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维戈塞尔塔球队: 一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201811025943.4

申請日:

20180904

公開號:

CN109122663A

公開日:

20190104

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01N1/02 主分類號: A01N1/02
申請人: 浙江海洋大學
發明人: 葉瑩瑩,曾善美,黃友坤,李繼姬,張建設
地址: 316000 浙江省舟山市定海區臨城街道海大南路1號
優先權: CN201811025943A
專利代理機構: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 代理人: 吳秉中
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201811025943.4

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉的?;ぜ?。本發明還公開了一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,該方法為:將休眠卵過篩并清洗干凈后,移至盛放有?;ぜ戀娜萜髂?,再通入由惰性化學干燥劑干燥后的循環氮氣干燥,待卵粒干燥后,轉移至避光容器中,密封保存即可。本發明提供的?;ぜ聊鼙3痔窖笳嬋硭樾菝唄鴉實耐暾?,減弱休眠卵組織結構的損傷,保持休眠卵的高活性,增加休眠卵的孵化萌發率;提供的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,技術操作簡單,具有可重復性,成本低廉,安全可靠,體系穩定干燥,環境無菌化,能延長休眠卵成活率,達到大量、長期儲存休眠卵的目的。

權利要求書

1.一種?;ぜ?,其特征在于:包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉。2.根據權利要求1所述的一種?;ぜ?,其特征在于:所述?;ぜ林新砝此岬鬧亓空急任?.055~0.075%;所述透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.2~1.5:0.6。3.根據權利要求1或2所述的一種?;ぜ?,其特征在于:所述?;ぜ劣糜詒4嫘菝唄?。4.一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:使用如權利要求1~3任一項所述的?;ぜ?。5.根據權利要求4所述的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:所述凍干冷藏法為:休眠卵清洗后,移至?;ぜ林?,再通入氮氣干燥后,密封保存即可。6.根據權利要求5所述的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:所述清洗步驟為:將休眠卵放置在300~320目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?。7.根據權利要求5所述的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:所述氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環。8.根據權利要求5或7所述的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:所述干燥氮氣的輸入速率為10~35L/min。9.根據權利要求5所述的一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其特征在于:所述保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于0~4°C冰箱中即可。

說明書

技術領域

本發明涉及水產生物技術領域,尤其是涉及一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法。

技術背景

橈足類,隸屬于節肢動物門、甲殼綱、橈足亞綱,是浮游動物的重要組成部分,為小型甲殼動物,體長<3mm,營浮游與寄生生活,分布于海洋、淡水或半咸水中。因其是大多數魚類幼體的開口餌料之一,故在水生態系統食物網和水產養殖中具有重要意義。太平洋真寬水蚤隸屬于哲水蚤目、寬水蚤科、真寬水蚤屬,是低鹽區十分常見的暖水性沿岸橈足類物種之一。太平洋真寬水蚤主要出現在夏秋季,到秋末開始產休眠卵,休眠卵沉入海底被埋入海泥并間續孵化以補充種群,休眠卵結構獨特,可以長期處于休眠狀態,是卵粒儲存很好的階段。

橈足類是水域生態系統的關鍵類群,在物質循環、能量流動和信息傳遞中起著重要作用。休眠卵是橈足類的重要生存策略,在抵抗不利環境、維持種群延續等方面起著重要作用,對橈足類種群的季節動態和物種延續具有十分重要的意義。休眠卵是橈足類在不良環境條件下進行有性生殖延續后代的產物,休眠卵具有抵抗外界不良環境、易于擴散和通過重組產生遺傳多樣性等特點,也是浮游動物集約化培養的重要種源,通過橈足類快速的孤雌生殖在短時間內大量繁殖,使得橈足類作為鮮活餌料為水產經濟動物的苗種生產起到極其重要的作用。

