• / 14
  • 下載費用:30 金幣  

维戈塞尔塔vs毕尔巴鄂竞技: 一種甲基斑蝥胺脂肪乳劑及其制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201210181278.4

申請日:

20120604

公開號:

CN102697723A

公開日:

20121003

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/107,A61K31/407,A61K47/44,A61P35/00,A61P1/16 主分類號: A61K9/107,A61K31/407,A61K47/44,A61P35/00,A61P1/16
申請人: 重慶市中藥研究院,香港浸會大學
發明人: 楊大堅,陳新滋,陳國慶,張毅,陳士林,徐宏喜
地址: 400065 重慶市南岸區南山路34號
優先權: CN201210181278A
專利代理機構: 重慶輝騰律師事務所 代理人: 侯懋琪
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN201210181278.4

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種甲基斑蝥安脂肪乳劑,其配方包括甲基斑蝥胺、脂肪油、表面活性劑和等滲調節劑;甲基斑蝥胺脂肪乳注射劑既不僅提高了甲基斑蝥胺溶解度低的缺點,同時具有靶向作用,可以減小其在腎臟的組織分布,增加對肝臟的組織分布,以提高治療效果,降低毒副作用。

權利要求書

1.一種甲基斑蝥安脂肪乳劑,其特征在于:其配方包括甲基斑蝥胺、脂肪油、表面活性劑和等滲調節劑。2.根據權利要求1所述的甲基斑蝥安脂肪乳劑,其特征在于:所述脂肪油為大豆油、芝麻油、橄欖油、玉米油、紫蘇子油、蘇合香油、亞麻子油、椰子油、茶油、麻油、紅花油、棉子油、沙丁魚油、魚肝油、長鏈脂肪酸甘油三酯、碳原子數為8~10的中鏈脂肪酸甘油三酯中的任意一種或二種以上的混合物;所述表面活性劑為蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丙三醇、磷脂酸、溶血卵磷脂、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧化乙烯氫化蓖麻油衍生物、聚氧乙烯高級醇、聚氧丙烯聚氧乙烯烷基醚、普羅流尼、普朗尼克F-68、聚山梨酯80、脫氧膽堿鈉中的任意一種或二種以上的混合物;所述等滲劑為甘油、葡萄糖、木糖醇、麥芽糖、甘露醇任意一種或二種以上的混合物。3.根據權利要求2所述的甲基斑蝥安脂肪乳劑,其特征在于:所述甲基斑蝥安脂肪乳劑的配方為甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油的混合物;其中甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油的重量比為1~20:3~20:0.5~5:0.05~5。4.根據權利要求3所述的甲基斑蝥安脂肪乳劑,其特征在于:所述甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油重量比為:25:200:12:28;其中,所述甲基斑蝥安脂肪乳劑在還添加了作為溶劑的水。5.根據權利要求4所述的甲基斑蝥安脂肪乳劑,其特征在于:所述甲基斑蝥安脂肪乳劑還添加了乳化輔助劑、穩定劑、抗氧劑;其中乳化輔助劑,可選用月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸中任意一種或二種以上的混合物;穩定劑為油酸、膽甾醇、磷脂酸任意一種或二種以上的混合物;抗氧劑為抗壞血酸、α-生育酚中一種或兩種的混合物。6.一種甲基斑蝥胺脂肪乳劑的制備方法,其特征在于:包括以下步驟:1)將蛋黃卵磷脂用大豆油溶解;2)將甲基斑蝥胺在40-70℃條件下溶解到蛋黃卵磷脂與大豆油的混合物中,得到油相;3)將甘油溶解到水中得到水相;4)將油相混入水相中,剪切10-20min,定溶得到初乳;5)條初乳pH值至中性,高壓條件下均質,過濾,充氮,灌封,高溫高壓滅菌,得到甲基斑蝥胺的脂肪乳劑。7.根據權利要求6所述的甲基斑蝥胺脂肪乳劑的制備方法,其特征在于:所述步驟1)、2)和4)都是在氮氣?;は陸?。8.根據權利要求6所述的甲基斑蝥胺脂肪乳劑的制備方法,其特征在于:步驟2)所述的溶解溫度為60℃。9.根據權利要求6所述的甲基斑蝥胺脂肪乳劑的制備方法,其特征在于:步驟5)的操作為調節pH至7.0左右;采用高壓均質機在800~1000bar的壓力下對初乳進行均質3~5次,微孔濾膜過濾,充氮,灌封,115℃高壓滅菌,制得含甲基斑蝥胺的脂肪乳劑。

