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皇家马德里队维戈塞尔塔直播: 益生菌和益生元的使用方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201580019123.2

申請日:

20150310

公開號:

CN106455660A

公開日:

20170222

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A23L33/00,A23L33/135,A23L33/26 主分類號: A23L33/00,A23L33/135,A23L33/26
申請人: MJN 美國控股有限責任公司
發明人: M.基奇羅夫斯基,B.伯格,C.魯多爾夫,R.J.麥克馬洪,R.瓦沃倫圖
地址: 美國伊利諾伊州
優先權: 14/249548,14/503930
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 代理人: 初明明;李炳愛
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201580019123.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本公開內容涉及用于在受試者中減少內臟疼痛超敏性的風險、調節腸?腦軸或減少局部炎性反應的方法。所述方法包括提供包含鼠李糖乳桿菌GG?(LGG)、半乳寡糖(GOS)和聚葡萄糖(PDX)的營養組合物至所述受試者。LGG、GOS和PDX的組合可在消耗時顯示加成或協同有益健康作用。本文營養組合物適于給予兒童和嬰兒。

權利要求書

1.一種用于在兒科受試者中減少內臟疼痛超敏性的風險和減少功能性腹痛和嬰兒絞痛的方法,其包括給所述兒科受試者提供營養組合物,所述營養組合物包含碳水化合物源、蛋白源、脂肪源、約1x10CFU/100kcal至約1.5x10CFU/100kcal的鼠李糖乳桿菌GG、約0.1g/100kcal至約0.5g/100kcal的聚葡萄糖和約0.1g/100kcal至約1.0g/100kcal的半乳寡糖。2.權利要求1的方法,其中所述營養組合物還包含乳鐵蛋白。3.權利要求1的方法,其中所述營養組合物還包含二十二碳六烯酸。4.權利要求3的方法,其中所述營養組合物還包含花生四烯酸。5.權利要求4的方法,二十二碳六烯酸與花生四烯酸的重量比為約1:3至約9:1。6.權利要求1的方法,其中所述營養組合物包含約1x10cfu/100kcal至約1.5x10cfu/100kcal的鼠李糖乳桿菌GG。7.權利要求1的方法,其中所述營養組合物還包含β-葡聚糖。8.權利要求1的方法,其中所述營養組合物還包含鐵源。9.權利要求1的方法,其中所述營養組合物為嬰兒配方。10.一種用于通過提供營養組合物給兒科受試者而改變所述兒科受試者的腸-腦軸的方法,所述營養組合物每100kcal包含:(i)約6g-約22g的碳水化合物源;(ii)約1g-約7g的蛋白源;(iii)約1g-約10.3g的脂肪源;(iv)約1x10CFU-1.5x10CFU的鼠李糖乳桿菌GG;(v)約0.1g-1.0g的半乳寡糖;和(vi)約0.1g-0.5g的聚葡萄糖。11.權利要求10的方法,其中所述兒科受試者為嬰兒。12.權利要求10的方法,其中所述營養組合物為嬰兒配方。13.權利要求10的方法,其中所述營養組合物還包含培養上清液。14.權利要求10的方法,其中所述營養組合物還包含β-葡聚糖。15.權利要求10的方法,其中所述營養組合物還包含鐵源。16.一種通過提供營養組合物而減少兒科受試者的功能性腹痛的方法,所述營養組合物包含碳水化合物源、蛋白源、脂肪源、約1x10CFU/100kcal至約1.5x10CFU/100kcal的鼠李糖乳桿菌GG、約0.1g/100kcal至約0.5g/100kcal的聚葡萄糖和約0.015g/100kcal至約1.5g/100kcal的半乳寡糖。17.權利要求16的方法,其中所述營養組合物還包含膽固醇。18.權利要求16的方法,其中所述營養組合物還包含DHA。19.權利要求16的方法,其中所述營養組合物還包含ARA。20.權利要求16的方法,其中所述營養組合物為嬰兒配方。

說明書

技術領域

本公開內容主要涉及通過給予營養組合物而在靶受試者中減少內臟痛覺過敏和減少功能性腹痛(FAP)的方法,所述營養組合物包括鼠李糖乳桿菌GG (Lactobacillus rhamnosus GG, LGG)、半乳寡糖(GOS)和聚葡萄糖(PDX)的組合。所述營養組合物適于給予兒科受試者。另外,本公開內容提供用于通過提供本文公開的營養組合物而調節腸-腦軸、支持腸微生物群的早期調節和減少局部炎性反應的方法。本文提供的包括LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物可提供加成和/或協同有益健康作用。

背景技術

新生兒期早期是神經通路發育的關鍵時間,神經通路要求使用依賴性活性以正常發育。然而,在新生兒期的異常刺激例如應力、持續疼痛或長期炎癥可不利地影響發育,并隨后導致降低以后生命中對疼痛的閾值。

此外,抗生素的治療使用可通過偏移微生物群落而引起異常發育,可能改變穩態機制或導致病原體儲庫的擴大。進一步地,在內臟中的有害刺激可導致在孩童時期觀察到的長期內臟超敏性。例如,基于群體的研究已證明約8%的兒童經歷復發性FAP和約61%的這些兒童在其成年期繼續報告腹痛或腸易激綜合征樣癥狀(Chitkara, Rawat等人, 2005)。

因此,需要用于改善腸微生物群組成和活性使得兒科受試者將經歷較低的內臟痛覺過敏發生率和較低的消化道感染發生率,使得該較低的疼痛閾值可在受試者成年生命中繼續的方法。因此,本文提供通過給予營養組合物至靶受試者而改善靶受試者中腸微生物群的方法,所述營養組合物包括LGG、GOS和PDX的組合。此外,本文公開了用于通過給予具有本文所述的LGG、GOS和PDX的特定組合的營養組合物而降低內臟痛覺過敏的發生率、降低消化道感染的發生率、使結腸滲透性正?;?或支持平衡的免疫應答的方法。

本發明的公開內容

簡言之,本公開內容在一個實施方案中涉及用于通過提供營養組合物而在靶受試者中減少內臟疼痛超敏性的風險和/或降低內臟痛覺過敏的發生率的方法,所述營養組合物包含碳水化合物源、蛋白源、脂肪源以及LGG、GOS和PDX的組合。該營養組合物可另外減少FAP事件。在一些實施方案中,靶受試者為兒科受試者。在一些實施方案中,本文公開的包括LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物可在嬰兒配方中。

在某些實施方案中所述營養組合物可任選含有長鏈多不飽和脂肪酸(“LCPUFA”)例如二十二碳六烯酸(“DHA”)和/或花生四烯酸(“ARA”)的源、β-葡聚糖、乳鐵蛋白、鐵源和其一種或多種的混合物。

另外,本公開內容涉及通過提供給靶受試者具有LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而改善腸微生物群組成和/或功能的方法。進一步提供用于通過提供給靶受試者具有LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而降低消化道感染的發生率的方法。

本公開內容另提供通過提供給靶受試者具有LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而使結腸滲透性正?;姆椒?。另外提供通過提供給靶受試者具有LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而支持平衡的免疫應答和/或抗炎性反應的方法。本文進一步公開通過提供給靶受試者具有LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而減少嬰兒絞痛發生率的方法。

應該理解的是,前述一般描述和下文詳述均呈現本公開內容的實施方案并意圖提供用于理解所要求?;さ謀竟諶蕕男災屎吞卣韉母攀齷蚩蚣?。該描述用于解釋所要求?;さ鬧魈獾腦硨筒僮?。本公開內容的其它和進一步的特征和優勢對本領域技術人員而言在閱讀下列公開內容后是顯而易見的。

