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埃瓦尔VS维戈塞尔塔: 一種富含免疫球蛋白的液態乳制品及其制備方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201210445840.X

申請日:

20121108

公開號:

CN102919365B

公開日:

20140326

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A23C9/152 主分類號: A23C9/152
申請人: 光明乳業股份有限公司
發明人: 任璐,張鋒華,苗君蒞,蔡濤,王輝,肖楊,劉振民
地址: 201103 上海市閔行區吳中路578號
優先權: CN201210445840A
專利代理機構: 上海智信專利代理有限公司 代理人: 朱水平;沈利
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210445840.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種富含免疫球蛋白的液態乳制品及其制備方法。所述液態乳制品原料包括下述以重量百分比計的組分:35~99%的原料乳,0.1~5%乳清粉和0.8~59.75%的水,所述乳清粉為IgG含量≥10%的乳清粉。所述制備方法包括步驟:(1)將原料混合,經均質、殺菌后冷卻,得滅菌的原料混合物;(2)將乳清粉溶解于水或原料乳中,混合均勻后均質,1.0-1.2微米的陶瓷膜過濾后再經巴氏殺菌,制得無菌的液態IgG;(3)向滅菌的原料混合物中加入(2)制得的IgG;(4)溫度≤20℃條件下無菌灌裝,即得。本發明所述液態乳制品延長了貨架期,擴大了銷售范圍和銷售周期;節約了生產成本和管理成本;且除了具有常規乳品的營養功能外,還能幫助人體進行免疫調節作用。

權利要求書

1.一種富含免疫球蛋白的液態乳制品,其特征在于,其原料包括下述以重量百分比計的組分:35~99%的原料乳,0.1~5%乳清粉和0.8~59.75%的水,所述乳清粉為免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉;所述的富含免疫球蛋白的液態乳制品由包括下述步驟的方法制得:(1)將包括原料乳和水的原料混合,經均質、殺菌后冷卻,得滅菌的原料混合物;所述殺菌的條件為在121-150℃下,殺菌4-15秒;(2)制備無菌的液態免疫球蛋白IgG:將免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水中,混合均勻后在60-65℃、150-300bar條件下進行均質,然后通過1.0-1.2微米的陶瓷膜過濾,再經過巴氏殺菌,從而制得無菌的液態免疫球蛋白IgG;所述巴氏殺菌的溫度為60-65℃,所述巴氏殺菌的時間為15s-15min;(3)無菌條件下,向步驟(1)制得的滅菌的原料混合物中加入步驟(2)制得的無菌的液態免疫球蛋白IgG;(4)在溫度≤20℃的條件下進行無菌灌裝,即得。2.如權利要求1所述的液態乳制品,其特征在于,所述的原料乳為生鮮牛奶。3.如權利要求1所述的液態乳制品,其特征在于,所述的原料還包括本領域液態奶中常規添加的食品添加劑。4.如權利要求3所述的液態乳制品,其特征在于,所述的食品添加劑為穩定劑和/或風味物質;所述的穩定劑選自單硬脂酸甘油脂肪酸酯、雙硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂、卡拉膠和微晶纖維素中的一種或多種;所述的風味物質為本領域常規使用的各種風味物質。5.如權利要求4所述的液態乳制品,其特征在于,所述穩定劑的用量為0.1~0.6%,所述風味物質的用量為0.05%~1%,所述百分比為占原料總重量的重量百分比。6.如權利要求1所述的液態乳制品,其特征在于,步驟(1)所述均質為一級均質,即均質的溫度為60-80℃,均質的壓力為150-300bar;或者,所述均質為二級均質,即均質的溫度為60-80℃,均質的壓力分別為30-45bar,100-250bar。7.如權利要求1所述的液態乳制品,其特征在于,步驟(1)所述冷卻為將滅菌的原料混合物冷卻到25℃以下。8.如權利要求1所述的液態乳制品,其特征在于,所述的原料還包括食品添加劑;所述的食品添加劑為熱敏性食品添加劑,所述食品添加劑在步驟(1)所述的均質后添加;或者,所述的食品添加劑為非熱敏性食品添加劑,所述食品添加劑在步驟(1)中所述混合的過程中添加。9.一種如權利要求1~8任一項所述富含免疫球蛋白的液態乳制品的制備方法,其包括下述步驟:(1)將包括原料乳和水的原料混合,經均質、殺菌后冷卻,得滅菌的原料混合物;(2)制備無菌的液態免疫球蛋白IgG:將免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水中,混合均勻后在60-65℃、150-300bar條件下進行均質,然后通過1.0-1.2微米的陶瓷膜過濾,再經過巴氏殺菌,從而制得無菌的液態免疫球蛋白IgG;(3)無菌條件下,向步驟(1)制得的滅菌的原料混合物中加入步驟(2)制得的無菌的液態免疫球蛋白IgG;(4)在溫度≤20℃的條件下進行無菌灌裝,即得。

