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维戈塞尔塔莱万特: 側溝爬巖鰍的人工繁殖方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201810975838.0

申請日:

20180824

公開號:

CN108967280A

公開日:

20181211

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A01K61/10 主分類號: A01K61/10
申請人: 四川律貝生物科技有限公司
發明人: 譚剛,何興恒,吳毅,李捷,陳凡剛,另世權,韓飛宇,鄧艾
地址: 610000 四川省成都市錦江區一環路東五段108號1-1幢20樓2003號
優先權: CN201810975838A
專利代理機構: 成都君合集專利代理事務所(普通合伙) 代理人: 張鳴潔
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201810975838.0

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,具體包括以下步驟:步驟S1:野生親魚的收集和馴養;步驟S2:親魚的培育;步驟S3:親魚的選擇;步驟S4:人工催產;具體包括包括以下步驟:步驟S5:人工授精及孵化;本發明提供一種受精率高、孵化率高的側溝爬巖鰍的人工繁殖技術,為側溝爬巖鰍種群恢復提供基礎支撐。

權利要求書

1.側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:具體包括以下步驟:步驟S1:野生親魚的收集和馴養;步驟S2:親魚的培育;步驟S3:親魚的選擇;步驟S4:人工催產;具體包括以下步驟:步驟S41:挑選雌魚;具體是指根據側溝爬巖鰍的繁殖生物學的測定數據,按照每尾雌魚3.5g的標準進行挑??;步驟S42:人工注射催產劑;所述催產劑為藥物合劑量,劑量為1~3μgLHRH-A/g和10~30IUHCG/g;步驟S43:將注射過催產劑的親魚,放回到循環池中,保持水溫在15~17℃,設置水流速度在0.2~0.4m/s;步驟S5:人工授精及孵化;具體包括以下步驟:步驟S51:在雌魚注射藥物16h后,將雌魚撈出,擠壓腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;步驟S52:將雌魚體表多余水份吸干,將成熟的卵擠入干燥的培養皿中;步驟S53:獲取雄魚精子;擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出,用精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的溶液;,用注射器沖入盛有卵子的培養皿中,并輕輕用手晃動培養皿10~15s后靜置30s,獲得受精卵;步驟S54:將受精卵平鋪在燒杯中,再將燒杯放置在暫養盆中的進出水口處,控制水溫在15~17℃,保持微流水流速在0.05~0.1m/s進行孵化;在燒杯中進行孵化。2.根據權利要求1所述的側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:所述步驟S2具體包括以下步驟:步驟S21:選擇體表無傷、體重在1.5g以上的雄魚和體重在2.3g的以上的雌魚;經過馴化的野生側溝爬巖鰍作為后備親魚進行培育;步驟S22:將后備親魚投放到室外水泥池中進行培育,在室外水泥池用流水養殖;養殖密度為320尾/水泥池,控制水泥池的進水量為0.3m/s,培育用水的pH為6.9~7.7、溶解氧為10.5~12mg/L、水溫為15~20℃;步驟S23:后備親魚飼養。3.根據權利要求2所述的側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:所述步驟S23具體包括以下步驟:步驟S231:飼喂培育,具體包括是指:在將后備親魚轉入水泥池后的2周內,每日投放餌料一次,每日投喂量為親魚體重的1~2%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料;所述水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料的質量比為2:2:1;步驟S232:從第3周開始減少投喂量和次數,第4周觀察,若親魚不再進食投放的餌料,既停止對其進行投放;步驟S233:從步驟S232中的飼養的后備親魚進行篩選并強化飼養;具體是指:篩選60尾成熟的親魚單獨放于另外一個水泥池,進行加強培育;所述加強培育集體是指:控制水流速度在2.5m/s~3.5m/s;每日投喂量為親魚體重的3~5%,每天投喂二次,投喂的餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料;所述水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料的質量比為2:2:1。4.根據權利要求1所述的側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:所述步驟S3具體是指:雌魚選擇腹部膨大、柔軟、有彈性,輕壓有流動感,生殖孔微紅的個體,擠卵可見卵粒大小均勻、呈淡黃色;雄魚選擇個體活躍,體型稍小,生殖孔長而尖的個體;所述雌魚和雄魚的比例為1.2:1。5.根據權利要求1所述的側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:所述步驟S42:具體是指:采用一針注射法,從雌魚胸鰭基部以45度角注射催產藥物,進針深度為0.8~0.12cm。6.根據權利要求1~5任一項所述的側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,其特征在于:所述步驟S1中的野生親魚馴養具體包括第一階段馴養和第二階段馴養;所述第一階段馴養時間為35~40天;所述第二階段馴養時間為120~150天;所述第一階段馴養具體是指:采用石頭上長出的藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲作為開口餌料進行為期35~40天的馴養;第二階段馴養具體是指:采用水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料,作為第二階段馴養餌料進行為期120~150天的馴養;所述水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為1:1:2。

