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维戈塞尔塔的赛程: 聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201610052691.9

申請日:

20160127

公開號:

CN105435134A

公開日:

20160330

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K36/9066,A61P35/00,A61K35/24 主分類號: A61K36/9066,A61P35/00,A61K35/24
申請人: 青島大學附屬醫院
發明人: 王海冀,張碧媛,曹偉紅
地址: 266003 山東省青島市江蘇路16號
優先權: CN201610052691A
專利代理機構: 北京冠和權律師事務所 代理人: 李建華
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610052691.9

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其原料藥包括炒白術、炙黃芪、茯苓、黨參、生甘草、法半夏、陳皮、當歸、白花蛇舌草、薏苡仁、白芍、莪術、半枝蓮、丹參、砂仁、麥冬、木香、藤梨根、炒麥芽、延胡索、川芎、五靈脂、枸杞子、熟地黃、重樓。本發明中藥制劑具有很好的治療胃癌的作用,并且改善患者帶瘤生存質量,適用于臨床推廣。

權利要求書

1.一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:原料藥包括炒白術、炙黃芪、茯苓、黨參、生甘草、法半夏、陳皮、當歸、白花蛇舌草、薏苡仁、白芍、莪術、半枝蓮、丹參、砂仁、麥冬、木香、藤梨根、炒麥芽、延胡索、川芎、五靈脂、枸杞子、熟地黃和重樓。2.如權利要求1所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:各原料藥的重量份分別為炒白術20重量份~30重量份、炙黃芪20重量份~30重量份、茯苓15重量份~25重量份、黨參35重量份~45重量份、生甘草10重量份~20重量份、法半夏10重量份~20重量份、陳皮15重量份~25重量份、當歸20重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~15重量份、薏苡仁10重量份~20重量份、白芍10重量份~20重量份、莪術15重量份~25重量份、半枝蓮10重量份~20重量份、丹參20重量份~30重量份、砂仁5重量份~15重量份、麥冬25重量份~35重量份、木香15重量份~25重量份、藤梨根10重量份~20重量份、炒麥芽20重量份~30重量份、延胡索20重量份~30重量份、川芎20重量份~30重量份、五靈脂5重量份~15重量份、枸杞子20重量份~30重量份、熟地黃15重量份~25重量份和重樓5重量份~15重量份。3.如權利要求1或2所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份~30重量份、炙黃芪25重量份~30重量份、茯苓15重量份~20重量份、黨參40重量份~45重量份、生甘草10重量份~15重量份、法半夏10重量份~15重量份、陳皮15重量份~20重量份、當歸25重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~10重量份、薏苡仁10重量份~15重量份、白芍15重量份~20重量份、莪術15重量份~20重量份、半枝蓮10重量份~15重量份、丹參25重量份~30重量份、砂仁5重量份~10重量份、麥冬30重量份~35重量份、木香20重量份~25重量份、藤梨根10重量份~15重量份、炒麥芽25重量份~30重量份、延胡索25重量份~30重量份、川芎20重量份~25重量份、五靈脂5重量份~10重量份、枸杞子25重量份~30重量份、熟地黃15重量份~20重量份和重樓5重量份~10重量份。4.如權利要求1至3所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份、炙黃芪25重量份、茯苓20重量份、黨參40重量份、生甘草15重量份、法半夏15重量份、陳皮20重量份、當歸25重量份、白花蛇舌草10重量份、薏苡仁15重量份、白芍15重量份、莪術20重量份、半枝蓮15重量份、丹參25重量份、砂仁10重量份、麥冬30重量份、木香20重量份、藤梨根15重量份、炒麥芽25重量份、延胡索25重量份、川芎25重量份、五靈脂10重量份、枸杞子25重量份、熟地黃20重量份和重樓10重量份。5.如權利要求1至4所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:所述中藥制劑是通過將上述原料藥提取后,搭配藥學上可接受的賦形劑獲得各種需要的劑型。6.如權利要求1至5所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:所述藥學上可接受的賦形劑包括藥學領域常規的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體和潤滑劑。7.如權利要求1至6所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:所述中藥制劑的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、注射液、注射用粉劑、透皮貼劑、軟膏劑、凝膠劑、栓劑、口服液、口服混懸液、注射用乳劑、口服乳劑、緩釋片劑、控釋片劑。8.如權利要求1至7所述的聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其特征在于:所述中藥制劑的劑型為口服液。9.權利要求1至8所述中藥制劑作為口服液時的制備方法,其特征在于,包括:第一步,取各原料藥材加醇濃度為70%~90%乙醇回流提取兩次,第一次加相對于原料藥質量之和6~10倍量乙醇,浸泡3h,回流提取2~4h,濾過,第二次加相對于原料藥質量之和3~7倍量乙醇,回流提取1~3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為50~60℃時1.10~1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末;第二步,取第一步獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

說明書

技術領域

本發明涉及中醫藥技術領域,尤其涉及一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑。

背景技術

胃癌(GastricCancer)是消化道最常見惡性腫瘤之一。世界范圍內最常見惡性腫瘤中胃癌居第四位,各地胃癌發生率各不相同。2009年,美國胃癌新發病例超過21130例,因胃癌死亡人數約10620例。中國是胃癌高發地區,患者幾乎占全球胃癌患者的一半,發病率男性40.8/10萬,女性18.6/10萬,分別為歐美發達國家的4.2~1.9倍和3.8~8.0倍,并且具有明顯的地區和城鄉差異,城市為15.3/10萬,農村為24.4/10萬。雖然城市發病率有下降趨勢,而據中國2002~2004年統計,大中城市如上海,胃癌死亡率男性為52.24/10萬,仍居惡性腫瘤發病第二位,女性為29.26/10萬,居惡性腫瘤發病第三位,發病部位仍然以胃竇為主。胃癌發病率隨年齡增長呈上升趨勢,45歲以下年齡相對少見,大多數患者在診斷時年齡在60-80歲,近年我國胃癌的發病有年輕化趨勢。

胃癌危險因素包括幽門螺桿菌(HP)感染、吸煙、高鹽飲食和N-亞硝基化合物(NOC)等其他飲食因素。HP可能主要是通過誘發胃粘膜炎癥反應而導致粘膜上皮細胞再生來促進胃癌發生。并且,HP感染能導致胃腺分泌胃酸下降,間接影響胃內NOC的合成和分解代謝,而具有較強的致癌作用。精神心理因素亦為重要危險因素。比較公認的意見是:心理因素-內分泌和腦神經介質改變-機體免疫功能下降-癌癥發生。

