吸收滲透促進劑的組合物有釋放緩慢,在血漿中作用持續時間長的特點,最重要的是臨床用藥方便,可在臨床上用于腔隙性腦梗塞的預防和治療、腦梗塞的預防及恢復期治療、風濕與類風濕性關節炎及脊柱炎等疾病的治療、器官移殖排斥反應的預防與治療、潰瘍性結腸炎及紅斑狼瘡的治療等。

5結論

本發明人先篩選出了對人參皂苷-Rd體外透皮吸收有促進作用的滲透促進劑,而且由于滲透促進劑單用的效果不好,一般是兩個或三個同時應用,所以采用正交試驗法,考察幾種滲透促進劑之間相互的影響以及對人參皂苷-Rd體外透皮吸收的影響,最后選出最優的滲透促進劑組合,得出以下結論:

1.以丙二醇為溶媒,人參皂苷-Rd體外不能經離體小鼠皮膚透過。

2.以離體小鼠皮膚為模型,測定不同滲透促進劑單用時對人參皂苷-Rd體外經皮吸收的影響,滲透促進作用強度依次為2%氮酮>3%薄荷醇>3%月桂醇。

3.以離體小鼠皮膚為模型,測定氮酮、薄荷醇、月桂醇以不同的百分濃度聯合應用時對人參皂苷-Rd體外經皮吸收的影響,在滲透促進劑聯合應用時,只有以恰當的百分濃度聯合應用(2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇、3%氮酮+1%薄荷醇+5%月桂醇或3%氮酮+3%薄荷醇+1%月桂醇),才能發揮協同滲透促進作用。

4.人參皂苷-Rd體外透皮吸收最優滲透促進劑組合為:2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇。

5.這些人參皂苷-Rd透皮吸收滲透促進劑的組合物臨床用藥方便,可在臨床上用于腔隙性腦梗塞的預防和治療、腦梗塞的預防及恢復期治療、風濕與類風濕性關節炎等疾病的治療及器官移殖排斥反應的預防等。

實施例2

人參皂苷-Rd經皮給藥的抗炎作用

1材料與儀器

1.1動物

昆明種小鼠,,體重18-22g,購自蘭州大學實驗動物中心,合格證號:SCXK(甘)2009-0004。

1.2藥品與試劑

人參皂苷-Rd,由廣東泰禾生物藥業有限公司提供,批號:080312。

丙二醇,中國派尼化學試劑廠,分析純,批號:20060708;

氮酮,上海元越化工有限公司,分析純;

薄荷醇,上海中秦化學試劑有限公司,分析純,批號:20081225;

月桂醇,天津市光復精細化工研究所,分析純;

EUDRAGITE100,德國生產,批號:E080501129;

癸二酸二丁酯,上海中秦化學試劑有限公司,化學純,批號:20100312;

琥珀酸,上海中秦化學試劑有限公司,分析純,批號:20100120;

丙酮,天津化學試劑有限公司,分析純,批號:20080702;

異丙醇,上海中秦化學試劑有限公司,分析純,批號:20100105;

無水乙醇,天津市光復科技發展有限公司,分析純,批號:20080327);

地塞米松磷酸鈉注射液:天津藥業基團新鄭股份有限公司,產品批號:0912012,臨用前用生理鹽水稀釋成相應濃度;

角叉菜膠:和光純藥工業株式會社生產,產品批號:037-09692,臨用前24h用生理鹽水配制成濃度為1%的溶液,4℃密封保存;

生理鹽水:甘肅扶正藥業科技股份有限公司生產,產品批號:20091219;