休眠卵的產生、誘導休眠卵的形成以及休眠卵的適時孵化利用也是水產養殖業中非常有意義的課題。橈足類因其體內富含某些必需脂肪酸,特別是EPA和DHA,在水產育苗上有很多應用,常常被用來作為一些經濟魚類的開口餌料。隨著研究的深入和科學技術的發展,通過橈足類休眠卵獲得大量無節幼體逐漸被人們重視和利用,休眠卵的規模培養將在現代海水養殖中發揮重要作用,具有廣闊的應用前景。

目前,將休眠卵應用于水產養殖業還有很多困難,比如,對休眠卵的保存、孵化等方面的研究還不夠,無法按照規模生產的需求對其進行控制,而育苗池中過早從休眠卵萌發的橈足類易捕食經濟動物幼體等。因此,深入研究橈足類休眠卵生態學對于海水養殖業具有重要意義,而如何大量、長期儲存休眠卵是一個亟待解決的難題。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種能保持休眠卵基質完整性,減弱休眠卵組織結構損傷,保持休眠卵的高活性,增加休眠卵孵化萌發率的?;ぜ?。

本發明的目的之二在于提供一種技術操作簡單,具有可重復性,成本低廉,安全可靠,體系穩定干燥,環境無菌化,能延長休眠卵成活率的用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法。

本發明針對背景技術中提到的問題,采取的技術方案為:

一種?;ぜ?,其中包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉。該?;ぜ聊芄槐3中菝唄嚴赴謝實耐暾?,并且減弱低溫對休眠卵組織結構的損傷,以此保持休眠卵的高活性,增加休眠卵的孵化萌發率。

為了達到最佳技術方案,?;ぜ林新砝此岬鬧亓空急任?.055~0.075%,透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.2~1.5:0.6。在進行休眠卵的凍干冷藏時,加入上述休眠卵?;ぜ?,其中馬來酸和透明質酸鈉之間由配糖鍵和不飽和鍵相互交結,利用高粘結性和二甲基亞砜的高滲透性,進入休眠卵內部,并形成一定的滲透壓,使得基質纖維連接蛋白富集在休眠卵外部的質膜上,間質膠原纖維的重新排列減緩,從而保持了休眠卵中基質的完整性,減弱了低溫氮氣對休眠卵組織結構的損傷,使得休眠卵在凍存期間能盡可能的保持活性,增加其孵化萌發率。

作為優選,上述?;ぜ劣糜詒4嫘菝唄?。

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其中使用了包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉的?;ぜ?。利用干燥氮氣來完成凍干冷藏,同時使用?;ぜ煉韻赴斜;?,使得休眠卵在常壓下低溫脫水,并抑制氧化作用,能延長休眠卵的保存周期,并使休眠卵在凍存期間保持活性。

作為優選,凍干冷藏法為:將收集的休眠卵清洗干凈后,移至?;ぜ林?,再通入循環干燥的氮氣干燥,待卵粒干燥后,轉移至避光容器中,密封保存即可。橈足類休眠卵的保存方式一般包括:低溫干燥保存、低溫帶水保存和常溫干燥保存,而采用的凍干冷藏法,在使用液氮凍干時,休眠卵的質量損失很小,體積穩定,可溶性固形物、溶膠分布梯度小,能夠長期保存休眠卵的高活性,有利于后期對休眠卵的孵化。

進一步優選,清洗步驟為:將休眠卵放置在300~320目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?。

進一步優選,氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環。經干燥后的氮氣經過濕潤的卵粒表面,帶走水分,能實現卵粒的快速干燥,在低溫下進行操作,對于許多熱敏性的物質,如蛋白質、微生物之類不會發生變性或失去生物活力,并且保持了原來的結構,不會發生濃縮現象,同時由于干燥在真空下進行,氧氣極少,因此一些易氧化的物質得到了?;?,實現了休眠卵常壓低溫脫水并抑制氧化作用。