目前我國胃癌5年生存率約20%-30%,近20年來治療效果僅提高5%左右。胃癌雖是我國第三位最常見惡性腫瘤,但目前無全國性普查計劃,早期胃癌只在機會性檢查中發現1955-1956日本早期胃癌占胃癌病人3.8%,10年后增至35.5%,胃癌篩查結果導致在胃癌發病率未出現明顯下降情況下,胃癌死亡率則下降了50%-60%,5年生存率達70%。因此目前提高胃癌療效關鍵在于早期發現,早期診斷,早期治療。

胃癌的病因尚不明確,常見有胃炎和胃粘膜腸化生,但一般認為這些現象是胃癌的結果,而不是癌前病變。胃癌是一個長期的多因素作用、多基因參與的慢性增生性疾病。過去10多年分子病理學的系統研究己揭示胃癌發生發展過程中的許多分子機制,胃癌遺傳多態性是影響腫瘤發生的重要內因,基因組不穩定性、DNA高甲基化和組蛋白低乙?;且鷂赴┑腦縉誆”?,癌基因活化、抑癌基因失活、細胞周期調控因子和生長因子異常改變是多種基因改變的積累結果,也是胃癌發病機制之一。胃癌發生過程十分復雜,呈現多步驟、多基因復合的特點。流行病學研究認為,胃癌病因主要與生活環境和生活方式有關。遠端胃癌的主要風險因素是幽門螺桿菌感染和飲食,而胃食管返流性疾病和肥胖在近端胃癌的發展過程中起了重要的作用。

胃癌發病的分子機制是目前十分活躍的研究領域。胃癌形成的多步驟過程中,涉及到許多遺傳學和非遺傳學如表觀遺傳學(epigenetic)的改變,包括癌基因、抑癌基因、細胞周期調節因子、細胞粘附分子、轉移相關基因、DNA修復基因的改變和端粒酶的活化以及基因不穩定性、DNA甲基化等,均可使細胞增殖失控而導致惡性轉化、轉移。且這些改變因胃癌組織學類型的不同而不同。隨著研究的不斷深入,人們揭示了一系列遺傳學和表觀遺傳學的改變與胃癌發生發展有關。遺傳物質構成和數量改變是腫瘤形成的關鍵。癌基因激活,抑癌基因失活和體內修復機制異常是腫瘤發生的分子基礎。遺傳物質改變包括經典的遺傳學機制,如基因突變、缺失、易位、插入以及染色體數目和結構的改變等;10年來,表觀遺傳學學說在腫瘤發生的作用逐漸受到認識并成為腫瘤研究熱點。

胃癌是現代醫學中的一個病名,在中醫學中并無胃癌稱謂,但中醫對其卻早有認識。類似癥狀或體征的記載十分豐富,如中醫學的胃脘痛、噎膈、“伏梁”、反胃、“呢逆”、積聚等范疇。胃癌致病腫塊位于賁門者可出現吞咽困難等噎膈表現,位于幽門部者可出現反胃。

造成胃癌的病因病機有以下6點,寒溫不適、臟腑失調、痰濁血瘀、癌毒滯留、七情內傷、脾胃虛弱,其中最主要的病因為脾胃虛弱,脾為后天之本,氣血生化之源?!鍍⑽嘎邸て⑽感槭蕩瀆邸吩疲骸捌⑽鋼壬?,而元氣亦不能充,而諸病之所由生也?!蹦殼?,中醫腫瘤學者認為,脾胃虛弱是胃癌最主要的病因病機。病者平素飲食不節,以致脾胃損傷,運納失常,精液化生無源,以致衛氣無處以生。而邪毒內侵,蓄結不除,癌瘤易生。加之癌瘤生成后,邪毒內蘊,又重傷脾胃、導致脾胃虛弱;再則胃癌病人經手術、化學藥物治療后,脾胃又受戧伐,運納無權,表現為泛泛欲嘔、納呆、食后作脹、腹痛腹瀉等脾胃虛弱之象。

根據胃癌的病因和病機,派生出相應治療大法。如健脾養胃法;活血化瘀法;清熱解毒法;燥濕祛邪法;化痰散結法及補腎養陰法等。以上各治法在治療胃癌的實驗和臨床研究方面均顯示了良好的效果與前景,其中以健脾養胃、活血化瘀、清熱解毒三法為基本大法。但各個治法又不是機械的和孤立的,應當在辨證論治的基礎上聯合使用。而健脾養胃更是是基礎,貫穿于治療的全過程。在健脾養胃的治療大法基礎上,還需要兼顧改善癌前病變、改善術后癥狀、抑制復發及轉移、提高機體免疫功能、減輕放化療毒副反應等。

目前認為,胃癌手術后患者的化療應盡可能早點進行。然而術后患者全身狀況較差,單純化療效果并不理想,且化療藥物大多具有細胞毒性,在抑制腫瘤細胞生長的同時,也殺傷正常細胞,使患者術后免疫功能更加低下,臨床上因細胞減少和嚴重貧血等化療藥物毒副作用造成化療中斷或終止者并不少見。放療亦有此類副反應。因此,減少放化療的毒副作用,增加人體免疫功能,使放化療能安全、順利地完成就顯得十分必要。中醫在臨床上常應用健脾扶正的方法組方來達到此目的。

本發明中藥制劑通過理論分析,并進行一定樣本量的臨床觀察,進一步利用現代醫學技術進行體內外實驗研究以探討本發明中藥制劑抗腫瘤作用機理,為該方的臨床合理應用提供科學實驗依據,得出的結論證實,本發明中藥制劑具有很好的治療胃癌的作用,并且改善患者帶瘤生存質量,適用于臨床推廣。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,本發明中藥制劑聯合化藥,具有很好的治療胃癌的作用,并且改善患者帶瘤生存質量,適用于臨床推廣。

基于此,本發明提供了一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其原料藥包括炒白術、炙黃芪、茯苓、黨參、生甘草、法半夏、陳皮、當歸、白花蛇舌草、薏苡仁、白芍、莪術、半枝蓮、丹參、砂仁、麥冬、木香、藤梨根、炒麥芽、延胡索、川芎、五靈脂、枸杞子、熟地黃和重樓。

其中,所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術20重量份~30重量份、炙黃芪20重量份~30重量份、茯苓15重量份~25重量份、黨參35重量份~45重量份、生甘草10重量份~20重量份、法半夏10重量份~20重量份、陳皮15重量份~25重量份、當歸20重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~15重量份、薏苡仁10重量份~20重量份、白芍10重量份~20重量份、莪術15重量份~25重量份、半枝蓮10重量份~20重量份、丹參20重量份~30重量份、砂仁5重量份~15重量份、麥冬25重量份~35重量份、木香15重量份~25重量份、藤梨根10重量份~20重量份、炒麥芽20重量份~30重量份、延胡索20重量份~30重量份、川芎20重量份~30重量份、五靈脂5重量份~15重量份、枸杞子20重量份~30重量份、熟地黃15重量份~25重量份和重樓5重量份~15重量份。