滅菌注射用水:天津藥業焦作有限公司,批號:10021731

2方法

2.1人參皂苷-Rd貼劑的制備

2.1.1壓敏膠的選擇

在經皮吸收給藥系統的開發中需要多種材料來滿足經皮給藥的需要,其中壓敏膠(PSA)是關鍵的材料,壓敏膠的選擇應用正確與否關系到產品的成敗。理想的壓敏膠應具備以下條件:(1)在所含的治療藥物濃度和化學性質的前提下,對藥物有理想的溶解度,粘度適當,但又不產生溢膠現象,在皮膚上不留痕跡;(2)在常用面積大小的條件下,能提供足夠的經皮流率;(3)能提供足夠長時間的載藥量;(4)在正常的室溫下,能保持藥物的化學穩定性或貼劑的穩定性;(5)在正常的季節下,對汗液有一定吸收性;(6)與所有的貼劑的添加劑,如滲透促進劑、增塑劑和有機溶劑有配伍相容性;(7)患者順應性好,無致敏性和刺激性;(8)易于生產。

目前,應用于透皮吸收給藥系統的壓敏膠有三類:硅酮壓敏膠、聚異丁烯壓敏膠和丙烯酸酯壓敏膠。其中丙烯酸酯類壓敏膠具有優良的粘合性、耐老化性、耐光性和耐水性,長期存放對壓敏性沒有明顯影響,是較理想的一類材料,作為醫用膠帶已有30多年的歷史。由于以聚丙烯酸酯為基質制成的醫用膠帶本身對皮膚刺激性小,而且可以直接用作基質,不需要加入增粘劑、抗氧化劑等,所以很少引起過敏,而且丙烯酸酯還具有良好的耐熱性,性質穩定,無色透明,無公害,皮膚應用后無殘留物等特點,所以本實驗選擇丙烯酸酯壓敏膠作為基質。

2.1.2制備工藝的分類

貼劑的制備工藝主要有三種:(1)水性分散體法,此種方法以水作為溶媒,避免了有機溶劑的使用,有利于環保;但是由于許多適于經皮給藥的藥物不溶于水,所以限制了此法的應用;(2)有機溶劑分散體法,雖然存在有機溶劑的使用的危險和不利于環保,但因為操作簡便,易于實驗室和工業生產,且可以通過減壓回流和其他工藝來減少有機物的用量,成為最常用的制備貼劑的方法,本實驗人參皂苷-Rd貼劑制備采用此種方法;(3)熱熔工藝法,在80-120℃將藥物和輔料一起熔融后鋪膠的方法,增塑劑用量大,對于熱敏感的藥物和輔料不適用。

2.1.3人參皂苷-Rd貼劑的制備工藝流程:

制備工藝I:聚丙烯酸樹脂EudragitE100(42.2%)、癸二酸二丁酯(19.0%)、琥珀酸(3.8%),加入混合溶劑(21.0%丙酮+2.3%異丙醇+11.7%無水乙醇),室溫放置溶解,攪拌均勻,制得壓敏膠液(所含成份均用重量份數比表示)。然后加入75-150mg/ml人參皂苷-Rd丙二醇溶液(其中含2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)0.5ml,攪拌均勻,制得含藥壓敏膠液15ml;將含藥壓敏膠液超聲脫氣40min,取2ml均勻涂布在防粘層上(厚0.4mm,長×寬=8cm×5.5cm),室溫放置60min自然干燥,覆蓋背襯膜(11.5cm×9cm),包裝,即得人參皂苷-Rd膠粘劑骨架擴散型貼劑(制備工藝I流程見圖10),每片貼劑含人參皂苷-Rd約10-20mg。

制備工藝II:聚丙烯酸樹脂EudragitE100(42.2%)、癸二酸二丁酯(19.0%)、琥珀酸(3.8%),加入混合溶劑(21.0%丙酮+2.3%異丙醇+11.7%無水乙醇),室溫放置溶解,攪拌均勻,制得壓敏膠液(所含成份均用重量份數比表示)。配制含5-150mg/ml人參皂苷-Rd的丙二醇溶液(其中含2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)2ml,攪拌均勻,制得含人參皂苷-Rd藥液,將藥液超聲脫氣40min后灌入小袋中密封保存。同時在背襯膜(11.5cm×9cm,正中貼有一層8cm×5.5cm的防水紙)上均勻涂上壓敏膠,并將一定大小的藥墊(8cm×5.5m)粘貼于背襯膜防水紙上,然后貼上防粘層。臨用前撕開防粘層,將2ml藥液滴到藥墊表面(含人參皂苷-Rd10-300mg),然后粘貼于皮膚表面。

