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皇家马德里VS维戈塞尔塔直播: 一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201510285540.3

申請日:

20150529

公開號:

CN104887340B

公開日:

20160928

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61D1/00,A61L31/04,A61L31/08,A61L31/10,A61L31/16,A61L33/10 主分類號: A61D1/00,A61L31/04,A61L31/08,A61L31/10,A61L31/16,A61L33/10
申請人: 河南科技大學第一附屬醫院
發明人: 田豐豐,趙蕾,張穎裕,賴曉藝,申蒙蒙,田真真,吳劍男
地址: 471000 河南省洛陽市澗西區景華路24號
優先權: CN201510285540A
專利代理機構: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 代理人: 羅民健
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510285540.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,線栓通過材料的選擇與準備、頭端包被以及包被后的標記制得,其中,線栓材料由聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.065~0.1mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到,進行頭端包被的包被材料是按照重量將15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在250~300℃下超聲震蕩混合后制得的。本發明所做的線栓大小一致、硬度彈性適中、頭端圓鈍光滑,能順利進入小鼠的大腦中動脈,并且插入后的線栓可隨血管的彎曲而彎曲,減少對血管的機械損傷,阻塞更徹底更可靠、腦缺血范圍穩定、腦梗塞體積穩定,操作簡單,模型成功率高,小鼠死亡率低。

權利要求書

1.一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,其特征在于:該線栓通過材料的選擇與準備、線栓原線頭端的包被以及在包被后的標記制得,其具體的步驟如下:(1)材料的選擇與準備將聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.065~0.1mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的線栓原線,然后按照重量將15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在250~300℃下超聲震蕩后混合形成用于包被的包被材料;(2)線栓原線頭端的包被首先從所制得的線栓原線上截取20±1.0mm作為線栓原線線段,將該線段兩端加工成正圓并與所述線栓原線端部的直徑保持一致,然后選擇其中一端作為線栓原線的頭端,將該頭端包埋于步驟(1)所制得的包被材料中,然后將線栓原線的頭端拉出包被材料即可完成對線栓原線頭端的包被;(3)包被后的標記在頭端包被后的線栓原線線段上,距離包被的端部11~12mm,環繞線栓原線線段一周進行標記,然后將線栓原線線段晾干即可得到小鼠MCAO模型用的線栓。2.根據權利要求1所述的一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,其特征在于:在對線栓原線頭端進行包被的過程中,線栓原線頭端在包被材料停留1~3s后,再將線栓原線頭端拉出包被材料。

說明書

技術領域

本發明屬于生命科學領域,具體涉及一種用于小鼠MCAO模型的線栓的制作方法。

背景技術

腦卒中是一種急性腦血管病的總稱,臨床表現為偏癱、失語等癥狀,具有高致死率、高致殘率和高復發率等特點。最新研究顯示腦卒中已嚴重威脅人們的生命和生活質量,其中尤以缺血性腦卒中位列患者第一位,占所有腦卒中患者的80%左右。

缺血性腦卒中動物模型是研究腦缺血損傷和治療的基礎,大腦中動脈是缺血性腦卒中的好發部位,因此常采用大腦中動脈栓塞(MCAO)動物模型作為研究基礎,其中線栓法大腦中動脈腦缺血模型是研究缺血性腦損傷動物模型的首選造模方法,該模型是目前研究局灶性腦缺血/再灌注損傷最廣泛的動物模型,具有無需開顱、創傷極小、腦缺血部位較恒定、腦梗死與臨床病理過程一致等優點。然而,一直以來該模型多用于大鼠的研究,但由于大鼠具有成本高、體積大、不便飼養特別是單支試劑使用成本是小鼠的數十倍甚至更多,且不滿足腦缺血基因水平研究等諸多因素,越來越多的研究采用小鼠來制備此模型。然而,由于手術操作復雜、小鼠體型小、手術耐受力較差,增加了制備腦缺血模型的難度,其穩定性和可靠性也是亟待解決的關鍵問題。但是,我們在研究中發現只要線栓做好,對血管機械損傷小,腦梗死區域穩定,梗塞體積穩定,重復性好,模型成功率就接近100%,術后存活率也很高。因此,MCAO線栓是制備局部腦缺血模型非常關鍵的實驗材料。

目前,MCAO線栓的制作方法有采用單線尼龍線、鼠須、釣魚線等,但多選用一定直徑的普通單線尼龍線,在頭端包被一定的硅膠。但普通的單線尼龍線軟硬度不夠理想,在一定溫度的液體中易變軟,在血管彎處易停止,入顱比較困難,大大增加了插線的難度使模型成功率下降,也增加了出血和死亡風險;用鼠須代替尼龍線雖然較尼龍線有良好的彈性和硬度,但是鼠須直徑不統一,對其頭端不易進行處理,難以造成完全阻塞。對栓線頭端的處理目的是在造模過程中對血管的損傷減到最低,梗塞灶更加穩定及較高的長期存活率等。常用的涂膠法有石蠟包裹、硅膠包被、聚己烯醇栓線等,其中石蠟包裹的容易脫落;硅膠包被出的線栓雖梗死面積相對穩定,但是沒有膨脹效果,使梗死不完全,而且死亡率較高、不易長時間觀察研究;聚己烯醇線栓硬度不夠同時遇到血液會膨脹,使進線不順利。

