• / 13
  • 下載費用:30 金幣  

024韦斯卡vs维戈塞尔塔: 一種高效秈稻花藥培養分化培養基.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201810648896.2

申請日:

20180622

公開號:

CN108739400A

公開日:

20181106

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00,C12N5/04 主分類號: A01H4/00,C12N5/04
申請人: 安徽袁糧水稻產業有限公司
發明人: 喬保建,喬琪,任代勝,夏祥華,付錫江,陶元平,彭沖
地址: 241000 安徽省蕪湖市弋江區中山南路717號服務外包產業園A12棟
優先權: CN201810648896A
專利代理機構: 蕪湖思誠知識產權代理有限公司 代理人: 楊濤
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201810648896.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種高效秈稻花藥培養分化培養基,該培養基的配方由一定比例的KNO3、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、EDTA二鈉、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、甘氨酸、蛋氨酸、煙酸、亮氨酸、纈氨酸、維生素E、維生素B1、維生素B6、維生素B12、萘氧乙酸、水楊酸、AgNO3、對氨基苯甲酸、蔗糖、泛酸鈣、海藻多糖、NAA、ZT、2?IP、IBA、酶水解酪蛋白。本發明所述的培養基顯著地提高秈稻花藥愈傷組織綠苗分化率的優點,可以顯著提高秈稻花藥培養效率。

權利要求書

1.一種高效秈稻花藥培養分化培養基,其特征在于,培養基的配方如下:KNO1850~1950mg/L、NHNO1600~1700mg/L、KHPO165~175mg/L、CaCl·2HO440~470mg/L、MgSO·7HO365~370mg/L、EDTA二鈉37~38mg/L、FeSO·7HO27~28mg/L、MnSO·4HO22~23mg/L、ZnSO·7HO8.5~9.5mg/L、HBO5.2~6.8mg/L、KI0.6~0.9mg/L、CuSO·5HO0.02~0.03mg/L、NaMoO·2HO0.15~0.33mg/L、CoCl·6HO0.01~0.03mg/L、肌醇95~105mg/L、甘氨酸1.9~2.5mg/L、蛋氨酸120~240mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸1.5~4.5mg/L、纈氨酸10~24mg/L、維生素B0.2~0.4mg/L、維生素B0.5~0.8mg/L、維生素E0.1~1mg/L、維生素B1.0~4.0mg/L、萘氧乙酸0.05~0.5mg/L、對氨基苯甲酸0.1~1mg/L、蔗糖30~50g/L、泛酸鈣1~9mg/L、AgNO2~14mg/L、海藻多糖2~7g/L、NAA2.25~4.75mg/L、ZT1.5~4.5mg/L、IBA3.0~5.0mg/L、2-IP1.0~3.0mg/L、水楊酸0.2~1.4mg/L酶水解酪蛋白0.9~1.1g/L,PH5.6~6.1。2.根據權利要求1所述的一種高效秈稻花藥培養分化培養基,其特征在于:KNO1950mg/L、NHNO1650mg/L、KHPO171mg/L、CaCl·2HO455mg/L、MgSO·7HO370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO·7HO27.5mg/L、MnSO·4HO22.5mg/L、ZnSO·7HO9mg/L、HBO6.3mg/L、KI0.83mg/L、CuSO·5HO0.025mg/L、NaMoO·2HO0.25mg/L、CoCl·6HO0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B0.3mg/L、維生素B0.6mg/L、維生素E0.5mg/L、維生素B3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA3.5mg/L、ZT3.0mg/L、IBA4.0mg/L、2-IP2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH5.8。3.根據權利要求1所述的一種高效秈稻花藥培養分化培養基,其特征在于,所述植物激素比例為2-IP:NAA:ZT:IBA=4:7:6:8。