說明書

技術領域

本發明涉及側溝爬巖鰍人工繁殖技術領域,具體的說,是側溝爬巖鰍的人工繁殖方法。

背景技術

側溝爬巖鰍(Beaufortialiui.Chang),屬于鯉形目,平鰭鰍科,腹吸鰍亞科,爬巖鰍屬。體前部平扁,體寬顯著大于體高。頭部扁平。吻扁鑿形。吻皮下包形成吻褶。吻褶分3葉,葉間具2對小吻須。吻后側具側溝與頭側相通??誶熬呶槍???諳攣?,口裂甚小,弧形。唇肉質,無乳突,具口角須一對。鰓裂很小,僅限于頭背側。背鰭起點至吻端較具尾鰭基稍近,背鰭無硬刺,外緣平截。偶鰭向平展。胸鰭起點約與眼后緣垂線平,末端稍超過腹鰭起點。腹鰭起點至臀鰭起點較至吻端稍遠,后緣相連成吸盤狀,末端不及肛門。尾柄短,尾柄長小于尾柄高。肛門至腹鰭末端與至臀鰭起點約相等。體被細鱗。頭、胸和腹部裸露無鱗。側線完全。體背和側面呈褐色,各鰭均有不規則褐色斑紋。主要分布于岷江和大渡河流域。

由于大渡河流域一系列大型水利工程的修建,對該區域的生態環境造成了一定的影響,再加上過度的捕撈,側溝爬巖鰍的生存環境越來越差,野生資源量急劇下降。迄今為止,對側溝爬巖鰍的研究僅有關于分類學的研究報道。

開展側溝爬巖鰍的人工繁殖工作,以恢復和補充其群體數量,具有重要意義。

現有技術中,還沒有對爬巖鰍人工繁殖技術進行報道。

發明內容

本發明的目的在于提供側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,提供一種受精率高、孵化率高的側溝爬巖鰍的人工繁殖技術。

本發明通過下述技術方案實現:

側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,具體包括以下步驟:

步驟S1:野生親魚的收集和馴養;

步驟S2:親魚的培育;

步驟S3:親魚的選擇;

步驟S4:人工催產;具體包括以下步驟:

步驟S41:挑選雌魚;具體是指根據側溝爬巖鰍的繁殖生物學的測定數據,按照每尾雌魚3.5g的標準進行挑??;

步驟S42:人工注射催產劑;所述催產劑為藥物合劑量,劑量為1~3μgLHRH-A2/g和10~30IU HCG/g;

步驟S43:將注射過催產劑的親魚,放回到循環池中,保持水溫在15~17℃,設置水流速度在0.2~0.4m/s;

步驟S5:人工授精及孵化;具體包括以下步驟:

步驟S51:在雌魚注射藥物16h后,將雌魚撈出,擠壓腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;

步驟S52:將雌魚體表多余水份吸干,將成熟的卵擠入干燥的培養皿中;

步驟S53:獲取雄魚精子;擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出,用精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的溶液;,用注射器沖入盛有卵子的培養皿中,并輕輕用手晃動培養皿10~15s后靜置30s,獲得受精卵;