發明內容

本發明的目的是提供一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,進而改進線栓的特性,使之更適合用于建立小鼠MCAO模型,提高小鼠的術后存活率,降低MCAO模型的制作難度與成本。

為了解決上述技術問題,本發明所采用的技術方案是:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,該線栓通過材料的選擇與準備、線栓原線頭端的包被以及在包被后的標記制得,其具體的步驟如下:

(1)材料的選擇與準備

將聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.065~0.01mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的線栓原線,然后按照重量將15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在250~300℃下超聲震蕩后混合形成用于包被的包被材料;

(2)線栓原線頭端的包被

首先從所制得的線栓原線上截取20±1.0mm作為線栓原線線段,將該線段兩端加工成正圓并與所述線栓原線端部的直徑保持一致,然后選擇其中一端作為線栓原線的頭端,將該頭端包埋于步驟(1)所制得的包被材料中,然后將線栓原線的頭端拉出包被材料即可完成對線栓原線頭端的包被;

(3)包被后的標記

在頭端包被后的線栓原線線段上,距離包被的端部11~12mm,環繞線栓原線線段一周進行標記,然后將線栓原線線段晾干即可得到小鼠MCAO模型用的線栓。

在對線栓原線頭端進行包被的過程中,線栓原線頭端在包被材料停留1~3s后,再將線栓原線頭端拉出包被材料。

本發明所制作的線栓在使用前可以將其浸泡在含有肝素鈉的生理鹽水中備用,以減少線栓周圍的血栓形成。

與現有技術相比,本發明具有以下有益效果:

第一,本發明所做的線栓大小一致、硬度彈性適中、線栓頭端圓鈍光滑,使線栓能順利進入大腦中動脈,并且插入后的線栓可隨血管的彎曲而彎曲,減少了對血管的機械損傷,阻塞更徹底更可靠、腦缺血范圍穩定、腦梗塞體積穩定,操作簡單,模型成功率高,小鼠死亡率低;

第二,本發明采用先包被后標記的方法,可以避免先標記后進行包被的過程中包被材料會遮擋甚至覆蓋標記的情況,并且先標記后包被的時候,由于包被材料的多少,使得包被的端部與標記之間的距離會大于標記時標記處和線栓頭端端部之間的距離,進而影響在插線時對進線長度的判斷,而采用本發明先包被后標記的方法,則可以很好地避免這個問題,準確的掌控進線的長度;

第三,本發明所做的線栓原線為非毛管性的,光滑程度接近真絲,對組織損傷非常微弱,并且涂布二氧化鈦,在光照條件下,二氧化鈦會發生氧化還原反應,具有殺菌的效果,使得制作后的線栓更好的保持無菌狀態;

第四,本發明所用的包被材料為一種透明高分子抗菌材料,能減少小鼠的顱內感染幾率,并且可以減少對血管的刺激,從而提高模型制作后小鼠的存活率,并且,在制作該透明高分子抗菌材料的原料中,硅乳液可以降低材料的表面張力,聚乙二醇使包被材料具有一定的抗凝性;

第五,本包被過程中,線栓原線的頭端在包被材料中停留1~3s,可以有利于線栓原線的頭端吸附包被材料,使其具有一定的硬度與韌性,并且包被材料與線栓原線之間的結合更加緊密,在制作模型的過程中,不會出現包被脫落的情況,但是如果停留時間過長,則會使得制作出來的線栓頭端硬度較大,再插入血管的過程中容易對血管內壁造成機械損傷,不利于模型的制作;

第六,在使用中,線栓在肝素鈉中浸泡后,可以減少線栓周圍血栓的形成,有利與拔線再灌注時線栓的拔出,而且在拔出線栓后能保持血流通暢,不會因為形成血栓而阻斷血流。

具體實施方式

下面通過具體實施方式對本發明作進一步的說明。

實施例1:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,通過制作材料的選擇與準備、頭端包被以及包被后的標記,最后得到適用于小鼠MCAO模型制作的線栓,其具體的制作方法如下:

1、制作材料的選擇與準備

1.1、線栓材料

將聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.065mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的原線,所制作的線栓原線的自然張力為1.96N,牽引張力為1.67±0.78 N;

1.2、頭端的包被材料

用于線栓頭端包被的包被材料為透明高分子抗菌材料,該透明高分子抗菌材料是由15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在250℃下超聲震蕩后混合而成的;

2、頭端包被

2.1、線栓原線的加工

將上述所制作的線栓原線放置在顯微鏡下后,測量其端部的直徑后,垂直截取長度為19mm的線栓原線線段,并且將得到的線栓原線線段的兩端加工成正圓,其直徑與加工前的線栓原線端部的直徑保持一致;