其中,所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份~30重量份、炙黃芪25重量份~30重量份、茯苓15重量份~20重量份、黨參40重量份~45重量份、生甘草10重量份~15重量份、法半夏10重量份~15重量份、陳皮15重量份~20重量份、當歸25重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~10重量份、薏苡仁10重量份~15重量份、白芍15重量份~20重量份、莪術15重量份~20重量份、半枝蓮10重量份~15重量份、丹參25重量份~30重量份、砂仁5重量份~10重量份、麥冬30重量份~35重量份、木香20重量份~25重量份、藤梨根10重量份~15重量份、炒麥芽25重量份~30重量份、延胡索25重量份~30重量份、川芎20重量份~25重量份、五靈脂5重量份~10重量份、枸杞子25重量份~30重量份、熟地黃15重量份~20重量份和重樓5重量份~10重量份。

其中,所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份、炙黃芪25重量份、茯苓20重量份、黨參40重量份、生甘草15重量份、法半夏15重量份、陳皮20重量份、當歸25重量份、白花蛇舌草10重量份、薏苡仁15重量份、白芍15重量份、莪術20重量份、半枝蓮15重量份、丹參25重量份、砂仁10重量份、麥冬30重量份、木香20重量份、藤梨根15重量份、炒麥芽25重量份、延胡索25重量份、川芎25重量份、五靈脂10重量份、枸杞子25重量份、熟地黃20重量份和重樓10重量份。

其中,本發明提供的中藥制劑是通過將上述原料藥提取后,搭配藥學上可接受的賦形劑獲得各種需要的劑型。

其中,所述藥學上可接受的賦形劑包括藥學領域常規的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體和潤滑劑。

其中,所述中藥制劑的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、注射液、注射用粉劑、透皮貼劑、軟膏劑、凝膠劑、栓劑、口服液、口服混懸液、注射用乳劑、口服乳劑、緩釋片劑、控釋片劑。

其中,所述中藥制劑的劑型為口服液。

本發明還提供了上述中藥制劑作為口服液時的制備方法,其包括:

第一步,取各原料藥材,混合在一起,加醇濃度為70%~90%乙醇回流提取兩次,第一次加相對于原料藥質量之和6~10倍量乙醇,浸泡3h,回流提取2~4h,濾過,第二次加相對于原料藥質量之和3~7倍量乙醇,回流提取1~3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為50~60℃時1.10~1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末;

第二步,取第一步獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

有益的技術效果

本發明中藥制劑聯合化藥,具有很好的治療胃癌的作用,并且改善患者帶瘤生存質量,適用于臨床推廣。

具體實施方式

本發明提供了一種聯合化療藥治療胃癌的中藥制劑,其原料藥包括炒白術、炙黃芪、茯苓、黨參、生甘草、法半夏、陳皮、當歸、白花蛇舌草、薏苡仁、白芍、莪術、半枝蓮、丹參、砂仁、麥冬、木香、藤梨根、炒麥芽、延胡索、川芎、五靈脂、枸杞子、熟地黃和重樓。

進一步優選,所述中藥制劑僅由上述原料藥制備而成。

所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術20重量份~30重量份、炙黃芪20重量份~30重量份、茯苓15重量份~25重量份、黨參35重量份~45重量份、生甘草10重量份~20重量份、法半夏10重量份~20重量份、陳皮15重量份~25重量份、當歸20重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~15重量份、薏苡仁10重量份~20重量份、白芍10重量份~20重量份、莪術15重量份~25重量份、半枝蓮10重量份~20重量份、丹參20重量份~30重量份、砂仁5重量份~15重量份、麥冬25重量份~35重量份、木香15重量份~25重量份、藤梨根10重量份~20重量份、炒麥芽20重量份~30重量份、延胡索20重量份~30重量份、川芎20重量份~30重量份、五靈脂5重量份~15重量份、枸杞子20重量份~30重量份、熟地黃15重量份~25重量份和重樓5重量份~15重量份。

進一步優選,所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份~30重量份、炙黃芪25重量份~30重量份、茯苓15重量份~20重量份、黨參40重量份~45重量份、生甘草10重量份~15重量份、法半夏10重量份~15重量份、陳皮15重量份~20重量份、當歸25重量份~30重量份、白花蛇舌草5重量份~10重量份、薏苡仁10重量份~15重量份、白芍15重量份~20重量份、莪術15重量份~20重量份、半枝蓮10重量份~15重量份、丹參25重量份~30重量份、砂仁5重量份~10重量份、麥冬30重量份~35重量份、木香20重量份~25重量份、藤梨根10重量份~15重量份、炒麥芽25重量份~30重量份、延胡索25重量份~30重量份、川芎20重量份~25重量份、五靈脂5重量份~10重量份、枸杞子25重量份~30重量份、熟地黃15重量份~20重量份和重樓5重量份~10重量份。

最優選,所述中藥制劑中各原料藥的重量份分別為炒白術25重量份、炙黃芪25重量份、茯苓20重量份、黨參40重量份、生甘草15重量份、法半夏15重量份、陳皮20重量份、當歸25重量份、白花蛇舌草10重量份、薏苡仁15重量份、白芍15重量份、莪術20重量份、半枝蓮15重量份、丹參25重量份、砂仁10重量份、麥冬30重量份、木香20重量份、藤梨根15重量份、炒麥芽25重量份、延胡索25重量份、川芎25重量份、五靈脂10重量份、枸杞子25重量份、熟地黃20重量份和重樓10重量份。

根據胃癌的發病機制,中醫總結歸納出健脾養胃、活血化瘀、清熱解毒三法為基本大法,因此本發明制劑在三法的指導下,組方配伍用藥:

1.健脾養胃

本發明制劑補脾益氣藥用炒白術、炙黃芪、黨參、生甘草、法半夏、茯苓,其中白術炒用、黃芪炙用,增其功效;胃癌導致中焦脾胃功能失常,故用行氣、利水消腫藥陳皮、木香、砂仁、茯苓、薏苡仁,以條暢中焦,疏利氣機,加入炒麥芽、法半夏、砂仁、薏苡仁有健脾開胃功效,顧護胃氣,使患者能食,以補后天以養先天;