說明書

技術領域

本發明涉及一種注射劑,更具體的說涉及一種甲基斑蝥胺脂肪乳劑及其制備方法。

技術背景

甲基斑蝥胺是斑蝥素衍生物,易溶于三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯,溶于乙醇、熱水,微溶于水、石油醚。甲基斑蝥胺是通過對斑蝥素結構改造而成,而斑蝥素依賴于斑蝥蟲體中提取制備。近幾年自然環境污染嚴重,使野生斑蝥蟲的產量大幅減少,而人工養殖斑蝥蟲目前還沒有成功的經驗,所以近年來斑蝥蟲的價格持續增長,使甲基斑蝥胺的生產成本大幅提升。目前臨床使用劑型為片劑,用于治療原發性肝癌。甲基斑蝥胺片雖然口服方便,但口服藥物首先需經過胃腸道消化,再經過分布、擴散、吸收才能進入血液循環到達病癥部位,藥物在短期內難以在血液中達到有效濃度,生物利用度低,直接導致藥效不高。部分晚期癌癥患者身體狀況差,進食困難,口服甲基斑蝥胺片需每日1~3次,每次5~10片,服用時間長,服用次數多,服用總量大,對患者易造成精神負擔和心理壓力,不利于病情治療。甲基斑蝥胺片治療效果的相對降低,治療時間長等原因,導致甲基斑蝥胺片在臨床的使用率逐漸下降。

中國專利申請(公開號:CN1857198A)和中國專利申請(公開號:CN1868471A)分別公開了一種甲基斑蝥胺注射劑的制備方法,采用親水性的丙二醇、乙醇、甘油、聚乙二醇和磷脂、環糊精、普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮、尿素等助溶物質,增加甲基斑蝥胺的水溶性,從而制備出甲基斑蝥胺注射劑。但以上專利中所用輔料如乙醇、丙二醇等,在注射時存在局部刺激性大、溶血性等缺點,臨床使用風險性大,治療效果還有待評價;同時采用以上方法制備的甲基斑蝥胺注射劑都沒有能有效解決注射后甲基斑蝥胺在肝臟和腎臟中的分布問題,相比口服甲基斑蝥胺片存在更大腎毒性的風險。另據報道報道顯示,將甲基斑蝥胺靜脈注射與口服灌胃對比發現,口服給藥的生物利用度為靜脈注射的57%;藥物均勻分布于體內各組織中,但靜脈注射后藥物在腎臟中的濃度在各個時間點均高于口服給藥,而在肝臟中的濃度低于口服給藥。由于甲基斑蝥胺主要的不良反應為泌尿道系統的刺激性,目前的采用甲基斑蝥胺靜脈注射劑臨床應用受到了巨大的影響。

發明內容

為解決上述問題本發明提供了一種甲基斑蝥胺作為藥物活性成分的靜脈脂肪乳劑及其制備方法。研究發現,采用油相的精制豆油及作為乳化劑的豆磷脂對人體無毒,可以代謝;可以增加藥物的穩定性;具有降低毒性和刺激性、延長藥效時間等優點。難溶的甲基斑蝥胺制備成脂肪乳劑,相比口服給藥其療效大幅提高;同時本發明還發現,靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后,相比口服灌胃其生物利用度高,可以明顯增大藥物在肝臟中的濃度,減少在腎臟中的濃度,因此可以提高療效,降低毒副作用。本發明的具體發明內容為:

一種甲基斑蝥安脂肪乳劑,其配方包括甲基斑蝥胺、脂肪油、表面活性劑和等滲調節劑。

所述脂肪油為大豆油、芝麻油、橄欖油、玉米油、紫蘇子油、蘇合香油、亞麻子油、椰子油、茶油、麻油、紅花油、棉子油、沙丁魚油、魚肝油、長鏈脂肪酸甘油三酯、碳原子數為8~10的中鏈脂肪酸甘油三酯中的任意一種或二種以上的混合物;

所述表面活性劑為蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丙三醇、磷脂酸、溶血卵磷脂、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧化乙烯氫化蓖麻油衍生物、聚氧乙烯高級醇、聚氧丙烯聚氧乙烯烷基醚、普羅流尼、普朗尼克F-68、聚山梨酯80、脫氧膽堿鈉中的任意一種或二種以上的混合物;

所述等滲劑為甘油、葡萄糖、木糖醇、麥芽糖、甘露醇任意一種或二種以上的混合物。

所述甲基斑蝥安脂肪乳劑的配方為甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油的混合物;其中甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油的重量比為1~20:3~20:0.5~5:0.05~5。

所述甲基斑蝥胺、大豆油、蛋黃卵磷脂和甘油重量比為:25:200:12:28;其中,所述甲基斑蝥安脂肪乳劑在還添加了作為溶劑的水。

所述甲基斑蝥安脂肪乳劑還添加了乳化輔助劑、穩定劑、抗氧劑;

其中乳化輔助劑,可選用月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸中任意一種或二種以上的混合物;穩定劑為油酸、膽甾醇、磷脂酸任意一種或二種以上的混合物;抗氧劑為抗壞血酸、α-生育酚中一種或兩種的混合物。

一種甲基斑蝥胺脂肪乳劑的制備方法,包括以下步驟:

1)將蛋黃卵磷脂用大豆油溶解;

2)將甲基斑蝥胺在40-70℃條件下溶解到蛋黃卵磷脂與大豆油的混合物中,得到油相;

3)將甘油溶解到水中得到水相;

4)將油相混入水相中,剪切10-20min,定溶得到初乳;

5)條初乳pH值至中性,高壓條件下均質,過濾,充氮,灌封,高溫高壓滅菌,得到甲基斑蝥胺的脂肪乳劑。

所述步驟1)、2)和4)都是在氮氣?;は陸?。

步驟2)所述的溶解溫度為60℃。

步驟5)的操作為調節pH至7.0左右;采用高壓均質機在800~1000bar的壓力下對初乳進行均質3~5次,微孔濾膜過濾,充氮,灌封,115℃高壓滅菌,制得含甲基斑蝥胺的脂肪乳劑。

本發明的有益技術效果是:甲基斑蝥胺脂肪乳注射劑既不僅提高了甲基斑蝥胺溶解度低的缺點,同時具有靶向作用,可以減小其在腎臟的組織分布,增加對肝臟的組織分布,以提高治療效果,降低毒副作用。

具體實施方式

實施例1不同表明活性劑對對脂肪乳制劑的質量影響考察

分別稱取甲基斑蝥胺3組各3.0g、分別為蛋黃卵磷脂組、大豆卵磷脂組、磷脂酰膽堿組和溶血卵磷脂組,在各組中添加精制大豆油200.0g,然后在蛋黃卵磷脂組中加入12.0g蛋黃卵磷脂,在大豆卵磷脂組中加入12.0g大豆卵磷脂,在磷脂酰膽堿組中加入12.0g磷脂酰膽堿,在溶血卵磷脂組中加入12.0g溶血卵磷脂,各組分別加熱攪拌約l0~20min,混勻。另取注射用水700mL,加入甘油22.0g在氮氣?;ず徒漣杼跫?,將精制蛋黃卵磷脂油溶液加入甘油水溶液中,調節總量至1000mL。經高壓均質機均質7~8次,均質壓力為100MPa,至粒徑范圍在180~300mm,調節pH值至6.0~8.5,過濾,分裝,通入氮氣,密封。于115℃滅菌30min,燈檢合格后,包裝。