步驟S54:將受精卵平鋪在燒杯中,再將燒杯放置在暫養盆中的進出水口處,控制水溫在15~17℃,保持微流水流速在0.05~0.1m/s進行孵化;在燒杯中進行孵化。

進一步地,為了更好的實現本發明,所述步驟S2具體包括以下步驟:

步驟S21:選擇體表無傷、體重在1.5g以上的雄魚和體重在2.3g的以上的雌魚;經過馴化的野生側溝爬巖鰍作為后備親魚進行培育;

步驟S22:將后備親魚投放到室外水泥池中進行培育,在室外水泥池用流水養殖;養殖密度為320尾/水泥池,控制水泥池的進水量為0.3m/s,培育用水的pH為6.9~7.7、溶解氧為10.5~12mg/L、水溫為15~20℃。

步驟S23:后備親魚飼養。

進一步地,為了更好的實現本發明,所述步驟S23具體包括以下步驟:

步驟S231:飼喂培育,具體包括是指:

將后備親魚轉入水泥池后2周內,每日投放餌料一次,每日投喂量為親魚體重的1~2%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料;所述水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料的質量比為2:2:1;

步驟S232:從第3周開始減少投喂量和次數,由于此時池內開始生長有大量的藻類可以為親魚提供食物,第4周觀察發現親魚不再進食投放的餌料,既可以停止對其進行投放;

步驟S233:從步驟S232中的飼養的后備親魚進行篩選并強化飼養;具體是指:篩選60尾成熟的親魚單獨放于另外一個水泥池,進行加強培育,控制水流速度在2.5m/s~3.5m/s;每日投喂量為親魚體重的3~5%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料;所述水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料的質量比為2:2:1。

進一步地,為了更好的實現本發明,所述步驟S3具體是指:雌魚選擇腹部膨大、柔軟、有彈性,輕壓有流動感,生殖孔微紅的個體,擠卵可見卵粒大小均勻、呈淡黃色;雄魚選擇個體活躍,體型稍小,生殖孔長而尖的個體;所述雌魚和雄魚的比例為1.2:1。

進一步地,為了更好的實現本發明,所述步驟S42:具體是指:采用一針注射法,從雌魚胸鰭基部以45度角注射催產藥物,進針深度為0.8~0.12cm。

進一步地,為了更好的實現本發明,所述步驟S1中的野生親魚馴養具體包括第一階段馴養和第二階段馴養;所述第一階段馴養時間為35~40天;所述第二階段馴養時間為120~150天。

所述第一階段馴養具體是指:采用石頭上長出的藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲作為開口餌料進行為期35~40天的馴養;

第二階段馴養具體是指:采用水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合飼料,作為第二階段馴養餌料進行為期120~150天的馴養;所述水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為1:1:2。

本發明與現有技術相比,具有以下優點及有益效果:

本發明提供一種受精率高、孵化率高的側溝爬巖鰍的人工繁殖技術,為側溝爬巖鰍種群恢復提供基礎支撐。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步地詳細說明,但本發明的實施方式不限于此。

實施例1:

本發明通過下述技術方案實現,

側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,具體包括以下步驟:

步驟S1:野生親魚的收集和馴養;

在野生的收集時,首先對野生親魚資源調查以區域性調查為主,不設固定采樣斷面,根據河段情況設臨時點調查采集魚類標本;篩選體質強壯、受傷較輕的親魚,采用青霉素和食鹽混合水溶液浸泡1~3分鐘;所述混合水溶液的濃度以及比例具體是指采用4.5%的食鹽水和1kg水中加入0.5萬單位的青霉素進行混合,對野生親魚進行浸泡1~3分鐘,目的是防治和減少水霉病發生。

在收集的野生側溝爬巖鰍中,選擇雌魚的個體體重平均3.5g,選擇雄魚體重在2.0~2.5g個體較小性成熟,采用解剖情況分析,收集以上體重的雌魚和雄魚性腺發育到IV,達到親魚規格,可進行馴養;

第一階段馴養:在收集的野生親魚靜養25~30d后開始對其進行攝食馴養;在第一階段21d左右親魚進食,餌料為藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲;采用石頭上長出的藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲作為開口餌料;