2.清熱解毒

胃癌患者正虛邪實,清熱解毒亦為要務,故使用臨床治療消化道腫瘤具有明確功效的中藥藥物,如白花蛇舌草、薏苡仁、半枝蓮、藤梨根、重樓等,以求邪毒得去,正氣得安;

3.活血化瘀

現代醫學認為,胃癌的發病與痰濁血瘀內阻有關,故治療當以活血化瘀、豁痰除結為治法,本發明中藥制劑使用當歸、白芍、熟地黃、丹參、莪術活血化瘀,養血生新;病程日久,導致正氣不足,陽氣虧損,亦生痰生濕,故用法半夏、茯苓、陳皮溫化寒痰;熱毒內盛,傷陰耗血,故加入麥冬、枸杞子滋陰潤燥;胃癌進展過程中,嚴重影響患者生活質量的就是癌性疼痛,因此本發明中藥制劑加入活血止痛藥川芎、延胡索、五靈脂行氣活血止痛,加入生甘草、白芍酸甘化陰止痛,改善患者生存質量,并且可以有效減少癌癥患者晚期對于嗎啡等止痛藥的使用及依賴程度。

對全方26味藥性味歸經分析表明,甘、苦、辛味藥同用,溫、寒、平性藥共存,藥物入脾胃肝經。甘能補、能緩、能和,具有補益、和中、緩急止痛的作用;苦能泄、能燥、能堅,有破血消癥的作用;辛,能散能行,具有行氣、行血的作用。全方合用,益氣健脾,引藥歸經,提高療效的作用。取得了很好的臨床療效。

各原料藥藥理如下:

炒白術:拉丁名Atractylodesmacrocephala,味苦,甘,性溫,歸脾、胃經,健脾益氣,燥濕利水,止汗,安胎。用于脾虛食少,腹脹泄瀉,痰飲眩悸,水腫,自汗,胎動不安。

炙黃芪:拉丁名astragaliradix,味甘,性溫,入脾、肺經,有補益脾肺,升舉陽氣、固表止汗,托瘡生肌等功效,主要用于脾肺氣虛所致之乏力食少便溏,心悸氣短,中氣下陷之臟器下垂,氣不攝血之崩漏便血,久瀉脫肛;表虛不固之自汗盜汗,氣血不足等證。

茯苓:味甘、淡,性平,入脾、肺、膀胱、心經,有滲濕利水、健脾寧心的作用,主要用于水濕停滯之水腫,小便不利;濕熱蘊結之熱淋,脾虛濕困之食少便溏、痰飲停滯、癲癇等證。

黨參:味甘,性平,歸肺、脾經,具有補氣益脾,養血生津的功效,主治脾肺氣虛或氣血兩虛之倦怠乏力、氣短,咳嗽自汗等癥狀,黨參長于補脾養胃,調理中焦,兼有養血的作用,其性平,健脾運而不燥;滋味陰而不濕,能夠改善機體的免疫狀態,提高抗病能力,促進消化吸收,提高新陳代謝,促進腸道對營養物質的吸收。

生甘草:拉丁名GlycyrrhizaeRadixetRhizoma,味甘,性平,入十二經,有清熱解毒,調和藥性,祛痰止咳的作用,并能健脾和中,緩急止痛,主要用于脾胃虛弱之腹脹納呆,乏力;能緩解腹中拘攣性疼痛,緩和某些藥物的烈性和毒性,減輕藥物對機體的毒副作用或對胃腸道的刺激,通過加入甘草能起到補氣中和,調和各組分的作。

法半夏:味辛、性溫,歸脾、胃、肺經,具有燥濕化痰的功效,主治痰多咳嗽,風痰眩暈,痰厥頭痛等證。

陳皮:味辛、苦,性溫,歸脾、肺經,具有理氣健脾,燥濕化痰的功效,主治脾胃氣滯,濕濁中阻所致之脘腹脹滿,惡心嘔吐,食少納呆,胃寒氣逆或胃有虛熱之嘔逆少食等證。

當歸:拉丁名angelicaesinensisradix,味甘、辛、苦,性溫,歸肝、心、脾經,具有補血活血,調經止疼,潤腸通便的功效,主治心血不足之頭目昏眩,倦怠乏力,心悸氣短,及其他血虛證;血??招?,沖任虛寒或淤血阻滯之月經不調,量少衍期等證。

白花蛇舌草:味苦、甘,性寒,入心,肝,脾,大腸經,具有清熱解毒,利水滲濕的作用,用于肺熱喘咳,咽喉腫痛,腸癰,癤腫瘡瘍,毒蛇咬傷,熱淋澀痛,水腫,痢疾,腸炎,濕熱黃疸,癌腫等證。

薏苡仁:性涼,味甘、淡,歸脾、胃、肺經。具有健脾滲濕、清熱排膿、除痹、利水的功能,用于脾胃虛弱,便溏腹瀉,或婦女帶下病,脾虛濕盛水腫,小便不利,或腳氣腫痛;濕熱痹痛,手足拘攣,酸楚疼痛;肺癰咳唾膿痰,或腸痛拘急腹痛。

白芍:味苦、酸,性涼,入肝、脾經,具有養血柔肝,緩中止痛,斂陰收汗的作用,主治胸腹脅肋疼痛,瀉痢腹痛,自汗盜汗,陰虛發熱,月經不調,崩漏,帶下等證。

莪術:味辛、苦,性溫,入肝、脾經,具有破血行氣,消積止痛的功效,用于氣滯血瘀所致的癥瘕痞塊,胸腹瘀痛,閉經,痛經,脘腹脹痛,跌打損傷,血瘀腫痛等證,莪術能明顯增加股動脈血流量,抑制血小板聚集和抗血栓形成。

半枝蓮:味辛、苦,性寒,入肺經、肝經、腎經,具有清熱解毒、散瘀止血、利尿消腫的作用,主治:熱毒癰腫;咽喉疼痛;肺癰;腸癰;瘰疬;毒蛇咬傷;跌打損傷;吐血;衄血;血淋;水腫;腹水及癌癥。

丹參:味苦、性寒,入心、肝經,有活血化瘀、祛瘀生新、涼血寧心的作用,主要用于血瘀氣滯之心胸,胸脅刺痛,胸悶氣短,腹脹;婦女氣血不和之月經不調,經痛經閉;氣血瘀滯,心腹疼痛等證。

砂仁:拉丁名AmomiFructus,味辛,性溫,歸脾經、胃經、腎經,具有化濕開胃,溫脾止瀉,理氣安胎的功效,用于濕濁中阻,脘痞不饑,脾胃虛寒,嘔吐泄瀉,妊娠惡阻,胎動不安等證。