說明書

技術領域

本發明涉及農業科學技術領域,特別涉及一種高效秈稻花藥培養分化培養基。

背景技術

水稻花藥培養(花培)又叫單倍體培養,即在特定的時期采取水稻的花藥或者花粉粒,經離體培養,誘導小抱子形成愈傷組織,分化成單倍體植株的過程?;ǚ壑倉甑牡ケ度舊逋ü斯せ蛘咦勻壞確絞?,加倍成為二倍體,最終達到快速獲得純系的目的?;ㄒ┡嘌哂醒≡裥矢?、后代遺傳穩定、遺傳類型豐富、育種年限短等優點,是轉基因、分子標記和基因圖譜構建的理想材料,也是近代育種學發展的一個重要環節,逐漸成為一種快速且高效的選育新品種的手段。將花藥培養應用于抗性育種,由于來源于單倍體的二倍體花粉植株控制病蟲害抗性的基因己經純合,對抗病、感病的反應十分明顯,因而在抗病株系的選擇上更簡單、快捷;花培應用于聚合育種,能克服聚合早期選擇效果差、穩定雜種性狀耗時長等問題;而將花培育種應用于遠緣雜交,雜種后代性狀能得到快速穩定,克服了后代的不育性和分離性;將花培應用于誘變育種,可縮短誘變育種年限,亦可以獲得較高的變異體頻率。目前,花藥培養和常規育種、誘變育種、遠緣雜交育種、轉基因技術等育種手段相結合,形成了一套全新的育種體系,是傳統農業向高技術農業轉化的橋梁。

中國專利申請號為201510156883公開了一種粳稻花藥分化培養基配方,該培養基的配方由一定比例的KNO3、NH4NO3、4-甲基苯甲酸鉀、KH2PO4、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、Na2-EDTA、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、CuSO4·5H2O、Na2MoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、甘氨酸、脯氨酸、煙酸、丙氨酸、賴氨酸、維生素B1、維生素B6、3-吡啶甲酸、蔗糖、海藻多糖、NAA、ZT、調環酸鈣、山梨醇、水解蛋白和生物素所組成。本發明所述的培養基具有高效率地提高粳稻花藥愈傷組織綠苗分化率的優點,可以顯著提高粳稻花藥培養效率。

粳稻的花藥培養相對較易,將其運用于育種己取得良好的效果,而秈型水稻出愈率、綠苗率均較低,出愈率不足5%,綠苗率不足20%,花藥培養力平均只有1~3%左右,使花藥培養技術不能在秈稻育種中得到高效應用。秈稻花藥培養是當前水稻花藥培養亟待解決的難題。雖然上述專利可以提高粳稻花藥愈傷組織綠苗分化率,但沒有突破秈稻花培技術難點,沒有提及是否能夠提高秈稻花藥愈傷組組織綠苗分化率。

發明內容

本發明所要解決的技術問題:秈稻花藥愈傷組織綠苗分化率低,導致秈稻花藥培養效率低,限制其在秈稻育種中的高效應用。

為解決上述技術問題,本發明提供以下的技術方案:一種高效秈稻花藥培養分化培養基,培養基的配方如下:KNO3 1850~1950mg/L、NH4NO3 1600~1700mg/L、KH2PO4 165~175mg/L、CaCl2·2H2O 440~470mg/L、MgSO4·7H2O365~370mg/L、EDTA二鈉37~38mg/L、FeSO4·7H2O 27~28mg/L、MnSO4·4H2O22~23mg/L、ZnSO4·7H2O 8.5~9.5mg/L、H3BO3 5.2~6.8mg/L、KI 0.6~0.9mg/L、CuSO4·5H2O 0.02~0.03mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.15~0.33mg/L、CoCl2·6H2O 0.01~0.03mg/L、肌醇95~105mg/L、甘氨酸1.9~2.5mg/L、蛋氨酸120~240mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸1.5~4.5mg/L、纈氨酸10~24mg/L、維生素B1 0.2~0.4mg/L、維生素B6 0.5~0.8mg/L、維生素E 0.1~1mg/L、維生素B12 1.0~4.0mg/L、萘氧乙酸0.05~0.5mg/L、對氨基苯甲酸0.1~1mg/L、蔗糖30~50g/L、泛酸鈣1~9mg/L、AgNO3 2~14mg/L、海藻多糖2~7g/L、NAA 2.25~4.75mg/L、ZT 1.5~4.5mg/L、IBA 3.0~5.0mg/L、2-IP 1.0~3.0mg/L、水楊酸0.2~1.4mg/L酶水解酪蛋白0.9~1.1g/L,PH 5.6~6.1。

