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马德里竞技对维戈塞尔塔2019: 一種羊凍精生產工藝.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201811081818.5

申請日:

20180917

公開號:

CN109258621A

公開日:

20190125

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01N1/02 主分類號: A01N1/02
申請人: 內蒙古草原烏骨羊生物科技有限公司
發明人: 任俊光
地址: 011700 內蒙古自治區呼和浩特市武川縣大青山鄉大興有四合義村
優先權: CN201811081818A
專利代理機構: 石家莊德皓專利代理事務所(普通合伙) 代理人: 劉磊娜;楊瑞龍
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201811081818.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及精液保存的技術領域,特別是涉及一種羊凍精生產工藝,其可以規范生產流程,減少其他因素的影響,提高冷凍效果,使生產出的羊凍精在解凍后活性較高,提高母羊的受孕率,同時可以提高生產出的羊羔的品質;包括以下步驟:(1)選擇種公羊;(2)種公羊前處理;(3)器械消毒;(4)采精;(5)精液檢測;(6)配制稀釋液;(7)精液稀釋;(8)細管包裝;(9)降溫平衡和冷凍;(10)封裝;(11)冷凍后活力檢測;(12)冷凍精液的保存;(13)定期抽檢。

權利要求書

1.一種羊凍精生產工藝,其特征在于,包括以下步驟:(1)選擇種公羊:選擇營養合理、體質健康、性欲旺盛和精液品質良好的公羊作為種公羊;(2)種公羊前處理:保持種公羊羊體清潔,并用溫水沖洗陰莖和包皮,剪掉過長的陰毛,再用生理鹽水沖洗干凈;(3)器械消毒:對整個過程中所使用的所有器械進行充分的消毒備用;(4)采精:采精人員使用假陰道對前處理后的種公羊進行采精,并將采集的精液送檢;(5)精液檢測:對采集的精液進行外觀評定和活力及前向運動評定;(6)配制稀釋液:選擇Eggyolk-freeconcentratedmediumforbullsemen作為稀釋原液,并將稀釋原液與蒸餾水按照體積比1:4混合得到稀釋液,并將配制后的稀釋液放入30℃的恒溫箱內進行預熱;(7)精液稀釋:采用精子密度儀測定精液密度,并計算稀釋倍數,使用稀釋液對精液進行稀釋,搖勻后,再次測定精液的活力及前向運動數值并記錄;(8)細管包裝:將精液搖勻后在4℃的恒溫箱采用0.25ml的細管進行灌裝,灌裝完成后挑出空管或沒吸滿的細管;(9)降溫平衡和冷凍:待細管溫度降至4℃后,將其放入4℃的恒溫容器內平衡2-4h,平衡后將細管上架,并迅速放入4℃的冷凍儀,冷凍儀按電腦預先設定好的冷凍曲線程序自動完成冷凍過程;(10)封裝:當細管溫度降至-140℃時,將凍制好的細管凍精取出迅速放入液氮中待檢,符合檢測標準后將檢測合格后的以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內;(11)冷凍后活力檢測:將凍制好的細管精液抽樣在38℃下解凍10s,并將細管擦干,取細管中間部分精液滴在載玻片上進行鏡檢,檢測其精子活力,當其直線運動精子數≥800萬個時,即為合格,合格入庫保存;(12)冷凍精液的保存:抽樣檢測合格后,將拇指管置于棉布袋內,并貼上標簽,轉移至液氮管中保存,每周定時添加液氮,每年更換液氮;(13)定期抽檢:定期抽查精液品質,每次取凍精時,凍精脫離液氮的時間要<10s。2.如權利要求1所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述步驟(5)中的外觀評定包括射精量評定、云霧運動評定、pH評定、色澤評定、精液的氣味評定和畸形率評定。3.如權利要求2所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述射精量評定只需將精液倒入有刻度的玻璃管中觀察即可,所述云霧運動評定是用肉眼觀察新采的種公羊精液,精子的密度越大,活力越強者,其云霧狀越明顯,所述pH評定為測定羊精液的pH,正常情況下羊精液的pH呈弱酸性,一般為6.5-6.9,所述色澤評定和氣味評定是對羊的精液顏色和氣味進行評定,羊的正常精液呈乳白色或乳黃色,若有異常的顏色和氣味時,則應棄去,所述畸形率評定為將精液做成抹片并染色后在顯微鏡下觀察,計數畸形精子數并計算精子畸形率,當畸形率<14%為合格。4.如權利要求1所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述步驟(5)中的活力及前向運動評定包括以下步驟:a、取10μl精液置于樣品管中,加入390μl稀釋液,混合均勻;b、在顯微鏡下觀察,利用CEROSII計算機輔助精子分析系統初步測定精液的活力值及前向運動;c、留取精液活力大于0.7,前向運動大于0.5的精液備用。5.如權利要求1所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述步驟(7)中的使用稀釋液對精液進行稀釋包括以下步驟:a、控制稀釋處理室內溫度為25℃-30℃;b、調整稀釋液和精液的溫度均為25℃-30℃;c、按照1:1的比例將稀釋液沿精液瓶壁緩慢倒入精液內,稀釋后將盛放精液的容器輕輕轉動,使其混合均勻;d、稀釋后立即鏡檢存活率。6.如權利要求1所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述步驟(9)中的冷凍曲線包括以下部分:4℃,5min;4至-20℃,10,min;-20至-100℃,60min;-100至140℃,30min。7.如權利要求1所述的一種羊凍精生產工藝,其特征在于,所述步驟(10)中的檢測標準為:活力大于0.6,前向運動大于0.45。

