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皇家维戈塞尔塔: 甘草液體發酵物、含發酵物的化妝品及其制備方法和用途.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201510036763.6

申請日:

20150123

公開號:

CN104490749A

公開日:

20150408

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K8/99,A61K8/97,A61Q19/00,A61K36/484,A61P17/04,A61P37/08,A61P29/00 主分類號: A61K8/99,A61K8/97,A61Q19/00,A61K36/484,A61P17/04,A61P37/08,A61P29/00
申請人: 四川省中醫藥科學院
發明人: 羅霞,江南,魏巍,余夢瑤,許曉燕
地址: 610042 四川省成都市武侯區人民南路4段51號
優先權: CN201510036763A
專利代理機構: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 代理人: 高蕓
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510036763.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明屬于生物發酵領域,具體涉及甘草液體發酵物、含發酵物的化妝品及其制備方法和用途。本發明所解決的技術問題是以“生物轉化理論”為指導,采用甘草與乳酸菌的液體發酵體系提供一種具有抗炎、抗過敏、止癢功效的產品。本發明甘草液體發酵物是培養基中加入甘草,然后與乳酸菌發酵所得的發酵液體混合物;其中,培養基中以生藥重量計,含有重量百分比為5~20%的甘草;乳酸菌的接種量為1.0×104~1.0×108cfu/ml。

權利要求書

1.甘草液體發酵物,其特征在于:以甘草和水組成培養基,,然后接種乳酸菌發酵所得的液體發酵混合物;其中,培養基以生藥重量計,甘草重量百分比為5~20%。2.根據權利要求1所述的甘草液體發酵物,其特征在于:培養基以生藥重量計,甘草重量百分比為10%。3.根據權利要求1或2所述的甘草液體發酵物,其特征在于:甘草為原生藥材或甘草飲片。4.根據權利要求1-3任一項所述的甘草液體發酵物,其特征在于:培養基中乳酸菌的接種量為1.0×10~1.0×10cfu/ml;優選,培養基中乳酸菌的接種量為1.0×10cfu/ml。5.甘草液體發酵物的制備方法,其特征在于:包括以下步驟:A、以甘草和水組成培養基,以生藥重量計,甘草重量百分比為5~20%;B、接種乳酸菌,接種量為1.0×10~1.0×10cfu/ml;C、于30℃~40℃和0~200rpm的條件下培養1~5天,即得甘草液體發酵物。6.根據權利要求5所述的甘草液體發酵物的制備方法,其特征在于:至少滿足以下任意一項:培養基以生藥重量計,甘草重量百分比為10%;乳酸菌的接種量為1.0×10cfu/ml;步驟C于37℃和50rpm的條件下培養5天。7.根據權利要求5所述的甘草液體發酵物的制備方法,其特征在于:乳酸菌菌種的培養方法包括如下步驟:A、在固體培養基中培養乳酸菌菌種;B、將步驟A培養的乳酸菌接種入乳酸菌液體培養基中;C、在30℃~40℃和0~200rpm的條件下培養1~5天所得乳酸菌菌種。8.根據權利要求7所述的甘草液體發酵物的制備方法,其特征在于:至少滿足以下任意一項:步驟B所述乳酸菌液體培養基中含有乳酸菌常規發酵的碳源、氮源、微量元素和/或無機鹽成分;優選,培養基中碳源成分為液體培養基總重量的0.5%~10%,氮源成分為0.5%~3%,微量元素和/或無機鹽成分為0.01%~1%,其余為水;步驟A所述固體培養基是由步驟B中所述的乳酸菌液體培養基1000ml和瓊脂10~20g組成;優選步驟A培養條件為:在30-40℃和0-200rpm的條件下培養1-3天;進一步優選培養條件為:在37℃和50rpm的條件下培養1天。9.甘草液體發酵物在制備具有抗炎、抗過敏、止癢功效的藥物或化妝品中應用。10.化妝品,其特征在于:以權利要求1-4任一項所述甘草液體發酵物或其提取物為活性成分,加入化妝品上可接受的輔料制備而成的化妝品;優選的,所述化妝品為爽膚水、乳液、精華液、面霜、面膜、眼膜。

說明書

技術領域

本發明屬于生物發酵領域,具體涉及甘草液體發酵物、含發酵物的化妝品及其制備方法和用途。

背景技術

甘草是傳統中醫藥學中一味補益類中草藥,藥用的甘草為豆科甘草屬的根及根莖。中國藥典記載甘草具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛,調和諸藥等功效。甘草主要化學成分為黃酮類、次酸類、甜素類等;西醫藥理發現,甘草劑有抗炎和抗變態反應的功能,因此在西醫臨床上主要作為緩和劑?;逼分?,甘草所含黃酮類成分具有美白和防曬等功效。

