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皇家马德里VS维戈塞尔塔在线直播: 一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基及方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201810871940.6

申請日:

20180802

公開號:

CN109122313A

公開日:

20190104

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所
發明人: 仇碩,唐鳳鸞,趙健,趙志國,夏科,周浩,蔣慶鴻
地址: 541006 廣西壯族自治區桂林市雁山區雁山街85號廣西植物研究所
優先權: CN201810871940A
專利代理機構: 北京輕創知識產權代理有限公司 代理人: 楊立;周玉婷
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201810871940.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基及方法,屬于植物生物技術領域。所述使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成。本發明還公開了一種利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,包括如下步驟:步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養;步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養;步驟3:叢生芽生根壯苗培養;步驟4:移栽馴化。本發明提高了移栽成活率,快速獲得大量翅萼石斛的種苗,克服了常規分株繁殖慢以及自然繁殖難等問題。

權利要求書

1.一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,其特征在于,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,所述種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、0.5-2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成;所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、1.0-4.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的馬鈴薯泥組成;所述生根壯苗培養基由MS基本培養基、1.0-4.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成。2.根據權利要求1所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,其特征在于,所述種子萌發和原球莖誘導培養基、所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及所述生根壯苗培養基的pH值均為5.8。3.一種利用權利要求1或2所述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,包括如下步驟:步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養將成熟未開裂的翅萼石斛蒴果消毒后,取出種子,均勻播種于種子萌發和原球莖誘導培養基中,先進行暗培養,待種子轉綠后再進行光培養,待種子萌發后,得到原球莖;步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養將步驟1得到的原球莖,均勻轉接到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,進行光培養,待原球莖增殖后,誘導得到叢生芽;步驟3:叢生芽生根壯苗培養當步驟2得到的叢生芽長出2-3片葉子、高2-3cm時,均勻轉接到生根壯苗培養基中,進行光培養,得到生根試管苗;步驟4:移栽馴化于春季3-4月,將步驟3得到的生根試管苗,煉苗15-30d天后,洗凈根部,移栽到移栽基質中,再置于塑料大棚中,澆水、保濕至成苗、出圃,即得到翅萼石斛種苗。4.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟1中,所述翅萼石斛蒴果采自廣西植物研究所蘭花種質圃,為當年人工自交授粉結實的成熟未開裂蒴果。5.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟1中,所述消毒的具體步驟為:先用洗潔精清洗翅萼石斛蒴果的表面,再用自來水沖洗至少30min,然后用75%v/v酒精浸泡1min,接著用無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞浸泡15-30min,然后用無菌水沖洗至少5次;所述暗培養的溫度為25±2℃,時間為20-30d。6.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟2中,所述原球莖的接種量為每個培養瓶接種150-200個原球莖,所述培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL原球莖增殖和叢生芽誘導培養基。7.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟3中,所述叢生芽的接種量為每個培養瓶接種15-20個叢生芽,所述培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL生根壯苗培養基。8.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟1、步驟2和步驟3中,所述光培養的溫度均為25±2℃,光照強度均為1500-2000lux,光周期均為12h/d,光照時間分別為30-50d、45-60d和80-120d。9.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟4中,所述煉苗的條件為:以散光為主,光照強度為3000-4000lux,溫度為15-25℃,濕度為70-80%;所述移栽基質經甲基托布津粉劑600倍稀釋液消毒處理,所述移栽基質為水苔。10.根據權利要求3所述的一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,其特征在于,步驟4中,所述塑料大棚在夏季用70%遮陽網進行遮陰。

說明書

技術領域

本發明涉及一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基及方法,屬于植物生物技術領域。

背景技術

翅萼石斛(Dendrobium cariniferum)是一種喜陰涼的多年生蘭科石斛(Dendrobium)草本植物,產自云南南部至西南部,生于海拔1100-1700米的山地林中樹干上。翅萼石斛具有較高的觀賞價值,花姿優雅,玲瓏可愛,花色鮮艷,具有橘子香氣味,也是雜交育種的重要親本之一。此外,翅萼石斛還具有較高的經濟價值,其含有34種化合物,為烷烴類和脂類。