說明書

技術領域

本發明涉及液態奶領域,尤其涉及一種富含免疫球蛋白的液態乳制品及其制備方法。

背景技術

隨著我國國民經濟的迅猛發展,快節奏、高效率的工作和生活方式,以及應對各種激烈的市場競爭,使越來越多的人長期處于亞健康狀態,導致人體的免疫力下降。與此同時,人民生活水平的提高及可持續發展觀、生活質量觀的日益興起,人們科學的醫療保健觀念正在逐步形成。過去“有病才去看醫生”的舊觀念正漸漸淡化,轉而追求以自我保健為中心的健康模式,自行掌管健康。這樣一種觀念的形成,為功能性食品特別是安全、天然的抗病毒的食品的發展提供了一個巨大的機會。

免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)是牛奶中最重要的免疫活性蛋白。牛奶中的免疫球蛋白主要有IgG、IgM、IgA,其中IgG為主要的免疫球蛋白。泌乳期牛乳中IgG的含量為0.030~0.614mg/mL,平均為0.322mg/mL。牛乳中的免疫球蛋白具有很多生物活性功能。牛奶IgG能夠有效抑制細菌的繁殖,抑制細菌定植,抑制細菌分泌毒素,還能夠阻止毒素與人體細胞受體的結合,中和毒素,以及有效地抗病毒。

SARS、禽流感等重大傳染病提醒人類,提高免疫能力才能有健康的生命,因此牛奶免疫球蛋白的功能引起普遍的關注。目前市場上有很多含有免疫球蛋白的乳制品,但大多數為固體。這主要是因為常規的液態乳品加工工藝會對免疫球蛋白的活性產生不利影響,容易導致免疫球蛋白變性(見表1),所以研究解決免疫球蛋白在加工中的熱穩定性關系到其是否能夠合理地應用到乳制品當中,從而影響這一類乳制品的開發研究。

表1常規殺菌條件下免疫球蛋白(IgG)變形率

??殺菌條件 ??免疫球蛋白(IgG)變形率 ??LTLT(63℃、30min) ??≤1% ??HTST(72℃、15s) ??≤10% ??UHT(120~139℃,4s) ??≥97.6%

發明內容

本發明解決的技術問題在于克服了超高溫乳制品加工工藝中的熱處理對免疫球蛋白會造成損失的缺陷,而提供一種利用無菌后添加的方式在常溫下加入無菌液體免疫球蛋白的方法,從而完全保留了免疫球蛋白功能性組分,使其充分發揮功效。

本發明提供的技術方案之一是:

一種富含免疫球蛋白的液態乳制品,其原料包括下述以重量百分比計的組分:35~99%的原料乳,0.1~5%乳清粉和0.8~59.75%的水,所述乳清粉為免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉;

所述的富含免疫球蛋白的液態乳制品由包括下述步驟的方法制得:

(1)將包括原料乳和水的原料混合,經均質、殺菌后冷卻,得滅菌的原料混合物;

(2)制備無菌的液態免疫球蛋白IgG:將免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水或原料乳中,混合均勻后在60-65℃、150-300bar條件下進行均質,然后通過1.0-1.2微米的陶瓷膜過濾,再經過巴氏殺菌,從而制得無菌的液態免疫球蛋白IgG;

(3)無菌條件下,向步驟(1)制得的滅菌的原料混合物中加入步驟(2)制得的無菌的液態免疫球蛋白IgG;

(4)在溫度≤20℃的條件下進行無菌灌裝,即得。

本發明中,對于所述的富含免疫球蛋白的液態乳制品,其原料較佳地包括下述以重量百分比計的組分:55~99%的原料乳,1~5%乳清粉和0.8~43%的水,所述乳清粉為免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉;

本發明中,所述的原料乳可以是本領域各種常規的用于制備液態乳品的原料乳,如牛乳、羊乳、馬乳等;所述的原料乳既可以是生鮮乳,也可以是還原乳,較佳地為生鮮乳,優選生鮮牛奶;所述的生鮮牛奶為符合GB-19301《食品安全國家標準生乳》標準的生鮮牛奶。從營養物質的含量來考慮,本發明的原料乳中的蛋白質含量優選≥2.9wt%,脂肪含量可以根據具體產品要求來定,可選用脫脂奶、低脂奶或全脂奶等。

