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维戈塞尔塔vs皇家马德里直播: 荒漠寄生植物鎖陽的綜合利用方法及其產物和它們的應用.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201210129836.2

申請日:

20120424

公開號:

CN102697821B

公開日:

20141203

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/185,A61K8/97,A61P39/06,A61P35/00,A61P25/28,A61P5/50,A61P3/10,A61P3/04,A61P1/16,A61P31/12,A23L1/29,A61K125/00 主分類號: A61K36/185,A61K8/97,A61P39/06,A61P35/00,A61P25/28,A61P5/50,A61P3/10,A61P3/04,A61P1/16,A61P31/12,A23L1/29,A61K125/00
申請人: 內蒙古大學
發明人: 馬超美,蒙昊聰,張義文
地址: 010021 內蒙古自治區呼和浩特市大學西路235號
優先權: CN201210129836A
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 代理人: 周慧敏;楊思捷
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210129836.2

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及荒漠寄生植物鎖陽的綜合利用方法及其產物和它們應用,具體涉及鎖陽三萜成分提取物和鎖陽多酚-半胱氨酸縮合物以及其組合物、它們的制備方法、以及它們在藥物、(功能)食品、化妝品等方面的應用。

權利要求書

1.鎖陽的綜合利用方法,包括:將新鮮或干燥的鎖陽植物材料用乙醇提取,過濾,所得濾液為富含鎖陽三萜類成分的乙醇提取物;以及將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液在室溫~90℃條件下處理,使其中的大分子縮合鞣質降解并同時生成低分子鞣質-半胱氨酸或其它含SH-化合物縮合物,得到富含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸或其它含SH-化合物縮合物的產物混合物,所述處理為將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣懸浮于水中,加入能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物并置搖床中振搖2--5天,其它含SH-化合物是半胱氨酸的酯類、半胱氨(?-巰基乙胺),低分子鞣質-半胱氨酸或其它含SH-化合物縮合物包含兒茶素-半胱氨酸縮合物、表兒茶素-半胱氨酸縮合物和表兒茶素-沒食子酸酯-半胱氨酸縮合物。.?權利要求1的方法,其中用于提取鎖陽三萜類成分的乙醇為40-95%乙醇。.?權利要求1的方法,其中用于提取鎖陽三萜類成分的乙醇為60-95%乙醇。.?權利要求1的方法,其中所述能釋放出半胱氨酸的化合物選自半胱氨酸、谷胱甘肽及其混合物。.?權利要求1的方法,其中所述能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物為半胱氨酸。.?權利要求1-5之任一項的方法,其中在將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理時,任選加入常規質子催化劑。.?權利要求6的方法,其中所述質子催化劑選自無機酸、有機酸或其混合物。.?權利要求7的方法,其中所述質子催化劑選自下列一組酸:鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸、維生素C、蘋果酸、檸檬酸及其混合物。.?權利要求1-5、7、8之任一項的方法,其中在將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理時,溫度為50-80℃。.?權利要求6的方法,其中在將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理時,溫度為50-80℃。.?含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物,其中所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物通過將鎖陽植物材料經乙醇提取后的殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物的水溶液在室溫~90℃條件下處理后濃縮獲得,所述處理為將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣懸浮于水中,加入能釋放出半胱氨酸的化合物并置搖床中振搖2--5天,低分子鞣質-半胱氨酸縮合物包含兒茶素-半胱氨酸縮合物、表兒茶素-半胱氨酸縮合物和表兒茶素-沒食子酸酯-半胱氨酸縮合物。.?含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的藥物組合物或食品,其中所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物通過將鎖陽植物材料經乙醇提取后的殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物的水溶液在室溫~90℃條件下處理后濃縮獲得,所述處理為將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣懸浮于水中,加入能釋放出半胱氨酸的化合物并置搖床中振搖2--5天,低分子鞣質-半胱氨酸縮合物包含兒茶素-半胱氨酸縮合物、表兒茶素-半胱氨酸縮合物和表兒茶素-沒食子酸酯-半胱氨酸縮合物。.?權利要求11的組合物在制備抗氧化劑方面的應用。.?權利要求11的組合物在制備用于抗氧化應激和/或自由基的食品方面的應用。.?權利要求11的組合物在制備用于預防和/或治療由氧化應激和/或自由基介導的疾病的藥物方面的應用。

