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莱加内斯vs维戈塞尔塔: 一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體及其制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201610777182.2

申請日:

20160831

公開號:

CN106387625A

公開日:

20170215

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A23L5/30,A23L33/125,A23L33/105,A23P10/35,A23L33/115,A23L33/11 主分類號: A23L5/30,A23L33/125,A23L33/105,A23P10/35,A23L33/115,A23L33/11
申請人: 秦皇島長勝營養健康科技有限公司
發明人: 高大威,邢珊珊,李磊,黃云祥,安靜
地址: 066000 河北省秦皇島市經濟技術開發區東海道12號
優先權: CN201610777182A
專利代理機構: 石家莊元匯專利代理事務所(特殊普通合伙) 代理人: 周大偉
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610777182.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體,屬于保健食品的技術領域,按重量份數計,包括以下組分:豆甾醇4?6份、卵磷脂30?90份、蘆筍水提物5?20份、殼聚糖5?20份。本發明還提供了一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法。本發明蘆筍脂質體能有效的降低心血管疾病的發生率,制備方法操作簡便,易于控制,能實現蘆筍中功能因子的緩釋效果,增加蘆筍中有益的功能因子在體內的循環時間,促進人體的吸收利用。

權利要求書

1.一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體,其特征在于,按重量份數計,包括以下組分:豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份。2.一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,采用薄膜水化法,其特征在于,包括以下步驟:A、按下述重量份數準備原料:豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份;B、將豆甾醇,卵磷脂溶解于有機溶劑中,于20℃-70℃,20-70rpm的條件下,減壓旋轉蒸發去除有機溶劑,形成脂相薄膜;C、取蘆筍水提物加入到步驟B中得到的脂相薄膜中,于20℃-60℃,20-70rpm的條件下,旋轉水化,形成脂質體粗懸液;D、將步驟C中得到的脂質體粗懸液進行震蕩處理,得到蘆筍脂質體;E、取殼聚糖溶解于水中,得到殼聚糖溶液;F、將步驟D得到的蘆筍脂質體與步驟E得到殼聚糖溶液,按體積比(0.8-1.2):(0.8-1.2)的比例混合,得到殼聚糖修飾的蘆筍脂質體。3.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,步驟A中所述的有機溶劑為無水乙醇。4.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,步驟B中減壓旋轉蒸發的時間為1-4h。5.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,步驟C中旋轉水化的時間為1-4h。6.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,步驟D中震蕩處理采用超聲波進行超聲處理2-20min。7.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,步驟E中,殼聚糖溶液的濃度為0.0001-0.01g/mL。8.根據權利要求2所述的一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,其特征在于,將蘆筍脂質體與殼聚糖溶液混合后,進行磁力攪拌1-4h。

說明書

技術領域

本發明屬于保健食品的技術領域,涉及脂質體及脂質體的制備方法,關鍵涉及一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體及其制備方法。通過利用脂質體運載蘆筍的活性成分可以延長其在體內的循環時間,使其功能因子的生物學活性進一步增強。

背景技術

隨著社會的飛速發展,人們的工作壓力不斷增大,作息不規律,生活節奏嚴重紊亂等一系列外界因素,使大多數人處于亞健康狀態,保健品和功能食品便應運而生,但由于天然產物中特定的功能因子含量較低,要提高其功效就需要改進其劑型以提高功能因子的生物利用度。納米脂質體是目前公認的可提高包載物生物利用度的新型載體系統。目前,國內外制備的脂質體大多會添加一定的膽固醇以作為脂質體的膜材,但高膽固醇會引發動脈粥樣硬化、冠心病等健康問題,隨著人們追求健康食品的意識越來越強,膽固醇已被限制在食品以及保健品中的應用。發明一種水溶性物質的食品級納米載體制備技術是目前亟待解決的問題。

蘆筍又名"荻筍"、"南荻筍",為百合科植物石刁柏的嫩芽,在國際市場上享有"蔬菜之王"的美稱,蘆筍富含多種氨基酸、蛋白質和維生素,其含量均高于一般水果和蔬菜,特別是蘆筍中的天冬酰胺和微量元素硒、鉬、鉻、錳等,具有調節機體代謝,提高身體免疫力的功效,在對高血壓、心臟病、白血病、血癌、水腫、膀胱炎等的預防和治療中,具有很強的抑制作用和藥理效應。其中的活性成分蘆筍皂苷具有增強免疫力、降血脂、促進睡眠、?;じ臥?、抑制癌細胞增殖、治療骨質疏松、抗糖尿病、延緩衰老、清熱瀉火、利水消腫、滋陰降火等功效。但單純服用蘆筍汁,其進入人體后只有少量的被吸收利用,大部分會經循環排出體外,不能有效的發揮其生物價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體及其制備方法,脂質體是一種類似于生物膜的雙分子層囊泡,具有良好的生物相容性以及可生物降解的特性。通過將蘆筍提取物包封進脂質體內,可以延長其在體內的循環時間,提高其功能因子的生物利用度。傳統的脂質體的穩定性差、緩釋效果不明顯,這些缺點使它的應用受到限制,對脂質體進行功能修飾,可以進一步提高其穩定性,提高功能因子的功效發揮。