第二階段馴養:在35~40d開始主動攝食,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子的配合飼料;所述配合飼料的質量比為1:1:2;進行第二階段馴養。

優選的第二階段馴養還可采用微粒子S1、S3、S5飼料配合水蚯蚓、微粒子S1、S3、S5飼料配合螺旋藻、硅藻和鰻魚粉料配合水蚯蚓、螺旋藻和硅藻的配合、三友金魚飼料中的一種或多種作為第二階段馴養餌料進行馴養。

步驟S2:親魚的培育;

選擇經過馴化培養的野生親魚作為后備親魚進行培育,后備親魚選擇體表無傷、體重1.5g以上雄魚和2.3g以上的雌魚;

將后備親魚投放到室外的一個水泥池中進行培育,在水泥池采用流水養殖,養殖密度為320尾/池,水泥池的進水量為0.3m/s,培育用水的pH值為6.9~7.7、溶解氧為10.5~12mg/L、水溫為15~20℃;

在水泥池培育的最開始兩周內,每日投放餌料兩次早晚各一次,第一周投放餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合形成的A飼料,所述A飼料中水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子的質量比為1:1:2,第二周投放餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子配合形成的B飼料,所述B飼料中水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子質量比為2:1:1。

在水泥池培育的第三周,開始減少投喂量和投放次數;由于第三周開始水泥池內已經有藻類生長,藻類可以提供一部分食物;故每日晚上8點投喂一次餌料,投喂餌料的量為親魚體重的1~2%,投放餌料為水蚯蚓和搖蚊幼蟲配形成合的C飼料,所述C飼料中水蚯蚓:搖蚊幼蟲的質量比為1:1;后面就逐漸減少投喂和減少水蚯蚓的比例,此時池內生長的大量的藻類將為親魚提供食物;

第4周投放餌料并觀察,當發現親魚不在進食投放的餌料時,既可以停止對其餌料的投放;

對培育4周的后備親魚進行篩選并進行加強培育。具體是指:選擇雌魚個體完整無傷口,腹部稍微按壓較柔軟在其泄殖孔出能隱約看到未成熟的卵粒,雄魚選擇個體完整無傷口,活力較好的60尾成熟的親魚單獨放于另外一個水泥池,進行加強培育,增大水流并控制在水流的速度在2.5~3.5m/s,增加餌料的投放,每日投喂量為親魚體重的3~5%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料,餌料的質量比為:水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子為2:2:1。

采用本操作的作用是采用流水刺激魚體,讓其性腺發育更成熟,并且在后面進行人工繁殖前便于對親魚進行定期的檢查;加大沖水強化培育。

步驟S3:親魚的選擇;

強化培育兩個月后,將篩選出來的60尾成熟的親魚暫養在半徑30cm的暫養盆中,暫養盆中采用流水循環對親魚進行刺激,控制水溫在15~17℃,保持流水;

雌魚選擇腹部膨大、柔軟、有彈性,輕壓有流動感,生殖孔微紅的個體,擠卵可見卵粒大小均勻、呈淡黃色;雄魚選擇個體活躍,體型稍小,生殖孔長而尖的個體;所述雌雄比的比例為1.2:1。

步驟S4:人工催產;具體包括以下步驟:

步驟S41:挑選雌魚;具體是指根據側溝爬巖鰍的繁殖生物學的測定數據,按照每尾雌魚3.5g的標準進行挑??;

步驟S42:人工注射催產劑;所述催產劑為藥物合劑量為1~3μgLHRH-A2/g和10~30IU HCG/g;

步驟S43:將注射過催產劑的親魚,放回到循環池中,保持水溫在15~17℃,設置水流速度在0.2~0.4m/s;

步驟S5:人工授精及孵化;具體包括以下步驟:

步驟S51:在雌魚注射藥物16h后,將雌魚撈出,擠壓腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;

步驟S52:將雌魚體表多余水份吸干,將成熟的卵擠入干燥的培養皿中;