乳酸菌是一種存在于人類體內的益生菌,是發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱,絕大部分都是人體內必不可少且具有重要生理功能的菌群,廣泛存在于人體的腸道中。乳酸菌發酵的主要產物為乳酸,乳酸是酸性的,因此可以應用于化妝品行業中用于ph值的調節;同時,由于乳酸是皮膚中天然保濕因子NMF的組成部分,因此,保濕是乳酸在化妝品中的一項重要用途。一般中和后的乳酸作為保濕成分使用。

但甘草和乳酸菌均未見有抗炎、抗過敏、止癢等功效的報道。

發明內容

本發明所解決的技術問題是以“生物轉化理論”為指導,采用甘草與乳酸菌的液體發酵體系提供一種具有抗炎、抗過敏、止癢功效的產品。

本發明所解決的第一個技術問題是提供甘草與乳酸菌的液體發酵所得的甘草液體發酵物。

本發明甘草液體發酵物,以甘草和水組成培養基,然后接種乳酸菌發酵所得的液體發酵混合物;其中,培養基以生藥重量計,甘草重量百分比為5~20%;乳酸菌的接種量為1.0×104~1.0×108cfu/ml。

上述技術方案中,培養基以生藥重量計,優選甘草重量百分比為10%。甘草為原生藥材或甘草飲片。

上述技術方案中,乳酸菌的接種量優選為1.0×106cfu/ml。

本發明所解決的第二個技術問題是提供本發明甘草液體發酵物的制備方法,包括以下步驟:

A、以甘草和水組成培養基,以生藥重量計,甘草重量百分比為5~20%;

B、接種乳酸菌,接種量為1.0×104~1.0×108cfu/ml;

C、于30℃~40℃和0~200rpm的條件下培養1~5天,即得甘草液體發酵物。

上述技術方案中,培養基以生藥重量計,優選甘草重量百分比為10%。

上述技術方案中,乳酸菌的接種量優選為1.0×106cfu/ml。

上述技術方案中,于37℃和50rpm的條件下培養5天。

上述技術方案中,接種采用的乳酸菌菌種可以選擇使用目前由各種常用方式培養得到的菌種,如用于制造泡菜、酸奶的乳酸菌種等。

其中,一種優選的菌種來源和培養方式為:

A、在固體培養基中培養乳酸菌菌種;

B、將步驟A培養的乳酸菌接種入乳酸菌液體培養基中;

C、在30℃~40℃和0~200rpm的條件下培養1~5天所得乳酸菌菌種。

上述技術方案中,步驟B所述乳酸菌液體培養基中含有乳酸菌常規發酵的碳源、氮源、微量元素和/或無機鹽成分,其中:碳源成分為液體培養基總重量的0.5%~10%,氮源成分為0.5%~3%,微量元素和/或無機鹽成分為0.01%~1%,其余為水,滅菌即可。其中所說的碳源、氮源都可以選擇目前通用培養基中的常用成分,如葡萄糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、酵母膏等常規培養基組成成分。進一步優選所述滅菌為經115~121℃滅菌15~30min。

上述技術方案中,步驟A所述固體培養基是由步驟B中所述的乳酸菌液體培養基1000ml和瓊脂10~20g組成,按同樣方式作常規滅菌處理。培養條件為:在30-40℃和0-200rpm的條件下培養1-3天;優選培養條件為:在37℃和50rpm的條件下培養1天。

本發明所解決的第三個技術問題是提供本發明甘草液體發酵物的用途,具體表現為本發明甘草液體發酵物具有明顯的抗炎、抗過敏、止癢作用。

本發明所解決的第四個技術問題是提供采用本發明甘草液體發酵物或其提取物為活性成分,加入化妝品上可接受的輔料制備而成的化妝品。

本發明制備的化妝品可為爽膚水、乳液、精華液、面霜、面膜、眼膜等常見的化妝品。

采用本發明甘草液體發酵物用于肌膚的護理,較單獨采用甘草提取物或乳酸菌發酵物能夠明顯對抗二甲苯所致小鼠耳腫脹,抑制組胺所致小鼠皮膚毛細血管擴張,具有明顯的抗炎作用;能夠降低DNCB誘導的小鼠遲發型超敏反應(DTH),具有明顯的抗過敏作用;能夠明顯減少4-氨基吡啶誘導的小鼠皮膚過敏性瘙癢的舔體次數,具有明顯的止癢作用;具有明確的抗炎、抗過敏、止癢功效。本發明甘草液體發酵物按常規方法制備的化妝品也具有明確的抗炎、抗過敏、止癢功效。

具體實施方式

以下通過實施例形式的具體實施方式,對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明,說明但不限制本發明。

實施例1液體培養基對乳酸菌的生長適應性影響試驗

(1)按1.0×105cfu/ml接種量將乳酸菌分別接種于含有5.0%、10.0%、15.0%、20.0%甘草(均以生藥重量計,以下同)的液體培養基中,于37℃和50rpm條件下培養3~5天,采用平板涂布法檢測發酵液中的乳酸菌菌落數。結果如表1所示。

