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维戈塞尔塔对莱万特: 一種雞球蟲病疫苗助懸劑及懸浮液.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201210230659.7

申請日:

20120705

公開號:

CN102727900B

公開日:

20140507

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K47/36,A61K47/10 主分類號: A61K47/36,A61K47/10
申請人: 煙臺青大生物制藥有限公司
發明人: 郝言芝,王江青
地址: 265200 山東省煙臺市萊陽市經濟技術開發區海河路31號
優先權: CN201210230659A
專利代理機構: 濟南圣達知識產權代理有限公司 代理人: 鄧建國
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210230659.7

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種雞球蟲病疫苗助懸劑及懸浮液,它由黃原膠和乙醇水溶液組成,其中乙醇水溶液的體積濃度大于38%~100%,黃原膠與乙醇水溶液按g/ml的比例為3%~60%。所述為黃原膠優選食品級、藥物級黃原膠,所述乙醇優選為食品級、藥物級乙醇。本發明還公開了由上述的助懸劑配制的助懸液。本發明的有益效果是:一、本發明助懸劑能快速溶解入水。二、制備的懸浮液能維持雞球蟲活疫苗的卵囊在水中8小時不沉降,提高雞飲入疫苗卵囊數量的均勻度。三、可以不停水免疫雞群,減少停水應激。四、也可以停水免疫雞群,縮短免疫時間。五、能降低疫苗的副反應。

權利要求書

1.一種雞球蟲病疫苗助懸劑,其特征是,它由黃原膠和乙醇水溶液組成,其中乙醇水溶液的體積濃度為75%,黃原膠與乙醇水溶液按g/ml的比例為3%~24%。2.如權利要求1所述的雞球蟲病疫苗助懸劑,其特征是,所述為黃原膠為食品級、藥物級黃原膠,所述乙醇為食品級、藥物級乙醇。

說明書

技術領域

本發明涉及一種雞球蟲病疫苗助懸劑及懸浮液,具體涉及一種用于飲水免疫的雞球蟲病活卵囊疫苗的助懸劑及懸浮液,該助懸劑既能快速溶解;又能減緩疫苗卵囊的下沉達8小時,并使雞群的不停水免疫或停水免疫都能得以實現,并且兩種情況下都能降低疫苗的副反應。

背景技術

雞球蟲病是一種原生動物寄生蟲病,由柔嫩艾美爾球蟲、堆形艾美爾球蟲、巨型艾美爾球蟲、毒害艾美爾球蟲、和緩艾美爾球蟲、布氏艾美爾球蟲、早熟艾美爾球蟲的一種或一種以上引起。它們在雞的腸道各部位寄生,引起腸道的炎癥、出血和雞的死亡,給養雞業造成巨大的經濟損失。

長期以來,該病的防治以藥物為主。由于藥物殘留影響食品安全和人類健康,加上球蟲對藥物很容易產生抗藥性,該病的防治越來越依靠免疫手段。

目前使用的雞球蟲病疫苗主要是活卵囊疫苗,例如先靈葆雅的PARACOX和COCCIVAC、加拿大維泰克的IMMUCOX、梅里亞的LIVACOX。其中COCCIVAC已有近60年的歷史(R.B.Williams,Avian?disease46:775—802,2002,Historical?article—Fifty?years?of?Anticoccidial?vaccines?for?poultry(1952--2002))。

雞球蟲病疫苗可以以多種方式接種給雞,如噴霧、噴料、拌料、滴口、口服凝膠、飲水等。所有上述方法都無法徹底解決免疫均勻性和副反應的問題,即每只雞攝入的卵囊數量多少不一,產生的免疫力也高低不一,當雞從墊料中吃到所免疫球蟲疫苗的后代卵囊時,那些免疫力較低而攝入卵囊較多的雞就容易出現疫苗免疫的副反應,出現糞便異常、血便、死亡等異常情況,影響養雞生產和球蟲疫苗的使用。