說明書

技術領域

本發明涉及荒漠寄生植物鎖陽的綜合利用方法及其產物和它們應用,具體涉及鎖陽三萜成分提取物和鎖陽多酚-半胱氨酸縮合物以及其組合物、它們的制備方法、以及它們在藥物、(功能)食品、化妝品等方面的應用。

背景技術

鎖陽(拉丁名:Cynomorium?songaricum)為我國西北荒漠地區藥食同源的寄生植物,俗名之一為不老藥,有強身健體作用。

研究表明,鎖陽肉質莖中含有熊果酸和乙酰熊果酸[張思巨,張淑運.“中藥鎖陽的化學成分研究”,中國藥學雜志,26,649-651(1991)];從鎖陽肉質莖的氯仿或二氯甲烷提取物中還分離鑒定出熊果酸丙二酸半酯[馬超美賈世山孫韜張義文“鎖陽中三萜及甾體成分的研究”,藥學學報28:152-5(1993)]。鎖陽的三萜成分:熊果酸及熊果酸丙二酸半酯具有抑制艾滋病毒蛋白酶和丙型肝炎病毒蛋白酶作用,并且熊果酸丙二酸半酯的作用更強[Ma,C.M.;Nakamura,N.;Miyashiro,H.;Hattori?M.;Shimotohno,K.,“Inhibitory?effects?of?constituents?from?Cynomorium?songaricum?and?related?triterpene?derivatives?on?HIV-1protease”,Chem?Pharm?Bull?47:141-145(1999);Ma,C.M.;Wei,Y.;Wang,Z.G.;Hattori,M.,“Triterpenes?from?Cynomorium?songaricum-analysis?of?HCV?protease?inhibitory?activity,quantification,and?content?change?under?the?influence?of?heating”,J?Nat?Med?63:9-14(2009)];另外,熊果酸還有保肝和抗癌活性[J.Liu,“Pharmacology?of?oleanolic?acid?and?ursolic?acid”,J.Ethnopharmacol.49(1995)57-68]。

鎖陽還含有大量的縮合鞣質類成分,具有抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶等作用[Ma,C.M.;Sato,N.;Li,X.Y.;Nakamura,N.;Hattori,M.,“Flavan-3-ol?contents,anti-oxidative?and-glucosidase?inhibitory?activities?of?Cynomorium?songaricum”,Food?Chem?118:116-119(2010)]。縮合鞣質等多酚類化合物過去被認為是反營養物質,隨著人們生活水平的大幅提高,肥胖癥和糖尿病等現代生活習慣病患者明顯增多,具有抑制α-葡萄糖苷酶作用的縮合鞣質對現代生活習慣病有一定的防治作用,因此越來越受到人們的重視。另外,縮合鞣質還可作為原料,合成生物活性更好的衍生物。歐洲和日本的研究人員已成功將葡萄籽的大分子縮合鞣質提取物降解為水溶性小分子,制備了兒茶素及其小分子聚合物與L-半胱氨酸的縮合物,證明這些縮合物有較高的生物利用度和較強的抗氧化活性,而且能明顯延長實驗動物壽命(Fujii?H,Nakagawa?T,Nishioka?H,Sato?E,Hirose?A,Ueno?Y,Sun?B,Yokozawa?T,Nonaka?G.,“Preparation,characterization,and?antioxidative?effects?of?oligomeric?proanthocyanidin-1-cysteinecomplexes”J.Agric.Food?Chem.55:1525-1531(2007);有效抑制人體結腸癌HT29細胞的增值(Torres?JL,Lozano?C,JuliàL,Sánchez-Baeza?FJ,Anglada?JM,Centelles?JJ,Cascante?M.“Cysteinyl-flavan-3-o1?Conjugates?from?Grape?Procyanidins.Antioxidant?and?Antiproliferative?Properties”Bioorganic?&?Medicinal?Chemistry?10(2002)2497-2509);并對神經細胞有?;ぷ饔?Torres?JL,Lozano?C,Maher?P.“Conjugation?of?catechins?with?cysteine?generates?antioxidant?compounds?with?enhanced?neuroprotective?activity”Phytochemistry?66:2032-2037(2005))。兒茶素-半胱氨酸縮合物還可用作干細胞、精子、卵母細胞及胚胎等活細胞和組織的保存劑(EP?1627565A1)。