然而,翅萼石斛并沒有被中國藥典收載,但民間常作為石斛藥用品種廣泛使用,特別是云南等西南地區,常用作藥用石斛利用,致使目前野生資源數量劇減。眾所周知,石斛類蘭花傳統分株繁殖種苗速度很慢,不能滿足市場需求,近年來,研究人員開展了石斛屬多個種的組培快繁種苗的技術,可以利用莖尖或莖段為外植體研究了組培快繁技術,也有研究無菌播種快繁種苗的技術。但是,石斛屬是蘭科第二大屬,有1500多個野生種,而翅萼石斛(Dendrobium formosum)等黑毛組植物,因葉片和葉鞘被黑色毛而難徹底消毒,目前沒有利用莖尖或莖段進行成功誘導不定芽的報道,也未見無菌播種快繁研究的報道。

鑒于此,有必要提供一種新的翅萼石斛種苗的繁殖方法,以解決現有技術的弊端。

發明內容

本發明的目的之一,是提供一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基。本發明的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長,原球莖增殖和叢生芽誘導培養基可以極大促進原球莖增殖和叢生芽生長,生根壯苗培養基可以極大促進生根壯苗。三種培養基相互作用,極大地提高了原球莖增殖倍數及誘導叢生芽產生,非常適合由翅萼石斛種子繁殖成苗。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下:一種使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,

所述種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、0.5-2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成;

所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、1.0-4.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的馬鈴薯泥組成;

所述生根壯苗培養基由MS基本培養基、1.0-4.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成。

本發明的原理說明:

MS,即MS培養基,是目前使用最普遍的培養基。其具有較高的無機鹽濃度,能夠保證組織生長所需的礦質營養還能加速愈傷組織的生長。由于配方中的離子濃度高,在配制、貯存和消毒等過程中,即使有些成分略有出入,也不會影響離子間的平衡。MS固體培養基可用于誘導愈傷組織,也可用于胚、莖段、莖尖及花藥的培養,其液體培養基用于細胞懸浮培養時能獲得明顯的成功。MS培養基的無機養分的數量和比例比較合適,足以滿足植物細胞在營養上和生理上的需要。因此,一般情況下,不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機附加成分。和其它培養基的基本成分相比,MS培養基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高,這是它的顯著特點。

MS主要包含以下成分:(1)NH4NO31650mg/L、(2)KNO31900mg/L、(3)CaCl2·2H2O 440mg/L、(4)MgSO4·7H2O 370mg/L、(5)KH2PO4170mg/L、(6)Na2-EDTA 37.3mg/L、(7)FeSO4·7H2O 27.8mg/L、(8)MnSO4·4H2O 22.3mg/L、(9)ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、(10)H3BO36.2mg/L、(11)KI 0.83mg/L、(12)Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、(13)CuSO4·5H2O 0.025mg/L、(14)CoCl2·6H2O 0.025mg/L、(15)鹽酸硫胺素VB10.1mg/L、(16)煙酸0.5mg/L、(17)肌醇100mg/L、(18)甘氨酸2mg/L、(19)鹽酸吡哆醇VB60.5mg/L。

6-BA,即6-(N-芐基)氨基嘌呤,又稱為6-芐基氨基嘌呤。是第一個人工合成的細胞分裂素。具有抑制植物葉內葉綠素、核酸、蛋白質的分解,保綠防老;將氨基酸、生長素、無機鹽等向處理部位調運等多種效能,廣泛用在農業、果樹和園藝作物從發芽到收獲的各個階段。

NAA,即1-萘乙酸。易溶于有機溶劑,是植物生長調節劑中的生長素類似物,常用語生產商用促根粉或促根劑,被廣泛應用于植物插扦繁殖中。

KT,即6-糠氨基嘌呤、激動素,是一種嘌呤類的天然植物內源激素,也是人類發現的第一個細胞分裂素。主要促進細胞分裂,提高產量,促進卵髓細胞和植物細胞的分裂。它不僅為幼胚的生長和發育不可缺少,而且對某些植物的單性生殖、刺激果實與谷粒的長大、防止衰老等都有明顯效果。

本發明的種子萌發和原球莖誘導培養基中,MS為基礎培養基,6-BA和NAA促進種子的萌發的植物激素。本發明的種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長。

本發明的原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,MS為基礎培養基,6-BA和NAA促進原球莖增殖和叢生芽的生長,香蕉泥促進壯苗生根。本發明的原球莖增殖和叢生芽誘導培養基可以極大促進原球莖增殖和叢生芽生長。

