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韦斯卡对阵维戈塞尔塔: 一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201210193023.X

申請日:

20120612

公開號:

CN102697727B

公開日:

20140108

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/127,A61K31/192,A61K47/32 主分類號: A61K9/127,A61K31/192,A61K47/32
申請人: 東華大學
發明人: 朱利民,袁彩艷,聶華麗
地址: 201620 上海市松江區松江新城人民北路2999號
優先權: CN201210193023A
專利代理機構: 上海泰能知識產權代理事務所 代理人: 黃志達;謝文凱
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210193023.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法,包括:(1)將聚乙烯吡咯烷酮、大豆卵磷脂和酮洛芬在攪拌下加入到混合溶劑中,繼續攪拌1~2h至完全溶脹;然后振蕩至完全溶解,使得溶液呈透明狀,超聲處理進行脫氣,得到紡絲溶液;(2)采用上述的紡絲溶液進行靜電紡絲,將收集到的電紡纖維膜真空干燥;(3)將上述電紡纖維膜溶解在雙蒸水中,得到脂質體懸浮液,然后超聲處理,得到酮洛芬脂質體。本發明方法操作簡單,耗時較少,適用于規?;?;所使用的原材料廉價易得,酮洛芬脂質體具有良好的可降解性及生物相容性,具有應用其做后續相關實驗分析的潛力。

權利要求書

1.一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法,包括:(1)將體積比為4:1氯仿和N,N-二甲基乙酰胺DMAc混合液放入反應容器內;(2)將稱量好的PVP、PC及酮洛芬粉末在攪拌條件下緩慢加入上述反應容器內,繼續攪拌1.5h至完全溶脹;其中,PVP在氯仿和DMAc混合液中的含量固定為10%(w/w),PC在氯仿和DMAc混合液中的含量固定為5%(w/w),酮洛芬與PC的質量比為3:25;(3)將三角燒瓶放在搖床中,在25℃下振蕩24h至完全溶解,聚合物溶液呈透明狀,超聲處理15min進行脫氣,制得紡絲液;(4)用5ml注射器抽取紡絲液,固定在靜電紡絲裝置上,固定靜電壓為14kv,接收距離為25cm,噴射流速為1ml/h,進行電紡,將得到PVP-PC-Keto復合納米纖維在真空干燥箱中干燥2天;(5)將上述干燥的納米纖維溶解于雙蒸水中得到脂質體懸浮液,超聲處理30min,備用。

說明書

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技術領域

本發明屬于藥物脂質體的制備領域,特別涉及一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法。

背景技術

分子自組裝是利用分子與分子或分子中某一片段與另一片段之間的分子識別,通過非共價作用形成具有特定排列順序的分子聚集體。近年來,由生物構建單元制備的微米及納米材料因其良好的生物相容性以及結構和功能的多樣性,在材料學、組織工程、生物工程及藥物傳遞等方面展示出巨大的應用潛力。目前為止,一系列的分子自組裝體系被構建起來,例如:蛋白質、多肽及其衍生物、核酸和磷脂等。一直以來,許多科學家探索用不同的方法來調控其自組裝過程。在自組裝過程中,除了需要合適的溶劑以外,適當的技術手段也是必需的。為此,科學家們嘗試利用現有的各種技術手段,如靜電紡絲、超聲波、外加磁場等來引導分子的自組裝過程。

脂質體是一種人工合成的磷脂載體。由于其特殊的結構,脂質體可以將親水性的藥物包裹在其內部的水環境中,而疏水性藥物則分布在其磷脂片層中。脂質體具有良好的生物相容性、生物可降解性及低毒性等優點,因此在作為有效的藥物載體方面具有潛在的應用價值。傳統的脂質體制備方法有:薄膜分散法、注入法、超聲波分散法及逆向蒸發法等。然而脂質體的穩定性差及在制備過程中有毒有機溶劑的殘留限制了它的應用與發展。因此科學家做了一系列的嘗試來增強脂質體的穩定性或降低毒性。