鎖陽中含有大量多酚類化合物,然而關于鎖陽多酚和半胱氨酸縮合物的制備及其應用尚未見報道。

本發明人通過大量實驗,發現了一種工藝流程簡單、試劑成本低的鎖陽綜合利用的方法。該方法的整個工藝流程所使用的溶劑和試劑均為無毒性的可食用物質。所得產物為具有保肝、抗病毒、抗癌作用的富含鎖陽三萜類成分的乙醇提取物和具有抗氧化、抗衰老活性的鎖陽多酚-半胱氨酸縮合物。由此完成了本發明。

發明內容

因此,本發明提供鎖陽的綜合利用方法,包括:

將新鮮或干燥的鎖陽植物材料用乙醇提取,過濾,所得濾液為富含鎖陽三萜類成分的乙醇提取物;以及

將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理,使其中的大分子縮合鞣質降解并同時生成低分子鞣質-半胱氨酸(或其它含SH-化合物)縮合物,得到富含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸(或其它含SH-化合物)縮合物的產物混合物。

本發明還提供含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物,其中所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物通過將鎖陽植物材料經乙醇提取后的殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物的水溶液處理后濃縮獲得。

本發明還提供含鎖陽三萜類成分的組合物,其中所述鎖陽三萜類成分通過將鎖陽植物材料用乙醇提取后將所得乙醇提取液濃縮獲得。

本發明還提供含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的食品、藥物組合物以及藥物制劑。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物以及含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的藥物組合物,用于治療和/或預防現代生活習慣病。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物以及含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物,用作抗氧化劑。

本發明還提供含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物和/或鎖陽三萜類成分的藥物組合物或食品。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物或含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物在制備用于治療和/或預防現代生活習慣病的藥物或者改善或預防現代生活習慣病的食品方面的應用。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物或含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物在制備抗氧化劑方面的應用。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物或含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物在制備用于抗氧化應激和/或自由基的藥物或食品方面的應用。

本發明還提供所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物或含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物在制備用于預防和/或治療由氧化應激和/或自由基介導的疾病的藥物方面的應用。

本發明還提供治療和/或預防現代生活習慣病的方法,包括給予有需要的對象有效量的所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物或含有所述鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的組合物的步驟。

在本發明中,術語“現代生活習慣病”是指肥胖癥、II型糖尿病及其它與胰島素抵抗有關的疾病如某些癌癥等。另外還包括老年癡呆等。

在本發明鎖陽綜合利用方法中,用于提取鎖陽三萜類成分的乙醇可以為40-95%乙醇,優選60-95%乙醇;特別是75-95%乙醇,例如80%、85%、90%以及95%乙醇;所述提取可以在室溫冷浸或加熱提取,例如室溫至回流提??;

所述能釋放出半胱氨酸的化合物選自半胱氨酸、谷胱甘肽及其混合物;以及

所述“其它含SH-化合物”是指半胱氨酸的酯類、半胱氨(β-巰基乙胺)等。

在本發明鎖陽綜合利用方法中,在將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理時,可以加入常規質子催化劑以促進反應,考慮本發明鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物要應用于藥物和食品領域,優選使用藥學和食品上可接受的質子催化劑,選自無機酸例如鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸等,以及有機酸例如醋酸、維生素C、蘋果酸、檸檬酸等,以及它們的混合物。

在本發明鎖陽綜合利用方法中,在將殘渣用含有能釋放出半胱氨酸的化合物或其它含SH-化合物的水溶液處理時,此處理可以持續數小時至數天,例如1至7天,優選2-5天;處理的溫度可以為室溫,但加溫可以促進反應,例如可以在室溫-90℃條件下進行處理,例如將溫度升至50、60、70、80℃等。

