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维戈塞尔塔VS塞维利亚: 用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201710287704.5

申請日:

20170427

公開號:

CN109220537A

公開日:

20190118

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01G18/20,A01G18/68,A01G18/69 主分類號: A01G18/20,A01G18/68,A01G18/69
申請人: 天明制藥股份有限公司
發明人: 王伯綸
地址: 中國臺灣新北市新莊區新北大道二段217號13樓
優先權: CN201710287704A
專利代理機構: 北京匯信合知識產權代理有限公司 代理人: 趙倩
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201710287704.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其包括接種步驟、添加第一營養液步驟、第一培養環境調整步驟、添加第二營養液步驟、第二培養環境調整步驟以及采收步驟。首先,將白樺茸菌株接種至固態培養基以培養出白樺茸菌絲體。當白樺茸菌絲體達第一預設面積時,添加第一營養液。當白樺茸菌絲體達第二預設面積時,降低培養環境的亮度與溫度后。接著,在添加第二營養液后,回復培養環境的亮度與溫度,并待白樺茸菌絲體達第三預設面積時采收。藉此,本發明可有效提升白樺茸菌絲體產物中三萜類化合物的含量。

權利要求書

1.一種用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,包括:進行一接種步驟,將至少一白樺茸菌株接種至一固態培養基并使所述白樺茸菌株于一培養環境中進行培養以產生至少一白樺茸菌絲體;進行一添加第一營養液步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第一預設面積時,添加一第一營養液至所述固態培養基上;進行一第一培養環境調整步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第二預設面積時,降低所述培養環境的一亮度,并降低一溫度至11℃至15℃之間,以使所述白樺茸菌絲體培養一培養時間;進行一添加第二營養液步驟,添加一第二營養液至所述固態培養基上;進行一第二培養環境調整步驟,恢復所述培養環境的所述亮度,并恢復所述溫度至15℃至25℃之間;以及進行一采收步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第三預設面積時,采收所述白樺茸菌絲體。2.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述接種步驟中的所述固態培養基的一制備方法,包括:混合一基料、一醣類、樺樹木屑、一瓊脂與水,其中所述基料包括一谷類或一豆類;以及進行一高溫滅菌步驟,以制得所述固態培養基。3.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述接種步驟中所述固態培養基置于一固態培養瓶中,且所述固態培養瓶的一底部面積大于或等于200平方公分。4.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,所述第一營養液為一中草藥萃取液,且所述第一營養液萃取自由川七、知母與百合所組成的一群組。5.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,所述第二營養液為一中草藥萃取液,且所述第二營養液萃取自由黃耆、紫草、黃岑、生姜與山藥所組成的一群組。6.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述添加第一營養液步驟中所述第一預設面積大于或等于40平方公分且小于或等于60平方公分。7.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述第一培養環境調整步驟中所述第二預設面積大于或等于110平方公分且小于或等于130平方公分。8.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述采收步驟中所述第三預設面積大于或等于150平方公分且小于或等于180平方公分。9.如權利要求1所述的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,其特征在于,于進行所述第二培養環境調整步驟與所述采收步驟之間,更包括:重復進行所述添加第二營養液步驟,其中添加所述第二營養液的頻率為每天20毫升至每天1000毫升。

說明書

技術領域

本發明有關于一種白樺茸的培養方法,尤其是有關于一種用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法。

背景技術

白樺茸(Inonotus obliquus)是主要分布于俄羅斯及東歐地區的一種民間藥用真菌,中文別名還有白樺蕈、樺樹菇、樺褐孔菌、西伯利亞靈芝、樺孔茸和樹蘑菇,在生物學上的分類屬于真菌界、擔子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、銹革孔菌目(Hymenochaetales)、銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)、纖孔菌屬(Inonotus)。

近年來,研究顯示白樺茸含有的多醣類與三萜類化合物(Triterpenoids)等成份能有效活化免疫系統與抑制病毒的增殖而具有預防乳腺癌、肝癌、子宮癌、胃癌、糖尿病及高血壓的效果,其營養和藥用價值逐漸引起人民的關注,尤其其中的三萜類化合具有直接抑制癌細胞生長和抗氧化活性,使其成為醫藥工業和保健品工業的熱門開發領域。