本發明中,較佳地,所述的原料還包括本領域液態奶中常規添加的食品添加劑,如穩定劑和/或風味物質。

所述的穩定劑可選用牛奶生產工藝中各種常規的穩定劑,一般是符合GB2760規定的各種穩定劑或復配而成的復合穩定劑;較佳地,所述的穩定劑選自單硬脂酸甘油脂肪酸酯、雙硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂、卡拉膠和微晶纖維素中的一種或多種。所述的穩定劑的用量為本領域液態奶中常規的添加量,較佳地為0.1~0.6%,更佳地為0.2~0.3%,所述百分比為占原料總重量的重量百分比。

所述的風味物質可選用本領域常規使用的各種風味物質,如香精和/或香料等調節牛奶風味的物質。所述的香精可選用本領域各種常規的香精,較佳地選自香草香精、牛奶香精和脂蕾中的一種或多種。所述風味物質的用量為本領域的常規用量,較佳地為0.05%~1%,更佳地為0.1~0.5%,所述百分比為占原料總重量的重量百分比。

本發明中,步驟(1)所述均質的條件為本領域常規的均質條件;較佳地,步驟(1)所述均質為一級均質,即均質的溫度為60-80℃,均質的壓力為150-300bar;或者,所述均質為二級均質,即均質的溫度為60-80℃,均質的壓力分別為30-45bar,100-250bar;更佳地,步驟(1)所述均質為一級均質,即均質的溫度為65-75℃,均質的壓力為200-250bar;或者,所述均質為二級均質,即均質的溫度為65-75℃,均質的壓力分別為35-40bar,150-200bar。

本發明中,步驟(1)所述殺菌的條件為本領域常規;較佳地,所述殺菌的條件為在121-150℃下,殺菌4-15秒;更佳地,所述殺菌的條件為在131-140℃下,殺菌7-12秒。

本發明中,步驟(1)所述冷卻較佳地為將滅菌的原料混合物冷卻到25℃以下。

本發明步驟(1)所述原料還可以包括本領域液態奶中常規添加的食品添加劑,如穩定劑和/或風味物質。所述的食品添加劑若是熱敏性的,則在步驟(1)所述的均質后添加;若所述食品添加劑是非熱敏性的,則在步驟(1)中所述混合的過程中添加。

本發明中,步驟(2)所述巴氏殺菌為本領域常規,較佳地,所述巴氏殺菌的溫度為60-65℃,所述巴氏殺菌的時間為15s-15min;更佳地,所述巴氏殺菌的溫度為62-65℃,所述巴氏殺菌的時間為1min-10min。

本發明中,所述免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉為市售常規途徑獲得。

本發明提供的技術方案之二是:一種如上所述的富含免疫球蛋白的液態乳制品的制備方法,其包括下述步驟:

(1)將包括原料乳和水的原料混合,經均質、殺菌后冷卻,得滅菌的原料混合物;

(2)制備無菌的液態免疫球蛋白IgG:將免疫球蛋白IgG含量≥10%的乳清粉充分溶解于水或原料乳中,混合均勻后在60-65℃、150-300bar條件下進行均質,然后通過1.0-1.2微米的陶瓷膜過濾,再經過巴氏殺菌,從而制得無菌的液態免疫球蛋白IgG,灌裝至無菌袋中備用;

(3)無菌條件下,向步驟(1)制得的滅菌的原料混合物中加入步驟(2)制得的無菌的液態免疫球蛋白IgG;

(4)在溫度≤20℃的條件下進行無菌灌裝,即得。

本發明是將熱敏性的富含免疫球蛋白的乳清粉制成無菌的液態免疫球蛋白樣品,然后采用無菌后添加的方式添加到已經滅菌處理過的常規液態乳制品中,從而制得本發明在常溫條件下保存的富含免疫球蛋白的液態乳制品。

在符合本領域常識的基礎上,上述各優選條件,可任意組合,即得本發明各較佳實例。

本發明所用試劑和原料均市售可得。

本發明的積極進步效果在于:

1、本發明富含免疫球蛋白液態乳制品的貨架期較長,在確保免疫球蛋白活性的前提下,可以達到常溫條件下保質期六個月以上,從而擴大了銷售范圍和銷售周期;