在本發明鎖陽綜合利用方法中,所得富含鎖陽三萜類成分的乙醇提取物可以直接或濃縮后作為保肝、抗病毒、抗癌活性成分使用,用于制備藥物或保健食品;以及

所得富含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的混合物可以直接用作抗氧化應激和/或自由基、預防和/或改善現代生活習慣病的保健(功能)食品或經過濾除渣得到含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的濾液,將其直接或濃縮至干用于制備所述保健(功能)食品或藥物。

在本發明鎖陽綜合利用方法的一個優選實施方案中,鎖陽三萜類成分提取物及鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的制備包括:

1)將鎖陽粉碎,用95%乙醇冷浸12h,過濾,濾液經高效液相-質譜分析并與標準品對照,證明含鎖陽三萜化合物(1-3),即熊果酸(ursolic?acid)、乙酰熊果酸(acetyl?ursolic?acid)和熊果酸丙二酸半酯(ursolic?acid?malonyl?hemiester)成分

該濾液可直接或濃縮后作為保肝、抗病毒、抗癌活性組分使用;

2)將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣懸浮于水中,加入半胱氨酸并置搖床中振搖2-5天,使縮合鞣質降解并同時與半胱氨酸縮合反應,得含低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的產物混合物。該混合物經反復分離純化和光譜測定,確認包含如下所示化合物:兒茶素(catechin,4),表兒茶素(epicatechin,5),兒茶素-半胱氨酸縮合物(catechin-cysteine?conjugate,6),表兒茶素-半胱氨酸縮合物(epicatechin-cystein?conjugate,7),和表兒茶素-沒食子酸酯-半胱氨酸縮合物(epicatechin-gallate-cystein?conjugate,8)

由于所用試劑和材料均為可食用物質,該產物混合物可直接使用,也可將其過濾或離心除去纖維素雜質;濾液部分富含低分子鞣質-半胱氨酸縮合物,將其濃縮后作為抗氧化應激和/或自由基或者用于治療和/或預防現代生活習慣病的活性組分使用。

在上述本發明鎖陽綜合利用方法的步驟2)中,向反應體系中加入酸例如維生素C、鹽酸或醋酸等或將反應體系溫度升高例如將溫度升至50-70℃,均可促進反應。

抗氧化活性測試結果表明,本發明鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物有比(表)兒茶素類更強的活性。

本發明人首次公開了對鎖陽植物材料進行綜合利用,由鎖陽制備出鎖陽三萜類成分提取物及富含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的產物混合物。該方法簡單易行、成本低,所得產物沒有任何毒性,分別可安全用于制備保肝、抗癌保健食品或藥品和具有高抗氧化活性的保健食品和藥品。此外,所得的富含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的混合物也可作為抗氧化劑,用于化妝品中。

附圖說明

圖1是實施例1化合物1、2和3的UPLC-ESIMS圖。

圖2是實施例1鎖陽95%乙醇提取物的UPLC-ESIMS圖。

圖3是實施例1化合物6、7和8的UPLC-ESIMS圖。

圖4是實施例1A)中乙醇提取后的鎖陽殘渣與半胱氨酸鹽酸鹽60℃反應液的UPLC-ESIMS圖。

UPLC-ESIMS(超高效液相-電噴霧質譜)在安捷倫Agilent?1290infinity?UPLC及Agilent?6430triple?Quad?MS系統上分析。層析柱為Eclipse?Plus?C18(50mm×2.1mm;1.8μm),柱溫控制在30℃。

鎖陽三萜的UPLC-ESIMS分析流動相:A為含0.1%甲酸的純凈水,B為含0.1%甲酸的乙腈.流速:0.4ml/min.程序:0min時75%B,2min時78%B,3-4.5min時100%B。用MRM(質譜多反應監測)模式分析。

鎖陽三萜的MRM測定條件

鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合反應產物的UPLC-ESIMS分析流動相:A為含0.1%甲酸的純凈水,B為含0.1%甲酸的乙腈.流速:0.4ml/min.程序:0min時5%B、3min時12%B,4-5.5min時100%B。用負離子模式在裂解電壓(fragmentor)10的條件下全掃描。

