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维戈塞尔塔直播间: 含甜茶提取物的口香糖及其制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201310103450.9

申請日:

20130328

公開號:

CN103141659A

公開日:

20130612

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A23G4/12 主分類號: A23G4/12
申請人: 陳顯剛
發明人: 陳顯剛
地址: 541500 廣西壯族自治區桂林市漓江路3號三星大廈1-5-5
優先權: CN201310103450A
專利代理機構: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司 代理人: 石曉玲
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310103450.9

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種含甜茶提取物的口香糖及其制備方法,所述的甜味成分為甜茶提取物,它占該口香糖重量的0.2~10%;所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~40%,甜茶多酚的重量含量為2~21%。其制備方法是將甜茶提取物和膠基混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即得。本發明的口香糖以甜茶提取物作為甜味成分,當甜茶提取物中甜茶甙的含量在5~40%以及甜茶多酚的含量在2~21%大范圍內,甜茶甙與甜茶多酚相互作用,能達到較好的預防齲齒以及改善口腔健康的效果。當口香糖中甜茶提取物含量一定時,其預防齲齒效果隨著甜茶甙含量的減少以及甜茶多酚含量的增加而增大。

權利要求書

1.含甜茶提取物的口香糖,包括膠基和甜味成分,其特征在于:所述的甜味成分為甜茶提取物,它占該口香糖重量的0.2~10%;所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~40%,甜茶多酚的重量含量為2~21%。2.根據權利要求1所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~5%。3.根據權利要求2所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~3.5%。4.根據權利要求3所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~2.5%。5.根據權利要求4所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物占該口香糖重量的2.5%。6.根據權利要求1~5中任一項所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~40%,甜茶多酚的重量含量為7~21%。7.根據權利要求1~5中任一項所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~20%,甜茶多酚的重量含量為17~21%。8.根據權利要求1~5中任一項所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~10%,甜茶多酚的重量含量為18~21%。9.根據權利要求1~5中任一項所述的含甜茶提取物的口香糖,其特征在于:所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5%,甜茶多酚的重量含量為21%。10.權利要求1所述的含甜茶提取物的口香糖的制備方法,其特征在于:將甜茶提取物和膠基混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即得。

說明書

技術領域

本發明涉及一種口香糖,具體涉及一種含甜茶提取物的口香糖及其制備方法。

背景技術

甜茶(Rubus?Suavissmus?S?Lee)是廣西特有的天然甜味植物,也是世界上最好的高甜、低熱、安全無毒性且具有保健功能的甜味植物。甜茶中約含有3.2%以上的的黃酮類化合物、9%左右的甜茶多酚和5~8%的甜茶甙(Rubusoside),除此之外,還富含多種氨基酸和人體所必須的微量元素,具有較高的營養價值和保健價值。甜茶甙為甜茶呈現甜味口感的甜味因子,它是斯替維醇(Steviol)和葡萄糖結合而成的二萜甙的低熱量高甜味物質,其分子式為C32H50O12。從甜茶中提取的甜茶甙是甜味植物中口感最佳的,甜味的純正程度接近白糖,它的甜度相當于蔗糖的300倍,是大自然中最佳的糖代品。甜茶甙還能抑制口腔中產生齲齒的變形鏈球菌(S.mutans)生長以及合成葡聚糖的葡萄糖基轉移酶(GTF)的活性,從而抑制強黏附性的水不溶性葡聚糖(WIG)以及酸的產生,防止牙菌斑的產生,達到預防齲齒的效果。甜茶多酚是甜茶中重要的活性成分,包括特有的GOD型鞣花單寧,還包括沒食子酸、鞣花酸、2-吡喃酮-4,6-二羧酸,云實酸、地榆皂酸二內酯、咖啡酸等,具有明顯抗氧化、抗突變、降低膽固醇、降低血液中低密度脂蛋白、抑制血壓上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物過敏、改善腸胃微生物環境、消臭的作用,是目前發現最理想的純天然抗氧化劑。因此,甜茶提取物是一種理想的甜味劑,可應用于口香糖生產領域。

