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维戈塞尔塔和皇家贝蒂斯: 苯甲酸衍生物在制備抗血管新生藥物中的用途.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201410740300.3

申請日:

20141203

公開號:

CN104490867A

公開日:

20150408

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/36,A61P35/00,A61P29/00,A61P19/02,A61P17/06,A61P27/02,A61P9/10,A61P3/10 主分類號: A61K31/36,A61P35/00,A61P29/00,A61P19/02,A61P17/06,A61P27/02,A61P9/10,A61P3/10
申請人: 沈陽藥科大學
發明人: 吳春福,楊靜玉,王立輝,陳國良,李猛,李華歡,蔣曉蕊,周啟璠,方武宏
地址: 110016 遼寧省沈陽市沈河區文化路103號
優先權: CN201410740300A
專利代理機構: 沈陽智龍專利事務所(普通合伙) 代理人: 宋鐵軍;周楠
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201410740300.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明屬于醫藥技術領域,涉及苯甲酸衍生物在制備抗血管新生藥物中的用途。本發明提供的苯甲酸衍生物在人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)微管形成實驗,Transwell小室遷移實驗和劃痕實驗,及小鼠腫瘤組織微血管密度實驗等方面的作用,發現苯甲酸衍生物可以明顯抑制內皮細胞微管的形成,明顯抑制內皮細胞遷徙轉移,并顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤組織中微血管密度。

權利要求書

1.式(I)中苯甲酸衍生物在制備抗血管新生藥物中的用途,式(I)DW22分子量364。2.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為腫瘤血管新生的藥物。3.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為抑制關節炎病變組織的血管新生的藥物。4.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為抑制銀屑病變組織血管新生的藥物。5.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為抑制新生血管性眼病的藥物。6.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為抑制動脈粥樣硬化病變處血管新生的藥物。7.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物為抑制糖尿病并發癥眼病的藥物。8.根據權利要求1所述的用途,其特征在于:所述的抑制新生血管生成的藥物劑型為膠囊劑、片劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑或軟膏劑。9.根據權利要求1中所述的用途,其特征在于:含有有效量的式(I)4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物以及藥學可接受成分的組合物在制備抑制血管新生藥物中的應用。

說明書

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域,涉及4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物以及含有此類化合物的藥物組合物作為治療血管新生相關疾病的藥物的應用。

背景技術

血管新生指在原有血管的基礎上芽生出新毛細血管的過程,包括以下過程:血管內皮細胞增殖,血管基底膜降解,內皮細胞遷移并形成微管,重塑基底膜,血管生成;該過程包含了血管內皮細胞與周圍細胞外基質間的相互作用,主要受血管新生促進因子和血管新生抑制因子的調控。研究發現,多種生長因子如血管內皮細胞生長因子(VEGF)、血管生成素2和堿性成纖維細胞生長因子,及標配生長因子等都可以通過不同的途徑調節血管新生。生理狀態下,血管新生在胚胎發育、創傷修復、女性月經時短暫開放,其余時段則處于關閉狀態,從而使血管的生長與退化維持在動態的平衡狀態。

腫瘤是人體細胞異常分化增殖的惡性疾病。腫瘤在表現其生長、轉移等生物學行為時與其中的微血管增生有密切的關系。無論原發性或轉移性腫瘤,其持續性生長都必須依賴于新生血管的形成。腫瘤的生長首先需要建立一個新生血管網絡。缺少血供的腫瘤直徑一般只能維持在1~2mm以內。新生腫瘤血管表現為結構不規則,生長方式各不相同,提示腫瘤血管生成有著與正常新生血管不同的條件。惡性腫瘤細胞依賴豐富的新生毛細血管網及時得到其迅速無限生長所需的氧氣和養料,并運走代謝廢物。因此,抗腫瘤血管新生已經成為抗腫瘤發生發展的有效策略之一。目前抗血管新生藥物已經有Avastin、Nexavar和Sutent等被美國FDA批準應用治療惡性腫瘤,還有數十種抑制劑被批準進行臨床實驗。

關節炎與血管新生的關系密切,因為關節炎早期的病理改變為持久性滑膜炎及血管翳形成,尤其依賴于廣泛的新生血管網的形成。血管翳具有類似于腫瘤組織的特性-侵蝕性,它可侵蝕和破壞關節軟骨和骨組織,最終引起不可逆的關節僵直、功能喪失。在關節炎的滑液細胞中有VEGF的高表達,顯示VEGF與關節炎發生的關系。臨床研究證實,關節炎患者關節內新生血管增生的程度與患者的病情、滑膜增生及炎細胞反應的程度呈正比,抑制血管新生的藥物可緩解關節炎的病情。

