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维戈塞尔塔主场迎战塞维利亚: 一種精準快速無創式大鼠滴注方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201510847643.4

申請日:

20151127

公開號:

CN105434081A

公開日:

20160330

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61D7/00,A61D7/04 主分類號: A61D7/00,A61D7/04
申請人: 湖南農業大學
發明人: 劉仲華,劉建軍,林勇,林海燕,洪樂樂
地址: 410128 湖南省長沙市芙蓉區人民東路湖南農業大學11教北棟4樓
優先權: CN201510847643A
專利代理機構: 北京路浩知識產權代理有限公司 代理人: 王文君
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510847643.4

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種精準快速無創式大鼠滴注方法,所述方法是在大鼠用乙醚麻醉后,將其懸掛在鐵架臺上,用包纏紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出口腔之外,在喉鏡照射下找到聲門,然后捏住大鼠鼻子,使大鼠用嘴呼吸,隨著聲門開合,將已吸好滴注藥物的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管;退出移液槍,繼續捏鼻3-8s,使其通過呼吸自動將滴注藥物吸入肺部,待聽到濕啰音,表明滴注成功。本發明提供的大鼠滴注方法具有無創、無痛苦、經濟、快捷、精準等特點,相比于其他滴注方式具有明顯優勢。

權利要求書

1.一種精準快速無創式大鼠滴注方法,其特征在于,所述方法是在大鼠用乙醚麻醉后,將其懸掛在鐵架臺上,用包纏紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出口腔之外,在喉鏡照射下找到聲門,然后捏住大鼠鼻子,使大鼠用嘴呼吸,隨著聲門開合,將已吸好滴注藥物的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管;退出移液槍,繼續捏鼻3-8s,使其通過呼吸自動將滴注藥物吸入肺部,待聽到濕啰音,表明滴注成功。2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,滴注結束后,將大鼠繼續懸掛在鐵架臺上5-10s,保持身體自然垂落,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,將大鼠置于帶蓋的麻醉罐中進行麻醉,麻醉罐中放有蘸滿乙醚的棉花或紗布。4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,所述麻醉罐為玻璃罐或透明塑料罐。5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,待大鼠用乙醚麻醉后,用細繩系住大鼠門牙,將其懸掛在鐵架臺上。6.根據權利要求1-5任一項所述的方法,其特征在于,每次滴注劑量控制在300μl以內。

說明書

技術領域

本發明涉及臨床醫學和動物實驗領域,具體地說,涉及一種精準快速無創式大鼠滴注方法。

背景技術

呼吸道暴露是臨床醫學、毒理學、環境醫學等領域研究中最為重要的暴露途徑之一,隨著近年各學科研究的飛速發展,經呼吸道給藥、染毒、呼吸監測的動物實驗的需求呈上升趨勢,大鼠是國際通用的標準化的實驗動物,在多種醫學、生物學試驗研究中廣泛應用,在大鼠開胸手術需呼吸機輔助呼吸、呼吸功能檢測或氣管內給藥等動物實驗中,順利的大鼠氣管插管是實驗成敗的前提,目前,常用的插管方法有:頸部切口插管法(邱永明,田鑫,大鼠簡易的氣管插管方法[J].上海第二醫科大學學報,2001,21(6):567),頸部切口鋼絲引導插管法(陶運明,莫緒明,戚繼榮等,一種新的大鼠氣管插管方法[J],中華實驗外科雜志,2004,21(4)):504;WekslerB,NgB.LenertJ.Asimplifiedmethodforendotrochealintubationintherat[J].JoumalofAppliedPhysiology.1994.76(4):1823),盲插法,內窺鏡輔助插管法(ClaryEM.OHalloranEK,delaFuente.SG.etal.Videonendoscopicendortachealintubationoftherat[J].LabAnim,2004.38(2):158),經口明視插管法和經頸部透照氣管插管法(王響英,吳淑燕,李蘇安,等,大鼠直視氣管插管方法[J].上海實驗動物科學,2004,24(2):107)等。