具體實施方式

下面通過具體實施例,進一步闡述本發明。這些實施例僅用于例證本發明,不應將其理解為對本發明?;し段У南拗?。實施例中所采用的原料和試劑為可商業上購得的。

實施例1:鎖陽三萜類成分提取物以及鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合 物的制備

將鎖陽(2011年6月購自呼和浩特京遠大藥房,2克)粉碎后加入10毫升95%乙醇室溫振搖提取12小時,過濾,濾液經LC-MS檢測并與標準品對照,確認含有熊果酸(22.7微克/毫升),乙酰熊果酸(8.5微克/毫升)及熊果酸丙二酸半酯(63.5微克/毫升)。將濾液濃縮至干,得128.6毫克含鎖陽三萜類成分乙醇提取物,為類白色固體。

若將95%乙醇換為40%乙醇,用同樣方法處理的提取液含有熊果酸(1.0微克/毫升),乙酰熊果酸(0.0微克/毫升)及熊果酸丙二酸半酯(10.8微克/毫升)。將濾液濃縮至干,得棕色提取物943.9毫克。

濾渣用下述4種方法制備鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物:

A)與半胱氨酸鹽酸鹽于60℃反應:

將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣(0.5克)懸浮于5毫升水中,加入0.1克半胱氨酸鹽酸鹽,這時混合物的pH大約為1。將混合物于60℃振搖48小時,過濾,得含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的濾液,經UPLC-ESIMS檢測,含化合物6、7、8分別為259.9微克/毫升、1014.7微克/毫升,和124.5微克/毫升。

B)與半胱氨酸鹽酸鹽于室溫反應:

將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣(0.5克)懸浮于5毫升水中,加入0.1克半胱氨酸鹽酸鹽,這時混合物的pH大約為1。將混合物于室溫(22℃)反應振搖48小時,過濾,得含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的濾液,經UPLC-ESIMS檢測,含化合物6、7、8分別為23.9微克/毫升、41.3微克/毫升和2.3微克/毫升。

C)與半胱氨酸+醋酸反應:

將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣(0.5克)懸浮于5毫升水中,加入0.1克半胱氨酸和0.01毫升冰醋酸,這時混合物的pH大約為4。將混合物于60℃振搖48小時,過濾,得含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的濾液,經UPLC-ESIMS檢測,含化合物6、7、8分別為42.8微克/毫升、326.6微克/毫升和18.3微克/毫升。

D)與半胱氨酸于中性條件下反應:

將上述乙醇提取后的鎖陽殘渣(0.5克)懸浮于5毫升水中,加入0.1克半胱氨酸,這時混合物的pH=6-7。將混合物在60℃振搖48小時,過濾,得含鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的濾液,經UPLC-ESIMS檢測,含化合物6、7、8分別為9.9微克/毫升、47.8微克/毫升和3.7微克/毫升。

實施例2:鎖陽低分子鞣質-半胱角酸縮合物6、7和8的分離與鑒定

將200克鎖陽參照實施例1方法,用1000毫升95%乙醇室溫振搖提取12小時,過濾后,濾渣用實施例1中“A)與半胱氨酸鹽酸鹽于60℃反應”所述方法進行處理,所得濾液經ODS柱層析,水-甲醇梯度洗脫,得鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物6、7和8。用Bruker?Avance?III?500NMR測定儀(1H?NMR:500MHz;13C?NMR:125MHz)測定NMR數據如下:

化合物6:

1H?NMR(CD3OD)δ2.98(dd,1H,J=9.5,14.5Hz,cys3),3.62(br?d,1H,J=14.5Hz,cys3),4.01(dd,1H,J=4.0,9.5Hz,3),4.14(dd,1H,J=4.0,9.5Hz,cys2),4.25(d,1H,J=4.0Hz,4),4.77(與溶劑中的水峰重疊,2),5.82(d,1H,J=2.5Hz,8),5.92(d,1H,J=2.5Hz,6),6.76(m,2H,5′,6′),6.91(br?s,1H,2′);以及