附圖簡述

圖1闡明PDX/GOS和PDX/GOS+LGG在屬水平上對腸微生物群的作用。

圖2闡明PDX/GOS和PDX/GOS+LGG在屬水平上對腸微生物群的作用。

圖3闡明PDX/GOS和PDX/GOS+LGG對細菌多樣性的作用。

圖4闡明PDX/GOS和PDX/GOS+LGG在門水平上對腸微生物群的作用。

圖5闡明飼喂PDX/GOS的大鼠的新物體識別測試的結果。

圖6A闡明LGG處理對對照和實驗大鼠的腦干和下皮層中神經遞質的水平的作用。

圖6B闡明LGG處理對對照和實驗大鼠的腦干和下皮層中神經遞質的水平的作用。

圖7闡明LGG對在新生結腸炎大鼠中相對于結腸直腸膨脹(“CRD”)的內臟運動反應(“VMR”)的作用。

實施本發明的最佳方式

現在將詳細提及本公開內容的實施方案,在下文描述其一個或多個實例。各個實例通過解釋本公開內容的營養組合物的方式提供且并不是限制。實際上,對本領域技術人員顯而易見的是在不偏離本公開內容的范圍的情況下,可以對本公開內容的教導進行各種修改和改變。例如,作為一個實施方案的部分說明或描述的特征可以與另一個實施方案一起使用以產生又一個實施方案。

因此,本公開內容旨在涵蓋進入隨附權利要求及其等同物的范圍內的這些修改和改變。本公開內容的其它目的、特點和方面在以下詳述中公開或由以下詳述而顯而易見。本領域普通技術人員應當理解本發明的討論只是例示性實施方案的描述,且并不旨在限制本公開內容的更廣泛的方面。

本公開內容主要涉及通過提供包括LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而改善腸微生物群組成和/或活性、降低內臟痛覺過敏的發生率、降低消化道感染的發生率、使結腸滲透性正?;?或支持平衡的免疫應答的方法。

“營養組合物”意指滿足受試者的營養素需求的至少一部分的物質或制劑。術語“營養劑”、“營養配方”、“腸內營養劑”和“營養補充劑”在整個本公開內容中用作營養組合物的非限制性實例。而且,“營養組合物”可以指液體、粉末、凝膠、膏劑、固體、濃縮物、懸浮液或腸內配方、口腔配方、嬰兒配方、兒科受試者配方、兒童配方、成長乳和/或成人配方的即用型形式。

“兒科受試者”意指年齡小于13歲的人。在一些實施方案中,兒科受試者是指出生至8歲大的人類受試者。在其它施方案中,兒科受試者是指年齡為1-6歲的人類受試者。在又另外的實施方案中,兒科受試者是指年齡為6-12歲的人類受試者。術語“兒科受試者”可指如下所述的嬰兒(早產兒或足月兒)和/或兒童。

“嬰兒”意指年齡從出生至不超過1歲的范圍的人類受試者且包括0-12個月校正年齡的嬰兒。短語“校正年齡”意指嬰兒的實足年齡減去嬰兒早產的時間量。因此,如果懷胎已達足月,校正年齡為嬰兒的年齡。術語嬰兒包括低出生重量的嬰兒、非常低出生重量的嬰兒和早產兒?!霸綺幣庵岡諶焉锏?7周結束之前出生的嬰兒?!白閽露幣庵岡諶焉锏?7周結束之后出生的嬰兒。

“兒童”意指年齡為12個月-約13歲范圍的受試者。在一些實施方案中,兒童為年齡為1-12歲的受試者。在其它實施方案中,術語“兒童(children)”或“兒童(child)”指1-約6歲或約7-約12歲的受試者。在其它實施方案中,術語“兒童(children)”或“兒童(child)”指年齡為12個月-約13歲的任何范圍。

“嬰兒配方”意指滿足嬰兒的營養素需求的至少一部分的組合物。在美國,嬰兒配方的內含物通過在21C.F.R.第100、106和107章中描述的聯邦法規指定。這些法規限定常量營養素、維生素、礦物質和其它成分水平,以致力于模擬人母乳的營養和其它性質。

術語“成長乳”是指寬類別的營養組合物,其旨在用作多樣化膳食的一部分以便支持年齡為約1-約6歲的兒童的正常生長和發育。

“營養完全的”意指可以用作營養唯一來源的組合物,其將供應基本上所有的所需要的日常量的維生素、礦物質和/或痕量元素以及蛋白質、碳水化合物和脂質。實際上,“營養完全的”描述以下營養組合物,其提供支持受試者的正常生長和發育所需要的足夠量的碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

對足月兒“營養完全的”營養組合物將根據定義定性和定量地提供足月兒生長所需要的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

對兒童“營養完全的”營養組合物將根據定義定性和定量地提供兒童生長所需要的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

本公開內容的營養組合物可基本上不含本文中所述的任何任選或選擇的成分,前提是剩余的營養組合物仍包含本文中所述的所有需要的成分或特點。在該上下文中,且除非另有指定,否則術語“基本上不含”意指所選擇的組合物可以包含小于功能量的任選成分,通常小于0.1%重量,且還包含0%重量的這種任選或選擇的成分。

因此,對于早產兒“營養完全的”營養組合物將根據定義定性和定量地提供早產兒生長所需要的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

對足月兒“營養完全的”營養組合物將根據定義定性和定量地提供足月兒生長所需要的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

對兒童“營養完全的”營養組合物將根據定義定性和定量地提供兒童生長所需要的足夠量的所有碳水化合物、脂質、必需脂肪酸、蛋白質、必需氨基酸、條件必需氨基酸、維生素、礦物質和能量。

當應用到營養素時,術語“必需”是指無法通過身體以足以正常生長和保持健康的量合成且因此必需通過膳食供應的任何營養素。當應用到營養素時,術語“條件必需”意指在身體無法獲得足夠量的前體化合物以進行內生合成的條件下,營養素必須由膳食供應。

術語“水解度”是指肽鍵被水解方法破壞的程度。例如,本公開內容的蛋白質等效源可在一些實施方案中包含具有不大于40%水解度的水解蛋白。對于該實例,這意味著至少40%的總肽鍵已被水解方法切割。

術語“部分水解的”意指具有大于0%但小于50%的水解度。

術語“廣泛水解的”意指具有大于或等于50%的水解度。

術語“益生菌”意指對宿主的健康發揮至少一種有益作用的具有低的或沒有致病性的微生物。益生菌的一個實例是LGG。

在一個實施方案中,益生菌可以為存活的或非存活的。本文中所用的術語“存活的”是指活的微生物。術語“非存活的”或“非存活的益生菌”意指非活的益生菌微生物、其細胞組分和/或其代謝物。這種非存活的益生菌可以被熱殺死或以其它方式失活,但它們保留有利影響宿主的健康的能力。本公開內容中有用的益生菌可以為天然存在的、合成的或通過生物體的基因操作開發的,不管這種源現在是已知的或之后開發的。

術語“失活益生菌”意指其中所提及的益生菌生物體的代謝活性或繁殖能力已被降低或破壞的益生菌。然而,“失活益生菌”確實仍然在細胞水平上保留至少一部分其生物學二醇-蛋白質和DNA/RNA結構。本文中所用的術語“失活的”與“非存活的”同義。更具體而言,失活益生菌的一個非限制性實例是失活的鼠李糖乳桿菌GG (“LGG”)或“失活的LGG”。

術語“細胞當量”是指等同于同等數量的活細胞的非存活的非復制性益生菌的水平。術語“非復制性”應理解為自等量的復制菌獲得的非復制性微生物的量(cfu/g),包括失活的益生菌、DNA片段、細胞壁或胞質化合物?;謊災?,非存活的非復制性生物體的量以cfu的方式表示,如同所有微生物是活的一樣,不管它們是否死的、非復制性的、失活的、片段化的等。