質量評價:pH值及乳粒大小分布的測定參照2010版《中國藥典》方法。乳粒大小分布的測定用PSS?NICOMP?380粒測定系統,取0.5L脂肪乳樣品置測樣杯中,加空白介質至10ml,搖勻后計數其中粒徑﹥1μm和﹥5μm的粒子百分數。在粒徑﹥0.5μm的乳粒總數中,粒徑﹥1μm的乳粒數不得超過3%并不得有粒徑﹥5μm的乳粒。另依據2010年版《中國藥典》方法。使用高效液相色潛(HPLC)法測定脂肪乳注射劑樣品中游離脂肪酸、甘油三酯含量。使用硫代硫酸鈉液滴定法進行過氧化值測定,用紫外分光光度法測定甲氧基苯胺含量。

細菌內毒素檢查:試驗前先對購得的臀試劑進行靈敏度復核。參照《中國藥典》細菌內毒素檢查法,用一定靈敏度的鱟試利與樣品中細菌內毒素發生反應形成凝膠,以判斷檢品的細菌內毒素是否超限。然后各取樣品原液用鱟試劑檢查用水稀釋,進行干擾試驗,證實對鱟試劑無抑制或增強作用后,再檢查脂肪乳樣品的內毒素,每1ml樣品含內毒素不得超過0.5EU。

穩定性試驗:將兩種脂肪乳樣品住10,20,40℃條件下經0,3,6,12,18個月貯藏,分別參照2010版《中國藥典》方法測定pH值和游離脂肪酸濃度,同時記錄樣品的外觀變化。

對比上述實驗組樣品的pH值、甘油三酯及游離脂肪酸含量等質量參數,結果如表1所示。

表1四種脂肪乳劑的質量評價結果(n=3)

過氧化值、甲氧基苯胺含量測定結果如表2所示,可見四種脂肪乳制劑未見明顯差異且均符合2010版《中國藥典》規定的質量標準。

表2四種制劑中過氧化值及甲氧基苯胺含量測定結果(n=3)

按2010版《中國藥典》細菌內毒素檢測法,用鱟試劑法檢測樣品中細菌內毒素是否超限。結果顯示四種制劑中每1ml含內毒素均小于0.4EU,其中蛋黃卵磷脂組的內毒素小于0.2EU,完全符合規定的質量要求。

穩定性試驗結果見表3所示,隨著貯藏溫度和貯藏時間的變化,四種制劑的pH值及游離脂肪酸濃度均有變化,放置12個月后這兩項指標略低于制備初期,但相同貯藏時間及溫度條件下的變化趨勢相同,表明四種種制劑的質量穩定性沒有差異(P>0.05)。

表3制劑穩定性實驗結果(n=3)

實施例2等滲調節劑對脂肪乳制劑注射液降解產物的影響

有人曾對0.5%親水性甲基斑蝥胺注射劑注射液進行測定。確認有降解產物NO2-存在;也有報道pH值與滅菌時間及溫度對親水性甲基斑蝥胺注射劑降解產物NO2-濃度有影響。為了進一步探討等滲調節劑對本發明提供的甲基斑蝥胺注射劑穩定性的影響。對本發明提供的脂肪乳制劑內分別含葡萄糖5%、甘油5%、木糖醇5%、麥芽糖5%和甘露醇5%,在pH=4.5~5.5,以110℃30min滅菌生產的0.2%脂肪乳制劑,液采用比色法測定其降解產物NO2-含量,采用親水性甲基斑蝥胺作為對照組,并對結果進行比較。結果表明,分別精取各組溶液各1.25ml置10ml容量瓶中,按上述方法配制,在479nm處分別測定其吸收值(A)帶入標準曲線方程,計算含量,結果如表4所示。