2.2人參皂苷-Rd經皮給藥對角叉菜膠致小鼠足腫脹的抑制作用

昆明種小鼠,64只,,體重18~22g,隨機分為4組,每組16只。分組及給藥情況如下:

第一組:模型對照組,55%丙二醇,im,0.1ml/10g;

第二組:陽性對照組,地塞米松磷酸鈉,im,2mg/kg,0.1ml/10g;

第三組:人參皂苷-Rd肌肉注射組,50mg/kg,im,0.1ml/10g;

第四組:人參皂苷-Rd經皮給藥組,經皮給藥,lmg/只。

第四組小鼠用0.3%戊巴比妥鈉(0.3ml/10g)麻醉后,各組小鼠給予相應藥物或溶媒,給藥后1h分別在每組每只小鼠左后肢足跖皮下注射1%角叉菜膠致炎,50μl/只。致炎后4h,處死小鼠,沿足踝關節迅速剪下左右后足,精確稱重。按下列公式計算各組的腫脹度和腫脹抑制率:

腫脹度(mg)=左足重量-右足重量

2.3數據處理

使用Excel-2003進行統計,各組數據均為計量資料,以表示,組間差異的顯著性用t-檢驗。

3.結果

人參皂苷-Rd經皮給藥的抗炎作用研究,該實驗分為模型對照組、陽性對照組、人參皂苷-Rd肌肉注射組以及人參皂苷-Rd經皮給藥組,各組足腫脹度和腫脹抑制率見表11。結果顯示:陽性對照組小鼠足腫脹減輕最為明顯,腫脹抑制率為44.10%,與模型對照組比較,有顯著性差異(P<0.01);人參皂苷-Rd肌肉注射組小鼠足腫脹也明顯減輕,腫脹度抑制率為41.49%,與模型對照組相比,有顯著性差異(P<0.01);人參皂苷-Rd經皮給藥組小鼠足腫脹也明顯減輕,與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),腫脹度抑制率為26.78%。

表11人參皂苷-Rd經皮給藥對角叉菜膠致小鼠足腫脹的抑制作用

注:與模型對照組比較,**P<0.01

4.討論

炎癥是許多疾病的基本病理過程,根據病程經過的不同,炎癥可分為急性炎癥和慢性炎癥兩大類。急性炎癥是機體對致炎因子發生的即刻和早期反應,病程短,持續數小時或數天,其病理特征是血管變化和滲出性改變:表現為炎性出血、血管通透性增高而出現炎性滲出和炎性細胞浸潤。慢性炎癥的炎性刺激常持續存在,長達數周或數月,病灶既有炎癥反應、阻止破壞,又有修復現象。

角叉菜膠是一種中性致炎劑,它所誘發的小鼠足腫脹是一急性非特異性的經典炎癥模型,是以血管系統的反應為主所構成的炎癥,以發紅、腫脹、疼痛等為主要癥候,腫脹高峰在致炎后4-6h,該模型的特點是致炎局部白細胞浸潤、前列腺素合成增加,并與血管活性物質和激肽類一起誘發水腫。該模型能成功地復制化學性因素和生物性因素所導致的滲出性炎癥變化,具有高度的重復性,模型穩定,結果可靠,常用于抗炎藥物的篩選和評價,是篩選抗炎藥物的常規模型。

本實驗采用此種模型觀察人參皂苷-Rd通過經皮吸收給藥的抗炎作用,實驗結果表明,人參皂苷-Rd經皮給藥對角叉菜膠誘發的小鼠足急性腫脹有明顯的抑制作用,因此,在該模型上證實人參皂苷-Rd通過經皮吸收給藥有顯著的抗炎作用。

而且,人參皂苷-Rd經皮給藥系統能夠避免了肌肉注射刺激性大以及口服生物利用度低等的一系列問題,為該藥的臨床應用提供了可靠的實驗依據。

5、結論

人參皂苷-Rd經皮吸收給藥有顯著的抗炎作用。

在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考,就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解,在閱讀了本發明的上述講授內容之后,本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改,這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

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