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维戈塞尔塔对皇家社会直播: 一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201811146860.0

申請日:

20180929

公開號:

CN109258425A

公開日:

20190125

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01G31/00,A01G7/04,A01G7/06 主分類號: A01G31/00,A01G7/04,A01G7/06
申請人: 西北大學
發明人: 郭斌,李夢青,姚凱,李小艷,尉亞輝
地址: 710069 陜西省西安市太白北路229號
優先權: CN201811146860A
專利代理機構: 西安恒泰知識產權代理事務所 代理人: 孫雅靜
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201811146860.0

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,包括對蛇足石杉植株黑暗環境預處理,再利用組合光對預處理的蛇足石杉植株進行光誘導培養,所述的組合光包括白光、紅光和/或藍光。該方法可以顯著提高蛇足石杉中石杉堿甲的含量,方法簡單易行,為快速提高蛇足石杉的石杉堿甲的含量提供新方法。

權利要求書

1.一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,包括對蛇足石杉植株黑暗環境預處理,再利用組合光對預處理的蛇足石杉植株進行光誘導培養,所述的組合光包括白光、紅光和/或藍光。2.如權利要求1所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述組合光的光照強度為3500Lux。3.如權利要求1或2所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的組合光的光照周期為每24h給光8-24h。4.如權利要求1所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的黑暗環境預處理是將蛇足石杉植株培養在青苔基質中,然后將其放置在黑暗的環境中培養。5.如權利要求1或2所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的黑暗環預處理時間為3-6周。6.如權利要求1所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的光誘導培養是對預處理的蛇足石杉植株噴灑酒精,然后用組合光培養。7.如權利要求6所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的酒精的濃度為70-100%。8.如權利要求1所述的提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,所述的預處理和光誘導培養溫度均為25±5℃,濕度均為60%。

說明書

技術領域

本發明屬于生物技術領域,具體涉及一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法。

背景技術

蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)為石松目(Lycopodiales)石杉科(Lycopodiaceae)石杉屬(Lycopodium L.)多年生草本蕨類植物。蛇足石杉的主要分布區位于我國中亞熱帶和南亞熱帶所在的地理區域,幅員面積260×10%m2,實際分布生境總面積約39x107mP;性喜陰溫,所適應的生態環境為中亞熱帶常綠國葉林和南亞熱帶季風常綠葉林及其次生生態系統。蛇足石杉在民間主要用于治療跌打腫痛、內傷出血、毒蟲毒蛇咬傷、燒傷燙傷等病癥。1927年我國科技工作者報道了從該植物中分離的石杉堿甲具有橫紋肌松弛作用,之后的大量研究發現石杉堿甲是一種高效、低毒、可逆和高選擇性的乙酰膽堿酯酶抑制劑。現在,被石杉堿甲及經作為治療阿爾茨海默病(AD,Alzheimer disease)的藥物,同時在美國被用做益智的營養保健品。

然而,蛇足石杉自然資源嚴重短缺。蛇足石杉生長緩慢,野生狀態其的繁殖主要以孢子繁殖為主,孢子萌發周期長,萌發后屬地下生配子體,需6-15年才能成熟。因此極大地限制了蛇足石杉野生資源的再生。蛇足石杉中的石杉堿甲含量又很低(0.007%),再加上其全合成石杉堿甲步驟繁瑣、價格昂貴且有副作用。目前,石杉堿甲的提取主要依賴于野生資源,提取率僅為0.006%-0.1%,因而大量的市場需求、受限的自然資源和自身生長繁殖的限制。因此,為了獲取這種資源,人們瘋狂的從自然界索取蛇足石杉野生資源,導致其已處于滅絕的邊緣;同時,蛇足石杉生長地生態環境也遭到破壞。為了緩解這種供需矛盾,很多研究者已經開始對其生殖繁殖進行研究。

但是,即使未來蛇足石杉的大規模繁殖已經解決,其生長緩慢,最主要是其中的功能成分石杉堿甲含量非常低,這必將成為使用這一資源的限制性因素。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,可用于快速提高蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量,從而節約蛇足石杉資源,也為進一步研究石杉堿甲的生物調控提供依據。

為了實現上述任務,本發明采取如下的技術解決方案:

一種提高蛇足石杉中石杉堿甲含量的方法,其特征在于,包括對蛇足石杉植株黑暗環境預處理,再利用組合光對預處理的蛇足石杉植株進行光誘導培養,所述的組合光包括白光、紅光和/或藍光。

進一步地,所述組合光的光照強度為3500Lux。

進一步地,所述的組合光的光照周期為每24h給光8-24h。

具體地,所述的黑暗環境預處理是將蛇足石杉植株培養在青苔基質中,然后將其放置在黑暗的環境中培養。

更具體地,所述的黑暗環境預處理時間為3-6周。

進一步地,所述的光誘導培養是對預處理的蛇足石杉植株噴灑酒精,然后用組合光培養。

進一步地,所述的酒精的濃度為70-100%。

更進一步地,所述的預處理和光誘導培養溫度均為25±5℃,濕度均為60%。

本發明進行蛇足石杉插條生根的方法,具有以下優點:

本發明通過對蛇足石杉植株黑暗處理,再用酒精噴灑及不同組合的光質照射,達到了快速提高蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量的目的,方法簡單易行,為快速提高蛇足石杉的石杉堿甲的含量提供新方法。

具體實施方式

蛇足石杉的主要分布區位于我國中亞熱帶和南亞熱帶所在的地理區域,幅員面積260×10%m2,實際分布生境總面積約39x107mP;性喜陰溫,所適應的生態環境為中亞熱帶常綠國葉林和南亞熱帶季風常綠葉林及其次生生態系統。本發明中的蛇足石杉采集地主要集中于江西、云南、湖北、浙江等地,是指其蛇足石杉根莖葉俱全,無枯萎,無折斷;MS液體培養基也稱MS培養基。MS培養基是常用的基本培養基,是Murashige和Skoog于1962年為煙草細胞培養設計的,其特點是無機鹽和離子濃度較高,是較穩定的離子平衡溶液,它的硝酸鹽含量高,其養分的數量和比例合適,能滿足植物細胞的營養和生理需要,因而適用范圍比較廣,多數植物組織培養快速繁殖用它作為培養基的基本培養基。

測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量高效液相色譜檢測,步驟如下:精確稱取石杉堿甲標準品2.50mg于25mL容量瓶中以無水乙醇溶解并定容,得到標準品溶液。樣品的制備方法如下,取蛇足石杉全株于60℃下烘干至恒重,粉碎后用研缽研成粉末,精確稱取粉末0.12g置于5mL離心管中,加入3mL 2%酒石酸溶液,密封,在70MHz下超聲3h后12 000×g離心5min,取上清液用0.22μm微孔濾膜過濾即得樣品液。色譜條件如下,色譜柱為Diamonsil C18不銹鋼柱(250mm×4.6mm,5μm)(Dikma),流動相為甲醇-0.8%醋酸銨溶液(v/v=40:60),流速為0.8mL·min-1,檢測波長為308nm,柱溫為25℃,進樣量為10μL。按上述色譜條件進樣,記錄石杉堿甲峰面積,用外標法計算樣品中石杉堿甲的含量,重復3次取平均值。

以下結合實施例和對比例對本發明作進一步的詳細說明。

對比例1:

在野外采集生長良好的蛇足石杉植株,將植株的根部培養在用水浸濕至飽和狀態的青苔基質中,1周后,經測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量為0.016%。

實施例2:

在野外采集生長良好的蛇足石杉植株,將植株根部培養在用水浸濕至飽和狀態的青苔基質中,然后將其放置在黑暗的環境中預處理3-6周,然后放置到白光下培養,光強度3500Lux,溫度25±5℃,濕度60%。1周后測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量如下表1。

表1不同黑暗處理時間對蛇足石杉中石杉堿甲含量的影響

黑暗處理時間(周) 3 4 5 6 石杉堿甲含量(%) 0.018 0.026 0.021 0.021

實施例3:

步驟一,蛇足石杉植株的預處理

在野外采集生長良好的蛇足石杉植株,將植株根部培養在用水浸濕至飽和狀態的青苔基質中,然后將其放置在黑暗的環境中預處理4周,預處理溫度25±5℃,濕度60%。

步驟二,蛇足石杉植株的誘導

取經過預處理蛇足石杉植株,用70%酒精噴灑其葉片表面至有以肉眼可見一層水膜為止,然后放置在白光的環境中培養,光照周期為每24小時給光8-24小時,光照強度3500Lux,培養的溫度和濕度同步驟一。1周后測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量如表2。

表2不同白光光照周期對蛇足石杉中石杉堿甲含量的影響

光周期(小時) 8 16 24 石杉堿甲含量(%) 0.033 0.047 0.045

實施例4:

步驟一,蛇足石杉植株的預處理

同實施例3。

步驟二,蛇足石杉植株的誘導

取經過預處理蛇足石杉植株,用70-100%酒精噴灑其葉片表面至肉眼可見有一層水膜為止,然后放置在白光的環境中培養,光照周期為每24小時給光16小時,光照強度3500Lux,培養的溫度和濕度同步驟一。1周后測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量如表3。

表3不同酒精濃度對蛇足石杉中石杉堿甲含量的影響

酒精濃度(%) 70 80 90 100 石杉堿甲含量(%) 0.045 0.051 0.059 0.044

實施例5:

步驟一,蛇足石杉植株的預處理

同實施例3。

步驟二,蛇足石杉植株的誘導

取經過預處理蛇足石杉植株,用90%酒精噴灑其葉片表面至肉眼可見有一層水膜為止,然后放置在白光、紅光或藍光單獨環境中,或者兩兩組合光照的環境中培養,光照周期為每16小時,光照強度3500Lux,培養的溫度和濕度同步驟一。1周后測定蛇足石杉植株中石杉堿甲的含量如表4。

表4不同光質組合對蛇足石杉中石杉堿甲含量(%)的影響

關 鍵 詞:
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