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维戈塞尔塔赫罗纳: 一種塊菌的組織分離及培養方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201810383135.9

申請日:

20180426

公開號:

CN108739375A

公開日:

20181106

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 北京市農業技術推廣站
發明人: 鄧德江,魏金康,胡曉艷,吳尚軍,賀國強,趙???彭明才,趙恩永
地址: 100029 北京市朝陽區小關惠新里甲十號
優先權: CN201810383135A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201810383135.9

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及菌種分離培養領域,特別是涉及一種塊菌的組織分離及培養方法,其操作簡便,不易帶入雜菌,容易獲得純菌種;包括以下步驟:(1)前處理;(2)接種;(3)發菌;(4)純化;(5)保存。

權利要求書

1.一種塊菌的組織分離及培養方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)前處理:首先用無菌水將采集到的野生塊菌反復沖洗干凈,然后將塊菌放置于無菌水中浸泡2-4個小時;其次對超凈工作臺進行紫外殺菌,然后將浸泡后的塊菌用無菌濾紙擦拭干凈,放于超凈工作臺內備用;最后將塊菌子實體從中心刨開,取黃豆大小的塊菌中心組織若干塊,分別置于PDA培養基中;(2)接種:在超凈工作臺中將取出的塊菌中心組織分別接種于多個PDA培養基中;(3)發菌:把所有PDA培養基蓋上蓋子,并將其放置于恒溫培養箱中進行培養發菌;(4)純化:在多個PDA培養基中選取無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,轉接于多個新的PDA培養基中,對塊菌菌絲進行純化;(5)保存:選取純化后的PDA培養基中無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,接種于另外一支PDA試管斜面培養基中進行轉管培養保存,獲得純化菌絲。2.如權利要求1所述的一種塊菌的組織分離及培養方法,其特征在于,所述步驟(1)中的PDA培養基中包括馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂粉和無菌水。3.如權利要求1所述的一種塊菌的組織分離及培養方法,其特征在于,所述步驟(1)中的PDA培養基的制作方法包括以下步驟:a、稱取馬鈴薯200g,加入無菌水煮爛,用八層紗布過濾,棄去濾渣;b、將過濾后的液體加熱,加入15-20g瓊脂粉,繼續加熱攪拌混勻;c、待瓊脂粉完全溶解后,加入葡萄糖20g,攪拌均勻;d、稍冷卻后加入無菌水補足至1000ml并混勻;e、將混勻后的溶液分裝至試管或錐形瓶中,并對試管和錐形瓶進行加塞和包扎,在115℃下滅菌20分鐘;f、取出試管擺斜面,并將錐形瓶搖勻,冷卻后貯存備用。

說明書

技術領域

本發明涉及菌種分離培養領域,特別是涉及一種塊菌的組織分離及培養方法。

背景技術

眾所周知,塊菌是一種具有獨特的香味、口感和營養價值的食用菌,人類食用塊菌已有上千年的歷史,在歐美等發達國家,塊菌號稱“黑色金剛石”,使野生菌的極品,塊菌右多種療效,富含17種氨基酸、8中維生素、適量的蛋白質、雄性酮、甾醇、鞘脂、脂肪酸及微量元素等50余種生理活性成分,并且含有人體自身不能合成的8中氨基酸、鋅、錳、鐵、鈣、磷、硒等必需元素,具有增強免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、療痣等藥用價值,具有抗癌活性,對癌細胞有一定的抑制作用,可以激發腦細胞活力;

組織分離法是一種簡便、后代不易發生變異的用子實體的某一部分來分離菌種的方法;

2017年,在北京懷柔發現一種塊菌,屬于東南亞少有的物種,經過中科院微生物所鑒定,為新種,命名為“北京原塊菌”;

本發明采用組織分離法對新發現的“北京原塊菌”進行組織分離及培養。

發明內容

本發明提供一種操作簡便,不易帶入雜菌,容易獲得純菌種的塊菌的組織分離及培養方法。

本發明的一種塊菌的組織分離及培養方法,包括以下步驟:

(1)前處理:

首先用無菌水將采集到的野生塊菌反復沖洗干凈,然后將塊菌放置于無菌水中浸泡2-4個小時;

其次對超凈工作臺進行紫外殺菌,然后將浸泡后的塊菌用無菌濾紙擦拭干凈,放于超凈工作臺內備用;

最后將塊菌子實體從中心刨開,取黃豆大小的塊菌中心組織若干塊,分別置于PDA培養基中;

(2)接種:

在超凈工作臺中將取出的塊菌中心組織分別接種于多個PDA培養基中;

(3)發菌:

把所有PDA培養基蓋上蓋子,并將其放置于恒溫培養箱中進行培養發菌;

(4)純化:

在多個PDA培養基中選取無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,轉接于多個新的PDA培養基中,對塊菌菌絲進行純化;