因為雌魚沒有進行麻醉,所以需要將其表面的水擦干,用一只手固定它,另一只手進行擠卵,由于其卵較小且有微黏性故需要一個助手用生理鹽水將擠出的卵沖洗到培養皿中;擠完后,再把雄魚逮出也是將其表面的水用卷紙擦干,用一只手固定雌魚,另一只手進行擠精液。

步驟S53:獲取雄魚精子;擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出,用精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的溶液;用注射器沖入盛有卵子的培養皿中,并輕輕用手晃動培養皿10~15s后靜置30s,獲得受精卵;

用精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的溶液具體是指:通過配制不同濃度的NaCl溶液,隨著NaCl溶液濃度的升高,側溝爬巖鰍精子的激烈運動時間、快速運動時間、壽命和激活率均呈先增加后減小的趨勢。

在4%的NaCl溶液中,精子激烈運動時間和壽命最長,且激活率在100%;

而在3%的NaCl溶液中,精子快速運動的時間最長,且激活率在90%以上。

側溝爬巖鰍精子活力的最適NaCl的濃度范圍在3%~4%;最適精子活力配置的溶液即NaCl的濃度3%的生理鹽水。

步驟S54:將受精卵平鋪在燒杯中,再將燒杯放置在暫養盆中進出水口處,控制水溫在15~17℃,保持微流水,控制微流水流速在0.05~0.1m/s,并在燒杯中進行孵化。

側溝爬巖鰍胚胎發育在15~17℃下歷時60h 55min后,開始孵化出幼苗,積溫974.56℃·h。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例2:

本發明通過下述技術方案實現,側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,具體包括以下步驟:

步驟S1:野生親魚的收集和馴養;

在野生的收集時,首先對野生親魚資源調查以區域性調查為主,不設固定采樣斷面,根據河段情況設臨時點調查采集魚類標本;篩選體質強壯、受傷較輕的親魚,采用青霉素和食鹽混合水溶液浸泡1分鐘;

所述混合水溶液的濃度以及比例具體是指采用4.5%的食鹽水和1kg水中加入0.5萬單位的青霉素進行混合,對野生親魚進行浸泡1分鐘,目的是防治和減少水霉病發生。

在收集的野生側溝爬巖鰍中,選擇雌魚的個體體重平均3.5g,選擇雄魚體重在2.5g個體較小性成熟,采用解剖情況分析,收集以上體重的雌魚和雄魚性腺發育到IV,達到親魚規格,可進行馴養;

第一階段馴養:在收集的野生親魚靜養30d后開始對其進行攝食馴養;在第一階段21d親魚進食;第一階段馴養餌料為藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲;采用石頭上長出的藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲作為開口餌料;

第二階段馴養:在35d開始主動攝食,第二階段馴養餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子的配合飼料;所述第二階段馴養餌料的質量比為1:1:2;進行第二階段馴養。

步驟S2:親魚的培育;

選擇經過馴化培養的野生親魚作為后備親魚進行培育,后備親魚選擇體表無傷、體重1.5g以上雄魚和2.3g以上的雌魚;

將后備親魚投放到室外的水泥池中進行培育,在水泥池采用流水養殖,養殖密度為320尾/池,水泥池的進水量為0.3m/s,培育用水的pH值為7.0、溶解氧為12mg/L、水溫為16℃;

在水泥池培育的最開始兩周內,每日投放餌料兩次早晚各一次,第一周投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為1:1:2,第二周投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為2:1:1。

在水泥池培育的第三周,開始減少投喂量和投放次數;在第三周由于已經有藻類生長,可以為親魚提供一部分食物,每日晚上8點投喂一次,投喂量為親魚體重的1~2%,投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲為1:1;由于隨著時間的延長,池內生長的大量的藻類將為親魚提供食物;故逐漸減少投喂和減少水蚯蚓的比例。

第4周投放餌料并觀察,當發現親魚不災進食投放的餌料時,既可以停止對其餌料的投放;