可將氣管滴注法分為暴露式和非暴露式兩種,暴露式即通過手術將大鼠氣管暴露出來,切口再進行插管;非暴露式主要不需要暴露氣管,主要是通過口腔借助透射鏡、喉鏡等輔助工具,利用冷光源找到氣管,再用導管插入氣管進行滴注。以往的暴露式氣管滴注需要切開大鼠頸部的皮膚和肌肉以暴露氣管,再把微樣進樣器插入氣管,故實驗的精確性得到了保證,但是尖頭的微樣進樣器容易引起大鼠呼吸道損傷,氣管切開后插管雖快速簡便,但對動物機體傷害比較大。組織損傷及術后的感染都會影響術后大鼠機體的恢復,增加了非實驗因素對實驗結果的影響。非暴露式氣管滴注是采用磨鈍的靜脈留置針或穿刺針進行插管,雖然具有無創性的優點,但因為這些插管針往往和普通注射器匹配,而普通注射器的精確度卻不如微樣進樣器,且非暴露式氣管滴注方法難以兼顧無創性和精確性。研究顯示,鼻腔滴注可以達到呼吸道給藥或染毒的目的,但尚沒有相關的研究對其進行評價。

近年來,呼吸機輔助通氣技術開始應用于嚙齒類動物,為心胸外科、麻醉科、藥學等專業的動物模型研究提供了呼吸支持手段??燜俁行У鈉懿騫蓯怯τ酶ㄖㄆ際醯那疤?,以往的暴露式氣管滴注需要切開大鼠頸部的皮膚和肌肉以暴露氣管,再將微樣進樣器插入氣管,故實驗的精確性得到了保證,但是尖頭的微樣進樣器容易引起大鼠呼吸道損傷,氣管切開后插管雖快速簡便,但對動物機體傷害比較大。組織損傷及術后的感染都會影響術后大鼠機體的恢復,增加了非實驗因素對實驗結果的影響。非暴露式氣管滴注是采用磨鈍的靜脈留置針或穿刺針進行插管,雖然具有無創性的優點,但因為這些插管針往往和普通注射器匹配,而普通注射器的精確度卻不如微樣進樣器。因此,有創的插管方法會對氣管及咽喉部周圍組織造成損傷,從而影響插管的重復進行,進而影響整個實驗的結果;而采用直視下導引鋼絲引導插管(VLGIT)法,雖然為無創式氣管滴注,但是滴注操作,每只動物所用時間長;滴注量尚不精確,并且插管操作同樣會增加小鼠的痛苦與不適。

發明內容

本發明鑒于現有的氣管滴注法中存在的缺陷和不足,為保證大鼠滴注能達到快速、精準、無創和成活率高等效果,從氣管滴注的設備、麻醉、操作步驟等方面入手進行革新完善,提供一種精準快速無創的大鼠滴注方法。

為了實現本發明目的,本發明的一種精準快速無創式大鼠滴注方法,所述方法是在大鼠用乙醚麻醉后,將其懸掛在鐵架臺上,用包纏紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出口腔之外,在喉鏡照射下找到聲門,然后捏住大鼠鼻子,使大鼠用嘴呼吸,隨著聲門開合,將已吸好滴注藥物的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管;退出移液槍,繼續捏鼻3-8s,使其通過呼吸自動將滴注藥物吸入肺部,待聽到濕啰音,表明滴注成功。

滴注結束后,將大鼠繼續懸掛在鐵架臺上5-10s,保持身體自然垂落,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

前述的方法,將大鼠置于帶蓋的麻醉罐(例如玻璃罐或透明塑料罐)中進行麻醉,麻醉罐中放有蘸滿乙醚的棉花或紗布。

前述的方法,待大鼠用乙醚麻醉后,用細繩系住大鼠門牙,將其懸掛在鐵架臺上。

優選地,每次滴注劑量控制在300μl以內,滴注量在300μl以上,可分為兩次緩慢滴注。

本發明的目的還可以采用以下的技術措施來進一步實現。

1、滴注前期準備

將滴注中所需設備與儀器提前準備好,包括:鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細鐵絲或細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花或者紗布、計時器。

