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塞维利亚对维戈塞尔塔: 炎癥性病癥的治療.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201480030407.7

申請日:

20140409

公開號:

CN105431172A

公開日:

20160323

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K45/06,A61K31/4375,A61K31/47,A61K31/4709,A61K31/473,A61K31/4741,A61K31/5025,A61K31/519,A61P29/00,A61P11/06,A61P11/00,A61P19/02,A61P19/10,A61P17/06,A61P17/00 主分類號: A61K45/06,A61K31/4375,A61K31/47,A61K31/4709,A61K31/473,A61K31/4741,A61K31/5025,A61K31/519,A61P29/00,A61P11/06,A61P11/00,A61P19/02,A61P19/10,A61P17/06,A61P17/00
申請人: 克雷瑟特分子學探索有限公司
發明人: 艾倫·萊斯利·羅瑟爾,杰里米·吉爾伯特·溫特爾,羅伯特·亞瑟·斯科芬
地址: 英國劍橋郡
優先權: 1306411.8,1306413.4
專利代理機構: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 代理人: 王達佐;洪欣
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201480030407.7

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了用于治療炎癥性病癥的萘啶酸和萘啶酸類似物。

權利要求書

1.式(I)的萘啶酸或其類似物或其藥物可接受的鹽,其用途是治療或預防炎癥性病癥2.根據權利要求1所述的用于所述用途的化合物,其中所述炎癥性疾病為:呼吸系統疾病,例如哮喘或慢性阻塞性肺??;慢性退行性疾病,例如風濕性關節炎、骨關節炎或骨質疏松癥;皮膚病,例如銀屑病、硬皮病或特應性皮炎;慢性脫髓鞘疾病,例如多發性硬化;炎癥性腸病,例如潰瘍性結腸炎或克羅恩氏??;牙科疾病,例如牙周病或牙齦炎;系統性紅斑狼瘡;糖尿病性腎??;狼瘡性腎炎;IgA腎病或腎小球腎炎;移植物抗宿主病或眼科病。3.根據權利要求1或2所述的用于所述用途的化合物,其中所述化合物配制用于局部遞送。4.根據權利要求3所述的用于所述用途的化合物,其中所述化合物配制用于對皮膚、肺或胃腸道局部遞送。5.根據前述權利要求中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述化合物配制用于對皮膚局部遞送,且所述病況為例如銀屑病、硬皮病或特應性皮炎的皮膚病。6.根據權利要求1至4中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述化合物配制用于對肺局部遞送,且所述病況為例如哮喘或慢性阻塞性肺病的肺部病況。7.根據權利要求1至4中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述化合物配制用于對胃腸道局部遞送,且所述病況為例如潰瘍性結腸炎或克羅恩氏病的炎癥性腸病。8.根據權利要求1至4中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述病況為例如牙周病或牙齦炎的牙科疾病。9.根據權利要求1或2所述的用于所述用途的化合物,其中將所述化合物配制用于全身遞送。10.根據前述權利要求中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述治療包括對還施用一種或多種糖皮質激素的患者施用所述化合物,所述糖皮質激素例如為倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氫化可的松、氟替卡松、甲潑尼松、莫美他松、帕拉米松和潑尼松龍。11.根據前述權利要求中任一項所述的用于所述用途的化合物,其中所述治療包括向還施用另外的治療劑的患者施用所述化合物,所述治療劑選自:抑制血管生成的肽,例如血管生成抑制素;抑制血管生成的類固醇,例如乙酸阿奈可他;VEGF或FGF的調節劑,例如Zactima;配制為眼用的非類固醇抗炎藥(NSAID),例如氟比洛芬、雙氯芬酸和酮咯酸;糖皮質激素,例如甲基潑尼松龍;白三烯調節劑,例如齊留通;抗組胺藥,例如西替利嗪、氯雷他定、酮替芬等;和常規的細胞因子/生長因子調節劑,例如環孢素A、磷酸二酯酶抑制劑等。12.根據權利要求10或11所述的用于所述用途的化合物,其中所述活性試劑與所述另外的試劑組合提供。13.包含式(I)的萘啶酸或其類似物或其藥物可接受的鹽的藥物組合物,其用途是治療或預防炎癥性疾病14.根據權利要求13所述的用于所述用途的藥物組合物,其適于局部遞送。15.根據前述權利要求中任一項所述的用于所述用途的化合物或用于所述用途的藥物組合物,其中所述化合物為萘啶酸或其藥物可接受的鹽。16.根據權利要求1至15中任一項所述的用于所述用途的化合物或用于所述用途的藥物組合物,其中所述萘啶酸類似物為式(II)的化合物其中,X和X獨立地表示CH或N;X表示C(R)或N;X表示C(R)或N;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、NH-烴基、烴基、環烴基或苯基,并任選地被一個或多個R取代;其中R可與R形成環的部分;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、烴基、O-烴基或S-烴基;其中R可與R形成環的部分;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、烴基、O-烴基、吡啶基、環烴基或雜環烴基,并任選地被一個或多個R取代;其中R可與R形成環的部分;R為H、F或O-烴基;其中R可與R形成環的部分;R為H、F、Cl、烴基、O-烴基或NH;R為F、烴基、NH、NH-烴基、CHNH或OH;或其藥物可接受的鹽。17.通過施用式(I)的萘啶酸或式(II)的萘啶酸類似物治療或預防炎癥性病況的方法其中,X和X獨立地表示CH或N;X表示C(R)或N;X表示C(R)或N;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、NH-烴基、烴基、環烴基或苯基,并任選地被一個或多個R取代;其中R可與R形成環的部分;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、烴基、O-烴基或S-烴基;其中R可與R形成環的部分;R為H、CF、CONH、CN、鹵素、NH、烴基、O-烴基、吡啶基、環烴基或雜環烴基,并任選地被一個或多個R取代;其中R可與R形成環的部分;R為H、F或O-烴基;其中R可與R形成環的部分;R為H、F、Cl、烴基、O-烴基或NH;R為F、烴基、NH、NH-烴基、CHNH或OH;或其藥物可接受的鹽。18.根據前述權利要求中任一項所述的用于所述用途的化合物、用于所述用途的組合物或方法,其中(I)或(II)或其藥物可接受的鹽的量不具有實質的抗菌活性。