本發明的生根壯苗培養基中,MS為基礎培養基,6-BA和KT促進叢生芽的生長,NAA促進叢生芽的生根,香蕉泥促進壯苗生根,活性炭吸附生長中產生的有害物質以及壯苗生根。本發明的生根壯苗培養基可以極大促進生根壯苗。

在上述技術方案的基礎上,本發明還可以做如下改進。

進一步,所述種子萌發和原球莖誘導培養基、所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及所述生根壯苗培養基的pH值均為5.8。

采用上述進一步的有益效果是:上述培養基的pH值適合種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基和生根壯苗培養基。

上述三種培養基的pH值的調節,采用上海三愛思pH精密試紙檢測酸堿度,用鹽酸或者氫氧化鈉調節pH。pH值超過5.8用鹽酸調節,pH低于5.8用氫氧化鈉調節。

本發明的目的之二,是提供一種利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法。本發明以翅萼石斛經無菌播種獲得的原球莖為材料,包括種子播前處理、種子萌發和原球莖誘導培養、原球莖增殖和叢生芽誘導培養、叢生芽生根壯苗培養以及移栽馴化步驟。采用本發明方法繁殖翅萼石斛種苗,可在短期內獲得大量優良種苗,增殖系數高達6.4倍,克服了以莖段為外植體浪費材料及增殖系數較低的弊端;移栽成活率高達76.7%,具有繁殖速度快、產量大、種苗質量優、需時短、實際操作性強等特點。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下:一種利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,包括如下步驟:

步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養

將成熟未開裂的翅萼石斛蒴果消毒后,取出種子,均勻播種于種子萌發和原球莖誘導培養基中,先進行暗培養,待種子轉綠后再進行光培養,待種子萌發后,得到原球莖;

步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養

將步驟1得到的原球莖,均勻轉接到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,進行光培養,待原球莖增殖后,誘導得到叢生芽;

步驟3:叢生芽生根壯苗培養

當步驟2得到的叢生芽長出2-3片葉子、高2-3cm時,均勻轉接到生根壯苗培養基中,進行光培養,得到生根試管苗;

步驟4:移栽馴化

于春季3-4月,將步驟3得到的生根試管苗,煉苗15-30d天后,洗凈根部,移栽到移栽基質中,再置于塑料大棚中,澆水、保濕至成苗、出圃,即得到翅萼石斛種苗。

本發明的繁殖方法簡單,操作容易,能在較短時間內獲得大量翅萼石斛種苗,對翅萼石斛種質資源?;ず涂沙中鎂哂兄匾庖?,應用前景非常廣闊,適合規?;乒閿τ?。

在上述技術方案的基礎上,本發明還可以做如下改進。

進一步,步驟1中,所述翅萼石斛蒴果采自廣西植物研究所蘭花種質圃,為當年人工自交授粉結實的成熟未開裂蒴果。

進一步,步驟1中,所述消毒的具體步驟為:先用洗潔精清洗翅萼石斛蒴果的表面,再用自來水沖洗至少30min,然后用75%(v/v)酒精浸泡1min,接著用無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞浸泡15-30min,然后用無菌水沖洗至少5次。

采用上述進一步的有益效果是:采用上述消毒方法,消毒滅菌的效果好。

進一步,步驟1中,所述暗培養的溫度為25±2℃,時間為20-30d。

進一步,步驟2中,所述原球莖的接種量為每個培養瓶接種150-200個原球莖,所述培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL原球莖增殖和叢生芽誘導培養基。

進一步,步驟3中,所述叢生芽的接種量為每個培養瓶接種15-20個叢生芽,所述培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL生根壯苗培養基。

進一步,步驟1、步驟2和步驟3中,所述光培養的溫度均為25±2℃,光照強度均為1500-2000lux,光周期均為12h/d,光照時間分別為30-50d、45-60d和80-120d。

進一步,步驟4中,所述煉苗的條件為:以散光為主,光照強度為3000-4000lux,溫度為15-25℃,濕度為70-80%。

進一步,步驟4中,所述移栽基質經甲基托布津粉劑600倍稀釋液消毒處理,所述移栽基質為水苔。

采用上述進一步的有益效果是:移栽基質經消毒處理后,不含有毒、有害物質。此外,上述栽培基質的移栽成活率均超過76.7%,且長勢很好。

進一步,步驟4中,所述塑料大棚在夏季用70%遮陽網進行遮陰。

本發明的有益效果:

(1)本發明的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長,原球莖增殖和叢生芽誘導培養基可以極大促進原球莖增殖和叢生芽生長,生根壯苗培養基可以極大促進生根壯苗。本發明的三種培養基相互作用,極大地提高了原球莖增殖倍數及誘導叢生芽產生,非常適合由翅萼石斛種子繁殖成苗。

(2)本發明建立了一種利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,以翅萼石斛經無菌播種獲得的原球莖為材料,包括種子播前處理、種子萌發和原球莖誘導培養、原球莖增殖和叢生芽誘導培養、叢生芽生根壯苗培養以及移栽馴化步驟。采用本發明方法繁殖翅萼石斛種苗,可在短期內獲得大量優良種苗,增殖系數高達6.4個,克服了以莖段為外植體浪費材料及增殖系數較低的弊端;移栽成活率高達76.7%,具有繁殖速度快、產量大、種苗質量優、需時短、實際操作性強等特點。

(3)本發明的繁殖方法簡單,操作容易,能在較短時間內獲得大量翅萼石斛種苗,對翅萼石斛種質資源?;ず涂沙中鎂哂兄匾庖?,應用前景非常廣闊,適合規?;乒閿τ?。

附圖說明

圖1為本發明的實施例2原球莖接種到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基60d后的原球莖增殖情況。

圖2為本發明的實施例2叢生芽接種到生根壯苗培養基90d后的原球莖增殖情況。

圖3為本發明的實施例2生根苗移栽60d后的生長情況。

具體實施方式

以下結合附圖對本發明的原理和特征進行描述,所舉實例只用于解釋本發明,并非用于限定本發明的范圍。

實施例1

本實施例的使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,

所述種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成;

所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的馬鈴薯泥組成;

所述生根壯苗培養基由MS基本培養基、1.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成。

本實施例的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,包括如下步驟:

步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養

在廣西植物研究所蘭花種質圃,采摘當年人工自交授粉結實的成熟未開裂的翅萼石斛蒴果,采用如下方法進行消毒:先用洗潔精清洗翅萼石斛蒴果的表面,再用自來水沖洗30min,然后用75%(v/v)酒精浸泡1min,接著用無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞浸泡15min,然后用無菌水沖洗至少5次。

取出種子,均勻播種于種子萌發和原球莖誘導培養基中,先于溫度為25±2℃,進行暗培養20d,待種子轉綠后,再于溫度為25±2℃,光照強度為1500lux,光周期為12h/d,進行光培養50d,種子萌發后,進而得到原球莖。

步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養

將步驟1得到的誘導的原球莖,均勻轉接到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,每個培養瓶接種150個原球莖,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL原球莖增殖和叢生芽誘導培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為1500lux,光周期為12h/d,進行光培養60d,原球莖增殖后,誘導得到叢生芽。

步驟3:叢生芽生根壯苗培養

當步驟2得到的叢生芽長出2-3片葉子、高2-3cm時,均勻轉接到生根壯苗培養基中,每個培養瓶接種15個叢生芽,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL生根壯苗培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為1500lux,光周期為12h/d,進行光培養120d,得到生根試管苗。

步驟4:移栽馴化

于春季3-4月,將步驟3得到的生根試管苗置于煉苗室,煉苗室以散光為主,光照強度為3000lux,溫度為15℃,濕度為70%,帶瓶煉苗15d天后,洗凈根部,移栽到經甲基托布津粉劑600倍稀釋液消毒處理的移栽基質中,移栽基質為水苔,再置于塑料大棚中,塑料大棚在夏季用70%遮陽網進行遮陰,澆水、保濕至成苗、出圃,即得到翅萼石斛種苗。

實施例2

本實施例的使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,

所述種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成,pH值為5.8;

所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的香蕉泥組成,pH值為5.8;

所述生根壯苗培養基由MS基本培養基、2.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成,pH值為5.8。

本實施例的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,包括如下步驟:

步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養

在廣西植物研究所蘭花種質圃,采摘當年人工自交授粉結實的成熟未開裂的翅萼石斛蒴果,采用如下方法進行消毒:先用洗潔精清洗翅萼石斛蒴果的表面,再用自來水沖洗40min,然后用75%(v/v)酒精浸泡1min,接著用無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞浸泡20min,然后用無菌水沖洗至少5次。