2、本發明的產品采用UHT殺菌后段無菌添加免疫球蛋白液體,大大節約了生產成本和管理成本,解決了產品在貨架期內的穩定性問題;

3、本發明通過膜過濾和低溫巴氏殺菌的方式將富含免疫球蛋白的乳清粉制成無菌的液態免疫球蛋白,解決了粉體在牛奶中難溶解且熱處理易變性的問題,該方法大大提高了免疫球蛋白在牛奶中的利用率。

4、本發明富含免疫球蛋白的液態乳制品除了具有常規乳品的營養功能外,還能幫助人體進行免疫調節作用。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進一步說明本發明,但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍之中。

下列實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規條件,或按照制造廠商所建議的條件。本發明中除特別說明之外,所用的百分比都是重量百分比。實施例中所用原料的生產廠商如下:

原料乳:光明乳業股份有限公司荷斯坦分公司;

乳清粉(免疫球蛋白IgG含量≥10%):戴維林國際貿易(上海)有限公司;

穩定劑QSR-70(組成:單硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、卡拉膠):上海藍島嘉利食品添加劑有限公司;

穩定劑SR-16(組成:單硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、大豆磷脂):上海藍島嘉利食品添加劑有限公司;

穩定劑9395-C(組成:微晶纖維素、單硬脂酸甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯):丹尼斯克(中國)有限公司;

香精APG-07:愛普香料集團股份有限公司;

香料APG-03:愛普香料集團股份有限公司。

實施例1

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g) ??原料乳 ??990 ??水 ??8 ??乳清粉(IgG≥10%) ??1 ??穩定劑QSR-70 ??1

制備工藝:

(1)將穩定劑QSR-70加入原料乳中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)二級均質:均質溫度為75℃,第一級在30bar,第二級在250bar下進行;

(3)殺菌:殺菌條件為121℃,時間為15秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(4)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為60℃,均質壓力為300bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.2微米膜過濾和65℃巴氏殺菌15s制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(5)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標

??脂肪 ??3.1% ??蛋白 ??2.9% ??免疫球蛋白IgG ??100mg/L

實施例2

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g) ??原料乳 ??800 ??乳清粉(IgG≥10%) ??3.5 ??穩定劑QSR-70 ??1 ??香精APG-07 ??0.5 ??水 ??196

制備工藝:

(1)將穩定劑QSR-70、香精APG-07、水加入原料奶中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)二級均質:均質溫度:60℃,第一級在45bar,第二級在100bar下進行;

(3)殺菌:殺菌條件為150℃,時間為4秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(4)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為65℃,均質壓力為150bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.0微米膜過濾和60℃巴氏殺菌15min制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(5)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標 ??脂肪 ??2.5% ??蛋白 ??2.3%

??免疫球蛋白IgG ??350mg/L

實施例3

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g) ??原料乳 ??350 ??乳清粉(IgG≥10%) ??50 ??穩定劑SR-16 ??2.5 ??水 ??597.5

制備工藝:

(1)將穩定劑SR-16、水分加入原料奶中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)二級均質:均質溫度:80℃,第一級在45bar,第二級在100bar下進行;

(3)殺菌:殺菌條件為135℃,時間為4秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(4)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為63℃,均質壓力為200bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.2微米膜過濾和60℃巴氏殺菌15min制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(5)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標 ??脂肪 ??1.1% ??蛋白 ??1.0% ??免疫球蛋白IgG ??5000mg/L

實施例4

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g)

??原料乳 ??800 ??乳清粉(IgG≥10%) ??20 ??穩定劑SR-16 ??2.5 ??水 ??177.5

制備工藝:

(1)將穩定劑SR-16、水分加入原料奶中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)一級均質:均質溫度:80℃,在300bar下進行均質;

(3)殺菌:殺菌條件為135℃,時間為4秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(4)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為63℃,均質壓力為200bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.2微米膜過濾和60℃巴氏殺菌10min制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(5)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標 ??脂肪 ??2.5% ??蛋白 ??2.3% ??免疫球蛋白IgG ??2000mg/L

實施例5

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g) ??原料奶 ??600 ??乳清粉(IgG≥10%) ??10 ??穩定劑9395-C ??6 ??水 ??384

制備工藝:

(1)將穩定劑9395-C、水分加入原料奶中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)一級均質:均質溫度:60℃,在150bar下進行均質;