對培育四周后的后備親魚進行篩選并加強培育;選擇雌魚個體完整無傷口,腹部稍微按壓較柔軟在其泄殖孔出能隱約看到未成熟的卵粒,雄魚選擇個體完整無傷口,活力較好的60尾成熟的親魚單獨放于另個一水泥池,進行加強培育,增大水流,并將水流的速度控制在2.5m/s,通過流水對親魚刺激,增加餌料的投放,每日投喂量為親魚體重的5%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料,餌料的比例是:水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為2:2:1。

以上所篩選的60尾成熟的親魚單獨放于另外一個水泥池,進行加強培育,其作用是通過流水刺激魚體,讓其性腺發育更成熟,并且在后面進行人工繁殖前便于對親魚進行定期的檢查;在1月中旬進行篩選進行加大沖水強化培育,強化培育的時間為兩個月。

步驟S3:親魚的選擇;

兩個月強化培育后,將篩選出來進行加強培育后的親魚暫養在半徑30cm的暫養盆中,暫養盆中采用流水循環對親魚進行刺激,控制水溫在16℃,保持流水;

雌魚選擇腹部膨大、柔軟、有彈性,輕壓有流動感,生殖孔微紅的個體,擠卵可見卵粒大小均勻、呈淡黃色;雄魚選擇個體活躍,體型稍小,生殖孔長而尖的個體;所述雌雄比的比例為1.2:1。

步驟S4:人工催產;具體包括包括以下步驟:

步驟S41:挑選雌魚;具體是指根據側溝爬巖鰍的繁殖生物學的測定數據,按照每尾雌魚3.5g的標準進行挑??;

步驟S42:人工注射催產劑;所述催產劑為藥物合劑量為:2μgLHRH-A2/g和10IU HCG/g。

步驟S43:將注射過催產劑的親魚,放回到循環池中,保持水溫在15~17℃,設置水流速度在0.2m/s;

步驟S5:人工授精及孵化;具體包括以下步驟:

步驟S51:在雌魚注射藥物16h后,將雌魚撈出,擠壓腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;

步驟S52:將雌魚體表多余水份吸干,將成熟的卵擠入干燥的培養皿中;

步驟S53:獲取雄魚精子;擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出,精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的NaCl的濃度3%的生理鹽水,用注射器沖入盛有卵子的培養皿中,并輕輕用手晃動培養皿10s后靜置30s,獲得受精卵;

步驟S54:將受精卵平鋪在燒杯中,再將燒杯放置在有將燒杯放入暫養盆進出水口處,控制水溫在15℃,保持微流水,控制微流水流速0.05m/s在燒杯中進行孵化。所述暫養盆的上方設置有進水管,在盆中中心設置有出水管。

側溝爬巖鰍胚胎發育在16℃下歷時60h55min后,開始孵化出幼苗,積溫974.56℃·h。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例3:

本實施例與實施例2的步驟相同,區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為:1μgLHRH-A2/g和30IU HCG/g。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例4:

本實施例與實施例2的步驟相同,區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為:2μgLHRH-A2/g和20IU HCG/g。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例5:

本實施例與實施例2的步驟相同,區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為:2μgLHRH-A2/g和30IU HCG/g。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例6:

本實施例與實施例2的步驟相同,區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為:1μgLHRH-A2/g和20IU HCG/g。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例7:

本實施例與實施例2的步驟相同,區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為:1μgLHRH-A2/g和10IU HCG/g。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

實施例8:

本發明通過下述技術方案實現,側溝爬巖鰍的人工繁殖方法,具體包括以下步驟:

步驟S1:野生親魚的收集和馴養;

在野生的收集時,首先對野生親魚資源調查以區域性調查為主,不設固定采樣斷面,根據河段情況設臨時點調查采集魚類標本;篩選體質強壯、受傷較輕的親魚,采用青霉素和食鹽混合水溶液浸泡3分鐘;