取出種子,均勻播種于種子萌發和原球莖誘導培養基中,先于溫度為25±2℃,進行暗培養25d,待種子轉綠后,再于溫度為25±2℃,光照強度為1800lux,光周期為12h/d,進行光培養40d,待種子萌發后,進而得到原球莖。

步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養

將步驟1得到的誘導的原球莖,均勻轉接到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,每個培養瓶接種150個原球莖,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL原球莖增殖和叢生芽誘導培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為1800lux,光周期為12h/d,進行光培養45d,待原球莖增殖后,誘導得到叢生芽。原球莖增殖系數達到6.4個,叢生芽表現好,顏色深綠,苗壯(如圖1所示)。

步驟3:叢生芽生根壯苗培養

當步驟2得到的叢生芽長出2-3片葉子、高2-3cm時,均勻轉接到生根壯苗培養基中,每個培養瓶接種15個叢生芽,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL生根壯苗培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為1800lux,光周期為12h/d,進行光培養90d,得到生根試管苗。生根試管苗生長表現越來越好,葉片呈深綠色,100%生根,根系9.5cm,株高平均8.7cm(如圖2所示)。

步驟4:移栽馴化

于春季3-4月,將步驟3得到的生根試管苗置于煉苗室,煉苗室以散光為主,光照強度為3500lux,溫度為20℃,濕度為75%,帶瓶煉苗25d天后,洗凈根部,移栽到經甲基托布津粉劑600倍稀釋液消毒處理的移栽基質中,移栽基質為水苔,再置于塑料大棚中,塑料大棚在夏季用70%遮陽網進行遮陰,澆水、保濕至成苗、出圃,即得到翅萼石斛種苗。成活率達到76.7%,且長勢很好(如圖3所示)。

實施例3

本實施例的使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的培養基,由種子萌發和原球莖誘導培養基、原球莖增殖和叢生芽誘導培養基以及生根壯苗培養基組成,其中,

所述種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、2.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成;

所述原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、4.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的馬鈴薯泥組成;

所述生根壯苗培養基由MS基本培養基、4.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成。

本實施例的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,包括如下步驟:

步驟1:無菌播種及原球莖誘導培養

在廣西植物研究所蘭花種質圃,采摘當年人工自交授粉結實的成熟未開裂的翅萼石斛蒴果,采用如下方法進行消毒:先用洗潔精清洗翅萼石斛蒴果的表面,再用自來水沖洗50min,然后用75%(v/v)酒精浸泡1min,接著用無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞浸泡30min,然后用無菌水沖洗至少5次。

取出種子,均勻播種于種子萌發和原球莖誘導培養基中,先于溫度為25±2℃,進行暗培養30d,待種子轉綠后,再于溫度為25±2℃,光照強度為2000lux,光周期為12h/d,進行光培養30d,待種子萌發后,進而得到原球莖。

步驟2:原球莖增殖和叢生芽誘導培養

將步驟1得到的誘導的原球莖,均勻轉接到原球莖增殖和叢生芽誘導培養基中,每個培養瓶接種200個原球莖,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL原球莖增殖和叢生芽誘導培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為2000lux,光周期為12h/d,進行光培養45d,待原球莖增殖后,誘導得到叢生芽。原球莖增殖系數達到8.2個,叢生芽表現好,顏色深綠,苗壯。

步驟3:叢生芽生根壯苗培養

當步驟2得到的叢生芽長出2-3片葉子、高2-3cm時,均勻轉接到生根壯苗培養基中,每個培養瓶接種20個叢生芽,培養瓶的容量為630mL,每個培養瓶中放有100mL生根壯苗培養基。于溫度為25±2℃,光照強度為2000lux,光周期為12h/d,進行光培養80d,得到生根試管苗。

步驟4:移栽馴化

于春季3-4月,將步驟3得到的生根試管苗置于煉苗室,煉苗室以散光為主,光照強度為3500lux,溫度為20℃,濕度為75%,帶瓶煉苗25d天后,洗凈根部,移栽到經甲基托布津粉劑600倍稀釋液消毒處理的移栽基質中,移栽基質為水苔,再置于塑料大棚中,塑料大棚在夏季用70%遮陽網進行遮陰,澆水、保濕至成苗、出圃,即得到翅萼石斛種苗。

