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埃瓦尔对维戈塞尔塔: 一種香蕉組培中更簡化的消毒方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201811333833.4

申請日:

20181109

公開號:

CN109247236A

公開日:

20190122

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 廣西壯族自治區農業科學院園藝研究所
發明人: 鄧彪,堯金燕,方仁,龍興,張繼,周雙云,高一寧,黃偉雄,唐文忠
地址: 530007 廣西壯族自治區南寧市西鄉塘區大學東路174號
優先權: CN201811333833A
專利代理機構: 深圳市興科達知識產權代理有限公司 代理人: 袁士林
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201811333833.4

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明屬于香蕉組織培養技術領域,具體涉及一種香蕉組培中更簡化的消毒方法。本發明充分利用香蕉本體內部無菌的特性,對外表層進行沖洗晾干后,逐層剝除葉鞘,并多次使用75%的酒精對表層滅菌,不破壞內部環境,最終獲得內部無菌的外植體材料。本發明的方法去除了組培過程中重離子化學藥品的使用,操作更簡化更安全,減少了組培的生產時間以及生產成本,同時與原有方法在增殖率上有所提高。

權利要求書

1.一種香蕉組培中更簡化的消毒方法,其特征在于,包括如下步驟:(1)先配置好75%酒精溶液,再準備干凈菜刀、砧板、滅菌的報紙和無菌紗布,待用;(2)挖取至少2天前無雨水、未灌溉的健壯香蕉吸芽,用無菌水沖洗后,晾干;(3)用菜刀削除吸芽外表層,剝除外層葉鞘,留下高20cm葉鞘、寬6cm×8cm的球莖基部,底部切平,用滅菌后的報紙包裹好,待用;(4)對外植體表層用75%酒精溶液擦拭后,放至超凈工作臺;(5)逐層剝去葉鞘,每剝一層用75%酒精溶液擦拭1次,剝除2-3層后,直接掰除葉鞘,換無菌手術刀切平,暴露中心生長點;(6)用另外一把無菌手術刀挖取基部中心2cm×2cm×2cm塊莖,將其置于誘導培養基上,于28℃條件下黑暗培養30-40天,獲得第一代。2.根據權利要求1所述的香蕉組培中更簡化的消毒方法,其特征在于,步驟(3)中用刀削除吸芽外表層時,刀口不能過深,剝除葉鞘直至吸芽整體表面干凈無刀口,然后用報紙包裹嚴實。3.根據權利要求1所述的香蕉組培中更簡化的消毒方法,其特征在于,步驟(3)-步驟(4)的間隔時間不超過4小時。4.根據權利要求1所述的香蕉組培中更簡化的消毒方法,其特征在于,步驟(5)中用刀環剝去除葉鞘時,刀口不能深入葉鞘內層,以每層葉鞘厚度為準。5.根據權利要求1所述的香蕉組培中更簡化的消毒方法,其特征在于,步驟(6)中的誘導培養基為MS+6-BA3mg/L+NAA0.1mg/L。

說明書

技術領域

本發明屬于香蕉組織培養技術領域,具體涉及一種香蕉組培中外植體的消毒方法。

背景技術

香蕉屬于芭蕉科(Musaceae)芭蕉屬(Musa)植物,是世界性的水果之一,在熱帶、亞熱帶地區普遍種植,中國作為主產區之一,種植面積達43萬余公頃居世界第五,產量達1332萬余噸居世界第二(FAO 2016),是我國南方農業支柱產業之一。常規香蕉栽培種為三倍體,繁殖手段為組織培養,主要是通過采集香蕉吸芽,經過消毒、誘導、增殖以及生根等獲得組培苗,經過幾十年的發展,技術基本沒有改變,特別是在外植體的消毒方面,絕大部分都一直采用升汞或者其他化學藥劑進行浸泡消毒,其方法一方面使材料表面褐化,殘留升汞會持續影響細胞生長,減小繁殖系數,同時使操作過程更加繁瑣;另一方面,消毒液為有毒物質,操作不當會對人體產生危害,而廢棄液的處理不當甚至對整個環境產生不利影響。

發明內容

鑒于上述內容,本發明的目的是提供一種更簡化的消毒方式,只需要利用75%的酒精,即可完成外植體的消毒,去除了重離子化學藥品的使用,減少了組培的生產時間以及生產成本。

為了實現上述發明目的,本發明采用以下技術方案:

一種香蕉組培中更簡化的消毒方法,包括以下步驟:

(1)配置好75%酒精溶液,準備干凈菜刀、砧板、滅菌的報紙和無菌紗布,待用;

(2)挖取至少2天前無雨水、未灌溉的健壯香蕉吸芽,用無菌水沖洗后,晾干;

(3)用菜刀削除吸芽外表層,剝除外層葉鞘,留下高20cm葉鞘、寬6cm×8 cm的球莖基部,底部切平,用滅菌后的報紙包裹好,待用;

(4)對外植體表層用75%酒精溶液擦拭后,放至超凈工作臺;

(5)逐層剝去葉鞘,每剝一層用75%酒精溶液擦拭1次,剝除2-3層后,直接掰除葉鞘,換無菌手術刀切平,暴露中心生長點;