早期白樺茸的使用主要以天然生成的野生白樺茸為主,可采集的地區為俄羅斯的西伯利亞地區、日本北海道、芬蘭、中國吉林長白上地區、黑龍江大小興安嶺地區等地。然而,因天然生成的白樺茸產量、采集成本較高,導致野生的白樺茸價格昂貴,且野生資源有限,日益枯竭,很難滿足市場的需求。

據此,目前白樺茸的生產方式多以液態發酵培養或固態培養等人工生產的方式較為常見。其中,液態發酵培養技術雖培養白樺茸的速度較快,適宜工業化量產,但必須使用大量的培養液,或使用較大容量的發酵槽,且因生長環境與天然白樺茸差異較大,產物的營養成分亦與天然產物有所不同。而固態培養會與天然白樺茸的生長環境及條件較為接近,因此產生的產物及營養成分也較接近天然的白樺茸。然而,現階段白樺茸固態培養技術的產物產量較低、生長速度較慢且所含的有效成分三萜類化合物的成份比率均較天然生成的野生白樺茸來得低。

因此,如何提高人工培養白樺茸中的三萜類化合物比例,是為目前白樺茸培養相關研究的熱門課題。

發明內容

有鑒于此,本發明提供提供一種新穎的白樺茸培養方法,藉以有效的培養出白樺茸菌絲體產物,藉由固態培養模擬白樺茸天然的生長環境,提高產物內的三萜類化合物的含量。

承上述,本發明的一實施方式在于提供一種用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法,包括:

進行一接種步驟,將至少一白樺茸菌株接種至一固態培養基并使所述白樺茸菌株于一培養環境中進行培養以產生至少一白樺茸菌絲體;

進行一添加第一營養液步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第一預設面積時,添加一第一營養液至所述固態培養基上;

進行一第一培養環境調整步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第二預設面積時,降低所述培養環境的一亮度,并降低一溫度至11℃至15℃之間,以使所述白樺茸菌絲體培養一培養時間;

進行一添加第二營養液步驟,添加一第二營養液至所述固態培養基上;

進行一第二培養環境調整步驟,恢復所述培養環境的所述亮度,并恢復所述溫度至15℃至25℃之間;以及

進行一采收步驟,其中當所述白樺茸菌絲體經培養而達一第三預設面積時,采收所述白樺茸菌絲體。

其中,于進行所述接種步驟中的所述固態培養基的一制備方法,包括:

混合一基料、一醣類、樺樹木屑、一瓊脂與水,其中所述基料包括一谷類或一豆類;以及

進行一高溫滅菌步驟,以制得所述固態培養基。

其中,于進行所述接種步驟中所述固態培養基置于一固態培養瓶中,且所述固態培養瓶的一底部面積大于或等于200平方公分。

其中,所述第一營養液為一中草藥萃取液,且所述第一營養液萃取自由川七、知母與百合所組成的一群組。

其中,所述第二營養液為一中草藥萃取液,且所述第二營養液萃取自由黃耆、紫草、黃岑、生姜與山藥所組成的一群組。

其中,于進行所述添加第一營養液步驟中所述第一預訂面積大于或等于40平方公分且小于或等于60平方公分。

其中,于進行所述第一培養環境調整步驟中所述第二預設面積大于或等于110平方公分且小于或等于130平方公分。

其中,于進行所述采收步驟中所述第三預設面積大于或等于150平方公分且小于或等于180平方公分。

其中,于進行所述第二培養環境調整步驟與所述采收步驟之間,更包括:

重復進行所述添加第二營養液步驟,其中添加所述第二營養液的頻率為每天20毫升至每天1000毫升。

上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要,以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容并非本揭示內容的完整概述,且其用意并非在指出本發明實施例的重要/關鍵組件或界定本發明的范圍。

附圖說明

為讓本發明的上述和其他目的、特征、優點與實驗例能更明顯易懂,所附圖式的說明如下:

圖1顯示本發明一實施方式的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法的流程圖。

附圖標記說明:

S100、S102、S104、S106、S108、S110表示步驟

具體實施方式

請參考圖1,其繪示本發明一實施方式的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法的流程圖,且前述培養方法包括步驟S100、步驟S102、步驟S104、步驟S106、步驟S108以及步驟S110。

步驟S100為進行一接種步驟。在步驟S100中,將至少一白樺茸菌株接種至一固態培養基上,其中固態培養基可置于一固態培養瓶中,且前述固態培養瓶的一底部面積可大于或等于200平方公分,但本發明并不欲以此為限。再者,雖未圖示,在本發明中固態培養基可事先混合一基料、一醣類、樺樹木屑、一瓊脂與水,再經由一高溫滅菌步驟制備而得。較佳地,前述基料可包括一谷類或一豆類。接著,將白樺茸菌株于一培養環境中進行培養以產生至少一白樺茸菌絲體,且前述培養環境具體地為一常溫光照環境。

步驟S102為進行一添加一第一營養液步驟。在步驟S102中,在白樺茸菌絲體于前述培養環境中經培養而達一第一預設面積時,將第一營養液至固態培養基上作為白樺茸菌絲體后續成長的營養來源。具體地,前述第一營養液一中草藥萃取液,且其萃取自由川七、知母與百合所組成的一群組。更具體地,前述第一預設面積大于或等于40平方公分且小于或等于60平方公分。

步驟S104為進行一第一培養環境調整步驟。接著,當白樺茸菌絲體經于前述培養環境中培養而達一第二預設面積時,步驟S104用以降低培養環境的一亮度與一溫度而使白樺茸菌絲體后續于一避光低溫環境中培養一培養時間。具體地,前述培養時間可介于6小時至24小時之間,而溫度經調整而介于11℃至15℃之間。更具體地,前述第二預設面積大于或等于110平方公分且小于或等于130平方公分。

步驟S106為進行一添加第二營養液步驟。詳細來說,在白樺茸菌絲體于避光低溫環境中培養一段時間后,可進一步添加第二營養液至固態培養基上以作為白樺茸菌絲體后續成長的營養來源。具體地,第二營養液亦為一中草藥萃取液,且其萃取自由黃耆、紫草、黃岑、生姜與山藥所組成的一群組。

步驟S108為進行一第二培養環境調整步驟。在步驟S106之后,白樺茸菌絲體持續進行培養另一培養時間,且此培養時間較佳地小于5小時。接著,在步驟S108中回復前述培養環境的亮度與溫度,亦即使培養環境恢復至常溫光照環境。

步驟S110為一采收步驟。詳言之,在步驟S108之后使白樺茸菌絲體于常溫光照環境中持續進行培養,當白樺茸菌絲體經培養而達一第三預設面積時,即可進行采收。具體地,第三預設面積大于或等于150平方公分且小于或等于180平方公分。此外,如前文所述,在步驟S108之后白樺茸菌絲體于常溫光照環境中持續進行培養,故于培養期間可重復進行步驟S106以補充第二營養液至固態培養基上。較佳地,添加第二營養液的頻率為每天20毫升至每天1000毫升。

下述將藉由本發明一實施方式的一實施例與比較例來詳細說明本發明的用以提高白樺茸中三萜類化合物含量的培養方法的細節及其可產生的功效。然而,此實施方式可為各種發明概念的應用,可被具體實行在各種不同的特定范圍內。特定的實施方式是僅以說明為目的,且不受限于公開的范圍。

實施例

如第1圖的步驟S100所示,在本實施例中,先將白樺茸菌株接種至固態培養基上,其中固態培養基置于固態培養瓶中,且固態培養瓶的底部面積為220平方公分。再者,前述固態培養基較佳地由綠豆粉、葡萄糖、樺樹木屑、瓊脂與水以下述比例混合:11.8%的綠豆粉、9.7%的樺樹木屑、1.3%的葡萄糖、9.5%的瓊脂以及67.7%的水,并經高溫滅菌處理制備而得。接著,使白樺茸菌株于一常溫光照環境中進行培養以產生白樺茸菌絲體,其中前述常溫指將培養環境的溫度控制于15℃至25℃之間,且較佳地為25℃。