再進一步優選,干燥氮氣輸入速率為10~35L/min。

進一步優選,保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于0~4℃冰箱中即可。

與現有技術相比,本發明的優點在于:1)本發明中在凍干冷藏時加入?;ぜ?,能夠?;ば菝唄閻謝實耐暾?,減弱低溫氮氣對休眠卵組織結構的損傷,使得休眠卵在凍存期間能盡可能的保持活性,增加其孵化萌發率;2)本發明中利用干燥氮氣來完成凍干冷藏法,使得休眠卵在常壓下低溫脫水,并抑制其氧化作用,能延長休眠卵的保存周期,使休眠卵在凍存期間保持活性,并且凍存期間保持高穩定、高干燥性的環境,對外界細菌具有一定的抵抗效果,達到大量、長期儲存休眠卵的目的;3)本發明中提供的用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,技術操作簡單,具有可重復性,成本低廉,安全可靠,體系穩定。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明方案作進一步說明:

實施例1:

一種?;ぜ?,其中包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉。該?;ぜ聊芄槐3中菝唄嚴赴謝實耐暾?,并且減弱低溫對休眠卵組織結構的損傷,以此保持休眠卵的高活性,增加休眠卵的孵化萌發率。

?;ぜ林新砝此岬鬧亓空急任?.056%,透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.3:0.6。在進行休眠卵的凍干冷藏時,加入上述休眠卵?;ぜ?,其中馬來酸和透明質酸鈉之間由配糖鍵和不飽和鍵相互交結,利用高粘結性和二甲基亞砜的高滲透性,進入休眠卵內部,并形成一定的滲透壓,使得基質纖維連接蛋白富集在休眠卵外部的質膜上,間質膠原纖維的重新排列減緩,從而保持了休眠卵中基質的完整性,減弱了低溫氮氣對休眠卵組織結構的損傷,使得休眠卵在凍存期間能盡可能的保持活性,增加其孵化萌發率。

上述?;ぜ劣糜詒4嫘菝唄?。

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其中使用了包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉的?;ぜ?。利用干燥氮氣來完成凍干冷藏,同時使用?;ぜ煉韻赴斜;?,使得休眠卵在常壓下低溫脫水,并抑制氧化作用,能延長休眠卵的保存周期,并使休眠卵在凍存期間保持活性。

凍干冷藏法為:將收集的休眠卵清洗干凈后,移至?;ぜ林?,再通入循環干燥的氮氣干燥,待卵粒干燥后,轉移至避光容器中,密封保存即可。橈足類休眠卵的保存方式一般包括:低溫干燥保存、低溫帶水保存和常溫干燥保存,而采用的凍干冷藏法,在使用液氮凍干時,休眠卵的質量損失很小,體積穩定,可溶性固形物、溶膠分布梯度小,能夠長期保存休眠卵的高活性,有利于后期對休眠卵的孵化。

清洗步驟為:將休眠卵放置在320目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?。

氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環。經干燥后的氮氣經過濕潤的卵粒表面,帶走水分,能實現卵粒的快速干燥,在低溫下進行操作,對于許多熱敏性的物質,如蛋白質、微生物之類不會發生變性或失去生物活力,并且保持了原來的結構,不會發生濃縮現象,同時由于干燥在真空下進行,氧氣極少,因此一些易氧化的物質得到了?;?,實現了休眠卵常壓低溫脫水并抑制氧化作用。

干燥氮氣輸入速率為10L/min。

保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于0℃冰箱中即可。

實施例2:

一種?;ぜ?,其中包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉,?;ぜ林新砝此岬鬧亓空急任?.062%,透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.5:0.6。

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其具體步驟為:

1)清洗步驟為:將休眠卵放置在320目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?;

2)氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,干燥氮氣輸入速率為15L/min,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環;

3)保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于2℃冰箱中即可。

實施例3:

一種?;ぜ?,其中包含二甲基亞砜、馬來酸和透明質酸鈉,?;ぜ林新砝此岬鬧亓空急任?.074%,透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.4:0.6。

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其具體步驟為:

1)清洗步驟為:將休眠卵放置在300目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?;

2)氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,干燥氮氣輸入速率為25L/min,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環;

3)保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于4℃冰箱中即可。

實施例4:

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其進一步優化步驟為:

1)清洗步驟為:將休眠卵放置在300目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?,上述?;ぜ林邪諄瓊?、馬來酸和透明質酸鈉,二甲基亞砜的重量占比為10%,馬來酸的重量占比為0.07%,透明質酸鈉和馬來酸的重量比為1.4:0.6;

2)氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,干燥氮氣輸入速率為25L/min,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環;

3)保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于4℃冰箱中即可,上述干燥劑包中含有硅膠干燥劑、鈦酸丁酯和納米級二氧化鈦,鈦酸丁酯和納米級二氧化鈦在干燥劑包中的重量占比分別為0.047%和0.036%,鈦酸丁酯加入干燥劑包中,在長期儲存中,能迅速遇水吸潮而分解,其水解產物吸附在硅膠微孔之間,與硅膠干燥劑和納米級二氧化鈦之間形成交聯,從而提高硅膠之間的粘合性,使得干燥包中的干燥劑形成類似凝膠的結構,進而利用這種結構,在休眠卵上方形成更加致密、穩定的干燥環境,同時鈦酸丁酯和納米級二氧化鈦中的高活性陽離子能夠打入細菌細胞內部,使其喪失活性,具有一定的殺菌效果,保證了休眠卵存儲環境的無菌化,延長休眠卵的成活率。

實施例5:

一種用于長期保存太平洋真寬水蚤休眠卵的凍干冷藏法,其具體步驟為:

1)清洗步驟為:將休眠卵放置在300目篩網內,用雙蒸水洗去卵粒表面的培養基,移至盛放有?;ぜ戀牟A萜髂詡純?,上述?;ぜ廖諄瓊咳芤?;

2)氮氣干燥步驟為:將玻璃轉移至左右通透的管道內,管道一端為進氣口,另一端為出氣口,將液氮使用惰性化學干燥劑干燥后,由循環氣泵從進氣口通入,干燥氮氣輸入速率為25L/min,氮氣從出氣口經過循環氣泵的吸氣口進入干燥循環;

3)保存步驟為:將干燥之后的干燥休眠卵轉移至避光容器內,在容器口放置可顯色的惰性干燥劑包,密封保存于4℃冰箱中即可。

實施例6:

太平洋真寬水蚤休眠卵凍干冷藏法保存試驗

將收集得到的3060粒太平洋真寬水蚤的休眠卵,平均分為6組,每組3個重復,試驗組1~5分別采用實施例1~5的方法進行保存,將使用低溫干燥保存的組別設為對比組進行保存,分別在保存至10d、30d、180d時,取出干燥冷藏的卵粒進行孵化,試驗結果如下。

表1太平洋真寬水蚤休眠卵凍干冷藏法保存試驗

由上表1可得,由于實驗組5?;ぜ林形刺砑油該髦仕崮坪吐砝此?,因此在孵化率上具有顯著差異,實驗1~4組休眠卵在10d、30d、180d時的孵化率平均比實驗組5高出1.9%、2.7%、3.6%,平均高出對比組12.9%、12.8%、9.9%;試驗4組由于干燥包與試驗3組不同,因而在長期存儲后的孵化率上略高,有一定的增益效果。由試驗結果可知,本發明實施例中所用的凍干冷藏法,對真寬水蚤休眠卵的保存較為完好,能夠在長期保存中保持休眠卵的高活性,增加其孵化萌發率,并且凍存期間保持高穩定、高干燥性的環境,對外界細菌具有一定的抵抗效果,能延長休眠卵的保存周期,達到大量、長期儲存休眠卵的目的。

本發明操作步驟中的常規操作為本領域技術人員所熟知,在此不進行贅述。

以上所述的實施例對本發明的技術方案進行了詳細說明,應理解的是以上所述僅為本發明的具體實施例,并不用于限制本發明,凡在本發明的原則范圍內所做的任何修改、補充或類似方式替代等,均應包含在本發明的?;し段е?。

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一種 用于 長期 保存 太平洋 水蚤 休眠 冷藏
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