2、麻醉罐的制作:為能夠直觀地觀察到大鼠麻醉的效果,選用一透明玻璃或者塑料罐,根據大鼠體型選擇麻醉罐大小。將棉花或紗布放入罐中,最少將麻醉罐底部覆蓋,然后,將無水乙醚注入罐中,為避免大鼠身體沾染太多的乙醚,注入量以棉花或紗布不滴出乙醚為適。一般大鼠在5-10s內能夠達到完全麻醉的效果,操作多次后,可視情況添加無水乙醚,以保證麻醉效率。

3、簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾或鐵圈上系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾或鐵圈的高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

4、大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛在鐵架臺的細繩上,使其自然垂落。

5、定位氣管:按照步驟4操作后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出口腔之外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

6、藥物滴注:按步驟5操作后,另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管。退出移液槍,左手繼續捏鼻3-8s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

7、藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上5-10s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

本發明提供的大鼠滴注方法具有無創、無痛苦、經濟、快捷、精準等特點,相比于其他滴注方式具有良好的效果和優點:

(一)經過大量實踐證明,本方法成功率高,測試中對25只SD大鼠進行了5次造模,對大鼠滴注累計120次,成功116次,成功率高達96.67%。

(二)本發明的麻醉方法屬于無創式、無后遺癥式麻醉,此前麻醉方式基本上是以戊巴比妥鈉或水合氯醛結合阿托品,需要兩次注射,增加實驗動物的痛苦,同時,也將使注射誤傷大鼠幾率提高,并且,該藥物的麻醉效果不容易控制,麻醉過淺大鼠容易在手術中清醒掙扎造成誤傷,太深大鼠呼吸速率太低,滴注藥物后容易窒息或嗆死。如果麻醉中沒有結合使用阿托品,大鼠經戊巴比妥鈉或水合氯醛后,氣管內產生較多的粘液,也會造成窒息的危險。本發明采用乙醚結合自制麻醉罐能夠避免上述弊端,達到無創、無后遺癥的理想麻醉效果。

(三)本發明的滴注屬于無創傷安全式滴注,以往的滴注方式,暴露式的氣管插管法和頸部氣管切開插管法(TTIT)直接切開皮膚、暴露氣管,手術中給大鼠造成一定的機械創傷,術后也存在感染風險,而非暴露式的直視下導引鋼絲引導插管法(VLGIT),同樣需要硬質鋼絲導入插管,存在戳傷大鼠氣管的可能。

(四)本發明的滴注方法屬于快速、精準式滴注,以往的暴露式和非暴露式,因氣管暴露、氣管縫合,導管的插入等繁瑣的步驟,消耗大量的時間,一般每只大鼠滴注時間需要40s-300s,本發明滴注時間只需15s-30s,以往方法大部分采用注射器或進樣器,外加導管的輔助,增加了藥物量的消耗,本發明直接采用移液槍一步到位、操作快捷方便。

(五)本發明還具有所需器材簡易,容易獲取、制作簡單、經濟合理;滴注過程中不需要插管,操作簡單,容易掌握推廣;大鼠采用鐵架臺自然懸掛,減少了大鼠的痛苦與不適。

附圖說明

圖1為本發明實施例1-5中使用的麻醉罐。

圖2為本發明實施例1-5中使用的移液槍和槍頭。

圖3為本發明實施例1-5中使用的鐵架臺。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明,但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明,實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段,所用原料均為市售商品。