“益生元”意指通過選擇性刺激可以改進宿主的健康的在消化道中的一個或有限數量的細菌的生長和/或活性而有利地影響宿主的不可消化的食物成分。益生元的實例包括PDX和GOS。

“β-葡聚糖”意指所有β-葡聚糖,包括特定類型的β-葡聚糖,例如β-1,3-葡聚糖或β-1,3;1,6-葡聚糖。此外,β-1,3;1,6-葡聚糖是β-1,3-葡聚糖的一個類型。因此,術語“β-1,3-葡聚糖”包括β-1,3;1,6-葡聚糖。

本文所用的“非人乳鐵蛋白”意指由人母乳之外的來源產生或獲得的乳鐵蛋白。在一些實施方案中,非人乳鐵蛋白為具有不同于人乳鐵蛋白的氨基酸序列的氨基酸序列的乳鐵蛋白。在其它實施方案中,用于本公開內容的非人乳鐵蛋白包括通過遺傳修飾的生物體產生的人乳鐵蛋白。本文使用的術語“生物體”是指任何連續生活的系統,例如動物、植物、真菌或微生物。

“固有葉黃素”或“來自內源來源的葉黃素”是指并非原樣加入但存在于配方中的其它組分或成分中的配方中所存在的任何葉黃素;葉黃素天然存在于這些其它組分中。

本文中所用的所有百分比、份數和比率均是按照總組合物的重量計的,除非另有指定。

本公開內容對單數特征或限制的所有提及應當包括相應的復數特征或限制,且反之亦然,除非另有指定或通過進行該提及的上下文作出明確相反暗示。

本文中所用的方法或過程步驟的所有組合可以以任何順序進行,除非另有指定或通過提及組合的上下文作出明確相反暗示。

本公開內容的方法和組合物(包括其組分)可以包含本文中所述的實施方案的必需要素和限制以及本文中所述的或另外在營養組合物中有用的任何另外或任選成分、組分或限制,由或基本上由本文中所述的實施方案的必需要素和限制以及本文中所述的或另外在營養組合物中有用的任何另外或任選成分、組分或限制組成。

本文中所用的術語“約”應當理解為指規定為任何范圍的端點的兩個數字。對范圍的任何提及應當認為是對該范圍內的任何子集提供支持。

本公開內容涉及通過提供包括LGG、GOS和PDX的組合的營養組合物而改善腸微生物群組成和活性的方法。

簡言之,在不限于任何具體理論的情況下,乳桿菌與PDX和GOS的組合對內臟痛覺過敏的作用可與這些營養素單獨給予時相比為協同的。

在不限于任何具體理論的情況下,存在包含LGG的營養組合物藉此可正面地影響腸-腦軸的作用的許多種生理學和生物化學機制。例如,可通過經由細胞因子和其它介質影響免疫系統和周圍神經系統而影響胃腸健康,所述細胞因子和其它介質促進作為炎性后內臟超敏性的形成的可能原因的傳入敏化。進一步地,營養組合物可引起產氣、膽汁鹽去綴合細菌菌株的置換。

本文公開的營養組合物的潛在作用機制包括但不限于:促進完全排除促炎菌(例如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)等)和/或產生炎性或神經毒性物質(例如分別為內毒素和ε毒素)的細菌(例如產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)、艱難梭菌(Clostridium difficile))的微生物學環境(例如酸化、改進的乳酸和/或短鏈脂肪酸概況、增加的抗菌劑);減輕胃腸炎癥的癥狀(例如疼痛/不適、氣脹/膨脹)和使抗炎/促炎細胞因子(IL-10/IL-12)的比例正?;?,例如通過與Toll樣受體(例如TLR2)和/或由樹突狀細胞和/或其它免疫細胞所攜帶的其它模式識別受體(PRR)的相互作用刺激抗炎細胞因子IL-10產生;生物合成神經遞質(例如谷氨酸鹽)和/或神經遞質前體(例如色氨酸);生物合成與神經發育/過程相關的營養素/微營養素(例如葉酸、膽堿、谷氨酰胺、鐵、鋅等);改善應激誘導的神經發育/過程的改變(例如促腎上腺皮質激素釋放因子等);經由5-羥色胺(5-HT)受體的正?;跎傺仔院蟪糶?;和分泌直接改善結腸粘膜完整性、跨上皮阻力、減少炎癥、減少甘露醇通量和增加緊密連接蛋白的表達的因子。

因此,本文提供的益生菌物質和益生元物質的特定組合一起可在兒科受試者(包括嬰兒和兒童)中優化胃腸微生物群的組成和支持腸-腦軸的發育。此外,當給予兒科受試者(包括嬰兒和兒童)時,本文所述的益生菌和益生元的特定組合可降低兒科受試者的內臟痛覺過敏和FAP。

在一些實施方案中所述營養組合物包含鼠李糖乳桿菌GG (ATCC號53103)。在一些實施方案中,本文所述的所公開的營養組合物還可包含LGG以外的益生菌源??砂謨楹銜鎦械鈉淥嬪ǖ幌抻謁綹司?Bifidobacterium)長雙歧桿菌BB536 (Bifidobacterium longum BB536)(BL999, ATCC: BAA-999)、長雙歧桿菌AH1206 (NCIMB: 41382)、短雙歧桿菌AH1205 (Bifidobacterium breve AH1205) (NCIMB: 41387)、嬰兒雙歧桿菌35624 (Bifidobacterium infantis 35624) (NCIMB: 41003)和動物雙歧桿菌乳酸亞種BB-12 (Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12) (DSM號10140)或其任何組合。

在一些實施方案中,所述營養組合物包含LGG的量為約1 x 104 cfu/100 kcal至約1.5 x 1010 cfu/100 kcal。在其它實施方案中,所述營養組合物包含LGG的量為約1 x 106 cfu/100 kcal至約1 x 109 cfu/100 kcal。仍在某些實施方案中,所述營養組合物可包含的LGG的量為約1 x 107 cfu/100 kcal至約1 x 108 cfu/100 kcal。在一些實施方案中,在LGG不以濃度范圍的上限包含時,可包含額外的益生菌直至規定的濃度上限。

在一些實施方案中,所述營養組合物包含來自如國際公布的申請號WO 2013/142403(其通過引用以其整體結合與此)中所公開的益生菌分批培養過程的指數生長后期的培養上清液。在不希望限于理論的情況下,據信培養上清液的活性可歸因于釋放于益生菌的分批培養的指數期(或“對數”期)后期的培養基中所發現的組分的混合物(包括蛋白質物質和可能包括(外)多糖物質)。本文所用的術語“培養上清液”包括發現于培養基中的組分的混合物。細菌的分批培養中所認可的階段對技術人員是已知的。這些是“滯后”、“對數” (“對數”或“指數”)、“靜止”和“死亡”(或“對數下降”)期。在活菌存在期間的所有階段中,細菌從培養基中代謝營養素,并將物質分泌(施加、釋放)到培養基中。在生長階段的給定的時間點分泌的物質的組成一般是不可預測的。

在一個實施方案中,可通過包括以下步驟的方法獲得培養上清液:(a) 使用分批方法使益生菌例如LGG在合適的培養基中培養;(b) 收獲在培養步驟的指數生長期后期的培養上清液,該期參照分批培養過程的滯后期和靜止期之間的后半段時間限定;(c) 任選地從上清液除去低分子量成分以保留5-6千道爾頓(kDa)以上分子量的成分;(d) 從培養上清液除去液體內容物以獲得組合物。

培養上清液可包含從指數期后期收獲的分泌物質。指數期后期發生在中期指數期(其為指數期持續時間的中段時間,因此將指數期后期稱為滯后期和靜止期之間的后半段時間)之后的時間。具體而言,本文使用術語“指數期后期”是指LGG分批培養過程的滯后期和靜止期之間時間的后四分之一部分。在一些實施方案中,培養上清液在指數期持續時間的75%-85%的時間點收獲,并可在指數期中流逝時間的約5/6處收獲。