表1結果顯示,當甘草含量為10.0%時,乳酸菌的長勢佳,且基本一致;當培養基中甘草的濃度大于10%以后,乳酸菌的生長受到抑制。因此在液體發酵基中,甘草最適含量為10%。

表1?甘草含量和發酵時間對乳酸菌培養的影響

由表1結果還可以看出,隨著培養時間的延長,乳酸菌的菌落數逐漸增加,從生產成本考慮,確定本發明中乳酸菌的發酵時間為120h,即5天。

(2)按1.0×104、1.0×105和1.0×106cfu/ml接種量將乳酸菌分別接種于含有10%甘草的液體培養基中,于37℃和50rpm條件下培養5天,采用平板涂布法檢測發酵液中的乳酸菌菌落數。結果如表2所示

表2?接種量對乳酸菌培養的影響

由表2結果可以看出,發酵液中的活菌數隨著接種量的增加而增加,因此,確定本發明中的接種量為1.0×106cfu/ml。

實施例2甘草液體發酵物的功效試驗及刺激性試驗

以上述由以生藥重量計的甘草按10.0%的百分比加入培養基中,按1.0×106cfu/ml的量接種乳酸菌后,在37℃和50rpm條件下培養5天得到所說的甘草液體發酵物,進行下述的功效試驗及刺激性試驗。

一、二甲苯致小鼠耳腫脹試驗

昆明種小鼠70只,雌性各半,18~22g,隨機分為正常對照組,模型對照組,甘草液體發酵物高、中、低劑量組(10ml/kg,5ml/kg,2.5ml/kg),甘草藥材組(10%濃度,5ml/kg),乳酸菌液體發酵物組(5ml/kg),每組10只。除正常對照組外,其余各組小鼠分別在右耳前后兩面涂二甲苯致炎(0.02ml/只),正常對照組在右耳前后兩面涂相同劑量生理鹽水。致炎0.5,1,2小時后,分別用相應劑量的樣品在右耳涂藥。正常對照組合模型對照組同時涂生理鹽水(5ml/kg)。4小時后,將小鼠頸椎脫臼處死,剪下雙耳,用8mm打孔器分別在左右耳相同部位打下耳片,稱重,以兩耳片重量差為炎癥腫脹度,并計算腫脹抑制率。

抑制率(%)=(模型對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型對照組腫脹度×100

表3?各樣品對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

注:與正常對照組比較,**P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

試驗結果如表3所示,從試驗結果可知,造模后模型對照組耳腫脹度增大,與正常對照組比較,差異有顯著性意義(P<0.01),說明造模成功。各給藥組小鼠耳腫脹度與模型對照組比較,甘草發酵物的高、中劑量組有明顯的統計差異(P<0.05,P<0.01),說明甘草發酵物較甘草藥材和乳酸菌發酵物而言,對二甲苯所致小鼠的耳廓腫脹有顯著的抑制作用。

二、組胺致小鼠皮膚血管滲透性試驗

昆明種小鼠70只,雌性各半,18~22g,隨機分為正常對照組,模型對照組,甘草液體發酵物高、中、低劑量組(10ml/kg,5ml/kg,2.5ml/kg),甘草藥材組(10%濃度,5ml/kg),乳酸菌液體發酵物組(5ml/kg),每組10只。用8%硫化鈉酒精溶液背部脫毛(2cm×3cm),將受試樣品涂布于背部脫毛區,連續涂抹7天。模型對照組和正常對照組同時涂布相同劑量生理鹽水。末次涂藥1小時后于背部脫毛區皮下注射0.1%組胺(生理鹽水配制)0.05ml/只,同時靜脈注射0.5%伊文斯藍生理鹽水10ml/kg,正常對照組注射相同劑量生理鹽水。30分鐘后處死動物,剪下藍斑皮膚,剪碎后用(1:1)丙酮生理鹽水8ml浸泡24小時,離心取上清液,在610nm測定光密度,從而確定染料滲出量。通過對局部炎癥部位滲出液中伊文斯藍的含量來判斷藥物對組胺所致的皮膚血管滲透性的變化程度。

表4?各樣品對組胺致小鼠皮膚血管擴張的影響

注:與正常對照組比較,**P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

試驗結果如表4所示,從試驗結果可知,造模后模型對照組與正常組比較,差異顯著(P<0.01),說明造模成功;各給藥組與模型對照組比較,甘草發酵物的高、中劑量組有明顯的統計差異(P<0.05,P<0.01),說明甘草發酵物較甘草藥材和乳酸菌發酵物而言,能夠對抗組胺所致小鼠皮膚血管擴張,使其恢復到正常水平。