(5)保存:

選取純化后的PDA培養基中無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,接種于另外一支PDA試管斜面培養基中進行轉管培養保存,獲得純化菌絲。

本發明的一種塊菌的組織分離及培養方法,所述步驟(1)中的PDA培養基中包括馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂粉和無菌水。

本發明的一種塊菌的組織分離及培養方法,所述步驟(1)中的PDA培養基的制作方法包括以下步驟:

a、稱取馬鈴薯200g,加入無菌水煮爛,用八層紗布過濾,棄去濾渣;

b、將過濾后的液體加熱,加入15-20g瓊脂粉,繼續加熱攪拌混勻;

c、待瓊脂粉完全溶解后,加入葡萄糖20g,攪拌均勻;

d、稍冷卻后加入無菌水補足至1000ml并混勻;

e、將混勻后的溶液分裝至試管或錐形瓶中,并對試管和錐形瓶進行加塞和包扎,在115℃下滅菌20分鐘;

f、取出試管擺斜面,并將錐形瓶搖勻,冷卻后貯存備用。

本發明的有益效果為:通過上述方法,其只需將塊菌的中心組織取出并放置于培養基上培養并純化即可,操作簡便,并且在操作前首先對塊菌進行清洗和浸泡,并放入殺菌后的超凈工作臺上備用,此后的接種均在超凈工作臺上完成,不易帶入雜菌,并通過對培養后的菌絲進行純化培養,從而容易獲得純菌種。

具體實施方式

下面結合實施例,對本發明的具體實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。

本發明的一種北京原塊菌的組織分離及培養方法,包括以下步驟:

(1)前處理:

首先用無菌水將采集到的野生塊菌反復沖洗干凈,然后將塊菌放置于無菌水中浸泡2-4個小時;

其次對超凈工作臺進行紫外殺菌,然后將浸泡后的塊菌用無菌濾紙擦拭干凈,放于超凈工作臺內備用;

最后將塊菌子實體從中心刨開,取黃豆大小的塊菌中心組織若干塊,分別置于PDA培養基中;

(2)接種:

在超凈工作臺中將取出的塊菌中心組織分別接種于多個PDA培養基中;

(3)發菌:

把所有PDA培養基蓋上蓋子,并將其放置于恒溫培養箱中進行培養發菌;

(4)純化:

在多個PDA培養基中選取無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,轉接于多個新的PDA培養基中,對塊菌菌絲進行純化;

(5)保存:

選取純化后的PDA培養基中無污染、菌絲健壯的塊菌,當菌絲生長至2-3cm時,挑取黃豆大小的菌絲尖端邊緣的培養基,接種于另外一支PDA試管斜面培養基中進行轉管培養保存,獲得純化菌絲。

本發明的一種塊菌的組織分離及培養方法,步驟(1)中的PDA培養基中包括馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂粉和無菌水。

本發明的一種塊菌的組織分離及培養方法,步驟(1)中的PDA培養基的制作方法包括以下步驟:

a、稱取馬鈴薯200g,加入無菌水煮爛,用八層紗布過濾,棄去濾渣;

b、將過濾后的液體加熱,加入15-20g瓊脂粉,繼續加熱攪拌混勻;

c、待瓊脂粉完全溶解后,加入葡萄糖20g,攪拌均勻;

d、稍冷卻后加入無菌水補足至1000ml并混勻;

e、將混勻后的溶液分裝至試管或錐形瓶中,并對試管和錐形瓶進行加塞和包扎,在115℃下滅菌20分鐘;

f、取出試管擺斜面,并將錐形瓶搖勻,冷卻后貯存備用。

本發明的一種北京原塊菌的組織分離及培養方法,首先對組織培養所需要的培養基進行配置,將裝有PDA培養基的試管和錐形瓶進行滅菌并冷卻凝固后放置于恒溫培養箱培養24小時,若無雜菌生長則其中的培養基可以對塊菌進行培養;

使用無菌水對采集的塊菌進行反復清洗和浸泡,并且同時對塊菌進行操作的超凈工作臺進行殺菌,減少塊菌夾帶的和空氣中的雜菌對塊菌的組織培養產生影響,此后的接種均在超凈工作臺上完成,不易帶入雜菌,同時選取塊菌中心組織進行培養,從而可以進一步減少雜菌的影響;

將選取的塊菌組織分別放置于不同的培養基上進行組織培養,并挑選無污染、長勢良好的菌絲進行純化培養,挑取純化后的菌絲轉接至試管斜面上進行保存,得到純化的菌絲。

以上所述僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明技術原理的前提下,還可以做出若干改進和變型,這些改進和變型也應視為本發明的?;し段?。

關 鍵 詞:
一種 塊菌 組織 分離 培養 方法
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