麥冬:味甘、微苦,性微寒,入心、肺、胃經,具有養陰潤肺、化痰止咳、清熱養心的功效,主治燥邪傷肺或陰虛肺燥有熱之干咳痰黏,勞嗽咳血,咽干鼻燥,肺癰,熱傷胃陰或胃陰不足所致的口干咽燥,舌紅少苔,胃脘隱痛,內熱消渴,大便燥結,心陰虛及溫病熱邪擾及心營而致的心煩不眠,舌絳而干等證。

木香:味辛、苦,性溫,入脾、胃、大腸、膽經,有星期止痛的作用,能升降諸氣,又長于行腸胃之滯,導三焦之壅;凡氣機阻滯之證,如腸胃氣滯,上為嘔吐,中為脘腹脹滿,下為泄瀉,還可用于腸胃濕熱積滯之痢疾,里急后重等癥狀,對傳染性胃腸炎、傷寒桿菌、枯草桿菌、痢疾桿菌有抑制作用。

藤梨根:拉丁名Actinidiaarguta(Sieb.&Zucc)Planch.exMiq.,味酸、澀,性涼,具有清熱解毒,清熱利濕的功效,防腫瘤抗癌,祛風除濕,利尿止血,解毒消腫,消化不良、嘔吐、風濕痹痛、風濕骨痛、消化道癌腫、消化道腫瘤、癰瘍瘡癤、風濕骨痛及黃疸等證。

炒麥芽:味甘,性平,歸脾、胃經,具有行氣消食,健脾開胃,退乳消脹的功效,用于食積不消,脘腹脹痛,脾虛食少,乳汗郁積,乳房脹痛,婦女斷乳,生麥芽健脾和胃通乳等證。

延胡索:味辛、苦,性溫,入肝、脾經,具有活血散瘀,行氣止痛的作用,用于氣滯血瘀引起的各種痛證,尤為心腹疼痛所常用,如肝郁化熱,肝胃不和之胃脘腹脹,具有鎮痛的作用。

川芎:味辛,性溫,歸肝、膽、心包經,具有活血行氣,祛風止痛的功效,主治月經不調;經閉痛經;產后瘀滯腥痛;癥瘕腫塊;胸脅疼痛;頭痛眩暈;風寒濕痹;跌打損傷;癰疽瘡瘍等證。

五靈脂:味甘,性溫,入肝經,具有活血散瘀的功效,用于心腹淤血作痛,痛經,血瘀經閉,產后淤血腹痛等證。

枸杞子:拉丁名lyciifructus,味甘、性平,入肝、腎經,有補益肝腎、養血補血、益精明目、潤肺止咳的作用,主要用于肝腎兩虛、精血不足之腰膝酸軟、頭暈耳鳴、遺精耳鳴、自汗乏力;腎陽不足之陽痿、不育;陰精虧損、肝血不足之眼目昏花以及陰虛勞嗽等證。

熟地黃:又名熟地,味甘,性微溫,入肝、腎經,具有補血滋陰,益精填髓的作用,用于血虛萎黃;眩暈,心悸,失眠,月經不調,崩不止;肝腎陰虧,盜汗,足膝疼痛,腰膝酸軟,耳鳴耳聾,頭目昏花;遺精陽痿;不育不孕;月經不調;崩漏下血;須發早白;消渴;便秘;腎虛喘促等證。

重樓:為百合科植物云南重樓或七葉一枝花的干燥根莖。其味苦,性微寒。具有清熱解毒,消腫止痛,涼肝定驚之功效,常用于疔瘡癰腫,咽喉腫痛,蛇蟲咬傷,跌撲傷痛,驚風抽搐等證。

本發明提供的中藥制劑是通過將上述原料藥提取后,搭配藥學上可接受的賦形劑獲得各種需要的劑型??捎玫囊┭峽山郵艿母承渭量梢允且┪鎦萍亮煊蛑腥魏緯9嫻母承渭?,特定賦形劑的選擇將取決于用于治療特定患者的給藥方式或疾病類型和狀態。用于特定給藥模式的合適藥物組合物的制備方法完全在藥物領域技術人員的知識范圍內。例如,可以作為藥學上可接受的賦形劑包括藥學領域常規的稀釋劑、載體、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體和潤滑劑等。必要時,還可以在藥物組合物中加入香味劑、防腐劑和甜味劑等。

上述各種劑型的中藥制劑均可以按照藥學領域的常規方法制備。具體地說,根據本發明的中藥制劑的劑型包括但不限于:片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、注射液、注射用粉劑、透皮貼劑、軟膏劑、凝膠劑、栓劑、口服溶液、口服混懸液、注射用乳劑、口服乳劑、緩釋片劑、控釋片劑等,優選制備成口服溶液的形式。

本發明還提供了上述中藥制劑作為口服液時的制備方法,其包括:

第一步,取各原料藥材,混合在一起,加醇濃度為70%~90%乙醇回流提取兩次,第一次加相對于原料藥質量之和6~10倍量乙醇,浸泡3h,回流提取2~4h,濾過,第二次加相對于原料藥質量之和3~7倍量乙醇,回流提取1~3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為50~60℃時1.10~1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末;

第二步,取第一步獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

以下采用實施例來詳細說明本發明的實施方式,借此對本發明如何應用技術手段來解決技術問題,并達成技術效果的實現過程能充分理解并據以實施。

實施例1口服液1

取炒白術25g、炙黃芪25g、茯苓20g、黨參40g、生甘草15g、法半夏15g、陳皮20g、當歸25g、白花蛇舌草10g、薏苡仁15g、白芍15g、莪術20g、半枝蓮15g、丹參25g、砂仁10g、麥冬30g、木香20g、藤梨根15g、炒麥芽25g、延胡索25g、川芎25g、五靈脂10g、枸杞子25g、熟地黃20g和重樓10g,混合在一起,加醇濃度為80%乙醇回流提取兩次,第一次加4kg乙醇,浸泡3h,回流提取4h,濾過,第二次加2.5kg乙醇,回流提取3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為60℃時1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末,取獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

實施例2口服液2

取炒白術25g、炙黃芪25g、茯苓15g、黨參40g、生甘草10g、法半夏10g、陳皮15g、當歸25g、白花蛇舌草5g、薏苡仁10g、白芍15g、莪術15g、半枝蓮10g、丹參25g、砂仁5g、麥冬30g、木香20g、藤梨根10g、炒麥芽25g、延胡索25g、川芎20g、五靈脂5g、枸杞子25g、熟地黃15g和重樓5g,混合在一起,加醇濃度為80%乙醇回流提取兩次,第一次加3.5kg乙醇,浸泡3h,回流提取4h,濾過,第二次加2kg乙醇,回流提取3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為60℃時1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末,取獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