出版于《廣西醫學》2010年3月第32卷第3期的文獻《甜茶甙和木糖醇對變形鏈球菌合成水不溶性胞外多糖的對比研究》是以甜茶甙為原料,用含0.5%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培養基(TTY),采用二倍稀釋法配成5種不同濃度的甜茶甙溶液,依次為5g/100ml、2.5g/100ml、0.125g/100ml、0.625g/100ml、0.313g/100ml,上述濃度的甜茶甙溶液均對變形鏈球菌合成水不溶性胞外多糖產生了一定抑制作用,在上述濃度范圍內,隨著甜茶甙濃度的降低,抑制效果下降。出版于《廣西醫學》2012年6月第34卷第6期的文獻《甜茶護齒片對葡糖基轉移酶和細胞外水不溶性多糖的影響》是以桂林集琦實力天然有限公司生產的甜茶護齒含片為原料,用含1%蔗糖的胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培養基(TTY),采用二倍稀釋法配成5種不同濃度的溶液,依次為5g/50ml、2.5g/50ml、1.250g/50ml、0.625g/50ml、0.313g/50ml,由于該甜茶護齒含片中甜茶甙的含量為5.5%,換算成甜茶甙的濃度,依次為0.275g/50ml、0.138g/50ml、0.068g/50ml、0.034g/50ml、0.017g/50ml,上述濃度的甜茶護齒含片對變形鏈球菌GTF酶活力有明顯抑制作用,也能抑制WIG的合成,在上述濃度范圍內,隨著甜茶甙濃度的降低,抑制效果下降。綜合上述兩篇文獻,我們可以得出一個結論,即甜茶甙濃度越高,對變形鏈球菌的抑制效果越強,反之,則越弱。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種含甜茶提取物的口香糖及其制備方法,該口香糖以甜茶提取物為甜味成分,當甜茶提取物中含有較低劑量的甜茶甙和較高劑量的甜茶多酚時,可達到較好的預防齲齒以及改善口腔健康的效果。

本發明提供的技術方案是一種含甜茶提取物的口香糖,包括膠基和甜味成分,所述的甜味成分為甜茶提取物,它占該口香糖重量的0.2~10%;所述的甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~40%,甜茶多酚的重量含量為2~21%。

本發明所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~5%。

本發明所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~3.5%。

本發明所述甜茶提取物占該口香糖重量的0.2~2.5%。

本發明所述甜茶提取物占該口香糖重量的2.5%。

本發明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~40%,甜茶多酚的重量含量為7~21%。

本發明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~20%,甜茶多酚的重量含量為17~21%。

本發明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5~10%,甜茶多酚的重量含量為18~21%。

本發明所述甜茶提取物中甜茶甙的重量含量為5%,甜茶多酚的重量含量為21%。

為改善口感,還可在本發明的口香糖中添加酸味調節劑,它占該口香糖重量的0.2~1.2%。酸味調節劑可選用檸檬酸、酒石酸和蘋果酸中的一種。

為改善口感,清新口氣,還可在本發明的口香糖中添加薄荷油,它占該口香糖重量的0.05%~0.5%。

本發明還提供了上述含甜茶提取物的口香糖的制備方法,將甜茶提取物和膠基混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即得。

在上述混合過程中,還可以加入占該口香糖重量0.2~1.2%的酸味調節劑,所述酸味調節劑為檸檬酸、酒石酸或蘋果酸。

在上述混合過程中,還可以加入占該口香糖重量0.05%~0.5%的薄荷油。

本發明所述含甜茶提取物的口香糖的甜味成分為甜茶提取物,當甜茶提取物中甜茶甙的含量在5~40%以及甜茶多酚在2~21%的范圍內,甜茶甙和甜茶多酚相互作用,能較好地抑制變性鏈球菌生長以及合成葡聚糖的葡萄糖基轉移酶(GTF)的活性,從而抑制強黏附性的水不溶性葡聚糖(WIG)以及酸的產生,防止牙菌斑的產生,進而達到預防齲齒的效果。本發明的口香糖中甜茶提取物含量一定時,其預防齲齒效果隨著甜茶提取物中甜茶甙含量的升高、甜茶多酚含量的減小而降低。

具體實施方式

以下具體實施例對本發明作進一步闡述,但不作為對本發明的限定。

以下百分數均為重量百分數。實施例1

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%、膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的40%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