在一些實施方案中,營養組合物包含約0.015 mg/100 kcal至約1.5 mg/100 kcal的培養上清液。在一些實施方案中,在營養組合物不包含本文公開的濃度范圍的上限的LGG時,所述營養組合物可另外包含培養上清液。

所公開的營養組合物還包含益生元、具體為GOS和PDX的來源。在一些實施方案中,營養組合物中GOS的量可為約0.1 g/100 kcal至約1.5 g/100 kcal。在另一個實施方案中,營養組合物中GOS的量可為約0.15 g/100 kcal至約0.5 g/100 kcal。

營養組合物中PDX的量在一些實施方案中可在約0.1 g/100 kcal至約0.5 g/100 kcal的范圍內。在具體的實施方案中,GOS和PDX以約至少約0.2 g/100 kcal的總量補充于營養組合物中,并可為約0.2 g/100 kcal中約1.5 g/100 kcal。在一些實施方案中,營養組合物可包含總量約0.6至約0.8 g/100 kcal的GOS和PDX。

在一些實施方案中,營養組合物可包含GOS和PDX以外的益生元。在一些實施方案中,可用于本公開內容的額外益生元可包括:乳果糖、乳蔗糖、棉子糖、葡萄寡糖、菊粉、果寡糖、異麥芽寡糖、大豆寡糖、乳蔗糖、木寡糖、殼寡糖、甘露寡糖、阿拉伯寡糖、唾液酸寡糖、巖藻寡糖和龍膽寡糖。在其中GOS和PDX不以各自濃度范圍的上限包含在內的實施方案中,可包含額外的益生元直至規定的濃度上限。

在一個實施方案中,在營養組合物是嬰兒配方時,LGG、GOS和PDX的組合可加至市售可得的嬰兒配方。例如,Enfalac、Enfamil?、Enfamil?早產兒配方、含鐵Enfamil?、Enfamil? LIPIL?、Lactofree?、Nutramigen?、Pregestimil?和ProSobee? (可獲自Mead Johnson & Company, Evansville, IN, U.S.A.)可用LGG、GOS和PDX補充,并用于實施本公開內容。

本公開內容的營養組合物還可包含碳水化合物源。碳水化合物源可為本領域使用的任何來源,例如乳糖、葡萄糖、果糖、玉米糖漿固體、麥芽糖糊精、蔗糖、淀粉、大米糖漿固體等。碳水化合物在營養組合物中的量通??梢栽讜?g-約25g/100kcal中變化。在一些實施方案中,碳水化合物的量為約6g-約22 g/100kcal。在其它實施方案中,碳水化合物的量為約12g-約14g/100kcal。在一些實施方案中,玉米糖漿固體是優選的。此外,水解、部分水解和/或廣泛水解的碳水化合物由于其容易消化性對于包含在營養組合物中可為合乎需要的。具體而言,水解的碳水化合物較不可能包含變應原性表位。

適用于本文的碳水化合物物質的非限制性實例包括水解或完整的、天然或化合修飾的淀粉,其源自玉米、木薯、稻或馬鈴薯,呈蠟狀或非蠟狀形式。合適的碳水化合物的非限制性實例包括各種水解淀粉,其表征為水解玉米淀粉、麥芽糊精、麥芽糖、玉米糖漿、右旋糖、玉米糖漿固體、葡萄糖和各種其它葡萄糖聚合物及其組合。其它合適的碳水化合物的非限制性實例包括通常稱為蔗糖、乳糖、果糖、高果糖玉米糖漿、不消化的寡糖(例如果寡糖)及其組合的那些。

本公開內容的營養組合物還可包含蛋白源。蛋白源可為本領域中所用的任何來源,例如脫脂乳、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白、水解蛋白、氨基酸等??捎糜謔凳┍竟諶蕕吶H櫚鞍自窗ǖ幌抻諶櫚鞍追?、乳蛋白濃縮物、乳蛋白分離物、脫脂乳固體、脫脂乳、脫脂奶粉、乳清蛋白、乳清蛋白分離物、乳清蛋白濃縮物、甜乳清、酸乳清、酪蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白酸鹽(例如酪蛋白酸鈉、酪蛋白酸鈉鈣、酪蛋白酸鈣)及其任何組合。

在一個實施方案中,營養組合物的蛋白質提供為完整蛋白質。在其它實施方案中,蛋白質提供為完整蛋白質和部分水解的蛋白質兩者的組合,水解度為約4%和10%之間。在某些其它實施方案中,蛋白質為更完全水解的。在仍其它實施方案中蛋白源包含氨基酸。在又另一個實施方案中,蛋白源可用含谷氨酰胺的肽補充。

在營養組合物的具體實施方案中,蛋白源的乳清:酪蛋白比率類似于人母乳中發現的比率。在一個實施方案中,蛋白源包含約40%至約90%乳清蛋白和約10%至約60%酪蛋白。

在一些實施方案中,營養組合物包含約1 g-約7 g的蛋白源/100 kcal。在其它實施方案中,營養組合物包含3.5 g-約4.5 g的蛋白質/100 kcal。

在一些實施方案中,本文所述的營養組合物包含脂肪源。合適的脂肪源包括但不限于動物來源,例如乳脂肪、黃油、黃油脂肪、蛋黃脂質;海洋來源,例如魚油、海產油、單細胞油;蔬菜和植物油,例如玉米油、低芥酸菜子油、向日葵油、大豆油、棕櫚液油、椰子油、高油酸向日葵油、月見草油、菜籽油、橄欖油、亞麻仁(亞麻籽)油、棉籽油、高油酸紅花油、棕櫚硬脂酸甘油酯、棕櫚仁油、麥胚芽油;中鏈甘油三酯油和脂肪酸的乳液和酯;及其任何組合。

在一些實施方案中,營養組合物包含約1 g-約10 g的脂肪源/100 kcal。在其它實施方案中,營養組合物包含約3.5 g-約7 g的脂肪源/100 kcal。

在一些實施方案中營養組合物還可包含LCPUFA源。在一個實施方案中營養組合物中LCPUFA的量有利地為至少約5 mg/100 kcal并可在約5 mg/100 kcal至約100 mg/100 kcal變化,更優選約10 mg/100 kcal至約50 mg/100 kcal。LCPUFA的非限制性實例包括但不限于DHA、ARA、亞油酸(18:2 n-6)、γ-亞麻酸(18:3 n-6)、在n-6途徑中的二同型-γ-亞麻酸(20:3 n-6)、α-亞麻酸(18:3 n-3)、十八碳四烯酸(18:4 n-3)、二十碳四烯酸(20:4 n-3)、二十碳五烯酸(20:5 n-3)和二十二碳五烯酸(22:6 n-3)。

在一些實施方案中,營養組合物中所包括的LCPUFA可包含DHA。在一個實施方案中營養組合物中DHA的量為約15 mg/100 kcal至約75 mg/100 kcal。在仍一些實施方案中,營養組合物中DHA的量為約10 mg/100 kcal至約50 mg/100 kcal。

在另一個實施方案中,尤其如果營養組合物為嬰兒配方的話,營養組合物用DHA和ARA兩者補充。在該實施方案中,ARA:DHA的重量比可為約1:3和約9:1之間。在具體實施方案中ARA:DHA的比率為約1:2至約4:1。

DHA和ARA可呈天然形式,條件是LCPUFA源的其余部分不導致對嬰兒有任何實質的有害作用?;蛘?,DHA和ARA可以精制形式使用。

本文所述的所公開營養組合物在一些實施方案中還可包含β-葡聚糖的源。葡聚糖為多糖,特別是葡萄糖的聚合物,其為天然存在的且可以在細菌、酵母、真菌和植物的細胞壁中發現。β-葡聚糖本身為葡萄糖聚合物的多樣化子集,其由通過β型葡糖苷鍵連接在一起以形成復雜的碳水化合物的葡萄糖單體的鏈組成。