優選的,KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。

本發明產生的有益效果:

本發明的優選方案中包含多種植物生長調節劑,萘氧乙酸的加入能促進低密度培養細胞的生長,增加愈傷組織生長。當植物激素比例為2-IP:NAA:ZT:IBA=4:7:6:8且2,4-D的終濃度為3.75mg/L時,可顯著提高多個典型秈稻品種的花藥培養愈傷組織的綠苗分化率,分化率最高可達21.2%,提高秈稻花藥培養效率。

本發明采用水楊酸和維生素B12、萘氧乙酸的組合,水楊酸可促進愈傷組織分化生根,而維生素B12和萘氧乙酸作為生根劑的增效劑,增強分化生根作用。

本發明采用多種有機物的組合加入,如泛酸鈣、對氨基苯甲酸的加入,可以促進細胞的分裂增殖,提高細胞的新陳代謝速率,加速分化。

本發明還采用了多種氨基酸作為有機氮源,利于植物細胞吸收利用,促進愈傷組織細胞分化。

綜上所述,本發明通過單因素或多因素分析水稻花藥愈傷組織改良分化培養基的組分,找到最佳的成分組合,并摸索出詳細的使用濃度,大幅度提高了秈稻花藥培養的綠苗分化率,提高水稻花培效率,可廣泛應用于育種及水稻基因改良研究。

具體實施方式

下面通過對實施例的描述,對本發明的具體實施方式作進一步詳細的說明,以幫助本領域的技術人員對本發明的發明構思、技術方案有更完整、準確和深入的理解。

實施例1:

配制如下配方的培養基:

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。

選取秈科常規稻先恢207、9311、明恢63的花藥愈傷組織作為供體,當誘導培養后的花藥愈傷組織長到1.7mm大小時,轉到分化培養基上誘導綠苗,培養條件為恒溫26℃,恒濕69%,避光12h/光照2250Lx 14h,愈傷組織分化后(長到2.5mm)計算綠苗分化率。

綠苗分化率(%)=分化率綠苗數/接種的愈傷組織塊數*100%

實施例2:

配制如下配方的培養基(植物激素添加配比的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。

四種植物激素的添加濃度配比見表1。

表1培養基中四種植物激素的終濃度配比

同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例3:

配制如下配方的培養基(煙酸及濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B123.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將煙酸設置濃度梯度,分別為0、0.25、0.5、1.0、1.25、1.5mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例4:配制如下配方的培養基(蛋氨酸濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B123.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將蛋氨酸設置濃度梯度,分別為120、140、160、200、220、240mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例5:配制如下配方的培養基(亮氨酸濃度的優選):KNO3 1950mg/L、NH4NO31650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B10.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將亮氨酸設置濃度梯度,分別為1.5、2.0、2.5、3.5、4.0、4.5mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例6:配制如下配方的培養基(纈氨酸濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B123.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將纈氨酸設置濃度梯度,分別為10、12、14、16、20、22、24mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例7:配制如下配方的培養基(維生素B12濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將維生素B12設置濃度梯度,分別為1.0、1.5、2.0、2.5、3.5、4.0mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例8:配制如下配方的培養基(萘氧乙酸濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將萘氧乙酸設置濃度梯度,分別為0、0.05、0.15、0.35、0.45、0.5mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例9:配制如下配方的培養基(AgNO3濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO3 6.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B12 3.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、水楊酸0.8mg/L酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。將AgNO3設置濃度梯度,分別為0、2、4、6、10、12、14mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

實施例10:配制如下配方的培養基(水楊酸濃度的優選):