實施例1精準快速無創式大鼠滴注方法

1、材料與方法

1.1材料

鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花、計時器。

雄性健康SD大鼠25只,體量為230-260g,(SPF級,由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供,許可證號:SCXK(湘)2009-0012)。實驗動物分籠喂養,室內溫度保持在22±2℃,保持良好通風,每2天換墊料1次,每周用巴斯消毒液進行消毒,每2周清洗籠具一次。

1.2大鼠滴注操作方法

1.2.1麻醉罐的制作:本試驗中選用一透明塑料罐作為麻醉罐。將棉花放入罐中,使麻醉罐底部覆蓋,將適量的無水乙醚注入罐中。

1.2.2簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

1.2.3大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛只鐵架臺上的細繩上,使其自然垂落。

1.2.4定位氣管:將麻醉大鼠掛至鐵架臺細繩后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出之口腔外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

1.2.5藥物滴注:另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物100μl的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管,退出移液槍,左手繼續捏鼻6s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

1.2.6藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上8s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

2結果與分析

2.1滴注效果分析

本試驗大鼠共計25只,滴注藥物為懸浮液,滴注劑量為100μl/只,滴注時間平均耗時28.6s,整個造模過程從抓取大鼠、麻醉、滴注到大鼠完全清醒耗時78.4s,觀察一天后,滴注大鼠無異常現象,成功率100%。

本次滴注過程中,在各個環節的銜接中尚存在不夠嫻熟,稍顯生澀,因此,每只大鼠從抓取、麻醉、滴注、均勻分布藥物到清醒整個流程耗時平均達到78.4s,通過大量散試驗操作,操作者技術成熟、動作熟練、反應快速、配合默契的情況下,整個造模時間可以大大提高,縮短至60s以內完全可能。

實施例2精準快速無創式大鼠滴注方法

1、材料與方法

1.1材料

鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花、計時器

雄性健康SD大鼠25只,體量為245-290g,(SPF級,由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供,許可證號:SCXK(湘)2009-0012)。實驗動物分籠喂養,室內溫度保持在22±2℃,保持良好通風,每2天換墊料1次,每周用巴斯消毒液進行消毒,每2周清洗籠具一次。

1.2大鼠滴注操作方法

1.2.1麻醉罐的制作:本試驗中選用一透明塑料罐作為麻醉罐。將棉花放入罐中,使麻醉罐底部覆蓋,將適量的無水乙醚注入罐中。

1.2.2簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

1.2.3大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛只鐵架臺上的細繩上,使其自然垂落。

1.2.4定位氣管:將麻醉大鼠掛至鐵架臺細繩后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出之口腔外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

1.2.5藥物滴注:另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物200μl的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管,退出移液槍,左手繼續捏鼻6s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

1.2.6藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上8s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

2結果與分析

2.1滴注效果分析

本試驗大鼠共計25只,滴注藥物為懸浮液,滴注劑量為200μl/只,滴注時間平均耗時24.7s,觀察一天后,滴注大鼠無異常現象,成功率100%。

本次造模是在第一次造模后第三天進行的,滴注過程中,操作者技術較為嫻熟、動作較熟練、反應快速、配合默契,因此,每只大鼠從抓取、麻醉、滴注、均勻分布藥物到清醒整個流程耗時平均比第一次縮短10s左右,為68.4s。

實施例3精準快速無創式大鼠滴注方法

1、材料與方法

1.1材料

鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花、計時器

雄性健康SD大鼠25只,體量為265-326g,(SPF級,由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供,許可證號:SCXK(湘)2009-0012)。實驗動物分籠喂養,室內溫度保持在22±2℃,保持良好通風,每2天換墊料1次,每周用巴斯消毒液進行消毒,每2周清洗籠具一次。

1.2大鼠滴注操作方法

1.2.1麻醉罐的制作:本試驗中選用一透明塑料罐作為麻醉罐。將棉花放入罐中,使麻醉罐底部覆蓋,將適量的無水乙醚注入罐中。

1.2.2簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

1.2.3大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛只鐵架臺上的細繩上,使其自然垂落。

1.2.4定位氣管:將麻醉大鼠掛至鐵架臺細繩后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出之口腔外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