對比試驗1

本對比試驗1跟實施例2不同的是,種子萌發和原球莖誘導培養基由MS基本培養基、4.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成,pH值為5.8。其余都相同。

本對比試驗1的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,同實施例2。本對比試驗1的步驟1中,得到的原球莖超過50%死亡。

由此可見,本發明的種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長。

對比試驗2

本對比試驗2跟實施例2不同的是,原球莖增殖和叢生芽誘導培養基由MS基本培養基、1.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和100g/L的馬鈴薯汁組成,pH值為5.8。其余都相同。

本對比試驗2的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,同實施例2。本對比試驗2的步驟2中,原球莖增殖系數為5.8,但叢生芽生長慢。

由此可見,本發明的原球莖增殖和叢生芽誘導培養基可以極大促進原球莖增殖和叢生芽生長。

對比試驗3

本對比試驗3跟實施例2不同的是,原球莖增殖和叢生芽誘導由MS基本培養基、3.0mg/L的6-BA、0.1mg/L的NAA和20g/L的蔗糖組成,pH值為5.8。其余都相同。

本對比試驗3的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,同實施例2。本對比試驗3的步驟2中,原球莖增殖系數雖高達7.6,但是叢生芽誘導情況較差,生長相對較慢,表現一般,顏色淡黃,苗弱,有黃化現象。

由此可見,本發明的種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長。

對比試驗4

本對比試驗4跟實施例2不同的是,生根壯苗培養基由1/2MS基本培養基、0.8mg/L的NAA、200g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成,pH為5.8。其余都相同。

本對比試驗4的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,同實施例2。本對比試驗4的步驟3中,得到生根試管苗。生根試管苗生長較差,矮小,雖然100%生根,但根系相對較短,平均只有6.8cm,株高只有5.7cm。

對比試驗5

本對比試驗5跟實施例2不同的是,生根壯苗培養基由MS基本培養基、2.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT、0.2mg/L的NAA、100g/L的香蕉泥、30g/L的蔗糖和1.0g/L的活性炭組成,pH為5.8。其余都相同。

本對比試驗5的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的方法,同實施例2。本對比試驗5的步驟3中,得到生根試管苗。生根試管苗叢生芽較多,生根率75.0%,且根系少。

由此可見,本發明的生根壯苗培養基可以極大促進生根壯苗。

由對比試驗1-對比試驗5可知,本發明的種子萌發和原球莖誘導培養基可以極大促進種子萌發和原球莖生長,原球莖增殖和叢生芽誘導培養基可以極大促進原球莖增殖和叢生芽生長,生根壯苗培養基可以極大促進生根壯苗。三種培養基相互作用,極大地提高了原球莖增殖倍數及誘導叢生芽產生,非常適合由翅萼石斛種子繁殖成苗。

對比試驗6

本對比試驗5跟實施例2不同的是,移栽馴化時間為6-7月份。其余都相同。

本對比試驗5的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的移栽馴化方法,同實施例2。本對比試驗5的步驟4中,得到移栽馴化苗。移栽成活率只有15%,且生長較差,矮小,抗病差。

由此可見,本發明采用春季3-4月進行進行移栽馴化,可以提高移栽成活率,具有繁殖速度快、產量大、種苗質量優、需時短、實際操作性強等特點。

對比試驗7

本對比試驗7跟實施例2不同的是,移栽馴化時間為12月-次年1月份。其余都相同。

本對比試驗7的利用上述培養基使翅萼石斛種子快速繁殖成苗的移栽馴化方法,同實施例2。本對比試驗7的步驟4中,得到移栽馴化苗。移栽成活率只有36.7%,且生長較差,矮小,假鱗莖增殖能力差。

由此可見,本發明采用春季3-4月進行進行移栽馴化,可以提高移栽成活率,具有繁殖速度快、產量大、種苗質量優、需時短、實際操作性強等特點。

以上所述僅為本發明的較佳實施例,并不用以限制本發明,凡在本發明的精神和原則之內,所作的任何修改、等同替換、改進等,均應包含在本發明的?;し段е?。

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一種 使翅萼 石斛 種子 快速 繁殖 培養基 方法
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