說明書

技術領域

本發明涉及精液保存的技術領域,特別是涉及一種羊凍精生產工藝。

背景技術

全國養羊大致分為南方和北方兩個區域,近幾年來,隨著市場經濟的發展和人民生活水平的日益提高,南方養羊發展速度日益加快,養羊生產逐步邁入規?;?,科學化和產業化,養羊生產周期短,繁殖快、效益較好,備受廣大農牧民的青睞,發展態勢良好,羊肉比起其他肉類的人均消費量還存在著巨大的潛力,因此,養羊生產有著美好的廣闊前景。

羊的配種方法常用的有兩種,即自然配種和人工授精,人工授精是在羊的自然交配的基礎上,為了提高種公羊的利用率,加速品種改良而建立起來的人工繁殖技術,人工授精就是利用適當的器械采集種公羊的精液,經過質量檢查、稀釋和保存,將合格的精液再用器械適時地輸入發情母羊的生殖道內,以代替公母羊直接交配而使其受孕的方法,在羊的繁殖上具有多方面的優越性,一是人工授精能最大限度的發揮公羊的利用價值,提高公羊的配種效能;而是能對配種種公羊進行嚴格的選擇,加速動物品種的改良;三是避免了公母畜的直接接觸,可以防止各種疾病,特別是生殖道傳染病的傳播;四是可以提高母羊的受胎率;五是可以減少公羊的飼養頭數,節約費用,降低飼養成本;六是公母羊配種可以不受時間和地點的限制;七是可以促進其他繁殖技術諸如同期發情、超數排卵、體外受精、胚胎移植、精子性別鑒定和基因導入等技術的發展。

現有的人工授精技術所使用的羊凍精在生產過程中,由于生產流程不規范,極易受到其他因素的影響,出現冷凍效果不好,并且生產出的羊凍精在解凍后明顯活性較低,使母羊的受孕率極低,生產出的羊羔品質較差等情況。

發明內容

為解決上述技術問題,本發明提供一種可以規范生產流程,減少其他因素的影響,提高冷凍效果,使生產出的羊凍精在解凍后活性較高,提高母羊的受孕率,同時可以提高生產出的羊羔的品質的羊凍精生產工藝。

本發明的一種羊凍精生產工藝,包括以下步驟:

(1)選擇種公羊:選擇營養合理、體質健康、性欲旺盛和精液品質良好的公羊作為種公羊;

(2)種公羊前處理:保持種公羊羊體清潔,并用溫水沖洗陰莖和包皮,剪掉過長的陰毛,再用生理鹽水沖洗干凈;

(3)器械消毒:對整個過程中所使用的所有器械進行充分的消毒備用;

(4)采精:采精人員使用假陰道對前處理后的種公羊進行采精,并將采集的精液送檢;

(5)精液檢測:對采集的精液進行外觀評定和活力及前向運動評定;