1)取甜茶葉粉碎至40目,放入30%(v/v)的乙醇中,在超聲波40KHz、溫度為40℃下回流提取2次,每次提取20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為9,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用70%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為40%、甜茶多酚的重量含量為21%。

實施例2

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物0.2%,膠基99.8%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的2%。

所述甜茶提取物的制備方法:

取甜茶葉粉碎至5目,放入80℃水中浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為5%、甜茶多酚的重量含量為2%。

實施例3

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%,膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至20目,放入10%(v/v)的乙醇中,常溫浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)用D101大孔吸附樹脂對甜茶粗提物進行吸附分離,用50%(v/v)乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為5%、甜茶多酚的重量含量為21%。

實施例4

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%,膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的10%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的18%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至30目,放入30%(v/v)的乙醇中,常溫浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)用D101大孔吸附樹脂對甜茶粗提物進行吸附分離,用50%(v/v)乙醇洗脫,將洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為10%、甜茶多酚的重量含量為18%。

實施例5

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%,膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的40%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的15%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至40目,放入30%(v/v)的乙醇中,在超聲波40KHz、溫度為40℃下浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為11,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用70%(v/v)的乙醇洗脫,將洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為40%、甜茶多酚的重量含量為15%。

對照例1

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%,膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的70%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的7%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至40目,加水混合,加入甜茶葉重量0.3%的纖維素酶,在溫度40℃、pH4.5條件下酶解2小時,滅酶,過濾,得濾液;

2)將濾液通過孔徑為1萬分子量的高分子過濾膜進行分離,得到分離液;

3)將分離液用陰離子交換樹脂進行吸附分離,得到第二次分離液,再將第二次分離液通過ADS-7型大孔吸附樹脂進行吸附分離,然后用50%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮、干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為70%、甜茶多酚的重量含量為7%。

對照例2

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物10%,膠基90%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的95%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的2%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至40目,加水混合,加入甜茶葉重量0.5%的纖維素酶、半纖維素酶的復合酶,在溫度40℃、pH4.5條件下酶解3小時,滅酶,過濾,得濾液;

2)將濾液通過孔徑為可截留1萬分子量的中空陶瓷膜設備進行超濾分離,得截留液和分離液;

3)將分離液通過陰離子交換樹脂進行吸附分離,得到第二次分離液,再將第二次分離液通過ADS-7型大孔吸附樹脂進行吸附分離,然后用70%(v/v)的乙醇洗脫,將洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為95%、甜茶多酚的重量含量為2%。

實施例6

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物5%,膠基95%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的40%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的15%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例5。

實施例7

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物5%,膠基95%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例3。

實施例8

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物5%,膠基95%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的35%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的16%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至30目,放入20%(v/v)的乙醇中,在超聲波30KHz、溫度為40℃下浸提2次,每次20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為10.5,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用60%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為35%、甜茶多酚的重量含量為16%。

實施例9

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物3.5%,膠基96.5%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的10%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的18%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例4。

實施例10

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物3.5%,膠基96.5%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的20%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的20%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至20目,放入30%(v/v)的乙醇中,在溫度為40℃條件下浸提20min,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為10,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用50%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為20%、甜茶多酚的重量含量為20%。

實施例11

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物1.5%,膠基98.5%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的10%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的18%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例4。

實施例12

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物1.5%,膠基98.5%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例3。

實施例13

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物0.3%,膠基99.7%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例3。

實施例14

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物0.5%,膠基99.5%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的21%。

所述甜茶提取物的制備方法同實施例3。

實施例15

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物2.5%,膠基96.5%、酒石酸1%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的30%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的19%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至30目,放入10%(v/v)的乙醇中,在超聲波20KHz、溫度為30℃條件下浸提2次,每次20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為10.8,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用50%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為30%、甜茶多酚的重量含量為19%。

實施例16

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物3.5%,膠基95.5%、蘋果酸0.8%、薄荷油0.2%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的8.9%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的20.2%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至30目,放入20%(v/v)的乙醇中,常溫浸提2次,每次20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為9.5,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用60%(v/v)的乙醇洗脫,取洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為8.9%、甜茶多酚的重量含量為20.2%。