表4等滲調節劑對NO2-測定影響測定

實施例3脂肪乳制劑的制備

1組處方組成

甲基斑蝥胺25g,大豆油200g,蛋黃卵磷脂12g,甘油28g,加注射用水至1000ml。

制備工藝

在氮氣?;は虜捎?00g注射用大豆油將12g蛋黃卵磷脂全部溶解,加入25g甲基斑蝥胺,在60℃水浴加熱攪拌使其溶解,得油相;將28g甘油溶于500ml水中,得水相;將油相緩慢滴加入水相中,同時氮氣?;は陸屑艚?0min,注射用水補充至1000ml,得初乳,調節pH至7.0左右;采用高壓均質機在800~1000bar的壓力下對初乳進行均質3~5次,微孔濾膜過濾,充氮,灌封,115℃高壓滅菌,制得含甲基斑蝥胺的脂肪乳劑。本發明的脂肪乳劑,可以經過冷凍干燥過程制成冷凍干燥的制劑。這時制劑中可進一步添加賦形劑,可采用甘露糖醇、乳糖、麥芽糖、蔗糖、肌醇等。使用時,用注射用溶劑溶解即可。得到實驗組1。

2組處方組成

甲基斑蝥胺25g,大豆油3.75g,蛋黃卵磷脂1g,甘油0.5g,加注射用水至1000ml。

制備工藝按上述方法制備得到實驗組2。

3組處方組成

甲基斑蝥胺25g,大豆油500g,蛋黃卵磷脂125g,甘油125g,加注射用水至1000ml。

制備工藝按上述方法制備得到實驗組3。

1~20:3~20:0.5~5:0.05~5。

實施例4甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠的治療作用研究

1.試驗材料

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組1,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),口服灌胃甲基斑蝥胺溶液(采用5%乙醇溶液將甲基斑蝥胺配置成6mg/ml溶液),小鼠肝癌H22細胞株(由重慶市中藥研究院中藥藥理室提供),昆明中小鼠(雌性,體重20±2g,由重慶市中藥研究院動物中心提供,合格證號:SCXK渝20070006)。

2.試驗方法

2.1H22肝癌小鼠模型的建立

取3只雌性小鼠腹腔各接種0.3ml?H22細胞懸液,培養肝癌H22細胞株。10天后取腹水,傳代3次,按細胞懸液與0.4%臺盼藍生理鹽水液的比例為9:1計數活細胞,以RPMI-1640培養液調整H22細胞濃度為5×106個/ml,接種量為每只小鼠0.2ml細胞懸液,細胞總數為1×106個/只。

2.2試驗動物分組及給藥方法

雌性小鼠24只,取濃度為5×106個/ml?H22細胞,每只小鼠右腋窩皮下注射0.2ml(1×106個/只),整個操作在30min內完成;接種后隨機分為3組,分別是陰性對照組、口服灌胃甲基斑蝥胺組和尾靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑組,每組8只。陰性對照組每日靜脈注射生理鹽水(0.2ml/只),口服灌胃組按60mg/kg每日灌胃甲基斑蝥胺溶液,靜脈注射組按60mg/kg每日尾靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑,連續7天。

2.3對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

各組小鼠于末次給藥后次日處死,解剖后肉眼觀察小鼠H22實體瘤為球形結節狀,質脆細嫩,剖面呈魚肉狀,切面可見灰白色壞死灶。腫瘤多有浸潤性生長,有得甚至浸潤至胸骨、鎖骨及腋窩后等處,與周圍組織分界不清,難以剝離。注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑組小鼠的瘤體較小,形狀規則易剝離,與口服組和陰性對照組相比,瘤重明顯降低,具體結果如如表5所示,與口服灌胃組比較存在顯著性差異,說明注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的效果比口服甲基斑蝥胺的療效明顯提高。

表5甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

注:*與口服甲基斑蝥胺組比較P<0.05

實施例5甲基斑蝥胺脂肪乳劑藥代動力學研究

1.試驗材料

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組1,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),口服灌胃甲基斑蝥胺溶液(采用5%乙醇溶液將甲基斑蝥胺配置成6mg/ml溶液)。SD大鼠(雄性,質量200±20g,由重慶市中藥研究院試驗動物所供應,合格證號:SCXK渝20070006)。

2.儀器與色譜條件

Waters2695高效液相色譜儀,Waters2996紫外檢測器;Symmetry?shield?C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相乙腈:水(35:65);流速0.5ml/min,柱溫30℃,紫外檢測波長212nm,進樣量為20μl。

