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皇家贝蒂斯vs维戈塞尔塔: 一種鐵皮石斛內生真菌的育苗方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201811042090.5

申請日:

20180907

公開號:

CN109122206A

公開日:

20190104

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01G24/28,A01G31/00,A01G24/20,C05F11/08 主分類號: A01G24/28,A01G31/00,A01G24/20,C05F11/08
申請人: 福建省農業科學院亞熱帶農業研究所(福建省農業科學院蔗麻研究中心)
發明人: 王偉英,鄒暉,邱珊蓮,林江波,戴藝民,林碧珍,周龍生
地址: 363005 福建省漳州市龍文區朝陽鎮登科村省農科院亞熱帶農業研究所
優先權: CN201811042090A
專利代理機構: 福州元創專利商標代理有限公司 代理人: 蔡學俊
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201811042090.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種鐵皮石斛的育苗方法,所述育苗方法包括:(1)種子處理,摘取成熟的鐵皮石斛果莢并放置通風陰涼處晾干;(2)基質準備,在苗盤中先裝入滅菌泥炭土,再裝入混有內生真菌的菌肥,整平;(3)播種,把種子裝入種子播撒器中,均勻撒播在苗盤上;(4)保濕處理,用保鮮膜包住苗盤,并在上方打孔若干,在室外常溫下陰涼處放置即可。本發明的培育方法使得鐵皮石斛種子萌發快,成本低。

權利要求書

1.一種鐵皮石斛內生真菌的育苗方法,其特征在于,利用內生真菌菌肥培育鐵皮石斛種子,使真菌與種子形成共生關系,從而不需要通過組培即可實現種子的萌發和育苗。2.根據權利要求1所述的一種鐵皮石斛內生真菌的育苗方法,其特征在于,具體包括如下步驟:(1)種子采摘:將成熟的鐵皮石斛果莢采摘后,輕輕用水沖洗果莢表皮,放在干凈的白紙上于陰涼處晾干,直到果莢開裂,收集種子裝于種子播撒器中;(2)基質制備:將育苗基質泥炭土裝入育苗盤的1/2-3/4處,再用內生真菌菌肥填滿,整平,澆水至基質濕潤;(3)種子播種:輕輕搖動播撒器使石斛種子均勻播撒在基質表面,播撒完后蓋上一層保鮮膜具有保濕效果并在保鮮膜上打若干個小洞;(4)播后管理:播種后苗盤放置常溫下的陰涼處即可,保持表層育苗基質的含水量為30-35%,發芽后每20-30天噴霧一次過濾后的菌液液體,得初生石斛苗;(5)煉苗:待初生石斛苗長至3片真葉,對初生石斛苗進行煉苗,連續煉苗15天,得到鐵皮石斛苗。3.根據權利要求2所述的一種鐵皮石斛內生真菌的育苗方法,其特征在于,所述步驟(4)中菌液液體的制備方法如下:用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天后,用0.22μm濾膜過濾除去菌體,即得到菌液液體。4.根據權利要求2所述的一種鐵皮石斛內生真菌的育苗方法,其特征在于所述內生真菌菌肥的制備方法如下:(1)用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天,得到菌液;(2)將泥炭土與PDA液體培養基按照質量比2:1混合,滅菌,得到泥炭土混合物;(3)將步驟(2)獲得的泥炭土混合物與步驟(1)的菌液按質量比2:1混合,得到菌肥。

說明書

技術領域

本發明涉及種植栽培領域,特別涉及一種鐵皮石斛種子的育苗方法 。

背景技術

鐵皮石斛具有多種藥用功效,其莖入藥,屬補益藥中的補陰藥:益胃生津,滋陰清熱。歷代醫家都認為“鐵皮石斛”具有滋養肝陰的作用,是治療各種肝膽病的要藥,可用于治療肝炎、膽囊炎、膽結石等肝膽疾病。

鐵皮石斛與菌根真菌存在著天然的共生關系,種子非常細小,是分化不完全的胚細胞,其內部不含胚乳,在自然條件下不能正常萌發,只有真菌與種子或根形成共生的菌根關系后,才能正常地萌發和生長發育。目前鐵皮石斛種子萌發和育苗的傳統方法是通過組培來完成,而組建一個可以運行的接種室和組培室是需要不少的成本投入來購買設備,并需要花上大量工時來完成培養基的制作、種子萌發后的分瓶培育等一系列工時。本發明的方法是一種簡單快速、在正?;肪持芯涂梢醞瓿芍腫擁拿確⒑陀?,省去了用組培方法的設備和工時,極大的減少了鐵皮石斛種苗的生產成本。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鐵皮石斛種子的培育方法, 本發明的培育方法能很好的促進鐵皮石斛種子的萌發和育苗,這可省去繁瑣的人工組培的一系列工作及其產生的費用,具有顯著的應用價值。