(6)配制稀釋液:選擇Egg yolk-free concentrated medium for bull semen作為稀釋原液,并將稀釋原液與蒸餾水按照體積比1:4混合得到稀釋液,并將配制后的稀釋液放入30℃的恒溫箱內進行預熱;

(7)精液稀釋:采用精子密度儀測定精液密度,并計算稀釋倍數,使用稀釋液對精液進行稀釋,搖勻后,再次測定精液的活力及前向運動數值并記錄;

(8)細管包裝:將精液搖勻后在4℃的恒溫箱采用0.25ml的細管進行灌裝,灌裝完成后挑出空管或沒吸滿的細管;

(9)降溫平衡和冷凍:待細管溫度降至4℃后,將其放入4℃的恒溫容器內平衡2-4h,平衡后將細管上架,并迅速放入4℃的冷凍儀,冷凍儀按電腦預先設定好的冷凍曲線程序自動完成冷凍過程;

(10)封裝:當細管溫度降至-140℃時,將凍制好的細管凍精取出迅速放入液氮中待檢,符合檢測標準后將檢測合格后的以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內;

(11)冷凍后活力檢測:將凍制好的細管精液抽樣在38℃下解凍10s,并將細管擦干,取細管中間部分精液滴在載玻片上進行鏡檢,檢測其精子活力,當其直線運動精子數≥800萬個時,即為合格,合格入庫保存;

(12)冷凍精液的保存:抽樣檢測合格后,將拇指管置于棉布袋內,并貼上標簽,轉移至液氮管中保存,每周定時添加液氮,每年更換液氮;

(13)定期抽檢:定期抽查精液品質,每次取凍精時,凍精脫離液氮的時間要<10s。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述步驟(5)中的外觀評定包括射精量評定、云霧運動評定、pH評定、色澤評定、精液的氣味評定和畸形率評定。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述射精量評定只需將精液倒入有刻度的玻璃管中觀察即可,所述云霧運動評定是用肉眼觀察新采的種公羊精液,精子的密度越大,活力越強者,其云霧狀越明顯,所述pH評定為測定羊精液的pH,正常情況下羊精液的pH呈弱酸性,一般為6.5-6.9,所述色澤評定和氣味評定是對羊的精液顏色和氣味進行評定,羊的正常精液呈乳白色或乳黃色,若有異常的顏色和氣味時,則應棄去,所述畸形率評定為將精液做成抹片并染色后在顯微鏡下觀察,計數畸形精子數并計算精子畸形率,當畸形率<14%為合格。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述步驟(5)中的活力及前向運動評定包括以下步驟:

a、取10μl精液置于樣品管中,加入390μl稀釋液,混合均勻;

b、在顯微鏡下觀察,利用CEROSII計算機輔助精子分析系統初步測定精液的活力值及前向運動;

c、留取精液活力大于0.7,前向運動大于0.5的精液備用。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述步驟(7)中的使用稀釋液對精液進行稀釋包括以下步驟:

a、控制稀釋處理室內溫度為25℃-30℃;

b、調整稀釋液和精液的溫度均為25℃-30℃;

c、按照1:1的比例將稀釋液沿精液瓶壁緩慢倒入精液內,稀釋后將盛放精液的容器輕輕轉動,使其混合均勻;

d、稀釋后立即鏡檢存活率。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述步驟(9)中的冷凍曲線包括以下部分:4℃,5min;4至-20℃,10,min;-20至-100℃,60min;-100至140℃,30min。

本發明的一種羊凍精生產工藝,所述步驟(10)中的檢測標準為:活力大于0.6,前向運動大于0.45。

與現有技術相比本發明的有益效果為:本發明的一種羊凍精生產工藝在生產過程中可以規范生產流程,減少其他因素的影響,采用冷凍儀冷凍曲線逐漸冷凍的方法可以提高冷凍效果,經檢測使生產出的羊凍精在解凍后活性較高,同時由于其解凍后活性較高,相比于現有的技術來說,可以提高母羊的受孕率,同時其生產處的羔羊與正常受孕產出的羔羊相比無明顯差異,與現有的羊凍精受孕后生產處的羔羊相比,可以提高生產出的羊羔的品質。