β-1,3-葡聚糖為由例如酵母、蘑菇、細菌、海藻或谷類純化的碳水化合物聚合物。β-1,3-葡聚糖的化學結構取決于β-1,3-葡聚糖的來源。而且,各種物理化學參數例如溶解度、一級結構、分子量和支化對β-1,3-葡聚糖的生物活性有作用(Yadomae T.,Structure and biological activities of fungal beta-1,3-Glucans(真菌的β-1,3-葡聚糖的結構和生物活性). Yakugaku Zasshi. 2000; 120:413-431.)。

β-1,3-葡聚糖為具有或不具有在各種各樣植物、酵母、真菌和細菌的細胞壁中發現的β-1,6-葡萄糖側鏈的天然存在的多糖。β-1,3;1,6-葡聚糖為具有在(1,6)位置處連接的側鏈的含具有(1,3)連接的葡萄糖單元的那些。β-1,3;1,6葡聚糖為一組異質的葡萄糖聚合物,所述葡萄糖聚合物共享結構共性,包括由β-1,3鍵連接的直鏈葡萄糖單元的骨架和自該骨架延伸的β-1,6-連接的葡萄糖分枝。盡管這是目前描述的β-葡聚糖類別的基本結構,但是一些變化可存在。例如,某些酵母β-葡聚糖具有從β(1,6)分枝延伸的β(1,3)分枝的額外區域,這增加了其各自結構的進一步復雜性。

衍生自面包酵母釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的β-葡聚糖由D-葡萄糖分子鏈組成,所述D-葡萄糖分子在1和3位置處連接,具有在1和6位置處連接的葡萄糖側鏈。酵母衍生的β-葡聚糖是不可溶的、纖維狀、復雜的糖,其具有葡萄糖單元的直鏈通用結構,所述葡萄糖單元具有β-1,3骨架,其散布有在長度上一般為6-8個葡萄糖單元的β-1,6側鏈。更具體而言,衍生自面包酵母的β-葡聚糖為聚(1,6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1,3)-β-D-吡喃葡萄糖。

而且,β-葡聚糖在兒科受試者中具有良好耐受性且不產生或引起過多的氣體、腹脹、胃氣脹或腹瀉。將β-葡聚糖加到兒科受試者的營養組合物(例如嬰兒配方、成長乳或另一種兒童營養產品)將通過提高對入侵的病原體的抵抗性并因此保持或改進整體健康而改進受試者的免疫反應。

在一些實施方案中,β-葡聚糖為β-1,3;1,6-葡聚糖。在一些實施方案中,β-1,3;1,6-葡聚糖衍生自面包酵母。營養組合物可以包含全葡聚糖顆粒β-葡聚糖、微粒β-葡聚糖、PGG-葡聚糖(聚1,6-β-D-吡喃葡萄糖基-1,3-β-D-吡喃葡萄糖)或其任何混合物。

在一些實施方案中,β-葡聚糖在營養組合物中的量為約3mg-約17mg/100kcal。在另一個實施方案中,β-葡聚糖的量為約6mg-約17mg/100kcal。

本公開內容的營養組合物可包含乳鐵蛋白。乳鐵蛋白為含1-4個聚糖(取決于物種)的約80 kD的單鏈多肽。不同物種的乳鐵蛋白的3-D結構是非常相似的,但不相同。各乳鐵蛋白包含兩個同源葉(lobe),稱為N-和C-葉,分別指該分子的N末端和C末端部分。各葉進一步由兩個亞葉或域組成,所述亞葉或域形成裂口,在此鐵離子(Fe3+)以協同協作的方式與碳酸(氫)根陰離子緊密結合。這些域分別稱為N1、N2、C1和C2。乳鐵蛋白的N末端具有強陽離子肽區,其負責多種重要的結合特征。乳鐵蛋白具有非常高的等電點(~pI 9),其陽離子性質在其對抗細菌、病毒和真菌病原體的能力上起主要作用。在乳鐵蛋白的N末端區內有數個陽離子氨基酸殘基簇,其介導乳鐵蛋白針對大范圍的微生物的生物活性。

用于本公開內容的乳鐵蛋白可例如分離自非人動物的乳或由遺傳修飾的生物體產生。本文所述營養組合物在一些實施方案中可包含非人乳鐵蛋白、由遺傳修飾的生物體產生的非人乳鐵蛋白和/或由遺傳修飾的生物體產生的人乳鐵蛋白。

用于本公開內容的合適的非人乳鐵蛋白包括但不限于與人乳鐵蛋白氨基酸序列具有至少48%同源性的那些。例如,牛乳鐵蛋白(“bLF”)具有與人乳鐵蛋白的氨基酸組成有約70%序列同源性的氨基酸組成。在一些實施方案中,非人乳鐵蛋白與人乳鐵蛋白具有至少65%同源性,并在在一些實施方案中具有至少75%同源性。對于用于本公開內容而言可接受的非人乳鐵蛋白包括而不限于bLF、豬乳鐵蛋白、馬乳鐵蛋白、水牛乳鐵蛋白、山羊乳鐵蛋白、鼠乳鐵蛋白和駱駝乳鐵蛋白。

適于本公開內容的bLF可由本領域已知的任何方法產生。例如,在通過引用以其整體結合于本文中的美國專利號4,791,193中,Okonogi等人公開了產生高純度牛乳鐵蛋白的方法。一般而言,所公開的方法包括三個步驟。首先將原料乳材料接觸弱酸性陽離子交換劑以吸收乳鐵蛋白,接著第二步,其中進行洗滌,以除去未吸收的物質。接著是解吸步驟,其中取出乳鐵蛋白,以產生純化的牛乳鐵蛋白。其它方法可以包括美國專利號7,368,141、5,849,885、5,919,913和5,861,491中所述的步驟,其公開內容通過引用以其整體全部結合。

在某些實施方案中,本公開內容所用的乳鐵蛋白可通過用于自乳源分離蛋白質的膨脹床吸附(“EBA”)方法提供。EBA有時也稱為經穩定的流化床吸附,為用于自乳源分離乳蛋白例如乳鐵蛋白的方法,其包括建立包含微?;實吶蛘痛參街?,將乳源應用于基質,和用包含約0.3-約2.0 M氯化鈉的洗脫緩沖液自基質洗脫乳鐵蛋白。任何哺乳動物乳源均可用于本方法,盡管在具體實施方案中,乳源是牛乳源。乳源在一些實施方案中包括全乳、減脂乳、脫脂乳、乳清、酪蛋白或其混合物。

在具體實施方案中,靶蛋白質是乳鐵蛋白,但其它乳蛋白例如乳過氧化物酶或乳白蛋白也可分離。在一些實施方案中,所述方法包括下列步驟:建立包含微?;實吶蛘痛參街?,將乳源應用于基質,和用約0.3-約2.0 M氯化鈉自基質洗脫乳鐵蛋白。在其它實施方案中,乳鐵蛋白用約0.5-約1.0 M氯化鈉洗脫,而在另外的實施方案中,乳鐵蛋白用約0.7-約0.9 M氯化鈉洗脫。

膨脹床吸附柱可為本領域已知的任一種,例如描述于美國專利號7,812,138、6,620,326和6,977,046的那些,其本公開內容通過在此引用結合于本文中。在一些實施方案中,將乳源應用于膨脹模式的柱,并且洗脫以膨脹或填充模式進行。在具體實施方案中,洗脫以膨脹模式進行。例如,膨脹模式中的膨脹比率可為約1-約3或約1.3-約1.7。EBA技術進一步描述于國際公布申請號WO 92/00799、WO 02/18237、WO 97/17132,其通過引用以其整體結合于此。