為實現上述目的,本發明采用如下技術方案:

本發明利用鐵皮石斛內生真菌菌肥培育鐵皮石斛種子,使真菌與種子形成共生關系,從而不需要通過組培即可實現種子的萌發和育苗。

上述方法的具體步驟如下:

(1)種子采摘:將成熟的鐵皮石斛果莢采摘后,輕輕用水沖洗果莢表皮,放在干凈的白紙上于陰涼處晾干,直到果莢開裂,收集種子裝于種子播撒器中;

(2)基質制備:將育苗基質泥炭土裝入育苗盤的1/2-3/4處,再用內生真菌菌肥填滿,整平,澆水至基質濕潤;

(3)種子播種:輕輕搖動播撒器使石斛種子均勻播撒在基質表面,播撒完后蓋上一層保鮮膜具有保濕效果并在保鮮膜上打若干個小洞;

(4)播后管理:播種后苗盤放置常溫下的陰涼處即可,播種后第5天種子膨大轉綠萌發(圖1),保持表層育苗基質的含水量為30-35%,發芽后每20-30天噴霧一次過濾后的菌液液體,得初生石斛苗;

(5)煉苗:待初生石斛苗長至3片真葉,對初生石斛苗進行煉苗,連續煉苗15天,得到鐵皮石斛苗(圖2)。

所述步驟(4)中菌液液體的制備方法如下:用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天后,用0.22μm濾膜過濾除去菌體,即得到菌液液體。

所述內生真菌菌肥的制備方法如下:

(1)用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天,得到菌液;

(2)將泥炭土與PDA液體培養基按照質量比2:1混合,滅菌,得到泥炭土混合物;

(3)將步驟(2)獲得的泥炭土混合物與步驟(1)的菌液按質量比2:1混合,得到菌肥。

本發明的優點在于:目前鐵皮石斛種子萌發和育苗的傳統方法是通過組培來完成,而組建一個可以運行的接種室和組培室是需要不少的成本投入來購買設備,并需要花上大量工時來完成培養基的制作、種子萌發后的分瓶培育等一系列工時。本發明的方法是一種簡單快速、在正?;肪持芯涂梢醞瓿芍腫擁拿確⒑陀?,省去了用組培方法的設備和工時,極大的減少了鐵皮石斛種苗的生產成本。

附圖說明

圖1為播種后第5天種子膨大轉綠萌發。

圖2為鐵皮石斛苗。

具體實施方式

實施例1

1、瘤菌根菌固體培養基的制備

將瘤菌根菌接入PDA培養基中,該PDA培養基的制備為:將馬鈴薯去皮,稱取200g切成小塊,放入1000ml水中煮爛搗碎,用四層紗布過濾,濾液加入20g葡萄糖和10g瓊脂粉,定容至1000ml,分裝滅菌,冷卻后倒入無菌的培養皿中,每皿20ml。

2、制備內生真菌菌肥

(1)用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天,得到菌液;

(2)將泥炭土與PDA液體培養基按照質量比2:1混合,滅菌,得到泥炭土混合物;

(3)將步驟(2)獲得的泥炭土混合物與步驟(1)的菌液按質量比2:1混合,得到菌肥。

3、制備菌液液體

用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天后,用0.22μm濾膜過濾除去菌體,即得到菌液液體。

4、鐵皮石斛育苗

(1)種子采摘:將成熟的鐵皮石斛果莢采摘后,輕輕用水沖洗果莢表皮,放在干凈的白紙上于陰涼處晾干,直到果莢開裂,收集種子裝于種子播撒器中;

(2)基質制備:將育苗基質泥炭土裝入育苗盤的2/3處,再裝入1/3的內生真菌菌肥,整平,澆水至基質濕潤;

(3)種子播種:在播撒器中裝入10顆石斛果莢的種子,輕輕搖動播撒器使石斛種子均勻播撒在基質表面,播撒完后蓋上一層保鮮膜具有保濕效果并在保鮮膜上打若干個小洞;

(4)播后管理:播種后苗盤放置常溫下的陰涼處即可,播種后第5天種子膨大轉綠萌發,保持表層育苗基質的含水量為30-35%,發芽后每30天噴霧一次過濾后的菌液液體,得初生石斛苗;