1.2.5藥物滴注:另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物300μl的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管,退出移液槍,左手繼續捏鼻6s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

1.2.6藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上8s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

2結果與分析

2.1滴注效果分析

本試驗大鼠共計25只,滴注藥物為懸浮液,滴注劑量為300μl/只,滴注時間平均耗時22.5s,整個造模過程從抓取大鼠、麻醉、滴注到大鼠完全清醒耗時58.2s,滴注過程中大鼠死亡1只,觀察一天后,其余大鼠無異常現象,成功率96.0%。

本次造模是在第二次造模后第三天進行的,滴注過程中,操作者技術嫻熟、動作熟練、反應快速、配合默契,大鼠死亡原因有可能是一次滴注劑量太大,大鼠呼吸動力不足,窒息而亡,因此,為找到本發明適合的藥物滴注劑量范圍,尚需進一步試驗。

實施例4精準快速無創式大鼠滴注方法

1、材料與方法

1.1材料

鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花、計時器

雄性健康SD大鼠25只,體量為285-345g,(SPF級,由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供,許可證號:SCXK(湘)2009-0012)。實驗動物分籠喂養,室內溫度保持在22±2℃,保持良好通風,每2天換墊料1次,每周用巴斯消毒液進行消毒,每2周清洗籠具一次。

1.2大鼠滴注操作方法

1.2.1麻醉罐的制作:本試驗中選用一透明塑料罐作為麻醉罐。將棉花放入罐中,使麻醉罐底部覆蓋,將適量的無水乙醚注入罐中。

1.2.2簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

1.2.3大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛只鐵架臺上的細繩上,使其自然垂落。

1.2.4定位氣管:將麻醉大鼠掛至鐵架臺細繩后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出之口腔外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

1.2.5藥物滴注:另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物400μl的移液槍快速插入聲門,將藥物滴注至氣管,退出移液槍,左手繼續捏鼻6s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

1.2.6藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上8s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

2結果與分析

2.1滴注效果分析

本試驗大鼠共計24只,滴注藥物為懸浮液,滴注劑量為400μl/只,滴注時間平均耗時23.8s,整個造模過程從抓取大鼠、麻醉、滴注到大鼠完全清醒耗時61.4s,滴注過程中大鼠死亡3只,觀察一天后,其余大鼠無異常現象,成功率87.5%。

本次造模是在第三次造模后第三天進行的,滴注過程中,操作者技術嫻熟、動作熟練、反應快速、配合默契,但是,相對于第三次滴注,此次滴消耗注時間增加,主要原因是滴注量增加,為避免大鼠窒息,滴注速度有所減緩;另外,相比前三次滴注,本次大鼠死亡3只,死亡率增加,總結前面滴注經驗,推測為大鼠一次性滴注劑量太大,呼吸困難,窒息而亡。為進一步驗證該推測是否正確,可以在下一個試驗中將400μl藥物分兩次滴注,最后比較滴注效果和死亡率。

實施例5精準快速無創式大鼠滴注方法

1、材料與方法

1.1材料

鐵架臺、移液槍、槍頭、小兒喉鏡、細繩、麻醉罐、無水乙醚、棉花、計時器

雄性健康SD大鼠25只,體量為305-365g,(SPF級,由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供,許可證號:SCXK(湘)2009-0012)。實驗動物分籠喂養,室內溫度保持在22±2℃,保持良好通風,每2天換墊料1次,每周用巴斯消毒液進行消毒,每2周清洗籠具一次。