3.方法與結果

3.1樣品采集

取大鼠10只,隨機分為2組,每組5只,實驗前禁食12h,按劑量30mg/kg,一組口服灌胃市售甲基斑蝥胺溶液,另一組尾靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑,分別于給藥后0,5min,10min,20min,30min,45min,1h,2h,3h,4h取血,肝素抗凝,3000r/min離心15min,分離血漿,放-25℃冰凍備用。

3.2樣品處理

精密吸取0.1ml血漿,加入甲醇0.5ml,旋渦振蕩1min,離心10min(12000r/min),上清液用氮氣流吹干,殘渣加0.1ml甲醇超聲溶解,離心10min(12000r/min),取上清液進樣。

3.3標準溶液配制

精密稱取甲基斑蝥胺對照品11.36mg,采用甲醇溶解,定容為10ml,充分混勻制成1.136mg/ml貯備液。

2.4標準曲線制備

分別用適量空白血漿將標準貯備液稀釋成系列標準溶液,按2項下色譜條件進行測定,記錄峰面積,以濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標,得甲基斑蝥胺在血液中的標準曲線,其回歸方程為A=408.54C+0.9671(r=0.9992),在3.46~113.60μg/ml范圍內線性關系良好。

3.5大鼠灌胃和注射后藥代動力學研究

大鼠口服灌胃和靜脈注射等劑量甲基斑蝥胺(30mg/kg)后各時間點藥物濃度如表6所示。結果表明,口服灌胃后5min甲基斑蝥胺濃度為4.88μg/ml,2h達到峰值,為20.20μg/ml,隨后迅速下降,在4h下降至5.02μg/ml;靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后,5min時濃度為71.27μg/ml,之后平穩下降,至480min時測定其濃度為2.18μg/ml。

將測得的血藥數據輸入計算機,用bapp2.2藥代動力學統計程序處理,結果表明口服灌胃甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳的體內過程均符合一室模型,其主要的藥動學參數見表7,可以看到灌胃和靜脈注射后的AUC0-∞分別為(3705.06±243.88)和(11747.06±61.07)min·μg/ml,灌胃給藥的生物利用度僅為靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的31.54%。由此可見,將甲基斑蝥胺制成脂肪乳劑可以顯著提升其生物利用度,以此增加治療效果。

表6不同時間點甲基斑蝥胺個血藥濃度

表7大鼠口服甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后部分藥動學參數

實施例6甲基斑蝥胺脂肪乳劑在肝、腎中的組織分布研究

1.試驗材料

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組1,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),口服灌胃甲基斑蝥胺溶液(采用5%乙醇溶液將甲基斑蝥胺配置成6mg/ml溶液)。SD大鼠(雄性,質量200±20g,由重慶市中藥研究院試驗動物所供應,合格證號:SCXK渝20070006)。

2.儀器與色譜條件

Waters2695高效液相色譜儀,Waters2996紫外檢測器;Symmetry?shield?C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相乙腈:水(35:65);流速0.5ml/min,柱溫30℃,紫外檢測波長212nm,進樣量為20μl。

3.方法與結果

3.1樣品采集及處理

取大鼠18只,隨機分為2組,每組9只,實驗前禁食12h,按劑量60mg/kg,一組口服灌胃甲基斑蝥胺溶液,另一組尾靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑,給藥后于不同時間點,每次每組取3只小鼠頸椎脫臼處死,取小鼠肝臟和腎臟,用生理鹽水漂洗后濾紙吸干,精密稱重后用生理鹽水制備組織均漿液,取均漿液0.1g,加入甲醇0.5ml,渦旋,旋渦振蕩1min,離心10min(12000r/min),上清液用氮氣流吹干,殘渣加0.1ml甲醇超聲溶解,離心10min(12000r/min),取上清液進行HPLC分析。

3.2標準溶液配制

精密稱取甲基斑蝥胺對照品11.36mg,采用甲醇溶解,定容為10ml,充分混勻制成1.136mg/ml貯備液。

3.3標準曲線制備

分別用適量的空白肝、腎組織均漿液將標準貯備液稀釋成系列標準溶液,按2項下色譜條件進行測定,記錄峰面積,以濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標,分別得甲基斑蝥胺在肝、腎中的標準曲線,如表8所示。