KNO3 1950mg/L、NH4NO3 1650mg/L、KH2PO4 171mg/L、CaCl2·2H2O 455mg/L、MgSO4·7H2O 370mg/L、EDTA二鈉37.5mg/L、FeSO4·7H2O 27.5mg/L、MnSO4·4H2O 22.5mg/L、ZnSO4·7H2O 9mg/L、H3BO36.3mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、蛋氨酸180mg/L、煙酸0.75mg/L、亮氨酸3.0mg/L、纈氨酸18mg/L、維生素B1 0.3mg/L、維生素B6 0.6mg/L、維生素E 0.5mg/L、維生素B123.0mg/L、萘氧乙酸0.25mg/L、對氨基苯甲酸0.5mg/L、蔗糖45g/L、泛酸鈣5mg/L、AgNO3 8mg/L、海藻多糖5g/L、NAA 3.5mg/L、ZT 3.0mg/L、IBA 4.0mg/L、2-IP 2.0mg/L、酶水解酪蛋白1.0g/L,PH 5.8。

將水楊酸設置濃度梯度,分別為0、0.2、0.4、0.6、1.0、1.2、1.4mg/L。同樣選取三個秈科常規稻品種作為愈傷組織供體,操作方法、培養方法見實施例1,統計綠苗分化率。

將實施例2-10分別與實施例1進行對比,對比結果如下,結果如下表:

表2四種植物激素配比的優選

表3煙酸及濃度的確定

表4蛋氨酸的選擇及濃度的確定

表5亮氨酸的選擇及濃度的確定

表6纈氨酸的選擇及濃度的確定

表7維生素B12的選擇及濃度的確定

表8萘氧乙酸的選擇及濃度的確定

表9 AgNO3的選擇及濃度的確定

表10水楊酸的選擇及濃度的確定

由以上實驗數據得知,本發明所提供的培養基比使用其他任何對比培養基對秈稻花藥愈傷組織的綠苗分化效率更高,大量實驗結果顯示,本發明的組分配比是最優的,可以顯著提高典型秈稻花藥愈傷組織的綠苗分化率,最高可達21.2%,充分說明本發明提供了一種優良的秈稻花藥分化培養基。

實施例11:

為了體現本發明的有益效果,我們利用文獻中的三個水稻花藥愈傷組織分化培養基配方作為對照,評價實施例1中的分化培養基與現有的分化培養基對水稻花藥愈傷組織綠苗分化率的影響。

其他三種分化培養基為:

SK-ⅱ培養基:MS基本培養基+30g/L蔗糖+6.5g/L瓊脂+1mg/L NAA+1mg/L IBA+0.5mg/L ZT,pH為5.9(對比文件來自于孟祥禎等《雜交稻花藥培養中不同培養基的效率》);

MS培養基:MS基本培養基+30g/L蔗糖+4.2g/L瓊脂+0.5mg/L NAA+2mg/L IBA+0.5mg/L IAA+0.1mg/L IBA+100mg/L肌醇+2mg/L MET+0.5g/L LH,pH為5.8(對比文件來自于李鑫等《北方粳稻花藥培養力遺傳特性分析》);

NB培養基:NB基本培養基+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂+3mg/L IBA+0.5mg/L NAA,pH為5.8(對比文件來自于汪慶等《高花藥培養效率粳稻雜交組合的篩選》)。

將實施例11與實施例1進行綠苗分化率對比,得出結果如表11所示:

表11本發明與現有常用培養基對秈稻花藥愈傷組織綠苗分化率的對比

從不同培養基的綠苗分化率結果分析,本發明對秈稻愈傷組織平均綠苗分化率為21.2%,而SK-ii、MS、NB培養基的平均分化率僅為3.1%、5.3%、0.2%,本發明對秈稻花藥愈傷組織的綠苗分化率要顯著高于目前常用的三種花藥分化培基,顯著提高了秈稻愈傷組織綠苗分化率,提高秈稻花藥培養效率。

以上所述的僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明創造構思的前提下,還可以做出若干變形和改進,這些都屬于本發明的?;し段?。

關 鍵 詞:
一種 高效 秈稻 花藥培養 分化 培養基
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:一種高效秈稻花藥培養分化培養基.pdf
鏈接地址://www.vmyqew.com.cn/p-6882557.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 www.vmyqew.com.cn網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開