(6)用另外一把無菌手術刀挖取基部中心2cm×2cm×2cm塊莖,將其置于誘導培養基上,于28℃條件下黑暗培養30-40天,獲得第一代。

進一步的,步驟(3)中用刀削除吸芽外表層時,刀口不能過深,剝除葉鞘直至吸芽整體表面干凈無刀口,然后用報紙包裹嚴實。

進一步的,步驟(3)-步驟(4)的間隔時間不超過4小時。

進一步的,步驟(5)中用刀環剝去除葉鞘時,刀口不能深入葉鞘內層,以每層葉鞘厚度為準。

進一步的,步驟(6)中的誘導培養基為MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L。

與現有技術相比,本發明具有如下有益效果:

(1)本發明只需采用75%酒精即可完成滅菌,無需使用升汞或者其他有毒化學藥劑,省時省錢的同時,人工操作更安全。

(2)本發明對組培材料損傷更少,可以獲得更多的生長點,提高增殖率。

附圖說明

圖1為本發明的香蕉組培中更簡化的消毒方法對香蕉出芽數及增值率指標測定圖。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。在不背離本發明精神和本質的情況下,對本發明方法、步驟或條件所作的修改或替換,均屬于本發明的范圍。

實施例:

一種香蕉組培中更簡化的消毒方法,包括以下步驟:

前期準備:配置好誘導培養基,分裝滅菌后待用,所述誘導培養基的配方為MS+6-BA 3mg/L+NAA 0.1mg/L;配置好75%酒精,準備干凈菜刀、砧板以及滅菌的報紙、無菌紗布等待用,做好組培的準備工作。

外植體的選?。涸諫ぜ窘?,挖取至少2天無雨水未灌溉的健壯、無病毒植株40-50cm的香蕉吸芽,用無菌水沖洗后,放置通風陰涼處晾干24-48 小時。

外植體的處理:用菜刀削除吸芽根系和球莖外表層,剝除外層葉鞘直至吸芽整體表面干凈無刀口,留下高20cm葉鞘、寬6cm×8cm的球莖基部,底部切平,用滅菌后的報紙包裹好待用;對外植體表層用75%酒精充分擦拭后,放至超凈工作臺;用刀環剝逐層剝去葉鞘,每剝一層用75%酒精擦拭一次,剝除2~3層后,直接用手掰除葉鞘,分離葉鞘與球莖,換手術刀切平葉鞘與球莖連接處,暴露中心生長點。用無菌手術刀挖取基部中心2cm×2cm 塊莖,整塊置于誘導培養基上,于28℃條件下,黑暗培養30-40天,獲得第一代;然后對第一代增殖培養后同樣培養條件下培養20-30天,獲得第二代。

對照組:

前期及外植體的選取一致,在外植體的處理上,留下高6cm葉鞘、寬6cm ×8cm的球莖基部,對外植體表層用75%酒精充分擦拭后,放至超凈工作臺,用刀環剝逐層剝去葉鞘,留取4cm×6cm球莖基部,用75%酒精浸泡1min, 無菌水沖洗1次,再用0.1%的升汞溶液消毒殺菌15min,并不斷搖動處理液, 然后用無菌水沖洗4-5次,切除褐化部分,最后取基部中心約2cm×2cm塊莖,整塊置于誘導培養基上,于28℃條件下,黑暗培養30-40天獲得第一代,對第一代增殖培養后同樣培養條件下培養20-30天獲得第二代。

兩組實驗均采用“威廉斯”系列香蕉吸芽,起始每組設3次重復,每次重復5瓶,每瓶一個外植體,第二代切除叢芽,把外植體對半切后放置增殖培養基,增殖培養基配方為MS+6-BA 4mg/L+NAA 0.1mg/L。

通過統計污染率、第一代和第二代出芽數量進行對比,具體數據見表1。

表1使用本發明方法對香蕉組培影響的數據統計

由表1可知,在同等條件下,實施組與對照組均處理15瓶,每瓶一個外植體的情況下,實施組的污染數量相比對照組更多,主要原因是在逐層剝去葉鞘階段操作不熟練所致,實施組對操作要求更高;而第一代出芽不管是實施組還是對照組,每個外植體基本只出一個芽,兩者之間的增殖率無顯著差異,可見不同處理對香蕉組培的第一代出芽率影響不大;而從第二代出芽數上來說,實施組增殖率為2.93,對照組為2.42,表現出一定差異性,且實施組增殖率更高,可見,本發明的消毒方法能夠明顯提高香蕉組培的增殖率。

綜上所述,本發明的方法參照現在普遍采用的香蕉組培方法,結合香蕉吸芽的特性,去除了重離子化學藥品的使用,過程中只使用75%的酒精進行滅菌,減少了組培的生產時間以及生產成本,避免了對人體以及環境產生危害。采用本發明方法,已經培養了數批香蕉組培苗,此方法在操作不熟練的情況下,污染率比使用升汞略高,而出苗數無顯著差異;在操作熟練后,可以降低污染率,能獲得更高的增殖率。本發明方法為香蕉組培提供了新方法,在實際工作中具有很好的應用前景。

關 鍵 詞:
一種 香蕉 組培中更 簡化 消毒 方法
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