13C?NMR(CD3OD)δ36.6(C-cys3),45.0(C-4),55.5(C-cys2),72.1(C-3),79.0(C-2),95.6(C-6),96.7(C-8),101.8(C-10),116.0(C-2′),116.3(C-5′),121.2(C-6′),131.2(C-1′),146.2(C-3′),146.7(C-4′),156.5(C-5),157.4(C-7),159.7(C-9),172.8(C-cys1)。

化合物7:

1H?NMR(CD3OD)δ2.95(dd,1H,J=9.5,15.0Hz,cys3),3.43(dd,1H,J=3.5,15.0Hz,cys3),3.92(d,1H,J=2.0Hz,4),4.06(d,1H,J=1.5Hz,3),4.08(dd,1H,J=3.5,9.5Hz,cys2),5.19(s,1H,2),5.93(d,1H,J=2.5Hz,8),6.01(d,1H,J=2.5Hz,6),6.79(d,1H,J=8.0Hz,5′),6.86(dd,1H,J=1.5,8.0Hz,6′),7.02(d,1H,J=1.5Hz,2′);以及

13C?NMR(CD3OD)δ34.0(C-cys3),43.0(C-4),54.8(C-cys2),72.0(C-3),75.8(C-2),96.1(C-6),96.9(C-8),99.5(C-10),115.3(C-2′),116.0(C-5′),119.4(C-6′),131.8(C-1′),145.9(C-3′),146.1(C-4′),157.3(C-5),158.4(C-7),159.4(C-9),172.8(C-cysl)。

化合物8:

1H?NMR(CD3OD)δ3.20(dd,1H,J=7.5,15.0Hz,cys3),3.56(dd,1H,J=4.5,15.0Hz,cys3),4.06(d,1H,J=2.0Hz,4),4.09(dd,1H,J=4.5,7.5Hz,cys2),5.35(br?s,1H,3),5.44(s,1H,2),5.98(d,1H,J=2.0Hz,8),6.02(d,1H,J=2.0Hz,6),6.73(d,1H,J=8.0Hz,5′),6.88(dd,1H,J=2.0,8.0Hz,6′),6.92(s,2H,gal-2,6),6.97(d,1H,J=2.0Hz,2′);以及

13C?NMR(CD3OD)δ34.1(C-cys3),41.1(C-4),55.1(C-cys2),73.7(C-3),74.7(C-2),98.8(C-6,8),110.2(C-gal-2,gal-6),115.1(C-10),116.2(C-2′),119.4(C-5′),120.9(C-6′),130.6(C-1′,C-gal-1),140.1(C-3′),146.1(C-4′),146.2(C-gal-4),146.4(C-gal-3,gal-5),157.1(C-5),158.2(C-7),159.7(C-9),167.3(gal-COO-),172.7(C-cys1)。

實施例3:本發明鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的抗氧化活性測定

用本發明人報道的方法(Ma?CM,et?al.,“Daneshtalab?M.Synthesis,anti-HIV?and?anti-oxidant?activities?of?caffeoyl?5,6-anhydroquinic?acid?derivatives”,Bioorg?Med?Chem?2010,18:863-869),比較了本發明鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物與(表)兒茶素類本身的清除自由基作用。

清除自由基的作用在96-孔板上測得。每孔加入10μl受試化合物溶液(DMSO,1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml,0.125mg/ml,)和190μlDPPH[1,1-二苯基-2-間三硝基苯肼自由基(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl?radical)]的(0.1mM)乙醇溶液。室溫培養20分鐘后測定540nm的吸收值A。清除自由基的作用計算公式如下:

有效率%=100×(A對照-A受試化合物)/A對照,

其中對照用DMSO代替受試化合物溶液。每個樣品測定4個濃度(終濃度分別為50μg/ml,25μg/ml,12.5μg/ml和6.25μg/ml),EC50通過有效率%為縱坐標,受試化合物濃度為橫坐標的曲線求得。

抗氧化活性測試結果見下表1,EC50(μg/ml)代表受試化合物還原50%DPPH時的濃度。

表1.鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物的清除自由基活性

測試結果表明,本發明鎖陽低分子鞣質-半胱氨酸縮合物清除自由基活性不低于兒茶素和表兒茶素。

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荒漠 寄生 植物 鎖陽 綜合利用 方法 及其 產物 它們 應用
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