飲水免疫具有混合較均勻、疫苗活力保存較好等優點。飲水免疫可分為停水免疫和不停水免疫兩種方式。停水免疫是指在免疫之前給雞斷絕水源,使雞在一段時間內喝不到水,當開始飲水免疫時,所有雞同時開始喝水,停水免疫能使整個免疫操作時間縮短;但對雞會產生一定程度的應激。不停水免疫是指不給雞斷絕水源,可減少停水應激,但整個免疫過程持續時間較長,時間加長能影響疫苗的活力。現代養雞生產中,飼養和管理人員效率很高,非常繁忙,以上兩種方式各有優點,都被養雞生產所采用。

飲水免疫時,混合后的疫苗卵囊容易沉淀,這樣雞在飲水免疫時獲得的疫苗卵囊就會出現較大差異,均勻性較差。

黃原膠又稱黃膠、漢生膠,黃單胞多糖,是一種由假黃單胞菌屬發酵產生的單孢多糖,由甘藍黑腐病野油菜黃單胞菌以碳水化合物為主要原料,經好氧發酵生物工程技術,切斷1,6-糖苷鍵,打開支鏈后,按1,4-鍵合成直鏈組成的一種酸性胞外雜多糖。1952年由美國農業部伊利諾斯州皮奧里爾北部研究所分離得到的甘藍黑腐病黃單胞菌,并使甘藍提取物轉化為水溶性的酸性胞外雜多糖而得到?;圃菏悄殼骯噬霞齔?、懸浮、乳化、穩定于一體.性能優越的生物膠。但由于它有極強的親水性,如果直接加入水中,外層吸水膨脹成膠團,膠團包裹住里層的干粉,會阻止水分進入里層,從而大大減慢其溶解速度。由黃原膠、乙醇水溶液組成的混合物能夠快速溶解在水中,不形成膠團。

在將由黃原膠、乙醇水溶液組成的混合物引用到球蟲疫苗助懸劑這一新的領域時,首先必須解決下面的問題。1、所用助懸劑對雞沒有毒害作用;2、所用助懸劑對球蟲卵囊沒有殺傷作用;3、所用懸浮劑對球蟲卵囊釋放出的有感染性的子孢子沒有傷害作用;4、所用懸浮劑不堵塞水線。

以往報道的助懸劑,例如羧甲基纖維素,溶解過程很長。王江清等報道過羧甲基纖維素作為雞球蟲疫苗助懸劑的應用效果(王江清等.柔嫩艾美爾球蟲早熟減毒株飲水免疫方法的研究.山東畜牧獸醫,1999,04)。但羧甲基纖維素在水中溶解速度較慢,需要在水中長時間浸泡才能溶解,如在人工多次捏碎的情況下,需要十幾個小時才能溶解。故該纖維素醚不是一種理想的雞球蟲病疫苗助懸劑。

在現代化養雞業中,每個飼養員要喂養的雞很多,勞動強度很大、工作繁忙,球蟲活卵囊疫苗的助懸劑必須快速溶解才能符合高效率的現代化養雞生產的要求。如何提高助懸劑溶解速度,是一個急待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是為克服上述現有技術的不足,提供一種雞球蟲病疫苗助懸劑及懸浮液。

為實現上述目的,本發明采用下述技術方案:

一種雞球蟲病疫苗助懸劑,它由黃原膠和乙醇水溶液組成,其中乙醇水溶液的體積濃度為38%~100%,黃原膠與乙醇水溶液按g/ml的比例為3%~60%。

所述乙醇水溶液的體積濃度為45%~100%。

優選乙醇水溶液的體積濃度為75%。

黃原膠與乙醇水溶液的比例為3%~24%。

所述為黃原膠優選食品級、藥物級黃原膠,所述乙醇優選為食品級、藥物級乙醇。

本發明還提供了一種由上述的助懸劑配制的助懸液。

本發明的有益效果是:一、本發明助懸劑能快速溶解入水。二、制備的懸浮液能維持雞球蟲活疫苗的卵囊在水中8小時不沉降,提高雞飲入疫苗卵囊數量的均勻度。三、可以不停水免疫雞群,減少停水應激。四、也可以停水免疫雞群,縮短免疫時間。五、能降低疫苗的副反應。