說明書

發明領域

本發明涉及萘啶酸和類似物用于治療炎癥性病癥的用途。

發明背景

免疫引發的炎癥性事件是許多慢性炎癥性疾病的重要原因,其中長時間的炎癥可引起組織破壞,并可導致被感染的器官大幅損傷并最終衰竭。在很多情況下,這些疾病的確切病因是未知的。這些疾病包括自身免疫疾病,其中,盡管不了解該疾病的確切致病特征,但是已知炎癥性和組織破壞性方面是由對自身組織的不當的免疫應答引起的。涉及多個器官的病況包括例如系統性紅斑狼瘡(SLE)和硬皮病。其他類型的自身免疫疾病可涉及特定的組織或器官,例如肌肉骨骼組織(例如,風濕性關節炎、強直性脊柱炎)、胃腸道(例如,克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎)、中樞神經系統(例如,阿爾茨海默病、多發性硬化、運動神經元疾病、帕金森氏病和慢性疲勞綜合癥)、胰腺β細胞(例如,胰島素依賴型糖尿病)、腎上腺(例如,愛迪生氏病)、腎臟(例如,古德帕斯徹氏綜合癥、IgA腎病、間質性腎炎)、外分泌腺(例如,干燥綜合癥和自身免疫性胰腺炎)、皮膚(例如,銀屑病和特應性皮炎)和肺(例如哮喘)。

此外,存在某種程度上確定了病因的慢性炎癥性疾病。這些疾病也可表現出大幅的組織/器官破壞并包括以下病況:例如骨關節炎、牙周病、糖尿病性腎病、慢性阻塞性肺病、動脈粥樣硬化、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宮內膜異位、慢性肝炎和慢性肺結核。這些病況在發達國家和發展中國家中都是疾病的主要原因,并且在很多情況下通過目前的治療方法不能有好地治療。例如,皮膚結構的炎癥(皮炎)是常見的一組病況,其包括酒糟鼻、尋常性痤瘡、變應性接觸性皮炎、血管性水腫、特應性皮炎、大皰性類天皰瘡、皮膚藥物反應、多形性紅斑、紅斑狼瘡、光照性皮炎、銀屑病、銀屑病關節炎、硬皮病和蕁麻疹。諸如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和特發性肺纖維化(IPF)的呼吸道疾病以及諸如克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎的胃腸道的炎癥性疾病,也代表著人類疾病的重要原因。使用多種治療方法來治療這些疾病,其中的很多方法具有非常嚴重的副作用。

目前對炎癥性引發的病況的治療(若存在)包括中和抗體、細胞毒性、皮質類固醇、免疫抑制劑、抗組胺藥和抗毒蕈堿藥。這些治療經常與不便的施用途徑和嚴重的副作用有關,而導致依從性的問題。