(3)殺菌:殺菌條件為135℃,時間為4秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(4)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為63℃,均質壓力為200bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.0微米膜過濾和60℃巴氏殺菌15min制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(5)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標 ??脂肪 ??1.8% ??蛋白 ??1.7% ??免疫球蛋白IgG ??1000mg/L

實施例6

原料配方如下表:

??原料 ??添加量(g) ??原料乳 ??600 ??乳清粉(IgG≥10%) ??3 ??穩定劑9395-C ??4 ??香精APG-03 ??10 ??水 ??383

制備工藝:

(1)將穩定劑9395-C、水分加入原料奶中,攪拌10分鐘,混合均勻;

(2)一級均質:均質溫度:80℃,在150bar下進行均質;

(3)將香精APG-03加入到均質后的牛奶中混合均勻;

(4)殺菌:殺菌條件為135℃,時間為4秒,將牛奶冷卻至25℃以下;

(5)液態無菌免疫球蛋白的制備:將富含免疫球蛋白的乳清粉按照1︰8(w/w)的比例溶解在水中,然后采用均質溫度為63℃,均質壓力為200bar,充分溶解免疫球蛋白,再用1.2微米膜過濾和60℃巴氏殺菌10min制得無菌液體免疫球蛋白樣品備用。

(6)向冷卻后的滅菌牛奶加入無菌免疫球蛋白液體,進行無菌灌裝。

檢驗結果如下:

??項目 ??指標 ??脂肪 ??1.8% ??蛋白 ??1.7% ??免疫球蛋白IgG ??300mg/L

效果實施例1本發明富含免疫球蛋白的液態奶乳制品的感官評定結果

此感官評定實驗由50名評價員完成。得分高者則效果好,評價高。具體結果見下表:

由以上數據顯示,富含免疫球蛋白的液態乳制品從風味、口感、色澤三方面來看,都受到測評者的親睞。

效果實施例2本發明富含免疫球蛋白的液態乳制品在保質期內感官和理化評價

富含免疫球蛋白的液態乳(實施例5)在保質期內感官和理化的測試。

測試結果見下表:

*對照樣牛奶:常規超高溫殺菌牛奶,未添加免疫球蛋白。

由以上數據顯示,將富含免疫球蛋白的液態乳制品與常規超高溫牛奶比較,富含免疫球蛋白的液態奶在常溫七個月內產品的品質比較穩定,免疫球蛋白較好地保存了其活性,特別是在加速儲存試驗(恒溫箱36±1℃)條件下,免疫球蛋白在三個月內仍能夠較好地保存其活性。上述結果說明富含免疫球蛋白的液態奶在確保免疫球蛋白活性的前提下,能夠實現六個月以上的保質期,從而具有理想的貨架期,可以擴大銷售范圍和銷售周期。需要特別說明的是,對照樣牛奶由于未額外添加免疫球蛋白,因此其免疫球蛋白的含量幾乎為零,而且目前市場上幾乎所有的液態奶產品中的免疫球蛋白含量都幾乎為零。

效果實施例3本發明富含免疫球蛋白的液態乳制品的免疫功能效果評價

根據中國衛生部2003年公布的保健食品檢驗與評價技術規范(2003版)中所列的試驗項目、試驗原則和結果判定的初步規定,進行本發明富含免疫球蛋白的液態乳制品的免疫功能效果評價實驗。具體如下:

一、試驗項目

1.1體重;

1.2臟器/體重比之測定:胸腺/體重比值(胸腺指數),脾臟/體重比值(脾指數);

1.3細胞免疫功能測試:小鼠淋巴細胞轉化實驗,遲發型變態反應實驗(DTH);

1.4體液免疫功能測試:抗體生成細胞檢測,血清溶血素測定;

1.5單核-巨噬細胞功能測試:小鼠炭粒廓清實驗,小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗;

1.6NK細胞活性測試;

二、試驗原則

上述試驗項目所列指標為必做項目。

三、結果判定標準

增強免疫力功能:在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四個方面任兩方面結果陽性,可以判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。

其中細胞免疫功能測試項目中的兩個實驗結果均為陽性,或任一試驗的兩個劑量組結果陽性,可判定細胞免疫功能測試結果陽性。體液免疫功能測試項目中的兩個實驗結果均為陽性,或任一試驗的兩個劑量組結果陽性,可判定體液免疫功能測試結果陽性。單核-巨噬細胞功能測試項目中的兩個實驗結果均為陽性,或任一試驗的兩個劑量組結果陽性,可判定單核-巨噬細胞功能測試結果陽性。NK細胞活性功能測試項目中的兩個實驗結果均為陽性,或任一試驗的兩個劑量組結果陽性,可判定NK細胞活性測試結果陽性。