表8甲基斑蝥胺在肝臟和腎臟中的標準曲線

3.4小鼠灌胃和注射后組織分布

小鼠灌胃和靜脈注射等劑量(60μg/ml)甲基斑蝥胺后,不同時間點藥物在肝臟和腎臟中的分布結果如表9所示。由表9可以看出,靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳后不同時間點藥物在肝臟中的濃度均高于灌胃給藥,而在腎臟中的濃度均低于灌胃給藥,由此說明甲基斑蝥胺脂肪乳劑具有一定靶向性,靜脈注射后能使藥物更多的聚集在肝臟,降低腎臟中的藥物濃度,以此達到提高治療效果,降低腎臟毒性的作用。

表9不同時間點肝臟和腎臟中甲基斑蝥胺的濃度

實施例7甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠的治療作用研究2

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組2,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),方法與實施例5相同,考察對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用。

解剖后肉眼觀察小鼠H22實體瘤為球形結節狀,質脆細嫩,剖面呈魚肉狀,切面可見灰白色壞死灶。腫瘤多有浸潤性生長,有得甚至浸潤至胸骨、鎖骨及腋窩后等處,與周圍組織分界不清,難以剝離。注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑組小鼠的瘤體較小,形狀規則易剝離,與口服組和陰性對照組相比,瘤重明顯降低,具體結果如表10所示,與口服灌胃組比較存在顯著性差異,說明注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的效果比口服甲基斑蝥胺的療效明顯提高。

表10甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

注:*與口服甲基斑蝥胺組比較P<0.05

實施例8甲基斑蝥胺脂肪乳劑藥代動力學研究2

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組2,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),實驗方法同實施例5相同,考察大鼠灌胃和注射后藥代動力學。

大鼠口服灌胃和靜脈注射等劑量甲基斑蝥胺(30mg/kg)后各時間點藥物濃度如表11所示。結果表明,口服灌胃后5min甲基斑蝥胺濃度為4.88μg/ml,2h達到峰值,為20.20μg/ml,隨后迅速下降,在4h下降至5.02μg/ml;靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后,5min時濃度為71.27μg/ml,之后平穩下降,至480min時測定其濃度為2.18μg/ml。

將測得的血藥數據輸入計算機,用bapp2.2藥代動力學統計程序處理,結果表明口服灌胃甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳的體內過程均符合一室模型,其主要的藥動學參數見表12,可以看到灌胃和靜脈注射后的AUC0-∞分別為(3705.06±243.88)和(11747.06±61.07)min·μg/ml,灌胃給藥的生物利用度僅為靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的31.54%。由此可見,將甲基斑蝥胺制成脂肪乳劑可以顯著提升其生物利用度,以此增加治療效果。

表11不同時間點甲基斑蝥胺個血藥濃度

表12大鼠口服甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后部分藥動學參數

實施例9甲基斑蝥胺脂肪乳劑在肝、腎中的組織分布研究

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組2,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),試驗方法同實施例6相同,考察甲基斑蝥胺脂肪乳劑在肝、腎中的組織分布研究。

分別用適量的空白肝、腎組織均漿液將標準貯備液稀釋成系列標準溶液,按2項下色譜條件進行測定,記錄峰面積,以濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標,分別得甲基斑蝥胺在肝、腎中的標準曲線,如表13所示。

表13甲基斑蝥胺在肝臟和腎臟中的標準曲線

小鼠灌胃和靜脈注射等劑量(60μg/ml)甲基斑蝥胺后,不同時間點藥物在肝臟和腎臟中的分布結果如表14所示。由表14可以看出,靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳后不同時間點藥物在肝臟中的濃度均高于灌胃給藥,而在腎臟中的濃度均低于灌胃給藥,由此說明甲基斑蝥胺脂肪乳劑具有一定靶向性,靜脈注射后能使藥物更多的聚集在肝臟,降低腎臟中的藥物濃度,以此達到提高治療效果,降低腎臟毒性的作用。