亟需新型的有效且安全的治療方法。

膜聯蛋白-A1(脂皮質素-1)是36kDa蛋白質,其于20世紀70年代末被首次描述。膜聯蛋白-A1在許多細胞類型中均有發現,并且已知其在調節外源性和內源性糖皮質激素的抗炎活性中起關鍵的作用。膜聯蛋白-A1增強了類固醇的抗炎活性,并且在敲除膜聯蛋白-A1的小鼠中類固醇對動物炎癥模型是無效的,而膜聯蛋白-A1自身對動物炎癥模型是有效的(PerrettiM.和DalliJ.BritishJournalofPharmacology(2009)158,p936-946)。

非活性的膜聯蛋白-A1通過糖皮質激素受體刺激的細胞核作用而在細胞內釋放。所述膜聯蛋白-A1被轉位至細胞膜,在該處被蛋白激酶C磷酸化并作為抗炎蛋白釋放。磷酸酶PP2A負責通過直接去磷酸化和使蛋白激酶C失活而使膜聯蛋白-A1的抗炎活性失活(YazidS.等人PharmacologicalReports(2010)62,p511-517)。假定PP2A的抑制劑會提供強效的抗炎藥物。

發明概述

本發明涉及萘啶酸和萘啶酸類似物在炎癥性疾病的治療中的用途。

意外地發現萘啶酸(I)和一些萘啶酸的類似物對治療炎癥性病況有效。

已發現了萘啶酸和一些類似物是磷酸酶PP2A的強效抑制劑,由此增強內源性膜聯蛋白-A1的抗炎活性。由于萘啶酸通過腎途徑快速排泄,并由此具有差的全身性藥代動力學,因此是治療泌尿系統感染最常用的抗生素。該試劑通常需要每日四次的通過口服途徑施用的治療來達到抗菌活性。

現已發現使用萘啶酸或萘啶酸類似物或其藥物可接受的鹽對治療例如但不限于上文描述的那些炎癥性疾病是有效的。

因此,根據本發明,萘啶酸和萘啶酸的類似物可用于炎癥性疾病的治療。

附圖描述

圖1示出了萘啶酸對人肥大細胞中凈組胺釋放%的抑制。

圖2示出了萘啶酸對人肥大細胞中前列腺素D2釋放的抑制。

圖3示出了從人肥大細胞中膜聯蛋白-A1的釋放應答于增大的萘啶酸濃度。

圖4示出了在哮喘的鼠模型中通過鼻內途徑給予的萘啶酸對卵清蛋白誘發的BALF中嗜酸性粒細胞數的抑制。

圖5示出了在卵清蛋白誘發的哮喘的鼠模型中萘啶酸對總BALF細胞數中嗜酸性粒細胞百分比的抑制。

發明詳述

施用萘啶酸(I)、或萘啶酸藥物可接受的鹽用于一系列炎癥性病況的治療。

根據本發明的另一個方面,通式(II)的化合物可用于炎癥性病況的治療或預防

其中,

X和X1獨立地表示CH或N;

X2表示C(R2)或N;

X4表示C(R4)或N;

R1為H、CF3、CONH2、CN、鹵素、NH2、NH-烴基、烴基、環烴基或苯基,并任選地被一個或多個R6取代;其中R1可與R2形成環的部分;

R2為H、CF3、CONH2、CN、鹵素、NH2、烴基、O-烴基或S-烴基;其中R2可與R1形成環的部分,其中該環為5元或6元的飽和或不飽和環,含有一個或多個選自C、N、S和O的原子;

R3為H、CF3、CONH2、CN、鹵素、NH2、烴基、O-烴基、吡啶基、環烴基或雜環烴基,并任選地被一個或多個R6取代;其中R3可與R4形成環的部分;

R4為H、F或O-烴基;其中R4可與R3形成環的部分,其中該環為5元的飽和或不飽和環,含有一個或多個選自C、N、S和O的原子;

R5為H、F、Cl、烴基、O-烴基或NH2;

R6為F、烴基、NH2、NH-烴基、CH2NH2或OH。

任選地,R1、R2和R3獨立地為CF3、CONH2、CN、鹵素或NH2;

或其藥物可接受的鹽。

烴基指直鏈或支鏈的烴基,其含有1至10個碳原子,優選1至6個碳原子,更優選1至3個碳原子。優選的烴基實例為甲基、乙基、正丙基和異丙基。

環烴基指3至14個碳原子的且無環雜原子的飽和或部分飽和的環狀基團,且含有單環或多環,所述多環包括稠環、橋環和螺環系統,其中所述環烴基任選地被一個或多個取代基取代,所述取代基選自CF3、CONH2、CN、鹵素、NH2、NH-烴基、烴基、環烴基和苯基。

雜環烴基指含有1至14個碳原子和1至6個選自氮、硫或氧的雜原子的飽和或部分飽和的環狀基團,并且包括單環和多環系統,所述多環系統包括稠環、橋環和螺環系統,其中所述環烴基任選地被一個或多個取代基取代,所述取代基選自CF3、CONH2、CN、鹵素、NH2、NH-烴基、烴基、環烴基和苯基。優選的雜環烴基實例為哌啶、哌嗪和吡咯烷。