實施例3口服液3

取炒白術30g、炙黃芪30g、茯苓20g、黨參45g、生甘草15g、法半夏15g、陳皮20g、當歸30g、白花蛇舌草10g、薏苡仁15g、白芍20g、莪術20g、半枝蓮15g、丹參30g、砂仁10g、麥冬35g、木香25g、藤梨根15g、炒麥芽30g、延胡索30g、川芎25g、五靈脂10g、枸杞子30g、熟地黃20g和重樓10g,混合在一起,加醇濃度為80%乙醇回流提取兩次,第一次加4kg乙醇,浸泡3h,回流提取4h,濾過,第二次加2.5kg乙醇,回流提取3h,濾過,合并濾液,減壓蒸發濃縮至相對密度為60℃時1.15的浸膏,加入醇濃度為95%乙醇使含醇量為70%,靜置24小時,取上清液,回收溶劑,粉碎成干粉,粉碎成粉末,取獲得的300g粉末,并加水適量溶解完全,以40%氫氧化鈉溶液調節pH值至7.0,攪勻,4℃冷藏72小時,濾過,濾液加入蔗糖300g,攪拌使溶解,再加入香精15g,加水制成1000ml,攪勻,靜置12小時,濾過,灌裝,滅菌,即得。

實施例4藥物毒理學試驗

一、急性毒性實驗

考察SD大鼠24小時內3次按最大濃度及最大灌胃體積經口給予本發明中藥口服液后,動物所產生的急性毒性反應及毒性反應的主要靶器官,為臨床急性大劑量用藥提供安全性依據。

實驗動物:SD大鼠,等級:SPF級,性別:雌雄各半,數量:40只,體重180~220g。

實驗藥物:本發明實施例1制備的口服液1,濃縮成生藥濃度1.15g/ml,備用。

動物飼養環境條件:山東中醫藥大學基礎醫學院實驗動物房實驗動物屏障系統,溫度20~26℃,濕度40~70%。

飼料:鼠飼料,購自于華英生物技術有限公司

給藥途徑:灌胃,給藥體積40ml/kg,24小時內給藥3次。

動物分組:取檢疫合格的SD大鼠稱重,按體重隨機分為2組,每組動物20只,雌雄各半。

給藥:各鼠禁食不禁水,12小時后,給藥組按40ml/kg體重灌胃給予1.15g/ml的實施例1制備的口服液1,24小時內給藥3次,然后連續觀察14天。

一般癥狀觀察:觀察內容包括飲水、進食,外觀體征、一般行為活動。

觀察時間:給藥后連續觀察14天。

觀察頻率:試驗當天給藥后1/2、1、2、3、4、6、8h。試驗第2天至第14天,每日上午、下午各觀察一次。

觀察記錄:記錄毒性反應癥狀出現、加重、減輕和死亡的時間。

體重:給藥后第2天起隔日稱量SD大鼠體重。

解剖觀察:給藥第14天,處死并大體解剖動物,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器有無病變,有病變臟器進行病理檢查。

統計方法:使用SPSS13.0軟件,統計學方法為t檢驗。

實驗結果

一般癥狀觀察結果

24小時內3次灌胃本發明中藥口服液后,SD大鼠飲水、進食、外觀體征、一般行為活動均正常,觀察14天未見SD大鼠死亡。

體重觀察結果

給藥后SD大鼠活動正常。觀察14日內,動物未見死亡,一般狀況良好,飲食、二便正常,且外觀、皮毛、行為、呼吸均正常,鼻、眼、口腔無異常分泌物,除給藥組雄性大鼠給藥后第2天體重與對照組比較差異有非常顯著性意義(P<0.01)外,未見其它明顯異常反應。

解剖觀察結果

觀察結束后處死SD大鼠,大體解剖肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各主要臟器色澤、形狀、大小等未見異常。

最大給藥量計算

本發明中藥口服液SD大鼠灌胃給藥的最大給藥量為90g/kg,該劑量以臨床成人(體重按60kg計)日用劑量為30g折算,相當于臨床成人用量(0.5g/kg)的180倍,現代藥理學認為,動物實驗給藥為人體給藥量的100倍以上,而無明顯毒副作用且無遲發毒性反應,即可認為該藥無明顯毒副作用,因此通過本發明中藥制劑急性毒性實驗研究,其給藥劑量為人體給藥劑量的180倍,可以認為其具有很好的安全性。

本發明長期毒性實驗研究

考察SD大鼠30內,每日連續2次給藥,按最大濃度的0.7倍和0.49倍經口給予本發明中藥口服液后,動物所產生的慢性毒性反應及毒性反應的主要靶器官,為臨床長期用藥提供安全性依據。

實驗動物:同急毒性實驗。

實驗藥物:本發明中藥實施例1制備的口服液1,配置成相當于生藥濃度0.805g/ml、0.5635g/ml,備用。

動物飼養與管理:同急毒性實驗。

給藥途徑:灌胃,給藥體積40ml/kg,每日給藥2次,連續給藥30天。

動物分組:取檢疫合格的SD大鼠稱重,按體重隨機分為3組,每組動物20只,雌雄各半。

給藥:各鼠禁食不禁水,給藥組按40ml/kg體重灌胃給予生藥濃度0.805g/ml、0.5635g/kg的實施例1制備的口服液1,每日給藥2次,然后連續觀察30天。

觀察項目與指標:同急毒性實驗。

統計方法:統計學方法為t檢驗。

實驗結果

一般癥狀觀察結果:每日2次灌胃本發明中藥口服液后,SD大鼠飲水、進食、外觀體征、一般行為活動均正常,連續觀察30天未見SD大鼠死亡。

體重觀察結果:給藥后SD大鼠活動正常。觀察30日內,動物未見死亡,一般狀況良好,飲食、二便正常,且外觀、皮毛、行為、呼吸均正常,鼻、眼、口腔無異常分泌物,與對照組比較,未見明顯異常反應,差異無統計學差異(P>0.05)。

解剖觀察結果:觀察結束后處死SD大鼠,大體解剖肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各主要臟器色澤、形狀、大小等未見異常。

最大給藥量計算:本發明中藥口服液SD大鼠灌胃給藥的最大給藥量為64.4g/kg、45.08g/kg,該劑量以臨床成人(體重按60kg計)日用劑量為30g折算,相當于臨床成人用量(0.5g/kg)的128.8倍、90.16倍,現代藥理學認為,動物實驗給藥連續給藥30天,動物無明顯毒副作用,亦無明顯的蓄積毒性,可以認為其具有很好的安全性。