三、DNCB誘導的小鼠DTH試驗

昆明種小鼠70只,雌性各半,18~22g,隨機分為正常對照組,模型對照組,甘草液體發酵物高、中、低劑量組(10ml/kg,5ml/kg,2.5ml/kg),甘草藥材組(10%濃度,5ml/kg),乳酸菌液體發酵物組(5ml/kg),每組10只。用8%硫化鈉酒精溶液背部、腹部脫毛(2cm×3cm),24小時后,用5%DNCB(0.05ml/只)涂布于小鼠脫毛后的腹部皮膚致敏,次日強化1次,正常對照組涂布相同劑量生理鹽水。致敏前1天開始皮膚涂布樣品,每天1次,連續7天,模型對照組和正常對照組涂布生理鹽水(5ml/kg)。末次給藥40分鐘后,用1%DNCB丙酮液(0.02ml/只)涂右耳激發過敏反應,正常對照組涂布相同劑量生理鹽水,24小時后,頸椎脫臼處死小鼠,剪下雙耳,用8mm打孔器分別在左右耳相同部位打下耳片,分析天平稱重,以兩耳片重量差為腫脹度,作為遲發型超敏反應(DTH)強度指標。

表5?各樣品對DNCB誘導的小鼠DTH的影響

注:與正常對照組比較,**P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

試驗結果如表5所示,從試驗結果可知,造模后模型對照組耳腫脹度增大,與正常對照組比較,差異有顯著性意義(P<0.01),說明造模成功。各給藥組小鼠耳腫脹度與模型對照組比較,甘草發酵物的高、中劑量組有明顯的統計差異(P<0.05,P<0.01),說明甘草發酵物較甘草藥材和乳酸菌發酵物而言,對DNCB所致小鼠遲發型超敏反應(DTH)所引起的耳廓腫脹有顯著的對抗作用。

四、4-氨基吡啶誘導的小鼠過敏性皮膚瘙癢反應試驗

昆明種小鼠70只,雌性各半,18~22g,隨機分為正常對照組,模型對照組,甘草液體發酵物高、中、低劑量組(10ml/kg,5ml/kg,2.5ml/kg),甘草藥材組(10%濃度,5ml/kg),乳酸菌液體發酵物組(5ml/kg),每組10只。用8%硫化鈉酒精溶液背部脫毛(2cm×3cm),將受試樣品涂布于脫毛區皮膚上,每天1次,連續7天。模型對照組和正常對照組涂布生理鹽水(5ml/kg)。末次給藥40分鐘后頸背部皮下注射4-AP(4-氨基吡啶)(生理鹽水配成0.02%)溶液0.01ml/g,正常對照組注射等量生理鹽水。記錄各組小鼠在10分鐘內的舔體次數(以連續舔體至出現短暫停頓,做舔體1次計算)。

表6?各樣品對4-AP誘導的小鼠過敏性皮膚瘙癢反應的影響

注:與模型對照組比較,**P<0.01;與模型對照組比較,#P<0.05,##P<0.01。

試驗結果如表6所示,從試驗結果可知,造模后模型對照組舔體次數明顯增加,說明造模成功。各給藥組小鼠耳腫脹度與模型對照組比較,甘草發酵物的高、中劑量組有明顯的統計差異(P<0.05,P<0.01),說明甘草發酵物較甘草藥材和乳酸菌發酵物而言,對4-AP誘導的小鼠皮膚瘙癢模型的舔體反應次數,說明甘草液體發酵物具有抑制小鼠過敏性皮膚瘙癢的作用。

五、甘草液體發酵物安全性試驗

采用通行的化妝品原料檢測中的“急性經口和急性經皮毒性試驗”以及“皮膚和急性眼刺激性/腐蝕性試驗”,試驗結果均顯示甘草發酵物屬于無毒、無刺激性、無腐蝕性的化妝品原料,可用于化妝品的配方中。

從上述試驗結果可知,甘草液體發酵物較未發酵的甘草藥材和單一發酵的乳酸菌發酵物而言,能夠明顯對抗二甲苯所致小鼠耳腫脹,抑制組胺所致小鼠皮膚毛細血管擴張,具有良好的抗炎作用;能夠降低DNCB誘導的小鼠遲發型超敏反應(DTH),具有更好的抗過敏作用;能夠明顯減少4-氨基吡啶誘導的小鼠皮膚過敏性瘙癢的舔體次數,具有更好的止癢作用;說明甘草液體發酵物具有很強的抗炎、抗過敏、止癢功效。由甘草液體發酵物為原料,可以采用其發酵物原液或發酵物粉,按常規方法制備的爽膚水、乳液、精華液、面霜、面膜、眼膜等形式的化妝品也應具有明確的抗炎、抗過敏、止癢功效。

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甘草 液體 發酵 化妝品 及其 制備 方法 用途
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