(5)煉苗:待初生石斛苗長至3片真葉,對初生石斛苗進行煉苗,連續煉苗15天,得到鐵皮石斛苗,計算得到發芽率為95%,成活率為90%。

實施例2

1、瘤菌根菌固體培養基的制備

將瘤菌根菌接入PDA培養基中,該PDA培養基的制備為:將馬鈴薯去皮,稱取200g切成小塊,放入1000ml水中煮爛搗碎,用四層紗布過濾,濾液加入20g葡萄糖和10g瓊脂粉,定容至1000ml,分裝滅菌,冷卻后倒入無菌的培養皿中,每皿20ml。

2、制備內生真菌菌肥

(1)用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天,得到菌液;

(2)將泥炭土與PDA液體培養基按照質量比2:1混合,滅菌,得到泥炭土混合物;

(3)將步驟(2)獲得的泥炭土混合物與步驟(1)的菌液按質量比2:1混合,得到菌肥。

3、制備菌液液體

用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天后,用0.22μm濾膜過濾除去菌體,即得到菌液液體。

4、鐵皮石斛育苗

(1)種子采摘:將成熟的鐵皮石斛果莢采摘后,輕輕用水沖洗果莢表皮,放在干凈的白紙上于陰涼處晾干,直到果莢開裂,收集種子裝于種子播撒器中;

(2)基質制備:將育苗基質泥炭土裝入育苗盤的1/2處,再裝入1/2的內生真菌菌肥,整平,澆水至基質濕潤;

(3)種子播種:在播撒器中裝入10顆石斛果莢的種子,輕輕搖動播撒器使石斛種子均勻播撒在基質表面,播撒完后蓋上一層保鮮膜具有保濕效果并在保鮮膜上打若干個小洞;

(4)播后管理:播種后苗盤放置常溫下的陰涼處即可,播種后第5天種子膨大轉綠萌發,保持表層育苗基質的含水量為30-35%,發芽后每30天噴霧一次過濾后的菌液液體,得初生石斛苗;

(5)煉苗:待初生石斛苗長至3片真葉,對初生石斛苗進行煉苗,連續煉苗15天,得到鐵皮石斛苗,計算得到發芽率為87%,成活率為90%。

實施例3

1、瘤菌根菌固體培養基的制備

將瘤菌根菌接入PDA培養基中,該PDA培養基的制備為:將馬鈴薯去皮,稱取200g切成小塊,放入1000ml水中煮爛搗碎,用四層紗布過濾,濾液加入20g葡萄糖和10g瓊脂粉,定容至1000ml,分裝滅菌,冷卻后倒入無菌的培養皿中,每皿20ml。

2、制備內生真菌菌肥

(1)用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天,得到菌液;

(2)將泥炭土與PDA液體培養基按照質量比2:1混合,滅菌,得到泥炭土混合物;

(3)將步驟(2)獲得的泥炭土混合物與步驟(1)的菌液按質量比2:1混合,得到菌肥。

3、制備菌液液體

用接種針從瘤菌根菌固體培養基上挑取0.7cm2的瘤菌根菌菌種,接入400mL的PDA液體培養基中,28℃,200rpm培養10天后,用0.22μm濾膜過濾除去菌體,即得到菌液液體。

4、鐵皮石斛育苗

(1)種子采摘:將成熟的鐵皮石斛果莢采摘后,輕輕用水沖洗果莢表皮,放在干凈的白紙上于陰涼處晾干,直到果莢開裂,收集種子裝于種子播撒器中;

(2)基質制備:將育苗基質泥炭土裝入育苗盤的3/4處,再裝入1/4的內生真菌菌肥,整平,澆水至基質濕潤;

(3)種子播種:在播撒器中裝入10顆石斛果莢的種子,輕輕搖動播撒器使石斛種子均勻播撒在基質表面,播撒完后蓋上一層保鮮膜具有保濕效果并在保鮮膜上打若干個小洞;

(4)播后管理:播種后苗盤放置常溫下的陰涼處即可,播種后第5天種子膨大轉綠萌發,保持表層育苗基質的含水量為30-35%,發芽后每20天噴霧一次過濾后的菌液液體,得初生石斛苗;

(5)煉苗:待初生石斛苗長至3片真葉,對初生石斛苗進行煉苗,連續煉苗15天,得到鐵皮石斛苗,計算得到發芽率為91%,成活率為89%。

以上所述僅為本發明的較佳實施例,凡依本發明申請專利范圍所做的均等變化與修飾,皆應屬本發明的涵蓋范圍。

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一種 鐵皮 石斛 真菌 育苗 方法
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