具體實施方式

下面通過具體實例對本發明進行進一步的闡述,應該說明的是,下述說明僅是為了解釋本發明,并不對其內容進行限定。

一、該發明的助懸劑對球蟲子孢子無毒害作用、不堵塞水線。

經過反復研究,本發明人發現該發明的助懸劑對雞、雞球蟲卵囊、雞球蟲子孢子沒有毒害作用并且不堵塞水線。

水線是指在養雞生產中給雞輸送水的管道、乳頭式飲水器等,它們很容易被脫落的生物膜碎片、飲水使用的治療藥物的雜質堵塞,并且不容易清理。經試驗,本發明的助懸劑不會出現堵塞水線的現象。

雖然雞球蟲卵囊具有較厚的卵囊壁,能夠阻擋很多化學物質的殺滅作用;但是,當球蟲卵囊進入雞體內后,卵囊中的子孢子會釋放出來。按照專業常識,失去卵囊壁的?;ぷ饔煤?,子孢子會與雞喝入的懸浮劑直接接觸,子孢子有可能受到雞喝入的助懸劑的傷害。

實施例1.取黃原膠3.6克、95%乙醇水溶液25毫升混合作為助懸劑,將該助懸劑倒入6公斤水中并攪拌,該助懸劑很快溶解。含有堆形艾美爾球蟲、巨型艾美爾球蟲、柔嫩艾美爾球蟲、毒害艾美爾球蟲4種雞球蟲孢子化卵囊液2毫升(每毫升含孢子化卵囊1萬個),搖勻,均分成2份各1毫升。4日齡雞20只,均分成2組各10只。取該發明已溶解的助懸劑溶液9毫升與1份雞球蟲孢子化卵囊液混合,按每只雞1毫升(每毫升含孢子化卵囊1000個)的量各接種給1組雞;第2組雞不加助懸劑溶液,用9毫升水與1份雞球蟲孢子化卵囊液混合,按每只雞1毫升(每毫升含孢子化卵囊1000個)的量接種給雞。收集2組雞的含卵囊糞便,計算糞便中的卵囊總數。結果如表1.(毒害作用試驗)。兩組雞的糞便中卵囊總數基本相同。證明本發明中的助懸劑對球蟲子孢子沒有毒害作用。

表1.毒害作用試驗

二、該發明的助懸劑能快速溶解。

我們發現,該發明的懸浮劑能夠快速溶入水中。

實施例2.

取黃原膠每份3.6克。取體積濃度為38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、55%、65%、75%、85%、95%、100%的乙醇水溶液各25毫升。將一份乙醇水溶液與一份黃原膠混合,搖勻后倒入6公斤水中并攪拌,該助懸劑很快溶解,結果如表2.所示。

表2.乙醇濃度與溶解時間的關系

實驗證明,隨著乙醇濃度的升高,其溶解速度加快;特別是當乙醇水溶液的濃度為45%~100%時,溶解時間較短,故優選乙醇水溶液的濃度為45%~100%。乙醇水溶液的濃度取75%時,該溶液的防腐效果最好,故優選75%的乙醇水溶液。

實施例3.

取黃原膠3克、6克、9克、12克、15克、18克、21克、24克、27克、30克、33克、36克、39克、42克、45克、48克、51克、54克、57克、60克分別與100毫升50%(體積比)的乙醇水溶液混合,搖勻后倒入20公斤水中并攪拌,該助懸劑都在2分鐘內溶解,具體溶解時間如表3所示。實驗證明,當黃原膠與乙醇水溶液的比例在24克:100毫升以下時,助懸劑在水中溶解較快,故優選3~24克黃原膠:100毫升的乙醇水溶液。

表3黃原膠克數與溶解時間的關系

取羧甲基纖維素鈉(CMC)250克,少量緩慢加入100公斤水中并攪拌,其溶解速度很慢,長達十幾小時。

兩種方法的溶解速度結果如表4(溶解速度試驗),該發明的溶解速度最快。必須說明的是,在大規模養雞生產中,每個雞舍飼養的雞數多達2萬只,如果按每只雞飲水6公斤、含助懸劑0.25%計算(本發明不局限于0.25%),每個雞舍使用的助懸劑很多,緩慢加入將會浪費大量時間,影響雞球蟲疫苗的使用。

表4.溶解速度試驗

三、該發明的助懸劑能夠使疫苗卵囊維持8小時以上基本不沉降,提高疫苗卵囊分布的均勻度。

實施例5.