表14不同時間點肝臟和腎臟中甲基斑蝥胺的濃度

實施例10甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠的治療作用研究2

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組3,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),方法與實施例5相同,考察對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用。

解剖后肉眼觀察小鼠H22實體瘤為球形結節狀,質脆細嫩,剖面呈魚肉狀,切面可見灰白色壞死灶。腫瘤多有浸潤性生長,有得甚至浸潤至胸骨、鎖骨及腋窩后等處,與周圍組織分界不清,難以剝離。注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑組小鼠的瘤體較小,形狀規則易剝離,與口服組和陰性對照組相比,瘤重明顯降低,具體結果如表15所示,與口服灌胃組比較存在顯著性差異,說明注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的效果比口服甲基斑蝥胺的療效明顯提高。

表15甲基斑蝥胺脂肪乳劑對荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

注:*與口服甲基斑蝥胺組比較P<0.05

實施例11甲基斑蝥胺脂肪乳劑藥代動力學研究2

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組3,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),實驗方法同實施例5相同,考察大鼠灌胃和注射后藥代動力學。

大鼠口服灌胃和靜脈注射等劑量甲基斑蝥胺(30mg/kg)后各時間點藥物濃度如表16所示。結果表明,口服灌胃后5min甲基斑蝥胺濃度為4.88μg/ml,2h達到峰值,為20.20μg/ml,隨后迅速下降,在4h下降至5.02μg/ml;靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后,5min時濃度為71.27μg/ml,之后平穩下降,至480min時測定其濃度為2.18μg/ml。

將測得的血藥數據輸入計算機,用bapp2.2藥代動力學統計程序處理,結果表明口服灌胃甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳的體內過程均符合一室模型,其主要的藥動學參數見表17,可以看到灌胃和靜脈注射后的AUC0-∞分別為(3705.06±243.88)和(11747.06±61.07)min·μg/ml,灌胃給藥的生物利用度僅為靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑的31.54%。由此可見,將甲基斑蝥胺制成脂肪乳劑可以顯著提升其生物利用度,以此增加治療效果。

表16不同時間點甲基斑蝥胺個血藥濃度

表17大鼠口服甲基斑蝥胺和靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳劑后部分藥動學參數

實施例12甲基斑蝥胺脂肪乳劑在肝、腎中的組織分布研究

注射用甲基斑蝥胺脂肪乳劑(根據本發明實施3的方法制備得到的實驗組3,每瓶100ml含甲基斑蝥胺2.5g,試驗時根據所需濃度采用生理鹽水稀釋),試驗方法同實施例6相同,考察甲基斑蝥胺脂肪乳劑在肝、腎中的組織分布研究。

分別用適量的空白肝、腎組織均漿液將標準貯備液稀釋成系列標準溶液,按2項下色譜條件進行測定,記錄峰面積,以濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標,分別得甲基斑蝥胺在肝、腎中的標準曲線,如表18所示。

表18甲基斑蝥胺在肝臟和腎臟中的標準曲線

小鼠灌胃和靜脈注射等劑量(60μg/ml)甲基斑蝥胺后,不同時間點藥物在肝臟和腎臟中的分布結果如表19所示。由表19可以看出,靜脈注射甲基斑蝥胺脂肪乳后不同時間點藥物在肝臟中的濃度均高于灌胃給藥,而在腎臟中的濃度均低于灌胃給藥,由此說明甲基斑蝥胺脂肪乳劑具有一定靶向性,靜脈注射后能使藥物更多的聚集在肝臟,降低腎臟中的藥物濃度,以此達到提高治療效果,降低腎臟毒性的作用。

表19不同時間點肝臟和腎臟中甲基斑蝥胺的濃度

關 鍵 詞:
一種 甲基 斑蝥 脂肪 乳劑 及其 制備 方法
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
關于本文
本文標題:一種甲基斑蝥胺脂肪乳劑及其制備方法.pdf
鏈接地址://www.vmyqew.com.cn/p-6882208.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 www.vmyqew.com.cn網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開