乳鐵蛋白的等電點為約8.9。分離乳鐵蛋白的在先EBA方法使用200 mM氫氧化鈉作為洗脫緩沖液。因此,系統的pH升高至超過12,乳鐵蛋白的結構和生物活性可因不可逆結構改變而受損(comprised)。現已發現氯化鈉溶液可用作自EBA基質分離乳鐵蛋白的洗脫緩沖液。在某些實施方案中,氯化鈉具有約0.3 M-約2.0 M的濃度。在其它實施方案中,乳鐵蛋白洗脫緩沖液具有約0.3 M-約1.5 M或約0.5 m-約1.0 M的氯化鈉濃度。

在某些實施方案中使用的乳鐵蛋白可為分離自全乳和/或具有低體細胞計數的任何乳鐵蛋白,其中“低體細胞計數”指低于200,000個細胞/mL的體細胞計數。例如,合適的乳鐵蛋白可以獲自新西蘭Morrinsville的Tatua Co-operative Dairy Co. Ltd.,荷蘭Amersfoort的FrieslandCampina Domo或新西蘭Auckland的Fonterra Co-Operative Group Limited。

令人驚訝地,本文中包括的乳鐵蛋白即使暴露于預期會破壞或嚴重限制人乳鐵蛋白的穩定性或活性的低pH(即,低于約7,并且甚至低如約4.6或更低)和/或高溫(即,高于約65℃,并且高如約120℃)條件,仍然保持某種殺菌活性。在用于本文中所述類型的營養組合物的某些加工方案過程中,可預期這些低pH和/或高溫條件,如巴氏殺菌。因此,即使在加工方案后,乳鐵蛋白具有針對發現于人腸的不符合需要的細菌病原體的殺菌活性。

營養組合物在一些實施方案中可包含約10 mg/100 kcal至約250 mg/100 kcal的量的乳鐵蛋白。在一些實施方案中,乳鐵蛋白可以約50 mg/100 kcal至約175 mg/100 kcal的量存在。在仍一些實施方案中,乳鐵蛋白可以約100 mg/100 kcal至約150 mg/100 kcal的量存在。

本文所述的所公開的營養組合物在一些實施方案中還可包含有效量的鐵。鐵可包括膠囊化鐵形式,例如膠囊化富馬酸亞鐵或膠囊化硫酸亞鐵或較不反應性的鐵形式,例如焦磷酸鐵或正磷酸鐵。

還可以以足以供應受試者的日常營養需求的量將一種或多種維生素和/或礦物質加到營養組合物中。本領域普通技術人員應當理解維生素和礦物質需求將例如基于兒童的年齡而變化。例如,嬰兒可以具有不同于年齡為1-13歲的兒童的維生素和礦物質需求。因此,實施方案并不旨在將營養組合物限制到具體的年齡組,而是提供可接受的維生素和礦物質組分的范圍。

在給兒童提供營養組合物的實施方案中,營養組合物可以任選包括但不限于以下維生素或其衍生物中的一種或多種:維生素B1(硫胺素、焦磷酸硫胺素、TPP、三磷酸硫胺素、TTP、鹽酸硫胺素、一硝酸硫胺素)、維生素B2(乳黃素、黃素單核苷酸、FMN、黃素腺嘌呤二核苷酸、FAD、乳黃素(lactoflavin)、核黃素(ovoflavin))、維生素B3(煙酸、尼克酸、尼克酰胺、煙酰胺、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸、NAD、尼克酸單核苷酸、NicMN、吡啶-3-甲酸)、維生素B3-前體色氨酸、維生素B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺、鹽酸吡哆醇)、泛酸(泛酸鹽、泛醇)、葉酸鹽(葉酸、葉酸(folacin)、蝶酰谷氨酸)、維生素B12(鈷胺素、甲基鈷胺素、脫氧腺苷鈷胺素、氰鈷胺素、羥基鈷胺素、腺苷鈷胺素)、生物素、維生素C(抗壞血酸)、維生素A(視黃醇、乙酸視黃酯、棕櫚酸視黃酯、與其它長鏈脂肪酸形成的視黃酯、視黃醛、視黃酸、視黃醇酯)、維生素D(骨化醇、膽骨化醇、維生素D3、1,25,-二羥基維生素D)、維生素E(α-生育酚、α-生育酚乙酸酯、α-生育酚琥珀酸酯、α-生育酚煙酸酯、α-生育酚)、維生素K(維生素K1、葉綠醌、萘醌、維生素K2、甲基萘醌-7、維生素K3、甲基萘醌-4、甲萘醌、甲基萘醌-8、甲基萘醌-8H、甲基萘醌-9、甲基萘醌-9H、甲基萘醌-10、甲基萘醌-11、甲基萘醌-12、甲基萘醌-13)、膽堿、肌醇、β-胡蘿卜素及其任何組合。

在提供兒童營養產品例如成長乳的實施方案中,組合物可以任選包括但不限于以下礦物質或其衍生物中的一種或多種:硼、鈣、乙酸鈣、葡糖酸鈣、氯化鈣、乳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣、氯化物、鉻、氯化鉻、吡啶甲酸鉻、銅、硫酸銅(copper sulfate)、葡糖酸銅、硫酸銅(cupric sulfate)、氟化物、鐵、羰基鐵、三價鐵、富馬酸亞鐵、正磷酸鐵、鐵研制劑、多糖鐵、碘化物、碘、鎂、碳酸鎂、氫氧化鎂、氧化鎂、硬脂酸鎂、硫酸鎂、錳、鉬、磷、鉀、磷酸鉀、碘化鉀、氯化鉀、乙酸鉀、硒、硫、鈉、多庫酯鈉、氯化鈉、硒酸鈉、鉬酸鈉、鋅、氧化鋅、硫酸鋅及其混合物??笪鎦駛銜锏姆竅拗菩允糾匝萇鋨ㄈ魏慰笪鎦駛銜锏難?、堿性鹽、酯和螯合物。

可將礦物質以鹽的形式加到成長乳或其它兒童營養組合物中,例如磷酸鈣、甘油磷酸鈣、檸檬酸鈉、氯化鉀、磷酸鉀、磷酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳和亞硒酸鈉??杉尤氡玖煊蛞閻鈉淥睪涂笪鎦?。

本公開內容的營養組合物可任選包括以下調味劑的一種或多種,包括但不限于調味提取物、揮發油、可可或巧克力調味料、花生醬調味料、餅干屑、香草或任何市售調味料。有用的調味劑的例子包括但不限于純茴香提取物、仿制香蕉提取物、仿制櫻桃提取物、巧克力提取物、純檸檬提取物、純橙提取物、純薄荷提取物、蜂蜜、仿制菠蘿提取物、仿制朗姆酒提取物、仿制草莓提取物或香草提取物;或揮發油,例如蜜蜂花油、月桂油、香檸檬油、雪松木油、櫻桃油、肉桂油、丁子香油或薄荷油;花生醬、巧克力調味料、香草餅干屑、奶油糖果、太妃糖及其混合物。調味劑的量可根據所用的調味劑而大幅變化??裳≡癖玖煊蛞閻牡魑都戀睦嘈禿土?。

本公開內容的營養組合物可以任選地包含可以為最終產品的穩定性而加入的一種或多種乳化劑。合適的乳化劑的例子包括但不限于卵磷脂(例如,來自蛋或大豆)、α乳白蛋白和/或甘油單酯和甘油二酯,及其混合物。其它乳化劑對技術人員而言是顯而易見的,且合適的乳化劑的選擇將部分取決于制劑和最終產品。

本公開內容的營養組合物可任選地包含一種或多種防腐劑,也可以將其加入以延長產品的儲存壽命。合適的防腐劑包括,但不限于,山梨酸鉀、山梨酸鈉、苯甲酸鉀、苯甲酸鈉、EDTA二鈉鈣及其混合物。