可被提及的本發明實施方案包括環烴基和/或雜環烴基未被取代的那些實施方案。

本領域的技術人員應意識到,本文提及的治療延伸至確定病況的預防及治療。

式(II)的化合物包括一些已知的喹諾酮抗生素。已知喹諾酮抗生素是廣譜抗生素。其為化學治療性殺菌藥物,且其通過阻止細菌DNA解旋和復制來起作用。已知的喹諾酮抗生素包括:

第一代:西諾沙星、氟甲喹、惡喹酸、吡咯嘧啶酸、吡哌酸、羅索沙星。

第二代:環丙沙星、依諾沙星、氟羅沙星、洛美沙星、那氟沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、蘆氟沙星。

第三代:巴洛沙星、格帕沙星、左氧氟沙星、帕珠沙星、司氟沙星、替馬沙星、妥舒沙星。

第四代:克林沙星、加替沙星、吉米沙星、莫西沙星、西他沙星、曲伐沙星、普盧利沙星。

研發中:加雷沙星、德拉沙星。

獸用:達氟沙星、雙氟沙星、恩諾沙星、依巴沙星、馬波沙星、奧比沙星、沙氟沙星。

本發明中使用的式(II)的化合物包括(但不限于)上文描述的已知的喹諾酮抗生素和新穎的化合物,例如:

1-異丙基-7-甲基-4-氧-1,4-二氫喹啉-3-羧酸

1,5,7-三甲基-4-氧-1,4-二氫-1,8-萘啶-3-羧酸

2,4-二甲基-5-氧-5,8-二氫喹啉-6-羧酸

可以理解,本發明中使用的化合物包括鹽,例如鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、乙二胺鹽、精氨酸鹽、二乙胺鹽、哌嗪鹽或N-甲基葡糖酰胺鹽,而且還延伸至其代謝物和前體藥物。最適合使用游離酸或鹽。

本發明中使用的化合物或其藥物可接受的鹽可以是手性的,并且可以理解,本發明包括式(II)的任何非對映異構體和對映異構體。也可理解,本發明包括式(I)化合物和/或式(II)化合物的任何同位素衍生物。

為避免疑義,式(I)和式(II)的化合物可含有以其任何天然同位素形式或非天然同位素形式的所示出的原子。在這一方面,可提及的本發明的實施方案包括以下實施方案,其中:

a)式(I)的化合物和/或式(II)的化合物對于化合物的任何原子均未被同位素富集或被標記;以及

b)式(I)的化合物和/或式(II)的化合物對于化合物的一個或多個原子被同位素富集或被標記。

本文提及的“同位素衍生物”涉及這兩種實施方案中的第二種實施方案。在本發明具體的實施方案中,式(I)的化合物和/或式(II)的化合物是用一個或多個穩定的同位素來同位素富集或標記的(針對化合物的一個或多個原子)。因此,可提及的本發明的化合物包括,例如,用一個或多個諸如氘等的原子同位素富集或標記的式(I)的化合物和/或式(II)的化合物。