2.2、包被

將步驟1.2中制得的包被材料置于顯微鏡下的玻璃平面上,然后將步驟2.1中加工所得的線栓原線線段的一端選作頭端,并使用顯微鑷夾持線栓原線線段,將其頭端包埋于包被材料中,停留1s后迅速拖拉并將其拉出包被材料,即可完成對頭端的包被,并且包被部分的長度為5mm;

3、包被后的標記

3.1、標記

將步驟2.2包被后的線栓原線線段置于顯微鏡下,使用游標卡尺在距離包被的端部11mm進行標記,并且所做標記要環繞線栓原線線段一周,以便準確判斷及調整進線的方向并控制進線的深度,從而使得制作后的線栓能夠順利進入頸外;

3.2、干燥

將經標記的線栓原線線段晾干即可得到用于小鼠MCAO模型的線栓成品。

實施例2:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,通過制作材料的選擇與準備、頭端包被以及包被后的標記,最后得到適用于小鼠MCAO模型的線栓,其具體的制作方法如下:

1、制作材料的選擇與準備

1.1、線栓材料

將聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.1mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的原線,所制作的線栓原線的自然張力為1.88N,牽引張力為1.71±0.82 N;

1.2、頭端的包被材料

用于線栓頭端包被的包被材料為透明高分子抗菌材料,該透明高分子抗菌材料是由15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在300℃下超聲震蕩后混合而成的;

2、頭端包被

2.1、線栓原線的加工

將上述所制作的線栓原線放置在顯微鏡下后,測量其端部的直徑后,垂直截取長度為21mm的線栓原線線段,并且將得到的線栓原線線段的兩端加工成正圓,其直徑與加工前的線栓原線端部的直徑保持一致;

2.2、包被

將步驟1.2中制得的包被材料置于顯微鏡下的玻璃平面上,然后將步驟2.1中加工所得的線栓原線線段的一端選作頭端,并使用顯微鑷夾持線栓原線線段,將其頭端包埋于包被材料中,并在停留3s后迅速拖拉并將其拉出包被材料,即可完成對頭端的包被,并且包被部分的長度為5mm;

3、包被后的標記

3.1、標記

將步驟2.2包被后的線栓原線線段置于顯微鏡下,使用游標卡尺在距離包被的端部12mm進行標記,并且所做標記要環繞線栓原線線段一周,以便準確判斷及調整進線的方向并控制進線的深度,從而使得制作后的線栓能夠順利進入頸外;

3.2、干燥

將經標記的線栓原線線段晾干即可得到用于小鼠MCAO模型的線栓成品。

實施例3:一種小鼠MCAO模型用的線栓的制作方法,通過制作材料的選擇與準備、頭端包被以及包被后的標記,最后得到適用于小鼠MCAO模型的線栓,其具體的制作方法如下:

1、制作材料的選擇與準備

1.1、線栓材料

將聚四氟乙烯樹脂在300℃下拉成直徑為0.08mm的絲狀物后,在350℃條件下,用二氧化鈦涂布于該絲狀物表面得到制作線栓的原線,所制作的線栓原線的自然張力為1.92N,牽引張力為1.66±0.9 N;

1.2、頭端的包被材料

用于線栓頭端包被的包被材料為透明高分子抗菌材料,該透明高分子抗菌材料是由15%的硅乳液、34%的聚乙烯吡咯烷酮、23%的聚乙烯醇、16%的聚乙二醇和12%的聚四氟乙烯在270℃下超聲震蕩后混合而成的;

2、頭端包被

2.1、線栓原線的加工

將上述所制作的線栓原線放置在顯微鏡下后,測量其端部的直徑后,垂直截取長度為21mm的線栓原線線段,并且將得到的線栓原線線段的兩端加工成正圓,其直徑與加工前的線栓原線端部的直徑保持一致;

2.2、包被

將步驟1.2中制得的包被材料置于顯微鏡下的玻璃平面上,然后將步驟2.1中加工所得的線栓原線線段的一端選作頭端,并使用顯微鑷夾持線栓原線線段,將其頭端包埋于包被材料中,并在停留2s后迅速拖拉并將其拉出包被材料,即可完成對頭端的包被,并且包被部分的長度為5mm;

3、包被后的標記

3.1、標記

將步驟2.2包被后的線栓原線線段置于顯微鏡下,使用游標卡尺在距離包被的端部12mm進行標記,并且所做標記要環繞線栓原線線段一周,以便準確判斷及調整進線的方向并控制進線的深度,從而使得制作后的線栓能夠順利進入頸外;

3.2、干燥

將經標記的線栓原線線段晾干即可得到用于小鼠MCAO模型的線栓成品。

由于不同體重的小鼠腦血管直徑有差異,因此本發明所制作的線栓尤其適用于體重為24 g±1.0g的小鼠。

本發明所制作的線栓在使用前可以將其浸泡在含有肝素鈉的生理鹽水中備用,以減少線栓周圍的血栓形成。

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一種 小鼠 MCAO 模型 制作方法
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