本公開內容的營養組合物可任選地包括一種或多種穩定劑。用于實施本公開的營養組合物的合適穩定劑包括但不限于阿拉伯膠、茄替膠、刺梧桐膠、西黃蓍膠、瓊脂、紅藻膠、瓜爾膠、吉蘭糖膠、刺槐豆膠、果膠、低甲氧基果膠、明膠、微晶纖維素、CMC(羧甲基纖維素鈉)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、DATEM(甘油單酯和甘油二酯的二乙?;剖狨?、葡聚糖、角叉膠及其混合物。

本公開內容的營養組合物可提供最低限度、部分或全部營養支持。所述組合物可為營養補充劑或膳食替代物。所述組合物可以但無需為營養完全的。在一個實施方案中,本公開內容的營養組合物為營養完全的,并包含合適類型和量的脂質、碳水化合物、蛋白質、維生素和礦物質。脂質或脂肪的量通??勺栽?至約25 g/100 kcal變化。蛋白質的量通??勺栽?至約7 g/100 kcal變化。碳水化合物的量通??勺栽?至約22 g/100 kcal變化。

在一個實施方案中,兒童營養組合物每份可含有任何指定國家最大膳食推薦的約10和約50%之間或一組國家平均膳食推薦的約10和約50%之間的維生素A、C和E、鋅、鐵、碘、硒和膽堿。在另一個實施方案中,兒童的營養組合物每份可供應任何指定國家最大膳食推薦的約10-30%或一組國家平均膳食推薦的約10-30%的B-維生素。在又另一個實施方案中,兒童營養產品中的維生素D、鈣、鎂、磷和鉀水平可對應于存在于乳中的平均水平。在其它實施方案中,兒童營養組合物中的其它營養素的每份量可以任何指定國家最大膳食推薦的約20%或一組國家平均膳食推薦的約20%存在。

在一些實施方案中營養組合物為嬰兒配方。嬰兒配方為對嬰兒強化的營養組合物。嬰兒配方的內容物由聯邦法規規定,聯邦法規限定常量營養素、維生素、礦物質和其它成分水平,以致力于模擬人母乳的營養和其它性質。嬰兒配方經設計以支持兒科人受試者例如嬰兒或兒童的總體健康和發育。

在一些實施方案中,本公開內容的營養組合物為成長乳。成長乳為預期用于1歲以上年齡(通常1-3歲年齡、4-6歲年齡或1-6歲年齡)的兒童的強化的基于乳的飲料。它們不是醫用食品,且無意作為膳食替代物或補充劑以解決特定的營養缺乏。取而代之的是,設計成長乳以期用作不同膳食的補充,為兒童獲得所有的必需維生素和礦物質、常量營養素加其它功能性膳食組分(例如具有聲稱的促進健康性質的非必需營養素)的持續的每日攝取量提供額外的保障。

根據本公開內容的成長乳或其它營養組合物的確切組成可以在市場之間變化,這取決于地方法規和目標人群的膳食攝入量信息。在一些實施方案中,根據本公開內容的營養組合物由以下組成:乳蛋白源例如全脂乳或脫脂乳,加上實現所需感官性能所添加的糖和甜味劑,和添加的維生素和礦物質。脂肪組合物在一些實施方案中可包含衍生自乳的富脂質級分。總蛋白質指標可定為與人乳、牛乳或下限值的相符。總的碳水化合物指標通常定為提供盡可能少的添加糖(例如蔗糖或果糖)以實現可接受的味道。通常,以符合地方性牛乳的營養基值的水平添加維生素A、鈣和維生素D。此外,在一些實施方案中,可以每份提供膳食參考攝入量(DRI)的約20%或每日值(DV)的約20%的水平,添加維生素和礦物質。而且,根據已確定的預期人群的營養需求、原料基值和地區法規,營養素值在市場間可變化。

所公開的營養組合物可以本領域已知的任何形式提供,例如粉末、凝膠劑、混懸劑、糊劑、固體劑、液體劑、液體濃縮物、可復溶粉狀代奶品或即用產品。在某些實施方案中,營養組合物可包含營養補充劑、兒童營養產品、嬰兒配方、人乳強化劑、成長乳或設計用于嬰兒或兒科受試者的任何其它營養組合物。本公開內容的營養組合物包括例如可口服攝入的促進健康的物質,包括例如食品、飲料、片劑、膠囊劑和粉末。而且,可使本公開內容的營養組合物標準化至特定的含熱量,可作為即用產品提供,或可以濃縮形式提供。在一些實施方案中,營養組合物呈粉末形式,其粒度范圍為5 μm-1500 μm,更優選范圍為10 μm-300 μm。

本文中所用的方法或方法步驟的所有組合可以以任何順序進行,除非另有指定或由提及所述組合的上下文作出明確相反暗示。

本公開內容的方法和組合物(包括其組分)可以包含本文中所述的實施方案的必需要素和限制以及本文中所述的或另外在營養組合物中有用的任何另外或任選成分、組分或限制,由或基本上由本文中所述的實施方案的必需要素和限制以及本文中所述的或另外在營養組合物中有用的任何另外或任選成分、組分或限制組成。

實施例

實施例1

實施例1描述了與對照相比,飼喂PDX和GOS、LGG以及PDX、GOS和LGG三者的飲食的實驗室大鼠的糞便物中的微生物群落變化。

簡言之,飼喂剛斷奶(出生后第21天) Long Evans (LE)大鼠對照或PDX/GOS飲食食物(GOS 7 g/kg + PDX 7 g/kg)達四周。將益生菌LGG以1x108 CFU/ml的濃度在飲用水中復溶。根據每籠動物的大小和數目,各籠每天接受80-150 mL。各大鼠在各處理組中隨機分配。將動物維持在12/12光/暗循環。在動物光循環期期間進行了使用新物體識別的時間依賴性方式評價的記憶測試。在研究持續期間一周測體重三次。記錄疾病的任何臨床征兆的觀察結果。在研究持續期間每隔一天測量食物消耗。在3個時間點(基線、處理引入當天和實驗結束時)收集糞便樣品。在各時間點間,大約在一天的相同時間收集樣品。小心避免各處理組間的交叉污染樣品。

糞便樣品的微生物群落分析包括從兩個視角檢查的多樣性。首先,總體豐富度(即與微生物群落一起存在的不同生物體的數目)表示為操作分類單位(OTU)的數目,OUT定義為具有97%相似性的序列簇。其次,總體多樣性(其由豐富度和均勻度(不同分類單元間豐度的分布)兩者確定)表示為Shannon多樣性。Shannon多樣性(H’)如下計算:

其中R為豐富度和pi為第i個OUT的相對豐度。對于兩者,使用了稀薄化(rarefaction)來表明取樣深度對多樣性的影響。

使用混合效應ANOVA (隨機效應用于解釋來自同一受試者的多個觀察結果)針對組差異篩選各細菌分類單元。在分析前,使用反正弦變換轉換相對豐度。調節P值以保持5%的偽發現率(FDR)。

作為更直接的分析,還針對隨時間的顯著變化檢查了各OUT。在這里,獨立考慮各處理組,并分析了OUT計數數據。在測試隨時間的顯著變化之前移除受試者內變異性。

用“使用距離矩陣的排列多變量方差分析(Permutational Multivariate Analysis of Variance Using Distance Matrices)”函數adonis評價了組間的多變量差異。對于ADONIS分析,首先使用UniFrac或Bray-Curtis距離計算樣品間的距離,然后進行ANOVA樣模擬以測試組差異。

我們的結果顯示在第35天飼喂PDX/GOS飲食的大鼠中梭菌屬(Clostridia)減少(圖1)。一般而言,顯示與配方飼喂的嬰兒相比,母乳飼喂的嬰兒具有較低的梭菌屬比率(Azad 2013)。因此在PDX/GOS動物中見到的較低水平的梭菌屬可有益于動物的整體健康。