本發明為實現其目的采用的技術方案是:

一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體,按重量份數計,包括以下組分:豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份。

一種殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的制備方法,采用薄膜水化法,包括以下步驟:

A、按下述重量份數準備原料:豆甾醇4-6份、卵磷脂30-90份、蘆筍水提物5-20份、殼聚糖5-20份;

B、將豆甾醇,卵磷脂溶解于有機溶劑中,于20℃-70℃,20-70rpm的條件下,減壓旋轉蒸發去除有機溶劑,形成脂相薄膜,過高或過低的溫度影響磷脂和甾醇的物理學特性,因而影響脂質體膜的形成,經過長期的創造性研究,總結出溫度控制在20-70℃;減壓旋轉蒸發的轉速是為了控制形成膜的厚度,經過長期的創造性研究,總結出只有在此轉速才可以形成所需厚度的膜;

C、取蘆筍水提物加入到步驟B中得到的脂相薄膜中,于20℃-60℃,20-70rpm的條件下,旋轉水化,形成脂質體粗懸液;20℃-60℃范圍可以使磷脂和甾醇形成脂質體的物理學狀態最適,有利于通過分子自組裝形成所需的特性結構、粒徑和形貌脂質體;轉速控制是為了控制脂質體的形貌和尺寸的控制,過高的轉速導致粒徑尺寸會過小,過低的尺寸易出現脂質體的融合。

D、將步驟C中得到的脂質體粗懸液進行震蕩處理,得到蘆筍脂質體;

E、取殼聚糖溶解于水中,得到殼聚糖溶液;

F、將步驟D得到的蘆筍脂質體與步驟E得到殼聚糖溶液,按體積比(0.8-1.2):(0.8-1.2)的比例混合,得到殼聚糖修飾的蘆筍脂質體,當蘆筍脂質體與殼聚糖溶液的體積比大于或小于這個范圍時,無法制備出殼聚糖修飾的脂質體,得到的修飾后的脂質體穩定性差。

步驟A中所述的有機溶劑為無水乙醇。

步驟B中減壓旋轉蒸發的時間為1-4h,經過長期的創造性研究,將時間控制在該范圍內,有助于產品的穩定性。

步驟C中旋轉水化的時間為1-4h。

步驟D中震蕩處理采用超聲波進行超聲處理2-20min。本發明通過超聲使脂質體由多室變成單室,同時使脂質體的粒徑變小、分散性更好。

步驟E中,殼聚糖溶液的濃度為0.0001-0.01g/mL。

將蘆筍脂質體與殼聚糖溶液混合后,進行磁力攪拌1-4h。

本發明的有益效果是:

1、本發明制備的脂質體采用豆甾醇,在取代了膽固醇的同時,能有效的降低心血管疾病的發生率。

2、制備方法操作簡便,易于控制。

3、能實現蘆筍中功能因子的緩釋效果,增加蘆筍中有益的功能因子在體內的循環時間,促進人體的吸收利用,提高生物利用度,提高緩釋和長效作用。

4、本發明蘆筍脂質體的脂質粒徑為100-250nm。

5、本發明蘆筍脂質體結構為外層由磷脂雙分子層組成的囊膜,內部的空腔里包封的蘆筍水提物。

附圖說明

圖1是本發明實施例1所得蘆筍脂質體透射電子顯微鏡圖。

圖2是本發明實施例2所得蘆筍脂質體透射電子顯微鏡圖。

圖3是本發明實施例3所得蘆筍脂質體透射電子顯微鏡圖。

圖4是本發明實施例1所得蘆筍脂質體zeta電位圖。

圖5是本發明實施例2所得蘆筍脂質體zeta電位圖。

圖6是本發明實施例3所得蘆筍脂質體zeta電位圖。

圖7是本發明測定前繪制的蘆筍皂苷標準曲線圖。

圖8是實施例1蘆筍脂質體粒徑分布圖。

圖9是實施例2蘆筍脂質體粒徑分布圖。

圖10是實施例3蘆筍脂質體粒徑分布圖。

具體實施方式

下面結合附圖及具體實施例對本發明作進一步的說明。

本發明所用蘆筍水提物可由現有方法制備,也可以用下述方法制備:

取干燥蘆筍莖葉加水于80-100℃提取40-100min,提取次數1-2次,棄去殘渣,抽濾,合并蘆筍汁,得到蘆筍水提物。其中蘆筍干燥蘆筍莖葉與水的重量比為1:(10-20)。

實施例1

取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術有限公司),24mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司),溶解于4mL無水乙醇中,在20℃,20rpm的條件下,減壓旋轉蒸發1h去除無水乙醇,形成脂相薄膜。

取蘆筍水提物6mL作為水相,加入到脂相薄膜中,在10℃,20rpm的條件下,旋轉水化1h形成脂質體粗懸液。

將得到的粗懸液在冰浴下利用超聲波細胞破碎儀進行超聲(2s/2s,50%W)2min,得到蘆筍脂質體。

將0.001g的水溶性殼聚糖溶解于10mL無菌水中,攪拌0.5h,得到0.0001g/mL殼聚糖溶液。

取1mL的蘆筍脂質體與1mL的殼聚糖溶液混合,經磁力攪拌0.5h,得到殼聚糖修飾的蘆筍脂質體。

應用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質體進行形貌表征,如圖1所示,納米脂質體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質體帶電荷狀態,如圖4所示,從圖中可以看出脂質體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的蘆筍皂苷的包封率為83.77%,標準曲線如圖7所示。

實施例2

取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術有限公司),48mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司),溶解于7mL無水乙醇中,在45℃,45rpm的條件下,減壓旋轉蒸發2.5h去除無水乙醇,形成脂相薄膜。

取蘆筍水提物9mL作為水相,加入到脂相薄膜中,在35℃,45rpm的條件下,旋轉水化2.5h形成脂質體粗懸液。

將得到的粗懸液在冰浴下利用超聲波細胞破碎儀超聲(2s/2s,50%W)11min,即得到蘆筍納米脂質體。

將0.05g的水溶性殼聚糖溶解于10mL無菌水中,溶解4h,得到0.005g/mL殼聚糖溶液。

取5mL的蘆筍脂質體與5mL的殼聚糖溶液,磁力攪拌混合4h,得到殼聚糖修飾的脂質體。

應用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質體進行形貌表征,如圖2所示,納米脂質體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質體帶電荷狀態,如圖5所示,從圖中可以看出脂質體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質體中蘆筍皂苷的包封率為86.54%,標準曲線如圖7所示。

實施例3

取4mg豆甾醇(購自上海源葉生物技術有限公司),72mg大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司),溶解于10mL無水乙醇中,在70℃,70rpm的條件下,減壓旋轉蒸發4h去除無水乙醇,形成脂相薄膜。

取蘆筍提取物16mL作為水相,加入到脂相薄膜中,在60℃,70rpm的條件下,旋轉水化4h形成脂質體粗懸液。

將得到的粗懸液在冰浴下超聲波細胞破碎儀超聲(2s/2s,50%W)20min,即得到蘆筍納米脂質體。

將0.1g的殼聚糖溶解于10mL無菌水中,攪拌8h,得到0.01g/mL殼聚糖溶液。

取10mL的蘆筍納米脂質體與10mL的殼聚糖溶液,磁力攪拌混合8h,得到殼聚糖修飾的脂質體。

應用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的蘆筍脂質體進行形貌表征,如圖3所示,納米脂質體呈球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的蘆筍脂質體帶電荷狀態,如圖6所示,從圖中可以看出脂質體帶正電荷。利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的蘆筍皂苷包封率為88.05%,標準曲線如圖7所示。

實施例4

本發明殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的穩定性試驗:

將已經制備好的納米脂質體分別放置在4℃和25℃,測定14天中包封率的變化,結果見表1,

表1常溫和4℃下脂質體包封率隨時間的變化

項目 初始包封率 1d 7d 14d 常溫的包封率(%) 87.3 85.5 80.2 79.8 4℃包封率(%) 89.1 87.3 83.7 80.2

根據上述表1及附圖8-10,可以明顯的看出,本發明制備的殼聚糖修飾的蘆筍脂質體穩定性好,圖8可知,平均粒徑為81.00nm,PDI為0.246;圖9平均粒徑為79.36nm,PDI為0.258;圖10平均粒徑為79.73nm,PDI為0.222。由圖8-10可以看出得到的脂質體平均粒徑小,分散性良好。本發明制備的殼聚糖修飾的蘆筍脂質體利用高效液相色譜儀測定殼聚糖修飾的蘆筍脂質體的蘆筍皂苷的包封率為72.77-90.5%。

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一種 聚糖 修飾 蘆筍 脂質體 及其 制備 方法
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