優選的式(II)化合物的實例包括西諾沙星、氟甲喹、惡喹酸、吡咯嘧啶酸、哌啶酸和羅索沙星。

根據本發明,萘啶酸或式(II)的化合物、或其藥物可接受的鹽用于治療炎癥性疾病,其包括,但不專指:涉及多器官的自身免疫疾病,例如系統性紅斑狼瘡(SLE)和硬皮??;涉及特定組織或器官的自身免疫疾病,例如肌肉骨骼組織(例如,風濕性關節炎、強直性脊柱炎)、胃腸道(例如,克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎)、中樞神經系統(例如,阿爾茨海默病、多發性硬化、運動神經元疾病、帕金森氏病和慢性疲勞綜合癥)、胰腺β細胞(例如,胰島素依賴型糖尿病)、腎上腺(例如,愛迪生氏病)、腎臟(例如,古德帕斯徹氏綜合癥、IgA腎病、間質性腎炎)、外分泌腺(例如,干燥綜合癥和自身免疫性胰腺炎)、皮膚(例如,銀屑病和特應性皮炎)和肺(例如哮喘);慢性炎癥性疾病,例如骨關節炎、牙周病、糖尿病性腎病、慢性阻塞性肺病、動脈粥樣硬化、移植物抗宿主病、慢性盆腔炎、子宮內膜異位、慢性肝炎和慢性肺結核;IgE介導的(I型)超敏反應,例如鼻炎、哮喘、過敏反應和皮炎。皮炎病況包括光化性角化病、酒糟鼻、尋常性痤瘡、變應性接觸性皮炎、血管性水腫、特應性皮炎、大皰性類天皰瘡、皮膚藥物反應、多形性紅斑、紅斑狼瘡、光照性皮炎、銀屑病、銀屑病關節炎、硬皮病和蕁麻疹。也可治療眼部病況,例如糖尿病視網膜病變、黃斑變性、脈絡膜新生血管膜、囊狀黃斑水腫、視網膜外膜、黃斑裂孔、干眼癥、葡萄膜炎和結膜炎。尤其是萘啶酸或式(II)的類似物、或其藥物可接受的鹽用于治療:慢性退行性疾病,例如風濕性關節炎、骨關節炎或骨質疏松癥;慢性脫髓鞘疾病,例如多發性硬化;呼吸系統疾病,例如哮喘或慢性阻塞性肺??;炎癥性腸病,例如潰瘍性結腸炎或克羅恩氏??;皮膚病,例如銀屑病、硬皮病或特應性皮炎;牙科疾病,例如牙周病或牙齦炎;糖尿病性腎??;狼瘡性腎炎;IgA腎??;腎小球腎炎;系統性紅斑狼瘡;移植物抗宿主??;眼科病況,包括老年性黃斑變性、結膜炎、糖尿病視網膜病變、脈絡膜新生血管膜、囊狀黃斑水腫、視網膜外膜、黃斑裂孔、干眼癥或葡萄膜炎。

在炎癥性疾病的治療中,通過局部施用來使用萘啶酸或萘啶酸的類似物是有利的。當局部使用時,本發明的化合物用于治療炎癥性疾病,其包括但不專指:涉及特定組織或器官的自身免疫疾病,例如胃腸道(例如,克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎)、皮膚(例如,銀屑病和特應性皮炎)和肺;慢性炎癥性疾病,例如慢性阻塞性肺??;以及超敏反應,例如鼻炎、哮喘、過敏反應和皮炎。皮炎病況包括光化性角化病、酒糟鼻、尋常性痤瘡、變應性接觸性皮炎、血管性水腫、特應性皮炎、大皰性類天皰瘡、皮膚藥物反應、多形性紅斑、紅斑狼瘡、光照性皮炎、銀屑病、銀屑病關節炎、硬皮病和蕁麻疹。特別地,本發明的化合物用于治療:呼吸系統疾病,例如哮喘或慢性阻塞性肺??;炎癥性腸病,例如潰瘍性結腸炎或克羅恩氏??;皮膚病,例如銀屑病、硬皮病或特應性皮炎;以及牙科疾病,例如牙齦炎和牙周病。

根據本發明,當患者也被施用另外的治療劑時,可使用萘啶酸或式(II)的化合物或其鹽,或其中提供本發明的化合物與另外的治療劑的組合,其中所述治療劑選自皮質類固醇(實例包括皮質醇、可的松、氫化可的松、二氫可的松、氟氫可的松、潑尼松、35潑尼松龍、地夫可特、氟尼縮松、伯克納、甲基潑尼松龍、曲安西龍、倍他米松和地塞米松)、細胞毒性、改善病情的抗風濕藥物(DMARD)(實例包括柳氮磺胺吡啶(azulfidine)、金硫代蘋果酸鹽、布西拉明、苯丁酸氮芥、環磷酰胺、來氟米特、甲氨蝶呤、咪唑立賓、青霉胺和柳氮磺胺吡啶(sulphasalazine))、免疫抑制劑(實例包括硫唑嘌呤、環孢素、霉酚酸酯)、COX抑制劑(實例包括醋氯芬酸、阿西美辛、阿氯酚酸(alcofenac)、阿明洛芬、阿洛普令、氨芬酸、氨基比林、安特非寧(antraphenine)、阿司匹林、阿扎丙宗、貝諾酯、苯惡洛芬、芐達明、布替布芬、塞來昔布、氯乙喚(chlorthenoxacine)、水楊酸膽堿、氯美辛(chlometacin)、右旋酮洛芬、雙氯芬酸、二氟尼柳、依莫法宗、依匹唑、依托度酸、苯氯布宗、聯苯乙酸、芬布芬、芬氯酸、氟比洛芬、格拉非寧、羥基乙基水楊酸酯、布洛芬、吲哚美辛、吲哚洛芬、酮洛芬、酮咯酸、乳?;被揭頤?、洛索洛芬、甲滅酸、安乃近、莫非保松、莫苯唑酸、萘丁美酮、萘普生、尼芬那宗、奧沙美辛、非那西丁、哌保松、普拉洛芬、異丙安替比林、普羅喹宗、羅非昔布、水楊酰胺、雙水楊酸酯、舒林酸、舒洛芬、噻拉米特、替諾立定、托芬那酸、佐美酸)、中和抗體(實例包括依那西普和英夫利昔單抗)、抗生素(實例包括強力霉素和米諾環素)。