在屬水平上,如圖2所示,PDX/GOS和PDX/GOS+LGG處理增加Allobacullum屬,其是乳酸和丁酸生產者(Greetham 2004)。這些產物可促成大便pH降低,如在母乳飼喂的嬰兒中見到的。總體而言,在配方飼喂的嬰兒中,大便pH與母乳飼喂的嬰兒相比更高。此外,Allobaculum可通過腸-腦軸途徑提供額外的認知益處。

此外,微生物群落分析揭示PDX/GOS和PDX/GOS+LGG處理隨時間降低細菌多樣性(圖3)。與配方飼喂的嬰兒相比通常在母乳飼喂的嬰兒中觀察到較低的細菌多樣性。例如,在Azad等人(2013)進行的研究中配方飼喂的嬰兒具有增加的物種豐富度。因此,PDX/GOS飲食可降低物種豐富度,這類似于母乳飼喂的嬰兒。

如圖4所示,在PDX/GOS+LGG組中在放線菌門(Actinobacteria)方面有增加。先前的研究已證明與配方飼喂的嬰兒相比,放線菌水平在母乳飼喂的嬰兒中較高(Harmsen 2000)。因此,在配方飼喂的嬰兒中放線菌的增加水平可具有益處。

新物體識別測試揭示PDX/GOS飼喂的LE大鼠比飼喂對照飲食的大鼠具有顯著較高的識別指數(P<0.05)。體重、水和食物攝入在飲食組間并無差異(圖5)。

因此,在對照組中在糞便微生物群上隨時間有變化。PDX/GOS組導致推動嚙齒動物微生物群的顯著調節。進一步地,微生物群組成上的變化可對行為具有影響,因為在Allobaculum方面有增加,Allobaculum是短鏈脂肪酸生產者。

實施例2

本實施例描述了LGG對腦中神經遞質水平的作用。簡言之,在出生后第14-16天(P14-P16)在大鼠中通過給予結腸內酵母聚糖(或用于對照的正常鹽水)連續三天而誘導慢性內臟痛覺過敏。LGG處理在斷乳(P21)后開始并持續直至P60。神經遞質和氨基酸的水平在額皮質、下皮質、腦干和小腦中定量。

神經遞質的定量評價使用基于HPLC的分離接著熒光和/或電化學檢測而進行。簡言之,將腦切片使用組織解離器在100-750 ul的0.1M TCA中均質化,所述0.1M TCA包含10-2 M乙酸鈉、10-4 M EDTA、5ng/ml異丙基腎上腺素(作為內標)和10.5 %甲醇(pH 3.8)。將樣品在微型離心機中以10000 g離心20分鐘。然后分析上清液樣品的神經遞質(生物源一元胺)。生物源胺通過特異性HPLC測定而確定,所述特異性HPLC測定使用在33℃操作的Antec Decade II (氧化: 0.4) (3mm GC WE, HYREF)電化學檢測器。使用Water 2707自動取樣器將上清液的20樣品注入Phenomenex Kintex (2.6u, 100A) C18 HPLC柱(100 x 4.60 mm)。生物源胺用由89.5% 0.1M TCA、10-2 M乙酸鈉、10-4 M EDTA和10.5 %甲醇(pH 3.8)組成的流動相洗脫。使用Waters 515 HPLC泵以0.6 ml/min遞送溶劑。使用該HPLC溶劑,以下列順序洗脫下列生物源胺:去甲腎上腺素、腎上腺素、DOPAC、多巴胺、5-HIAA、HVA、5-HT和3-MT。HPLC控制和數據獲取由Empower軟件管理。

圖6A和6B闡述了LGG處理對對照和實驗大鼠的腦干和下皮層中神經遞質的水平的作用。在腦干(圖6A)中,與非LGG處理大鼠相比,LGG處理產生在5-羥色胺(5-HT)、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲腎上腺素(NA)和金屬硫蛋白(3-MT)的水平上的顯著增加。在神經遞質水平上的類似作用在LGG處理的大鼠的下皮質中觀察到(圖6B)。5-HT和NA在疼痛的脊柱遞減抑制上起作用。5-HT存在于中樞和外周血清素能神經元,其在組織損失后自血小板和肥大細胞釋放,并且取決于作用位點和受體亞型,其發揮疼痛和止痛作用(Sommer, 2004)。類似地,通常報道NA通過其對脊柱α2-腎上腺素受體的作用而改變疼痛行為。然而有證據表明NA通過α2-腎上腺素受體的作用通過作用于包括在藍斑中的脊柱和脊椎上的位點而具有抗疼痛作用(Pertovaara等人, 1991)。總體而言,LGG對腦中神經遞質水平具有顯著影響,這可能進而是造成在LGG處理后酵母聚糖處理的初生大鼠不顯示內臟痛覺過敏的原因。

這些結果突出了LGG在腸–腦軸的雙向通訊上的潛在作用并建議LGG可為治療新生兒慢性內臟疼痛上有用的治療選項。

該研究首次顯示LGG經由改變參與疼痛感知的CNS中數種關鍵神經遞質的水平而在調節內臟傷害感受上的直接作用。

實施例3

實施例3顯示LGG處理在減少內臟疼痛敏感性上的功效。

實施例3使用大鼠結腸酵母聚糖處理的痛覺過敏模型(即炎癥后內臟疼痛敏感性的模型)。將酵母聚糖在新生期期間注入結腸,產生短期炎癥和隨后的長期結腸超敏性。數據證明LGG削弱內臟超敏性。

如可在圖7中見到的,與結腸內鹽水處理的大鼠(對照)相比,新生兒的結腸內酵母聚糖滴注在成年大鼠中產生內臟痛覺過敏,如通過與結腸直腸膨脹(CRD)相比的內臟-運動反應(VMR)顯著增加所觀察到的。如可在圖7中進一步見到的,用LGG處理顯著削弱內臟運動反應。因此,如圖7所示,LGG、GOS和PDX在酵母聚糖誘導的結腸炎中具有顯著內臟止痛作用。酵母聚糖的引入在成年大鼠中產生內臟痛覺過敏,如通過肌電描記術(EMG)記錄的顯著增加所觀察到的(*p<0.05 vs對照)。用益生菌LGG或GOS/PDX處理顯著削弱對疼痛的敏感性(p<0.05 vs 對照 + 酵母聚糖; n = 10)。

在該實驗中,飼喂剛斷奶大鼠對照飲食或對照飲食加LGG和/或PDX/GOS達40天。使用來自腹部外斜肌的肌電描記術(EMG)記錄作為所有組中內臟感覺的客觀測量,定量相對于CRD的VMR。建立對分級CRD的刺激-響應函數以測試外斜肌的EMG活性變化上的結腸強度依賴性增加。

提供制劑實施例以說明本公開內容的營養組合物的一些實施方案,但不應解釋為對其的任何限制。在本文權利要求的范圍內的其它實施方案對本領域技術人員而言在考慮本文公開的營養組合物或方法的說明書或實踐后是顯而易見的。意圖將說明書以及本文公開的所有實施例視為僅僅是示例性的,本公開內容的范圍和精神由后接實施例的權利要求指定。

制劑實施例

表1. 包含LGG、GOS和PDX的營養組合物。

本說明書引用的所有參考文獻,包括而不限于所有的論文、出版物、專利、專利申請、簡報、教科書、報告、手稿、小冊子、書籍、互聯網文章、雜志文章、期刊等,通過引用以其整體結合到本說明書中。本文的參考文獻的論述僅僅意在概括其作者所做出的斷言,并非承認任何參考文獻構成先有技術。申請人保留對所引用的參考文獻的準確性和相關性提出異議的權利

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