隨后,如圖1的步驟S102所示,當白樺茸菌絲體經培養至其面積介于40平方公分至60平方公分時,將第一營養液至固態培養基上作為白樺茸菌絲體后續成長的營養來源。在本實施例中,第一營養液中草藥萃取液,且由下列步驟萃取而得。首先,取川七10公克、知母2.3公克與百合1.5公克加入750毫升的水中,隨后加熱并持續攪拌1.5小時,過濾以去除殘渣后即得第一營養液。此外,具體地,步驟S102中將第一營養液以每株菌絲體20毫升至1000毫升的條件添加至固態培養基上,且更具體地,前述第一營養液以每株菌絲體250毫升的條件添加至固態培養基上。

再如圖1的步驟S104所示,當白樺茸菌絲體經培養至其面積介于110平方公分至130平方公分時,將前述白樺茸菌絲體的培養環境的亮度與溫度調低以提供一避光低溫環境并使白樺茸菌絲體于調整后的培養環境中繼續進行培養一培養時間。在本實施例中,將前述培養環境的溫度降低至11℃。此外,白樺茸菌絲體于前述避光低溫環境中持續進行培養的培養時間較佳為12小時。

接著,如圖1的步驟S106所示,將第二營養液至固態培養基上作為白樺茸菌絲體后續成長的營養來源。在本實施例中,第二營養液為中草藥萃取液,且由下列步驟萃取而得。首先,取粉狀的黃耆40公克、紫草15公克、黃岑40公克、生姜17公克與山藥17公克加入2公升的5%酒精水溶液中,隨后加熱并持續攪拌2小時,過濾以去除殘渣后即得第二營養液。

在添加第二營養液之后,如第1圖的步驟S108所示,回復前述培養環境的亮度與溫度,亦即使培養環境由一避光低溫環境回復至一常溫光照環境,并使白樺茸菌絲體于常溫光照環境下持續進行培養。此外,在白樺茸菌絲體于常溫光照環境下進行培養的期間,每天補充100毫升的第二營養液至固態培養基上。

最后,如圖1的步驟S110所示,當白樺茸菌絲體經培養至其面積介于150平方公分至180平方公分時,即可進行白樺茸菌絲體的采收。后續則可以酒精于50℃的溫度處理采收的白樺茸菌絲體,以進行白樺茸菌絲體中三萜類化合物的粗萃取,并進一步依據采收的白樺茸菌絲體的重量來估算經由本發明所提供的培養方法所取得的白樺茸菌絲體中三萜類化合物的含量,并進一步整理如表1。

比較例1

比較例1以傳統固態培養方法進行白樺茸菌絲體的培養,并于采收后進行產物的三萜類化合物的粗萃取并估算其于產物中的含量后整理如表1。

比較例2

與比較例1不同的是,比較例2中所采用者為野生白樺茸。于采收后進行三萜類化合物的粗萃取并估算其于野生白樺茸中的含量后,一并整理如表1。

表1-實施例1、比較例1與比較例2的白樺茸菌絲體中三萜類化合物的含量

由表1可知,利用本發明所提供的培養方法所采收而得的白樺茸菌絲體,并與傳統固態培養方法的白樺茸菌絲體及野生白樺茸粗萃取后獲得的三萜類化合物含量進行比較,顯見以本發明所提供的培養方法培養的白樺茸菌絲體,其三萜類化合物含量遠高于傳統固態培養方法,且其含量更接近野生天然的白樺茸,顯見相對于傳統的固態培養方法,本發明確實可有效提高白樺茸中三萜類化合物的含量。

綜上所述,本發明藉由改良的培養方法以及添加中草藥萃取液作為白樺茸菌絲體于培養中的營養來源,確實可有效提升白樺茸中有效成份的含量。此外,本發明所提供的培養方法的操作步驟簡單,亦能達到降低培養人力與時間成本的功效。

雖然本發明已以實施方式揭露如上,然其并非用以限定本發明,任何熟習此技藝者,在不脫離本發明的精神和范圍內,當可作各種的更動與潤飾,因此本發明的?;し段У筆雍蟾降娜ɡ笏綞ㄕ呶?。

關 鍵 詞:
用以 提高 白樺 三萜類 化合物 含量 培養 方法
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