萘啶酸或式(II)的化合物、或其藥物可接受的鹽與用于疼痛治療的藥物組合使用常常是有利的。此類另外的藥物可以是諸如巴氯芬的阿片或非阿片或諸如加巴噴丁的神經痛試劑。其他可使用的化合物包括:非類固醇抗炎藥(例如,對乙酰氨基酚、乙酰水楊酸、萘普生)、麻醉鎮痛藥、局部麻醉藥、NMDA拮抗劑、安定劑、抗驚厥藥、抗痙攣藥、抗抑郁藥或肌肉松弛藥。

本發明化合物的抗炎活性可通過實施例中描述的適當的體外試驗或體內試驗來表征。萘啶酸治療均以劑量相關的形式對從IgE攻擊的人肥大細胞中釋放的組胺(實施例1)和PGD2(實施例2)進行抑制。此外,萘啶酸治療以劑量相關的形式增大了膜聯蛋白-A1的釋放(實施例3)。

本發明化合物的抗炎活性與其抗菌活性無關,并且其抗炎效果可以在萘啶酸或式(II)的類似物的非抗菌濃度下觀察。因此,根據本發明的另一方面,當萘啶酸或其類似物或其鹽的量、劑量或濃度不具有實質的抗菌活性時,可以在炎癥性病況的治療或預防中使用萘啶酸(I)或式(II)的類似物、或其藥物可接受的鹽。在細菌感染不作為疾病組成部分的情況下,使用低于抗菌劑量的萘啶酸或式(II)的類似物、或其藥物可接受的鹽會避免不必要地暴露于可導致產生細菌抗藥性的抗菌活性。

根據本發明另外的方面,萘啶酸或式(II)的化合物或其藥物可接受的鹽可用于增強糖皮質激素的抗炎作用。這種活性已通過使用適當的體外試驗和體內試驗被證實。因此,本發明的化合物與類固醇一同使用允許使用低于常規治療劑量的、并因此無害的類固醇劑量,并具有大幅增強的抗炎活性。根據本發明,當患者也被施用一種或多種糖皮質激素時,可使用萘啶酸或式(II)的化合物、或其藥物可接受的鹽,或其中提供本發明的化合物與一種或多種糖皮質激素的組合??稍詒痙⒚髦惺褂玫奶瞧ぶ始に匕?,但不限于,倍氯米松、倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氫化可的松、氟替卡松、甲潑尼松、莫美他松、帕拉米松和潑尼松龍。特別優選與塞米松、潑尼松龍、可的松、二氫可的松和氫化可的松的組合使用。

本發明的化合物可用作抗炎劑來治療炎癥性病況。在一些實例中,上文描述的疾病可伴隨微生物感染。這種感染可以是真菌的、病毒的或細菌的。例如,哮喘和COPD的加重都可與肺部的并發感染有關。諸如特應性皮炎的真皮炎癥性疾病也可與局部感染有關。本發明的化合物可用于治療存在微生物感染或不存在微生物感染的炎癥。存在微生物感染時,當患者也被施用抗生素時可使用本發明的化合物,或者本發明的化合物與抗生素組合施用。

可將本文描述的化合物配制用于以任何方便的方式施用,因此本發明也包括含萘啶酸或式(II)的類似物、或其藥物可接受的鹽一起的藥物組合物,如果需要,則混合一種或多種藥物可接受的稀釋劑或載體。

可以使用任何適合的施用途徑。例如,口服、局部、胃腸外、眼部、直腸、陰道、吸入式、口腔、舌下和鼻內遞送途徑的任何一種可以是適合的。

優選適于局部施用的藥物組合物??梢允褂萌魏問屎系氖┯猛揪獨炊約膊∥壞憬謝钚約戀木植康菟?。特別優選適于對肺、皮膚、或胃腸道局部施用的組合物。各種類型的用于局部施用的制劑的實例包括軟膏、洗劑、乳膏、凝膠、泡沫、噴霧劑、氣霧劑、粉末、在吸入器或吹入器中使用的膠囊或藥筒、滴劑、用于噴霧的溶液/懸浮液、栓劑、保留灌腸和陰道栓劑。

適于全身施用的萘啶酸或式(II)的類似物、或其藥用鹽的藥物組合物作為本發明的另一個方面。優選口服的藥物組合物。各種類型的用于口服施用的制劑的實例包括膠囊、片劑、微丸和液體組合物。也可以優選胃腸外的組合物。