實施例5臨床實驗研究

一般資料

本研究所選擇的172例病例均來自腫瘤科自2013年1月~2014年6月期間住院治療的患者。所有患者均經電子胃鏡或手術后病理及CT證實為胃癌,按照世界衛生組織胃癌分期標準均確診為III~IV期,并能接受治療、順利完成療程者作為觀察對象。其中男性95例,女性77例,年齡最小29歲,最大79歲,病程在1~20月不等;按照入院先后順序,隨機分為治療組(中藥聯合化療)96例,對照組(單純化療)76例。其中治療組,男56例,女40例;年齡最小29歲,最大78歲,平均年齡65.8歲;初治42例,復治54例;臨床分期:IIIb期43例,IV期53例。對照組,男39例,女37例;最小年齡31歲,最大79歲,平均年齡62.4歲;初治36例,復治40例;臨床分期:IIIb期34例,IV期42例。兩組患者在性別、年齡、原發病等方面差異無顯著性意義(P>0.05),具有可比性。

治療方法

對照組

符合化療條件、無化療相關禁忌癥的患者,根據病情需要,選用聯合化療方案,所用方案為:FOLFOX4方案(L-OHP85mg/m2,靜脈滴注2h,第1天;CF200mg/m2,靜脈滴注2h,第2、3天;5-FU400mg/m2,靜脈推注,第2、3天;5-FU600mg/m2,持續靜注22h,第2、3天),14天為1個周期,連用4周期,評價療效。在化療期間及化療后予以對癥支持治療,如靜脈給予奧美拉唑注射液、托烷司瓊注射液等。

治療組

治療方案同對照組,同時加用本發明實施例1制備的中藥口服液,每日2劑,每劑50ml,連服2個月。

觀察指標

主要觀察指標有:惡心或嘔吐、食欲、腹脹等消化道反應,白細胞計數、紅細胞計數、血紅蛋白、血小板計數等血細胞學檢查,Karnofsky評分,生活質量等,分別于治療前、治療后1周內作觀察記錄。

消化道反應

評分標準根據積分法計算療效指數,判定臨床癥狀療效。

顯效:癥狀消失,或療效指數≥75%;

有效:癥狀減輕,療效指數≥50%;穩定:25%≤療效指數<50%;

無效:療效指數<25%。

血細胞學

主要指標WBC,RBC,HGB及PLT。根據WHO制定的《抗癌藥物毒性反應分度標準》評定。

Karnofsky評分

治療后KPS評分升高≥10分為提高,減少≥10分為降低,介于二者之間為穩定。總有效率=(提高+穩定)/N。

腫瘤患者的生活質量(QOL)

標準生活質量滿分為60分,生活質量極差為<20分,差為21~30分,一般為31~40分,較好為41~50分,良好為51~60分。

腫瘤客觀療效評定標準根據WHO腫瘤病灶分類及療效評價標準。

統計分析方法

所有數據,采用SPSSl3.0統計軟件進行統計學處理。

結果

消化道反應比較

治療后,兩組患者消化道反應變化差異有統計學意義(P<0.05)。說明在胃癌患者化療過程中加服本發明中藥制劑能夠提高患者的耐受能力,減輕化療副作用。見表1。

表1兩組消化道反應比較

組別 N 顯效 有效 穩定 無效 總有效率% 對照組 77 13 23 32 9 88.31 治療組 95 21 39 33 2 97.89

注:對照組和治療組比較有統計學意義(P<0.05)。

骨髓抑制反應比較

兩組治療后比較分析,單純化療組骨髓抑制現象較為顯著,白細胞下降尤以III度、IV度為多,明顯高于中藥復方加化療組(P<0.01);兩組治療對紅細胞及血小板的影響差別不大(P>0.05)。

KPS評分結果

治療前對照組和治療組在KPS評分差異無統計學意義(P>0.05),兩組具有可比性。治療后,治療組KPS評分提高例數較對照組明顯增多,統計學分析差異非常顯著(P<0.01);兩組總有效率分別為58.33%和88.89%,經統計學分析有非常顯著性差異(P<0.01)。見表2。

表2KPS評分結果

組別 N 提高 穩定 下降 總有效率% 對照組 77 15 47 15 80.52 治療組 95 31 60 4 95.79

生活質量比較

治療后治療組(中藥加化療組)的生活質量顯著優于對照組(單純化療組)的生活質量,兩組治療后與治療前生活質量總分比較具有顯著差異(P<0.01)。

近期腫瘤客觀療效比較

治療后治療組(中藥加化療組)有效率高于對照組(單純化療組),但無統計學意義(P>0.05);但穩定率明顯優于對照組(P<0.05)。見表3。

表3近期腫瘤客觀療效比較

組別 N CR PR NC PD CR+PR CR+PR+NC 對照組 77 1 32 29 15 33 62 治療組 95 15 29 38 13 44 82

總之,中西醫結合治療中晚期胃癌,療效可靠。既能提高機體的免疫力、增加療效,又能減輕化療所造成的相關毒副作用增強患者對化療的耐受能力,是中晚期胃癌治療行之有效的方法。在胃癌的治療中值得廣泛應用及進一步研究。

實施例6動物實驗

實驗動物

裸鼠,體重25~31g。

細胞株

細胞株:SGC-7901胃癌細胞株,購自中科院上海細胞庫。

儀器

免疫組化:TP1020

LEICADM1000光學顯微鏡:德國Leica公司產品

MiniSee圖像釆集系統WesternBlotting:

酶標儀:SPECTRAmaxPlus384,MolecularDevices公司

電泳系統:Mini-ProtenTetraSystem,Bio-RAD公司

實驗藥物及試劑

本發明實施例1制備的中藥口服液1;

蝎毒多肽:購自江蘇省中醫藥研究院分子生物學研究室;

索拉菲尼武漢豐竹林化學科技有限公司(批號01109356);。

免疫組化主要抗體試劑:

ki67:福州邁新生物公司(MAB-0129);

BCL-2福州邁新生物公司(MAB-0014);

VEGF(c6081152):美國USBiological公司;

MaxVision試劑盒:福州邁新生物公司提供(KIT-5030);