靜電紡絲技術是指聚合物溶液或熔體被噴射拉伸成纖維的過程。它是一種制備聚合物納米纖維的新方法,它可制備出直徑為納米級的超細纖維,最小直徑可至1nm。較傳統方法制備的聚合物纖維,電紡法制備聚合物納米纖維具有設備簡單、操作容易、高效可控且用電紡法制備的超細纖維膜具有比表面積大和孔隙率高、質輕等優點,組織工程、藥物和催化劑載體、傷口敷料、過濾、傳感器、模板、防護織物、納米電子元件等眾多領域具有潛在的應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法,該方法操作簡單,耗時較少,可獲得粒徑均一的酮洛芬脂質體,適用于規?;?。

本發明的一種利用靜電紡絲技術制備自組裝酮洛芬脂質體的方法,包括:

(1)將聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、大豆卵磷脂(PC)和酮洛芬(Keto)在攪拌下加入到氯仿和N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)的混合溶劑中,繼續攪拌1~2h至完全溶脹;然后振蕩至完全溶解,使得溶液呈透明狀,超聲處理進行脫氣,得到紡絲溶液;其中,聚乙烯吡咯烷酮與大豆卵磷脂的質量比為2:1~5:1;酮洛芬與大豆卵磷脂的質量比為3:25~15:25;

(2)采用上述的紡絲溶液進行靜電紡絲,將收集到的電紡纖維膜真空干燥;

(3)將上述電紡纖維膜溶解在雙蒸水中,得到脂質體懸浮液,然后超聲處理,得到酮洛芬脂質體。

所述步驟(1)中的氯仿與N,N-二甲基乙酰胺的體積比為4:1~5:1。

所述步驟(1)中的振蕩的具體工藝為在25±2℃下振蕩15~24h。

所述步驟(1)中的超聲處理的時間為15~30min。

所述步驟(2)中的靜電紡絲的工藝參數為:注射器規格為5mL,針頭內徑為0.4~0.7mm,接收屏采用鋁箔接地接收,針頭與接收屏的距離為20~25cm,電壓為14~16kV,電紡時所選用的噴出流速為1.0~1.2ml/h。

所述步驟(3)中的真空干燥的時間為1~2天。

所述步驟(3)中的超聲處理的時間為20~30min。

本發明以PVP及PC為主要紡絲材料,并疏水性的藥物酮洛芬進行電紡,制備復合納米纖維并借助PVP極強的水溶性,實現了PC在水中的自組裝,并成功地將疏水性藥物包封進去。

本發明利用靜電紡絲技術成功地制備了自組裝脂質體。據文獻報道,在磷脂自組裝形成脂質體的過程中,模板起著非常重要的作用,它引導分子的自組裝過程。而PC納米纖維是比傳統的脂質體制備方法更好的模板。由于PC納米纖維不溶于水難以在水中通過自組裝形成脂質體,因此本發明利用PVP良好的水溶性,通過靜電紡絲技術合成了PVP-PC納米纖維,并成功的制備了PC自組裝脂質體。然而,到目前為止仍沒有人用電紡技術來制備載藥脂質體,因此在前人工作的基礎上,制備了粒徑均一且穩定的酮洛芬脂質體,以進一步研究它作為藥物載體的可行性打下基礎。

有益效果

(1)本發明方法操作簡單,耗時較少,可獲得粒徑均一的酮洛芬脂質體,適用于規?;?;

(2)本發明所使用的原材料廉價易得,酮洛芬脂質體具有良好的可降解性及生物相容性,具有應用其做后續相關實驗分析的潛力。

附圖說明

圖1為固定PVP含量為10%(w/v),PC含量為5%(w/v),紡絲電壓為14kv,接收距離為25cm,噴射流速為1ml/h時,不同Keto/PC質量比電紡得到的纖維電鏡照片及其直徑分布;其中,(a)為Keto與PC的質量比0:100,(b)為Keto與PC的質量比3:25,(c)為Keto與PC的質量比5:25,(d)為Keto與PC的質量比10:25,(e)為Keto與PC的質量比15:25;

圖2為在偏振光學顯微鏡下觀察的自組裝酮洛芬脂質體的形成過程;其中,a:PVP/PC/Keto復合納米纖維膜在滴水前的圖片;b:為PVP/PC/Keto復合納米纖維膜在滴水15秒后的圖片;c為PVP/PC/Keto復合納米纖維膜在滴水1分鐘后的圖片;