活性劑的劑量取決于病況的性質和程度、患者的年齡和狀況以及本領域技術人員已知的其他因素。典型的劑量為0.1mg至100mg,例如,取決于所涉及制劑的類型,活性成分為10至100mg。優選地,每天給予該劑量一至三次。本發明組合物中的活性劑的劑量可具有抗菌活性,或者其可低于抗菌劑量。優選地,存在的活性藥物的量不具有實質的抗菌活性??咕钚砸馕蹲泡拎に嶧蚴?II)的類似物的濃度對于在感染性病況中涉及的致病細菌的生長不具有臨床相關的活性。對于敏感菌株,該濃度約小于1μg/ml。

組合物還可包含一種或多種類固醇和/或另外的治療劑。通常,包含萘啶酸或式(II)的化合物或其藥物可接受的鹽、以及一種或多種類固醇的組合物含有該制劑的0.001%至5%wt/wt的類固醇。盡管特定的劑量取決于使用的特殊的類固醇,但是由于上文描述的本發明化合物的協同效應,優選以低于制劑的1%wt/wt的低于常規治療劑量存在的類固醇。例如,當使用萘啶酸時,組合物中存在的萘啶酸為制劑的0.001%至5%wt/wt,且存在低于制劑的1%wt/wt的治療劑量的類固醇。

一般通過多步合成路線來制備萘啶酸,該多步合成路線適于進行多種修改,以允許合成萘啶酸類似物,例如式(II)的類似物:

本發明中使用的式(II)的萘啶酸類似物可以由以下方案所示的多步合成步驟制備。

通過從通式(III)的二取代苯化合物開始的環化反應來進行所述合成:

其中R為技術人員已知的任何適合的基團。

然后通過Camps環化反應環化起始原料,以得到通式(IIIa)和(IIIb)的化合物:

然后可分離式(IIIa)的4-喹諾酮衍生物,并進一步反應以形成例如下式的4-喹諾酮衍生物:

7-甲基-4-氧-1,4-二氫喹啉-3-羧酸

式(II)的化合物或其藥物可接受的鹽的抗炎活性可以通過評估它們抑制組胺或PDG2從人肥大細胞中釋放的能力或促進膜聯蛋白-A1釋放的能力來確定。

以下試驗說明了本發明:

實施例1:萘啶酸對組胺從人肥大細胞中釋放的抑制

方案:使用以下方法培養人源臍帶肥大細胞。在補充有100ng/ml的人SCF、50ng/ml的IL-6和1ng/ml的IL-3、以及100μg/ml的青霉素/鏈霉素(Peprotech,倫敦,英國)的StemSpan(StemCellTechnologies,格勒諾布爾,法國)無血清培養基中,培養商業購得的CD34+干細胞2周。八周之后,在含有10%FCS的StemSpan中培養細胞。每周將細胞傳代至新的培養基中。在11至18周之間,經肥大細胞形態學的顯微鏡檢查、c-kit和FcRε1染色(通過FACS)確認后,將細胞用于試驗。為評估藥效,萘啶酸與等份的在10%FCS培養基中培養的2x105CDMCs(臍帶源肥大細胞)孵育5分鐘。

組胺釋放的測量

使用商業購得的酶免疫測定(SPIbio,斯特拉斯堡,法國)來檢測并定量上清液中釋放的組胺。按照制造商的方案來進行試驗。使用提供的試劑來得到0.39-50nM組胺的標準曲線,且然后在酶標儀中(在405nm處)于60分鐘內讀取光密度。在一些情況下,通過在攻擊之前凍融細胞來確定組胺的總細胞含量。

這些試驗的結果在圖1中示出。數據清楚地說明了萘啶酸對炎癥介質組胺的抑制是劑量相關的。

實施例2:萘啶酸對前列腺素D2從人肥大細胞中釋放的抑制

使用實施例1中描述的方法培養人臍帶源肥大細胞。

PGD2釋放的測量

使用商業購得的酶免疫測定(CaymanChemical,密歇根,美國)來檢測并定量上清液中釋放的PGD2。按照制造商的方案進行試驗。使用提供的試劑來得到78-10,000pg/mlPGD2的標準曲線,然后在酶標儀(在405nm處)中于60分鐘內取光密度。