除了惡性腫瘤及關節炎與血管新生相關外,血管新生還與糖尿病視網膜病變、銀屑病、血管新生性眼病和動脈粥樣硬化等多種疾病或病理過程有關。

發明內容

發明目的

本發明提供式(I)4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物DW22在制備用于血管新生相關疾病的治療和/或預防藥物中的應用。

式(I)

本發明要解決的技術問題在于式(I)4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物在制備用于血管新生相關疾病的治療和/或預防藥物中的應用,尤其是在制備腫瘤血管新生、眼科疾病、類風濕性關節炎、血管瘤、銀屑病等血管新生性疾病中的應用。其中,所述抑制血管新生藥物可抑制腫瘤血管新生,可抑制病變組織血管新生。其中,所述腫瘤血管新生包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤血液癌癥的血管新生、Kaposi’s肉瘤病變組織血管新生、Paget’s疾病血管新生、血管瘤病變組織血管新生、血管瘤、實體瘤病變組織血管新生、多發性血管瘤、血管母細胞瘤和良性血管增生疾病。所述病變組織血管新生包括關節炎病變組織血管新生、血管新生性眼病、銀屑病病變組織血管新生和動脈粥樣硬化組織血管新生。

本發明還提供含有有效量的式(I)4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物以及藥學可接受成分的組合物在制備抑制血管新生藥物中的應用。根據本發明可以將治療有效量的4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物和藥學上接受的任意一種輔料制成藥物組合物,也可以添加其他與4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物沒有拮抗作用的其他抗血管新生藥物??梢栽詒痙⒚韉囊種蒲芐律囊┪鎦屑尤胍恢只蚨嘀忠┭峽梢越郵艿腦靨?。其制劑可以是藥學上的任意一種劑型,包括但不限于膠囊劑、片劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑或軟膏劑等。

優點和效果:

經研究表明,本發明提供的式(I)中4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物在人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)微管形成實驗,Transwell小室遷移實驗和劃痕實驗等具有明顯的抑制作用,可以明顯抑制內皮細胞微管的形成,明顯抑制內皮細胞有阻力的遷徙轉移。

本發明中所用的4-[1-(5,6,7,8-四氫-3,5,5,8,8-四甲基-2-萘基)乙烯基]苯甲酸衍生物為沈陽藥科大學藥物化學實驗室合成和鑒定。

附圖說明

圖1、圖2為本發明化合物激活維甲酸受體RXR,抑制組蛋白脫乙?;窰DAC的示意圖;圖1為Bexa貝沙羅汀,圖2為HDAC組蛋白去乙?;?;

圖3為本發明化合物抑制VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞HUVEC侵襲的示意圖(VEGF血管表皮生長因子);

圖4為本發明化合物抑制VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞HUVEC轉移的示意圖(VEGF血管表皮生長因子);

圖5為本發明化合物抑制VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞HUVEC小管生成的示意圖(VEGF血管表皮生長因子);

圖6為本發明化合物在體抗血管新生的示意圖。

具體實施方式

實施例1、衍生物的制備及作用靶點

1.1化合物的來源和配制

DW22純度大于98%,化合物用DMSO溶解配制成100mM母液,臨用時用培養液稀釋制需要濃度。

1.2化合物的作用靶點

DW22是具有雙靶點的化合物,其一作為維甲酸類似物激活維甲酸受體(RXRα),其二抑制HDAC的活性,抑制細胞生長,誘導細胞分化及凋亡。

1.2.1材料肺癌A549細胞,乳腺癌MDA-MB-435細胞,培養液購自Gibco,Bexarotene、SAHA購自Sigma,CRBPII-tk-luc由makishima.makoto惠贈,pCMX-hRXR,和pRL?Renilla?Luciferase?Reporter?Vector購自Promega?Corporation,Cell?Lysis?Buffer購自Beyontime,BCA?protein?assay購自Beyontime,HDAC?fluorescent?activity?assay?kit購自Biovison。

1.2.2實驗方法

DW22、Bexarotene、SAHA以DMSO溶解成100mM母液儲備,臨用時以培養液稀釋;在5%CO2,37℃飽和濕度的培養箱中培養A549、MDA-MB-435細胞。培養液以90%RPMI-1640或MEM基礎培養基和10%FBS比例混合。

CRBPII-tk-luc、pCMX-hRXR、pRL?Renilla?Luciferase?Reporter?Vecto三種質粒(濃度比10:3:2)轉染A549、MDA-MB-435細胞,轉染5h后,以不同濃度的DW22、Bexarotene處理細胞,轉染48h后,Dual-Luciferase?Reporter?Assay?System檢測RXR活性。