1、將黃原膠10.8克、45%乙醇水溶液75毫升混合作為助懸劑,將該助懸劑倒入18公斤水中并攪拌,該助懸劑很快溶解,此為溶液甲。

2、不加助懸劑的水18公斤。此為乙。

取上述甲、乙溶液各100毫升與1瓶2毫升共1000羽份的同批次的雞球蟲病四價活疫苗混合,搖勻。放置不同時間后,分別從上層取出50微升,用血球計數板計算該50微升中的孢子化卵囊數量。結果如表5.(均勻度測定試驗)。

從表3可以看出,溶液甲的卵囊分布均勻度好,能夠維持8小時以上基本不變。

表5.均勻度測定試驗

四、該發明的助懸劑既能用于停水免疫、又能用于不停水免疫,能降低疫苗的副反應并成功應用于養雞生產。

該發明使雞球蟲疫苗卵囊能夠在水中懸浮8小時以上,可以實現雞群的不停水免疫,減少應激反應;也可以應用于停水免疫,縮短免疫的操作時間。在兩種情況下,都可以降低疫苗的副反應。

球蟲疫苗的副反應是指疫苗免疫后,免疫的卵囊在雞體內繁殖并排出較多的下一代卵囊,假如免疫雞不能夠抵抗下一代卵囊的攻擊,免疫雞就會出現球蟲病癥狀,甚至死亡,嚴重影響球蟲病疫苗的效果。所以,一種好的球蟲病疫苗必須最大限度地減少由于球蟲病疫苗免疫而引起的副反應。

實施例6.6公斤實施例5中的甲、乙兩種溶液分別與1000頭份的雞球蟲疫苗混勻,停水2小時后給1000只雞飲水免疫,免疫后飼養在稻殼墊料上,免疫后12天解剖20只雞,按照Jhonson和Raid的方法記錄病變計分(Johnson,J.,and?Reid,W.M.1970.Anticoccidial?drugs:lesion?scoring?techniques?in?battery?and?floorpen?experiments?with?chickens.Exp.parasital.28:30~36),該病變計分標準列在本申請書的最后,免疫后21天,取10只雞用柔嫩艾美爾球蟲強毒5萬個、毒害艾美爾球蟲強毒5萬個、巨型艾美爾球蟲強毒株5萬個、堆形艾美爾球蟲強毒株5萬個攻擊,6天后解剖并記錄病變計分。將盲腸、十二指腸、小腸中段三個部位的平均計分加在一起即為計分總和。結果如表6(停水免疫的疫苗副反應和免疫效果)。.

表6.停水免疫的疫苗副反應和免疫效果

實施例7.6公斤實施例5中的甲、乙兩種溶液分別與1000頭份的某公司生產的雞球蟲疫苗混勻,在不停水的情況下各給1000只雞飲水免疫,免疫后飼養在稻殼墊料上,免疫后13天解剖20只雞,按照Jhonson和Raid的方法記錄病變計分,免疫后21天,取10只雞用柔嫩艾美爾球蟲強毒5萬個、毒害艾美爾球蟲強毒5萬個、巨型艾美爾球蟲強毒株5萬個、堆形艾美爾球蟲強毒株5萬個攻擊,6天后解剖并記錄病變計分。將盲腸、十二指腸、小腸中段三個部位的平均計分加在一起即為計分總和。結果如表7.(不停水免疫的疫苗副反應和免疫效果)。

表7.不停水免疫的疫苗副反應和免疫效果

從表6和表7的結果可以看出,該發明的助懸劑既能用于不停水免疫,又能用于停水免疫,取得了良好的免疫效果;并且兩種情況下,疫苗液甲組免疫的雞的腸道病變都較輕,降低了疫苗的副反應。