這些試驗的結果在圖2中示出。數據說明了萘啶酸對炎癥性前列腺素PGD2的抑制是劑量相關的。

實施例3:萘啶酸對膜聯蛋白-A1從人肥大細胞中釋放的促進

使用實施例1中描述的方法培養人臍帶源肥大細胞。

通過ELISA測定條件培養基中的Anx-A1蛋白水平。簡言之,用1μg抗Anx-A1mAb1B的碳酸氫鹽緩沖液(pH9.6)涂布96孔平底ELISA板(Greiner,格洛斯特郡,英國),并在4℃下孵育過夜。在碳酸氫鹽緩沖液中洗滌后,在室溫下用100μL含1%BSA的PBS阻塞可能未經涂布的位點于1小時。在37℃下,于1小時內加入等份的樣品(100μL)或Anx-A1標準溶液(在0.1%吐溫-20的PBS中制備;濃度為10μg/mL至0.001μg/mL之間)。在PBS/吐溫-20中充分清洗后,加入(在37℃下1小時)100μL多克隆兔抗人Anx-A1血清(Zymed,Invitrogen,佩斯利,英國;在PBS/吐溫-20中以1:1000稀釋),之后與結合了堿性磷酸酶(1:1000;Sigma)的驢抗兔1gG一起孵育。通過加入100μL對硝基苯磷酸鹽(1mg/mL的碳酸氫鹽緩沖液,pH9.6)來顯色。在酶標儀(TitertekTM,維也納,奧地利)中405nm處(用620-nm的基準濾光片)讀取吸光度。對照標準曲線讀出研究樣品中的Anx-A1水平,并表示為ng/ml。

圖3中示出的結果突出了應答于增大的萘啶酸濃度,而從人肥大細胞中釋放的抗炎性膜聯蛋白-A1增多。

實施例4:在鼠哮喘模型中對肺部局部給予萘啶酸。

在小鼠哮喘模型中對局部施用萘啶酸的效果進行了研究。在研究的第1天和第14天,通過腹膜內注射使雌性BALB/c小鼠(每組8只動物)對卵清蛋白(OVA,10mg)敏感。在第20、21、22和23天,動物或接受通過鼻內施用對肺部給予的攻擊劑量的卵清蛋白(50μg),或接受50μl磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS,非攻擊組)。被OVA攻擊的動物還接受了PBS媒介物或通過鼻內施用吸入肺部而給予的萘啶酸(0.3mg/kg體重)。在第21天至第23天,在每次卵清蛋白攻擊之前的30分鐘和攻擊之后的6小時進行上述施用,并且另外在第24天(最后一次攻擊和試驗終止日之間)進行上述施用。在最終OVA攻擊后的48小時,用鹽酸氯胺酮(Narketan,2mg/小鼠)和鹽酸賽拉嗪(Rompun,0.07mg/小鼠)的組合來麻醉小鼠,并通過頸動脈放血處死小鼠。

按照以下步驟得到支氣管肺泡灌洗液(BAL)。插入氣管。將磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)用作灌洗液,將3份灌洗液(0.4ml;0.3ml;0.3ml;共1mL)緩慢滴入,并使用1ml的BD注射器在連續的3個時刻將其吸出,然后置于Eppendorf管(~1ml)中。

之后將這批Eppendorf管在臺式Eppendorf離心機中離心(5min/3500rpm/4℃)。移除上清液,并在渦旋器上通過劇烈震搖封閉在管內的物質使細胞塊(cellplugs)再懸浮于600μl的PBS中。然后,移除每份懸浮液的300μl,并置于標記的樣品腔內。將過濾卡(Shandon過濾卡,棕色,與0.4ml或更少的樣品一起使用,ref#5991023)預裝在樣品腔和被標記的顯微鏡載玻片(ThermoScientific,ShandonCytoslide,鍍膜的顯微鏡載玻片,ref#5991056)之間,用夾子固定在一起,并以垂直的狀態置于離心機內指定的位置。

在血液分析儀(SysmexXT-2000iV)上,對得到的BALF中的細胞計數。使用MannWhitney檢驗進行BALF細胞數的統計比較。

該模型的關鍵方面在于,由對卵清蛋白致敏的免疫反應誘發的嗜酸性粒細胞在BALF中的聚集進行評估。正如所預期的,被致敏的動物在用OVA攻擊并由鼻內給予PBS(OVA/OVA/媒介物)時,與未被攻擊的動物(OVA/PBS)相比BALF中的嗜酸性粒細胞數顯示出顯著增多。然而,鼻內施用萘啶酸(OVA/OVA/萘啶酸)使得與被攻擊的用媒介物治療的動物(OVA/OVA/媒介物)相比總BALF嗜酸性粒細胞數顯著地且統計學意義(p<0.05)上減少47%(圖4)。此外,相對于媒介物治療的組,在萘啶酸治療的組中,總細胞數中嗜酸性粒細胞的百分比也顯著地且統計學意義上(p<0.05)減少44%(圖5)。

這些數據說明了在哮喘模型中萘啶酸在對肺局部給予時的功效,并表明萘啶酸在通過口吸入給予時作為此類病況治療的潛力。

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