DAB顯色試劑等:均由福州邁新生物公司提供。

方法

分組與給藥

裸鼠62只,右側腋下皮下接種胃癌細胞株7901,濃度為107mL,接種體積為0.1mL/只,待瘤體積生長到10mm時,處死裸鼠,無菌取出瘤組織,用解剖剪剪成3min*3mm*3mm體積的瘤塊,每只裸鼠右側腋下皮下接種一塊瘤組織,待瘤體積大于50mm3,隨機分為模型對照組11只、本發明中藥制劑組(簡稱中藥組)11只,蝎毒多肽組10只,索拉非尼組10只,中藥+蝎毒多肽組10只,中藥+索拉非尼組10只。模型對照組灌胃給以生理鹽水,本發明中藥制劑組灌胃給以本發明中藥口服液1,生藥劑量為24g/kg,蝎毒多肽組腹腔注射給以蝎毒多肽,劑量為6rng/kg,索拉菲尼組灌胃給以索拉菲尼,劑量為30nig/kg。所有分組每三天稱重一次。給藥14天后,測量體重并計算腫瘤指數(瘤重mg/體重g)。成功取材時模型對照組9只、本發明中藥制劑組8只,蝎毒多肽組8只,索拉非尼組8只,中藥+蝎毒多肽組8只,中藥+索拉非尼組8只。取瘤塊分別置于中性甲酵固定和液氮速凍后-80℃保存。

組織標本的釆集與處理動物處死后,取瘤塊組織用10%中性甲酸固定,石蠟包埋用于檢測。

HE染色過程

①標本固定:取大鼠肺組織,10%中性甲酸固定,甲酸容量為組織標本的2-3倍。②切片:10%中性甲酸固定24h后取大鼠組織,逐級酒精脫水,二甲苯透明、浸蠟,石蠟包埋,常規切片4um,45℃水浴中拂片,8℃烤箱烤片,40min。

免疫組化

過程采用快速免疫組化方法,即用型快速免疫組化MaxVisionTM,試劑盒是根據多聚合酶技術把多分子量過氧化物酶與抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在聚合物上形成多聚物分子。實驗過程中加空白對照(以PBS代替各種一抗)以監測抗體特性。其余按試劑說明書操作。

WesternBlotting檢測

按照WesternBlotting檢測標準操作流程,先提取蛋白組織樣本,之后按BCA法測定蛋白濃度,然后進行聚丙稀酰胺凝膠電泳,在進行轉膜、封閉、孵育一抗、孵育二抗,最后進行ECL化學發光顯影。用QuantityOne軟件分析,以相應蛋白條帶的灰度值與P-actin蛋白條帶的灰度值的比值表示相對蛋白含量。

統計分析方法

釆用SPSS13.0軟件進行,數據以表示,檢驗前并進行方差齊性檢驗。若否則釆用非參數統計方法。

結果

腫瘤指數

表4各組腫瘤指數比較

與模型組比較,*P<0.05,

四組腫瘤指數比較見表4。與模型對照組相比,各給藥組腫瘤指數均有下降,其中蝎毒多肽組、索拉非尼組、中藥+蝎毒多肽組、中藥+索拉非尼組差異顯著(P<0.05),中藥組與模型組無明顯統計學差異,P>0.05,通過比較平均值,各組療效為中藥+索拉非尼組>中藥+蝎毒多肽組>索拉非尼組>蝎毒多肽組>中藥組。

常規病理切片

胃癌移植瘤病理組織切片經HE染色。腫瘤結節中見有壞死,中藥組壞死面積相對模型組較大,但無統計學差異,P>0.05。其余給藥組腫瘤結節中壞死面積均明顯增加,有統計學差異,P<0.05,其效果中藥+蝎毒多肽組>中藥+索拉非尼組>索拉非尼組>蝎毒多肽組>中藥組。

免疫組化結果

免疫組化的結果灰度是通過平均光密度結果體現的。光密度的大小與相應蛋白的表達成反比。因此,光密度值升高,表明相應分子蛋白表達下降。

PI3K和MT

與模型組比較,中藥組AKT光密度無明顯增加(P>0.05),也即AKT表達無明顯降低,其余給藥組均明顯增加P>0.05,增加幅度為中藥+蝎毒多肽組>中藥+索拉非尼組>蝎毒多肽組>索拉非尼組>中藥組。

與模型組比較,五組給藥組PI3K光密度明顯增加(P<0.05),即PI3K表達明顯降低,其增加幅度為中藥+蝎毒多肽組>中藥+索拉非尼組>蝎毒多肽組>索拉非尼組>中藥組。

WesternBlotting蛋白表達結果

WesternBlotting灰度值與相應蛋白分子成正向比例關系?;葉戎翟礁?,蛋白表達則也越高。

AKT和P-AKT

灰度值經t檢驗統計分析,與模型對照組相比,中藥組AKT表達有所降低,但P>0.05,其余給藥組均明顯降低,P<0.05,降低程度為中藥+索拉非尼組>中藥+蝎毒多肽組>索拉非尼組>蝎毒多肽組>中藥組。

灰度值經t檢驗統計分析,與模型對照組相比,給藥五組pAKT表達則明顯降低(P><0.05),降低程度為中藥+索拉非尼組>中藥+蝎毒多肽組>索拉非尼組>蝎毒多肽組>中藥組

PI3K

灰度值經統計分析,與模型對照組相比,五組給藥組PI3K表達顯著降低,具有非常顯著性差異(P<0.01),降低程度為中藥+索拉非尼組>中藥+蝎毒多肽組>索拉非尼組>蝎毒多肽組>中藥組。

結論

本動物實驗采取SGC-7901胃癌細胞株和裸鼠制作胃癌移植瘤模型,使用本發明中藥制劑聯合抗腫瘤藥物,并以不使用任何藥物作對照,通過病理組織切片,采用免疫組化和WesternBlotting技術檢測反應腫瘤細胞增殖、侵襲、調亡、血管生成及PI3K-AKT細胞通路的相關蛋白指標,觀察本發明中藥制劑對這些指標的作用和影響。研究結果表明本發明中藥制劑具有多種抗腫瘤機制,本發明中藥制劑具有一定的抑制腫瘤效應,可以抑制腫瘤細胞的增殖,可以降低腫瘤細胞的侵襲,可以誘導腫瘤細胞的調亡,可以抗血管生成,可以抑制PI3K-AKT信號通路,減少PI3K、pAKT的表達,可以激活抗癌基因,可以抑制癌基因活化等作用,因此臨床推廣本發明中藥制劑聯合西藥抗腫瘤藥物,具有很好的療效。

所有上述的首要實施這一知識產權,并沒有設定限制其他形式的實施這種新產品和/或新方法。本領域技術人員將利用這一重要信息,上述內容修改,以實現類似的執行情況。但是,所有修改或改造基于本發明新產品屬于保留的權利。

以上所述,僅是本發明的較佳實施例而已,并非是對本發明作其它形式的限制,任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容,依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型,仍屬于本發明技術方案的?;し段?。

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