A549、MDA-MB-435細胞以不同濃度的DW22、SAHA處理24h,cell?lysis?buffer裂解細胞,BCA?protein?assay測蛋白濃度,HDAC?fluorescent?activity?assay?kit檢測HDAC活性。

1.2.3結果

如圖1DW22顯著激活RXR,并呈現濃度依賴效應;在1μM和50μM濃度下,DW22比Bexarotene有更加顯著的激活RXR作用。

如圖2DW22抑制HDAC的活性,并呈現濃度依賴效應;在5μM濃度下,DW22與SAHA有相似的HDAC活性抑制效應。

實施例2、DW22對VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)侵襲能力的影響

2.1材料

原代HUVEC細胞,培養液、LSGS、胰酶購自Gibco,Transwell小室購自Corning,基質膠購自BD,鈣黃綠素購自Sigma。

2.2實驗方法

DW22以DMSO溶解成100mM母液儲備,臨用時以培養液稀釋;在5%CO2,37℃飽和濕度的培養箱中培養HUVEC細胞。培養液以90%M200基礎培養基和2%LSGS比例混合。

Transwell小室以1:8基質膠與培養液混合后包被,37度凝固0.5h后備用,上室加入200μl不含VEGF的培養液,下室加入500μl含VEGF培養液,藥物處理組加入1、5、20μM的DW22,培養12h后取出,棉簽擦去上室表面細胞,以鈣黃綠素染色觀察下室表面細胞,采用高內涵藥物分析系統拍照,并分析計數。

2.3結果

結果如圖3所示,DW22能夠抑制VEGF誘導的HUVEC細胞侵襲,此結果表明,DW22夠明顯抑制VEGF誘導的血管內皮細胞侵襲,可能具有抑制新生血管生成的能力。

實施例3、DW22對VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)遷移能力的影響

3.1材料

原代HUVEC細胞、培養液、胰酶購自Gibco。

3.2實驗方法

DW22以DMSO溶解成100mM母液儲備,臨用時以培養液稀釋;在5%CO2,37℃飽和濕度的培養箱中饑餓處理HUVEC細胞,然后在培養皿中間劃痕,加入含或者不含20ng/mlVEGF的0.5%FBS的ECGM基礎培養基。藥物處理組加入1、5、20μM的DW22,培養12h后取出,顯微鏡下觀察結果,并計數。

3.3結果

結果如圖4所示,DW22能夠抑制VEGF誘導的HUVEC細胞遷移,此結果表明,DW22夠明顯抑制VEGF誘導的血管內皮細胞遷移,可能具有抑制新生血管生成的能力。

實施例4、DW22對VEGF誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)小管生成的影響

4.1材料

原代HUVEC細胞、培養液、LSGS、胰酶購自Gibco,96孔板購自Corning,基質膠購自BD,鈣黃綠素購自Sigma。

4.2方法

DW22以DMSO溶解成100mM母液儲備,臨用時以培養液稀釋;在5%CO2,37℃飽和濕度的培養箱中培養HUVEC細胞。培養液以90%M200基礎培養基和2%LSGS比例混合。

96孔板沒空加入1:1混合的基質膠與培養液,37度凝固1h后加入100μL?HUVEC細胞懸液,每孔15000個細胞,培養12h后拍照觀察,VEGF刺激濃度為20ng/ml。

4.3結果

結果如圖5所示,DW22能夠抑制VEGF誘導的HUVEC細胞小管生成,此結果表明,DW22能夠明顯抑制VEGF誘導的血管內皮小管生成,可能具有抑制新生血管生成的能力。

實施例5、DW22對人肝癌細胞MDA-MB-435在體抗血管新生的影響

5.1材料

MDA-MB-435細胞,Balb/c?nude雄性鼠,抗CD31抗體、羊抗兔二抗、3,3-二氨基聯苯胺購自Sigma。

5.2方法

每只鼠接種100ul細胞懸液(5*106個細胞),11天后,處死小鼠,剝離瘤組織進行免疫組織化學實驗,其步驟簡介如下:包埋瘤組織,脫蠟,抗原修復,血清或生物素封閉,加一抗,加二抗,加3,3-二氨基聯苯胺,蘇木精染色。

5.3結果

結果如圖6所示,DW22能夠下調血管新生相關標志物CD31,此結果表明,DW22能夠明顯抑制新生血管的形成。

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苯甲酸 衍生物 制備 血管 新生 藥物 中的 用途
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