實施例17

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物2.5%,膠基96.5%、蘋果酸0.8%、薄荷油0.2%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的5%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的5%。

所述甜茶提取物的制備方法:

取甜茶葉粉碎至5目,放入80℃水中浸提30min,合并提取液,過濾,濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為5%、甜茶多酚的重量含量為5%。

實施例18

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物8%,膠基91%、蘋果酸0.8%、薄荷油0.2%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的40%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的7%。

所述甜茶提取物的制備方法:

1)取甜茶葉粉碎至40目,放入30%(v/v)的乙醇中,在超聲波40KHz、溫度為70℃下浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為12.5,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用50%(v/v)的乙醇洗脫,將洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為40%、甜茶多酚的重量含量為7%。

實施例19

含甜茶提取物的口香糖的配方:甜茶提取物2.5%,膠基96.5%、蘋果酸0.8%、薄荷油0.2%;其中,甜茶甙占甜茶提取物重量的40%、甜茶多酚占甜茶提取物重量的10%。

1)取甜茶葉粉碎至40目,放入30%(v/v)的乙醇中,在超聲波40KHz、溫度為60℃下浸提2次,每次浸提20min,合并提取液,過濾,取濾液回收溶劑,得甜茶粗提物。

2)在甜茶粗提物中加入石灰水使其pH值為11,待雜質沉淀后,濾去沉淀,取上清液備用。

3)調節上清液pH至中性后,用D101大孔吸附樹脂對其進行吸附分離,用50%(v/v)的乙醇洗脫,將洗脫液濃縮,干燥,即為甜茶提取物,其中,甜茶甙的重量含量為40%、甜茶多酚的重量含量為10%。

實施例1~13以及對照例1、2所述的含甜茶提取物的口香糖的制備方法是將甜茶提取物和膠基混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即為甜茶口香糖。

實施例15所述的含甜茶提取物的口香糖的制備方法是將甜茶提取物、膠基和酒石酸混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即為甜茶口香糖。

實施例16~19所述的含甜茶提取物的口香糖的制備方法是將甜茶提取物、膠基、蘋果酸和薄荷油混合,在50~60℃下加熱至其熔融,攪勻,冷卻即為糖坯;將糖坯壓延成糖片,冷卻,切塊,即為甜茶口香糖。

實驗例

為表明本發明的含甜茶提取物的口香糖對齲齒的預防效果,申請人針對該口香糖對口腔致齲菌(變形鏈球菌)的作用機制進行了體外實驗研究,具體報告如下:

1、實驗方法

1.1口香糖溶液和菌懸液的制備

實驗組:分別取本發明實施例3~5以及對照例1~2的口香糖25g,將其粉碎,置于試管中,再分別添加100ml含1%的蔗糖的TTY液體培養基(胰蛋白胨-胰蛋白月示-酵母提取物培養基)配成口香糖溶液。

陰性對照組:采用不含該口香糖的TTY液體培養基。

將變形鏈球菌(S.mutans)于TSB培養基(胰蛋白酶消化大豆液體培養基)活化3h后,接種于MSB固體培養基(輕唾選擇培養基)37℃下厭氧培養48小時,挑取典型菌落于5ml無菌生理鹽水內制成混懸液,調波長為540nm處,光密度值(Optical?Density,OD)為1.0的菌懸液。

1.2、口香糖溶液對致齲菌生長的影響

分別取0.3ml菌懸液接種于3ml不同濃度的口香糖溶液中,37℃下厭氧培養48小時,并分別離心收集各試管細菌,置于2ml生理鹽水中,混勻,紫外可見光分光光度計測波長為540nm處的OD值。

1.3、口香糖溶液對S.mutans產酸作用的影響

分別取3ml菌懸液接種于等量的各濃度的口香糖溶液中,37℃下厭氧培養48小時,并計算出培養前后的△pH值,并與陰性對照組的△pH值對比。

1.4、口香糖溶液對S.mutans粘附作用的影響

按口香糖溶液與菌懸液為10:1的比例,分別將菌懸液接種于各濃度的口香糖溶液中,所有試管30°水平角厭氧培養48h后,將粘附到試管壁的細菌用NaOH溶液洗脫,測定波長在540nm處的OD值,并計算粘附抑制率,與陰性對照組的粘附抑制率對比。