四、試驗方法

將300只小鼠按體重隨機分入五個實驗大組,每組60只(免疫一組進行NK細胞活性測試和淋巴細胞轉化實驗,免疫二組進行DTH、脾指數和胸腺指數實驗,免疫三組進行抗體生成細胞檢測和血清溶血素測定,免疫四組進行炭粒廓清實驗,免疫五組進行巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗。每個實驗大組中均設有空白對照組及低、中、高劑量組四組小組,每小組15只。按照每人(按60kg體重計算)每日200ml富含免疫球蛋白的牛奶(實施例5)a,相當于3.3ml/kg·bw,分別按人體推薦攝入量5、10、30倍設計三個劑量組,即17ml/kg·bw(低劑量組)、33ml/kg·bw(中劑量組)和100ml/kg·bw(高劑量組),另外0ml/kg·bw為不含免疫球蛋白IgG的牛奶代替受試物作為對照組,經口每日一次給予小鼠相應劑量的受試物,連續灌胃30d后測各項免疫力功能指標。(a注明:人體推薦量為200ml/60kg體重。由于樣品推薦劑量很大,超過動物最大承受量,故試驗采用脫去水分的有效成份進行,脫水后有效成份放置4℃冷藏)。

五、實驗數據處理

將所得的實驗數據采用SPSS軟件進行統計和分析。

六、實驗結果

表1免疫一組(NK細胞活性、脾淋巴細胞轉化實驗)結果(n=10)

?組別(ml/kg·bw) ??NK細胞活性(%) ??淋轉OD差值 ?0 ??71.2±10.7 ??0.008±0.005 ?17 ??73.9±17.5 ??0.010±0.005 ?33 ??82.0±15.2 ??0.015±0.008 ?100 ??92.4±13.1*# ??0.018±0.009*#

由表1可見:100ml/kg·bw劑量組的NK細胞活性顯著高于0ml/kg·bw對照組(p<0.05)。100ml/kg·bw劑量組的OD差值顯著高于0ml/kg·bw對照組(p<0.05)。

表2免疫二組(DTH實驗)結果(n=10)

??組別(ml/kg·bw) ??腫脹度 ??0 ??9.7±3.1 ??17 ??10.3±2.9 ??33 ??12.9±4.9*# ??100 ??12.9±2.6*#

由表2可見:DTH實驗中,33ml/kg·bw、100ml/kg·bw劑量組的左右耳重量差值(腫脹度)顯著高于0ml/kg·bw空白對照組(p<0.05)。

表3免疫三組(抗體生成細胞和溶血素實驗)結果(n=10)

?組別(ml/kg·bw) ??溶血空斑(×106個/全脾) ??HC50 ?0 ??182±63 ??91±40 ?17 ??254±47 ??92±29 ?33 ??286±91 ??123±27 ?100 ??287±90*# ??127±32*#

由表3可見:抗體生成細胞檢測中,33ml/kg·bw、100ml/kg·bw劑量組的空斑數顯著高于0ml/kg·bw空白對照組(p<0.05);血清溶血素實驗中,33ml/kg·bw、100ml/kg·bw劑量組的HC50數顯著高于0ml/kg·bw空白對照組(p<0.05)。

表4免疫四組(碳廓清實驗)結果(n=10)

??組別(ml/kg·bw) ??吞噬指數(%) ??0 ??6.3±0.34 ??17 ??6.39±0.57 ??33 ??6.16±0.66 ??100 ??6.15±0.70

由表4可見:炭粒廓清實驗中,17ml/kg·bw、33ml/kg·bw、100ml/kg·bw劑量組的吞噬指數略高于0ml/kg·bw空白對照組,但無統計學差異。

表5免疫五組(吞噬實驗)結果(n=10)

?組別(ml/kg·bw) ??吞噬率(%) ??吞噬指數 ?0 ??22.1±6.1 ??0.39±0.10 ?17 ??23.5±5.4 ??0.45±0.09 ?33 ??29.7±7.1 ??0.54±0.11 ?100 ??26.1±4.1 ??0.44±0.11

由表5可見:小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗中,33ml/kg·bw吞噬率和吞噬指數均顯著高于0ml/kg·bw空白對照組(均p<0.01)。

七、結論

本效果實施例的結果表明,本發明的富含免疫球蛋白的牛奶具有增強免疫力的功能。

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