1.2大鼠滴注操作方法

1.2.1麻醉罐的制作:本試驗中選用一透明塑料罐作為麻醉罐。將棉花放入罐中,使麻醉罐底部覆蓋,將適量的無水乙醚注入罐中。

1.2.2簡易手術臺的制作:取鐵架臺一個,將鐵夾系一根能夠承受大鼠重量的細繩,升高鐵夾高度,至能使上門牙掛在繩上的大鼠能伸展開。

1.2.3大鼠麻醉:抓取欲滴注的大鼠,快速密封至麻醉罐中,蓋緊麻醉罐,大鼠在5-10s內被麻醉,麻醉標準為倒下不動,呼吸較慢,似熟睡狀,快速從罐中取除大鼠,將大鼠上門牙懸掛只鐵架臺上的細繩上,使其自然垂落。

1.2.4定位氣管:將麻醉大鼠掛至鐵架臺細繩后,一人右手用包一層薄紗布的鑷子將大鼠舌頭夾住拉出之口腔外,用左手用拇指、食指輕輕順向拉出舌頭,右手放下鑷子,拿小兒喉鏡從口腔順著舌根照射,能清楚的看到大鼠的聲門隨著呼吸如魚嘴般開啟與閉合。

1.2.5藥物滴注:另一人左手捏住大鼠鼻子,大鼠用嘴呼吸,可見聲門一張一閉,右手持已吸好滴注藥物400μl的移液槍快速插入聲門,將藥物分兩次緩慢滴注至氣管,退出移液槍,左手繼續捏鼻8s,使其通過呼吸主動將滴注藥物吸入肺部,若聽到濕啰音,則說明滴注成功。

1.2.6藥物均勻分布:大鼠滴注結束后,繼續懸掛在細繩上8s,緩慢轉動大鼠,使藥物均勻分布到大鼠肺部。

2結果與分析

2.1滴注效果分析

本試驗大鼠共計21只,滴注藥物為懸浮液,滴注劑量為400μl/只,一次吸入400μl分兩次滴注只大鼠氣管。滴注時間平均耗時27.3s,整個造模過程從抓取大鼠、麻醉、滴注到大鼠完全清醒耗時66.7s,滴注過程中無大鼠死亡,觀察一天后,其余大鼠無異常現象,成功率100%。

本次造模是在第四次造模后第三天進行的,滴注過程中,操作者技術嫻熟、動作熟練、反應快速、配合默契,滴注劑量同樣為400μl,分為兩次,緩慢注入只大鼠氣管,滴注中無窒息死亡現象,第二天無異常現象,成功率100%。因劑量增加,滴注分次而緩慢,滴注時間相比第二次、第三次、第四次時間延長了,但是確保了成功率。

通過以上實施例,可以確定本發明滴注劑量在300μl以下,可以一次滴注,安全快捷,滴注量在300μl以上,分為兩次緩慢滴注,同樣能夠確保大鼠的成功率。

另外,在滴注過程中還需注意以下事項:第一、麻醉時一定要密切觀察動物的運動和呼吸狀態,防止麻醉過深或過淺;第二、麻醉前做好滴注準備,使麻醉和滴注操作做到無縫對接,提高效率;第三、事先準備蘸有乙醚的棉花團,以防大鼠滴注中蘇醒,如果蘇醒,迅速將棉花團堵住大鼠鼻孔,使其繼續麻醉,保證滴注順利進行。

實施例1-5中使用的麻醉罐、移液槍和槍頭以及鐵架臺的示意圖分別見圖1-圖3。

實施例1-5中試驗大鼠滴注量、滴注時間與成功率分析結果見表1。

表1試驗大鼠滴注量、滴注時間與成功率分析

項目 滴注量(μl) 滴注時間(s) 造模時間(s) 滴注數量(只) 成功率(%) 實施例一 100 28.6 78.4 25 100.0 實施例二 200 24.7 65.1 25 100.0 實施例三 300 22.5 58.2 25 96.0 實施例四 400一次滴注 23.8 61.4 24 87.5 實施例五 400兩次滴注 26.3 66.7 21 100.0

雖然,上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述,但在本發明基礎上,可以對之作一些修改或改進,這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此,在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進,均屬于本發明要求?;さ姆段?。

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