1.5、葡萄糖基轉移酶(Glucosyltransferase,GTF)的提取和水不溶性胞外多糖(WIG)的檢測

取不同濃度的口香糖溶液各3ml,加入S.mutans菌懸液0.3ml,厭氧培養后將細菌培養液離心,收集上清液,加入固體硫酸銨,使飽和度達到60%,離心后,將沉淀溶于磷酸鹽緩沖液中透析,離心,上清液即為GTF粗酶。取0.1mlGTF粗酶,加入4ml蒸餾水,采用考馬斯亮藍法(Bradford法)測定總蛋白含量。另取100μl0.5mmol/L蔗糖溶液、GTF粗酶0.1ml,加入0.1mmol/L磷酸鈉緩沖液,使混合液的總體積達500μl,37℃孵育60min,加熱至100℃持續10min后終止反應,加入2.5ml雙蒸水混勻,離心,收集上清液采用Smogyi法測定酶一底物反應液中還原糖量。GTF活力單位(IU)定義為標準條件下(37℃反應1h每分鐘從蔗糖釋放1μmol還原糖所需的酶量),并計算酶的比活力。

取細菌培養液離心,棄上清液,取沉淀物加入0.5mol/L的NaOH5ml,離心,取上清液,加入其3倍體積的無水乙醇,離心,沉淀即為反應生成的水不溶性胞外多糖,用蒽酮法測定水不溶性胞外多糖的含量。與陰性對照組中S.mutans的酶活性和不溶性胞外多糖對比。

2、實驗結果:

2.1、在上述實驗中,口香糖溶液中均有變形鏈球菌生長,且隨著甜茶提取物中甜茶甙含量的升高以及甜茶多酚含量的降低,溶液中變形鏈球菌的濃度增加。實驗組S.mutans的OD值總體均數低于陰性對照組(P<0.01),且其抑制性隨甜茶提取物中甜茶甙含量的降低以及甜茶多酚的增加而增加。具體結果見表1。

表1口香糖溶液對變形鏈球菌的抑制作用的OD值(X±s)

2.2、口香糖溶液實驗前后△pH(pH變化量)總體均數間均具有差異,在甜茶提取物中甜茶甙含量為5%、甜茶多酚含量為21%時,S.mutans的△pH值變化量是最小的;實驗組△pH值的總體均數間顯著低于陰性對照組△pH(P<0.001)。具體見表2。

表2口香糖溶液對變形鏈球菌產酸的影響(X±s)

2.3、隨著甜茶提取物中甜茶甙含量的升高、甜茶多酚含量的降低,粘附抑制率也隨之降低。實驗組粘附菌液的OD值的總體均數顯著低于陰性對照組組(p<0.01),具體結果見表3。

表3口香糖溶液對變形鏈球菌粘附的影響(X±s)

2.4、實驗組對S.mutans酶液中總蛋白、GTF酶活力、水不溶性胞外多糖的影響

2.4.1隨著甜茶提取物中甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量的降低,S.mutans酶液中總蛋白的含量反而減少。實驗組不同濃度的口香糖溶液中總蛋白含量反而高于陰性對照組組。具體見表4。

表4口香糖溶液對S.mutans酶液中總蛋白含量的影響(X±s)

2.4.2隨著甜茶提取物中甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量的降低,S.mutans的GTF活性逐漸升高。陰性對照組的還原糖量、酶活力、比活力均明顯高于實驗組(p<0.001)。具體見表5。

表5口香糖溶液對S.mutans中GTF的影響(X±s)

2.4.3隨著甜茶提取物中甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量的降低,S.mutans合成的水不溶性胞外多糖含量呈升高趨勢;陰性對照組S.mutans合成水不溶性胞外多糖的能力顯著高于實驗組(p<0.001)。具體見表6。

表6口香糖溶液對S.mutans合成水不溶性胞外多糖的影響(X±s)

經上述實驗,實驗組的GTF酶活性與甜茶提取物中甜茶甙含量呈正相關,與甜茶多酚含量呈負相關關系,當口香糖中甜茶提取物的含量一定時,對S.mutans的抑制隨著甜茶甙含量升高、甜茶多酚含量降低而降低。

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