具體實施方式

下面結合實施例,對本發明的具體實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。

選擇營養合理、體質健康、性欲旺盛和精液品質良好的公羊作為種公羊,保持種公羊羊體清潔,并用溫水沖洗陰莖和包皮,剪掉過長的陰毛,再用生理鹽水沖洗干凈,對整個過程中所使用的所有器械進行充分的消毒備用,采精人員使用假陰道對前處理后的種公羊進行采精,并將采集的精液送檢;

對采集的精液進行外觀評定和活力及前向運動評定:外觀評定包括射精量評定、云霧運動評定、pH評定、色澤評定、精液的氣味評定和畸形率評定。

射精量評定只需將精液倒入有刻度的玻璃管中觀察即可;

云霧運動評定是用肉眼觀察新采的種公羊精液,精子的密度越大,活力越強者,其云霧狀越明顯;

pH評定為測定羊精液的pH,正常情況下羊精液的pH呈弱酸性,一般為6.5-6.9;

色澤評定和氣味評定是對羊的精液顏色和氣味進行評定,羊的正常精液呈乳白色或乳黃色,若有異常的顏色和氣味時,則應棄去;

畸形率評定為將精液做成抹片并染色后在顯微鏡下觀察,計數畸形精子數并計算精子畸形率,當畸形率<14%為合格。

取10μl精液置于樣品管中,加入390μl稀釋液,混合均勻,在顯微鏡下觀察,利用CEROSII計算機輔助精子分析系統初步測定精液的活力值及前向運動,留取精液活力大于0.7,前向運動大于0.5的精液備用。

選擇Egg yolk-free concentrated medium for bull semen作為稀釋原液,并將稀釋原液與蒸餾水按照體積比1:4混合得到稀釋液,并將配制后的稀釋液放入30℃的恒溫箱內進行預熱,采用精子密度儀測定精液密度,并計算稀釋倍數,控制稀釋處理室內溫度為25℃-30℃,調整稀釋液和精液的溫度均為25℃-30℃,按照1:1的比例將稀釋液沿精液瓶壁緩慢倒入精液內,稀釋后將盛放精液的容器輕輕轉動,使其混合均勻,稀釋后立即鏡檢存活率。

將精液搖勻后在4℃的恒溫箱采用0.25ml的細管進行灌裝,灌裝完成后挑出空管或沒吸滿的細管,待細管溫度降至4℃后,將其放入4℃的恒溫容器內平衡2-4h,平衡后將細管上架,并迅速放入4℃的冷凍儀,冷凍儀按4℃,5min;4至-20℃,10,min;-20至-100℃,60min;-100至140℃,30min自動完成冷凍過程,當細管溫度降至-140℃時,將凍制好的細管凍精取出迅速放入液氮中待檢,符合活力大于0.6,前向運動大于0.45的以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內;

將凍制好的細管精液抽樣在38℃下解凍10s,并將細管擦干,取細管中間部分精液滴在載玻片上進行鏡檢,檢測其精子活力,當其直線運動精子數≥800萬個時,即為合格,合格入庫保存,抽樣檢測合格后,將拇指管置于棉布袋內,并貼上標簽,轉移至液氮管中保存,每周定時添加液氮,每年更換液氮,定期抽查精液品質,每次取凍精時,凍精脫離液氮的時間要<10s。

本發明制作的羊凍精的各項指標如下:

采精羊編號 1 2 3 采精量 5ml 3.6ml 4,2ml 原精液活力 0.92 0.9 0.94 原精液前向運動 0.65 0.67 0.62 原精液畸形率 10.5% 9.2% 9.9% 解凍后活力 0.69 0.71 0.72 解凍后前向運動 0.43 0.49 0.45 解凍后畸形率 12.9% 13.1% 12.9%

取100只身體健康狀況良好的受體母羊作為樣本,在其發情后12-24h內將本發明生產處的羊凍精解凍后,采用輸精器插入子宮頸口內1-2cm后將解凍后的精液輸入受體母羊體內,輸精完成后把母羊臀部抬高,或在母羊背部輕拍幾下,刺激平滑肌收縮,使精液快速流入子宮深部。

經過一段時間后檢測100只受體母羊的妊娠反應,測得受精率>80%,并且產得的羔羊與種公羊和受體母羊直接交配生產處的羔羊相比無明顯差異。

以上所述僅是本發明的優選實施方式,應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發明技術原理的前提下,還可以做出若干改進和變型,這些改進和變型也應視為本發明的?;し段?。

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種羊 生產工藝
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