雞球蟲病活卵囊疫苗自COCCIVAC球蟲病疫苗1952年出現以來,已有50多年的歷史,在這個漫長的過程中,雖然有利用黃原膠懸浮雞球蟲卵囊的報道,但沒有人利用該發明提到的黃原膠、乙醇水溶液組成的混合物能速溶入水的特征對雞球蟲病疫苗進行不停水的飲水免疫以減少應激或停水后的飲水免疫以縮短操作時間,并且兩種情況下都能降低疫苗的副反應。

附錄1病變記分

1柔嫩艾美爾球蟲引起的病變感染后第5~7日之間剖檢盲腸(兩側盲腸病變不一致時,以嚴重一側為準)。

0分無肉眼可見病變。

+1分盲腸壁有少量散在出血點或出血斑,腸壁不增厚,腸內容物正常。

+2分出血點或出血斑數量增多,腸內容物明顯帶血,腸壁略增厚,有正常內容物

+3分盲腸腔內有大量血液或出現盲腸芯(血凝塊或灰白色干酪樣香蕉型塊狀物);盲腸壁極度增厚;盲腸腔沒有或僅有少量的盲腸糞便。

+4分因出血量多和干酪樣盲腸芯大,盲腸極度擴張;盲腸腔內沒有糞便或糞便已被包在腸芯中;病死雞記為+4分。

2巨型艾美爾球蟲引起的病變感染后第6~7日之間剖檢小腸。

0分無肉眼可見病變。

+1分小腸中段漿膜隱約可見小的紅色出血點;腸壁不增厚,腸腔中可能有少量桔黃色粘液,沒有脹氣。

+2分漿膜面有許多紅色出血點;腸腔中見多量的桔黃色粘液;腸壁增厚;輕度脹氣或沒有脹氣。

+3分有脹氣且腸壁增厚;粘膜面粗糙;腸內容物中充滿小的血凝塊和粘液。

+4分小腸大部分脹氣;腸內容物含有大量血凝塊和消化的紅細胞而呈紅褐色;腸壁顯著增厚。病死雞記為+4分。

3堆形艾美爾球蟲引起的病變感染后第5~7日之間剖檢十二指腸。

0分無肉眼可見病變。

+1分含有正在發育的卵囊的散在白色結節局限于十二指腸;結節長形,橫向排列,外觀呈梯形;漿膜面和粘膜面都可見到結節;每平方厘米最多有5個結節。

+2分病變較為密集,但未融合;3周齡仔雞病變可能延伸至十二指腸后20厘米處;腸壁不增厚;內容物正常。

+3分病變融合成片,腸壁顯得象罩了一層病變;腸壁增厚,內容物呈水樣;病變可延伸至卵黃蒂處。

+4分粘膜面淺灰色,白色結節完全融合;充血狀況可能表現為小的淤血點,或者在極其嚴重感染下整個粘膜面呈鮮紅色;在小腸上段可能已經分辨不出單個病變;在小腸中段可見典型的梯形病變;腸壁極度增厚,腸腔內充滿奶油狀滲出物,滲出物中可能有大量卵囊;病死雞記為+4分。

4、毒害艾美爾球蟲引起的病變感染后第5~7日之間剖檢小腸。

0分無肉眼可見病變。

+1分漿膜面容易見到針尖大小的散在的出血點和白點;粘膜面沒有或僅有很少病變。

+2分漿膜面有大量出血點和白點;小腸中段可能會出現輕度脹氣。

+3分漿膜面布滿紅色出血點和白點;粘膜面粗糙、增厚,并有許多針尖大小出血點;腸腔內有多量出血,沒有正常的腸內容物;脹氣擴展到整個小腸下段。

+4分大量出血使小腸外觀呈黑紫色,小腸內容物中含有紅色或棕色粘液,脹氣可能擴展到小腸大部分。病死雞記為4分。

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一種 球蟲病 疫苗 助懸劑 懸浮液
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