圖3為當Keto/PC質量比為3:25時所制備的脂質體不同放大倍數的SEM及SPM圖;

圖4為不同Keto/PC質量比所制備的脂質體的粒徑分布圖;其中,(a)為Keto與PC的質量比0:100,(b)為Keto與PC的質量比3:25,(c)為Keto與PC的質量比5:25,(d)為Keto與PC的質量比10:25,(e)為Keto與PC的質量比15:25;

圖5為Keto與PC質量比3:25及10:25條件下所制備的脂質體的Zeta圖;

圖6為不同Keto/PC質量比所制備的脂質體對酮洛芬的包封率;

圖7為當Keto/PC質量比為3:25時,由電紡法制備的脂質體的體外緩釋曲線。

具體實施方式

下面結合具體實施例,進一步闡述本發明。應理解,這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解,在閱讀了本發明講授的內容之后,本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改,這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

實施例1

(1)將體積比為4:1氯仿和N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)混合液放入反應容器內;

(2)將稱量好的PVP、PC及酮洛芬粉末在攪拌條件下緩慢加入上述反應容器內,繼續攪拌1.5h至完全溶脹;其中,PVP在氯仿和DMAc混合液中的含量固定為10%(w/w),PC在氯仿和DMAc混合液中的含量固定為5%(w/w),酮洛芬與PC的質量比依次為0:100、3:25、5:25、10:25、15:25;

(3)將三角燒瓶放在搖床中,在25℃下振蕩24h至完全溶解,聚合物溶液呈透明狀,超聲處理15min進行脫氣,制得紡絲液;

(4)用5ml注射器(針頭內徑為0.5mm)抽取紡絲液,固定在靜電紡絲裝置上,固定靜電壓為14kv,接收距離為25cm,噴射流速為1ml/h,進行電紡,將得到PVP-PC-Keto復合納米纖維在真空干燥箱中干燥2天;

(5)將上述干燥的納米纖維溶解于雙蒸水中得到脂質體懸浮液,超聲處理30min,備用。

依照以上步驟所得到不同酮洛芬與PC質量比的納米纖維膜電鏡照片及其纖維直徑的分布如圖1所示;脂質體的形成過程如圖2所示;所形成脂質體的SEM、SPM及普通光學顯微鏡圖片如圖3所示。將脂質體懸浮液進行動態光散射(DLS)分析、粒徑結果如圖4所示。將脂質體懸浮液進行Zeta電位表征、結果如圖5所示。

實施例2

(1)各取10ml不同藥脂比的脂質體懸浮液,用甲醇定容至25ml,超聲處理30min破乳,從中取0.5ml用雙蒸水定容至100ml,在波長為260nm條件下,測其吸光度,以計算酮洛芬的總含量;

(2)各取10ml不同藥脂比的脂質體懸浮液,裝于透析袋(MWCO:3500)中,密封;

(3)同時取200ml雙蒸水作為透析外液,于室溫條件下,攪拌速度為150rpm攪拌24h,在波長為260nm條件下,測透析外液的吸光度,以計算游離酮洛芬的含量;

(4)按下述公式計算其包封率:

E.E.(%)=(1-游離酮洛芬的量/總酮洛芬的量)×100,不同藥脂比的酮洛芬包封率如圖6所示。

實施例3

(1)取10ml藥脂比為5:25的脂質體懸浮液,裝于透析袋(MWCO:3500)中,密封;

(2)同時取200ml雙蒸水作為透析外液,于37℃條件下,攪拌速度為150rpm振蕩24h,以除去游離酮洛芬;

(3)更換透析外液為不同pH值的緩沖溶液,于37℃恒溫,150rpm振蕩,分別于0h,0.5h,1h,2h,4h,6h,12h,24h,48h和72h用取樣器從中取樣3ml(平行操作2份),測各時間點在260nm下的吸光度,以0h脂質體內藥物含量為100%,計算出釋放百分率。在不同緩沖液下酮洛芬從脂質體中的釋放曲線如圖7所示。

關 鍵 詞:
一種 利用 靜電 紡絲 技術 制備 組裝 酮洛芬 脂質體 方法
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