所述混合水溶液的濃度以及比例具體是指采用4.5%的食鹽水和1kg水中加入0.5萬單位的青霉素進行混合,對野生親魚進行浸泡3分鐘,目的是防治和減少水霉病發生。

在收集的野生側溝爬巖鰍中,選擇雌魚的個體體重3.5g,選擇雄魚體重在2.0個體較小性成熟,采用解剖情況分析,收集以上體重的雌魚和雄魚性腺發育到IV,達到親魚規格,可進行馴養;

第一階段馴養:在收集的野生親魚靜養25后開始對其進行攝食馴養;在第一階段21d左右親魚進食;第一階段馴養餌料為藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲;采用石頭上長出的藻類和青苔、水蚯蚓、搖蚊幼蟲作為開口餌料;

第二階段馴養:在30d開始主動攝食,第二階段馴養餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲、微粒子的配合飼料;所述第二階段馴養餌料的質量比為1:1:2;進行第二階段馴養。

步驟S2:親魚的培育;

選擇經過馴化培養的野生親魚作為后備親魚進行培育,后備親魚選擇體表無傷、體重1.5g以上雄魚和2.3g以上的雌魚;

將后備親魚投放到室外的水泥池中進行培育,在水泥池采用流水養殖,養殖密度為320尾/池,水泥池的進水量為0.3m/s,培育用水的pH值為7.7、溶解氧為12mg/L、水溫為15℃;

在水泥池培育的最開始兩周內,每日投放餌料兩次早晚各一次,第一周投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為1:1:2,第二周投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為2:1:1。

在水泥池培育的第三周,開始減少投喂量和投放次數;在第三周由于已經有藻類生長,可以為親魚提供一部分食物,每日晚上8點投喂一次,投喂量為親魚體重的2%,投放餌料為水蚯蚓:搖蚊幼蟲為1:1;由于隨著時間的延長,池內生長的大量的藻類將為親魚提供食物;故逐漸減少投喂和減少水蚯蚓的比例。

第4周投放餌料并觀察,當發現親魚不災進食投放的餌料時,既可以停止對其餌料的投放;

對培育四周后的后備親魚進行篩選并加強培育;選擇雌魚個體完整無傷口,腹部稍微按壓較柔軟在其泄殖孔出能隱約看到未成熟的卵粒,雄魚選擇個體完整無傷口,活力較好的60尾成熟的親魚單獨放于另個一水泥池,進行加強培育,增大水流,并將水流的速度控制在3.5m/s,通過流水對親魚刺激,增加餌料的投放,每日投喂量為親魚體重的5%,每天投喂二次,餌料為水蚯蚓、搖蚊幼蟲和微粒子配合飼料,餌料的比例是:水蚯蚓:搖蚊幼蟲:微粒子配合飼料的質量比為2:2:1。

以上所篩選的60尾成熟的親魚單獨放于另外一個水泥池,進行加強培育,其作用是通過流水刺激魚體,讓其性腺發育更成熟,并且在后面進行人工繁殖前便于對親魚進行定期的檢查;在2月進行篩選進行加大沖水強化培育,強化培育的時間為兩個月。

步驟S3:親魚的選擇;

兩個月強化培育后,將篩選出來進行加強培育后的親魚暫養在半徑30cm的暫養盆中,暫養盆中采用流水循環對親魚進行刺激,控制水溫在16℃,保持流水;

雌魚選擇腹部膨大、柔軟、有彈性,輕壓有流動感,生殖孔微紅的個體,擠卵可見卵粒大小均勻、呈淡黃色;雄魚選擇個體活躍,體型稍小,生殖孔長而尖的個體;所述雌雄比的比例為1.2:1。

步驟S4:人工催產;具體包括包括以下步驟:

步驟S41:挑選雌魚;具體是指根據側溝爬巖鰍的繁殖生物學的測定數據,按照每尾雌魚3.5g的標準進行挑??;

步驟S42:人工注射催產劑;所述催產劑為藥物合劑量為:1μgLHRH-A2/g和30IU HCG/g。

步驟S43:將注射過催產劑的親魚,放回到循環池中,保持水溫在17℃,設置水流速度在0.4m/s;

步驟S5:人工授精及孵化;具體包括以下步驟:

步驟S51:在雌魚注射藥物16h后,將雌魚撈出,擠壓腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;

步驟S52:將雌魚體表多余水份吸干,將成熟的卵擠入干燥的培養皿中;

步驟S53:獲取雄魚精子;擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出,用精子活力的實驗結果所得最適精子活力配置的NaCl的濃度3%的生理鹽水,用注射器沖入盛有卵子的培養皿中,并輕輕用手晃動培養皿10~15s后靜置30s,獲得受精卵;

步驟S54:將受精卵平鋪在燒杯中,再將燒杯放置在有將燒杯放入暫養盆進出水口處,控制水溫在16℃,保持微流水,控制微流水流速0.05m/s在燒杯中進行孵化。

所述暫養盆的上方設置有進水管,在盆中中心設置有出水管。

側溝爬巖鰍胚胎發育在16℃下歷時60h 55min后,開始孵化出幼苗,積溫974.56℃·h。

實施例9:

本發明還設置對比例驗證實驗:

對比例1:

該對比例1與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為LHRH-A2、HCG、DOM,其劑量為LHRH-A23~5μg/g、HCG 30~50IU/g、DOM 2~3μg/g;

對比例2:

該對比例2與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為LHRH-A2、DOM,其劑量為LHRH-A23~5μg/g、DOM 2~3μg/g;

對比例3:

該對比例3與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為LHRH-A2、HCG,其劑量為LHRH-A23~5μg/g、HCG 30~50IU/g;

對比例4:

該對比例4與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為LHRH-A2、HCG,其劑量為LHRH-A21~3μg/g、HCG 10~30IU/g;

對比例5:

該對比例5與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;采用的催產藥物為LHRH-A2、HCG,其劑量為LHRH-A20.1~1μg/g、HCG1~10IU/g;

采用上述實施例3與對比例1~5的人工繁殖方法進行繁殖,實驗數據結構如下表1所示:

表1

表1中LHRH-A2和DOM的劑量為μg/g;HCG的劑量單位為IU/g;

由表1可知:側溝爬巖鰍在同等繁殖條件下,相比對比例1-5,本發明是通過各個步驟相匹配,使得本發明的側溝爬巖鰍的受精率高、孵化率高。

對比例6:

該對比例6與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;步驟S2中的水流速度為2.5m/s,步驟S43中的水流速度為0.2m/s以及步驟S54中的水流速度0.1m/s。

對比例7:

該對比例7與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;步驟S2中的水流速度為3.5m/s,步驟S43中的水流速度為0.4m/s以及步驟S54中的水流速度0.1m/s。

對比例8:

該對比例8與實施例8的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;步驟S2中的水流速度為2m/s,步驟S43中的水流速度為0.3m/s以及步驟S54中的水流速度0.075m/s。

對比例9:

該對比例9與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;所述,步驟S2中的水流速度為2.5m/s,步驟S43中的水流速度為0.3m/s以及步驟S54中的水流速度0.1m/s。

對比例10:

該對比例10與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;步驟S2中的水流速度為3.5m/s,步驟S43中的水流速度為0.3m/s以及步驟S54中的水流速度0.05m/s。

對比例11:

該對比例10與實施例2的區別在于催產劑的劑量和成分不同;區別在于步驟S2中的水流速度、步驟S43中的水流速度以及步驟S54中的水流速度;步驟S2中的水流速度為0.8m/s,步驟S43中的水流速度為0.1m/s以及步驟S54中的水流速度0.01m/s。

采用上述實施例8與對比例6~11的人工繁殖方法進行繁殖,實驗數據結構如下表2所示:

表2

由表2可知側溝爬巖鰍在同等繁殖條件下,相比對比例6-11,本發明是通過各個步驟相匹配,在本發明要求的水流速度范圍內,能夠有效的使得本發明的側溝爬巖鰍的受精率高、孵化率高。

本實施例的其他部分與上述實施例相同,故不再贅述。

以上所述,僅是本發明的較佳實施例,并非對本發明做任何形式上的限制,凡是依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化,均落入本發明的?;し段е?。

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