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艾拉维斯vs维戈塞尔塔: 鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201510313248.8

申請日:

20150610

公開號:

CN104887656A

公開日:

20150909

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/216,A61P29/00,A61P19/02 主分類號: A61K31/216,A61P29/00,A61P19/02
申請人: 蘇州大學附屬第一醫院
發明人: 耿德春,楊惠林,徐耀增,邵洪國,王熠軍
地址: 215006 江蘇省蘇州市十梓街188號
優先權: CN201510313248A
專利代理機構: 南京經緯專利商標代理有限公司 代理人: 曹毅
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510313248.8

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,鹽酸左旋多巴甲酯化學結構式如下:。本發明提供的鹽酸左旋多巴甲酯對類風濕關節炎療效確切,為將鹽酸左旋多巴甲酯開發為新藥提供了強有力的依據。

權利要求書

1.鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,鹽酸左旋多巴甲酯化學結構式如下:。2.根據權利要求1所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的藥物組合物包含藥學上有效劑量的鹽酸左旋多巴甲酯和藥學上可接受的載體。3.根據權利要求1所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的將鹽酸左旋多巴甲酯制備成適用于胃腸道或非胃腸道給藥的藥物制劑。4.根據權利要求3所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的將鹽酸左旋多巴甲酯制備成適用于胃腸道的藥物制劑,其制劑形式為常規片劑、膠囊劑、控釋制劑或緩釋制劑。5.根據權利要求4所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的在鹽酸左旋多巴甲酯制備成的藥物制劑中,鹽酸左旋多巴甲酯在制劑中的含量為1wt%~99wt%。6.根據權利要求5所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的在鹽酸左旋多巴甲酯制備成的藥物制劑中,鹽酸左旋多巴甲酯在制劑中的含量為10wt%~90wt%。7.根據權利要求3所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的藥物制劑的制備方法為將鹽酸左旋多巴甲酯直接做成制劑,或者分別或/和輔料混合后做成制劑,然后進行包裝即得。8.根據權利要求3所述的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,其特征在于所述的藥物組合物的給藥劑量根據給藥對象、給藥途徑或藥物的制劑形式不同進行變化,但以保證該藥物組合物在哺乳動物體內能夠達到有效的血藥濃度為前提。

說明書

技術領域

本發明屬于藥物新用途技術領域,涉及鹽酸左旋多巴甲酯的藥物用途,具體涉及鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用。

背景技術

類風濕關節炎(Rheumatoid?arthritis,RA)是一種常見的以慢性、進行性、侵蝕性關節炎為特點的系統性自身免疫性疾病,其主要侵犯手、腕、足等小關節,也可累及如心、肺、神經系統等其他器官或組織。RA基本病理改變是關節滑膜炎癥、血管翳形成、關節軟骨和骨質進行性破壞?;頰咴誆〕談鶻錐慰啥加泄亟諤弁?、腫脹、僵硬和永久性關節破壞,如未能及時控制,最終將會導致患者關節畸形和功能喪失,具有很高的致殘率,嚴重影響了患者的生活質量。RA在各個年齡階段均可發病,其發病高峰年齡集中在30~50歲,一般女性患者多于男性。據統計,該病在全世界范圍內發病率約為0.5%~1.0%,在我國患病率約為0.32%~0.36%。RA已經成為造成人群勞動力喪失和殘疾的主要原因之一。

目前,RA治療目的是控制病情,使患者盡早達到疾病緩解狀態,改善關節功能,最大程度的保持患者機體正常功能。RA的治療原則是早期治療、聯合用藥、治療方案個體化以及功能鍛煉。臨床上對于RA的治療是以藥物治療為主,主要包括非甾體抗炎藥、改善病情的抗風濕藥、生物制劑、糖皮質激素和植物藥制劑等。雖然經治療后RA病人的癥狀得到了明顯的緩解,預后也有顯著的改善,但是仍然面臨著病情易反復、藥物不良反應、藥物耐受等問題,因此尋找新的RA治療藥物具有十分重要的意義。

鹽酸左旋多巴甲酯(LDME),化學名稱為L-3,4-二羥基苯基丙氨酸甲酯鹽酸,其分子式為C10H13NO4.HCL,分子量為247.68,CAS?No.?是1421-65-4,結構如式(Ⅰ)所示:

LDME是左旋多巴的前體藥物,水解為左旋多巴后,通過血腦屏障進入中樞,經多巴脫羧酶作用轉化成多巴胺,臨床上用于改善帕金森病癥狀。LDME易溶于水,易制成各種口服劑型和注射劑給藥,吸收快,7-8分鐘血藥濃度達峰值,比左旋多巴起效快,療效肯定。近幾年動物實驗研究表明LDME對弱視也有治療作用。目前尚無研究LDME與類風濕性關節炎的關系,本發明由此而來。

發明內容

解決的技術問題:針對現有的研究LDME與類風濕性關節炎的關系的缺乏,本發明提供一種鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,為防治類風濕關節炎提供了一種新途徑。

技術方案:鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,鹽酸左旋多巴甲酯化學結構式如下:

。

所述的藥物組合物包含藥學上有效劑量的鹽酸左旋多巴甲酯和藥學上可接受的載體。

所述的將鹽酸左旋多巴甲酯制備成適用于胃腸道或非胃腸道給藥的藥物制劑。

所述的將鹽酸左旋多巴甲酯制備成適用于胃腸道的藥物制劑,其制劑形式為常規片劑、膠囊劑、控釋制劑或緩釋制劑。

所述的在鹽酸左旋多巴甲酯制備成的藥物制劑中,鹽酸左旋多巴甲酯在制劑中的含量為1wt%~99wt%。

所述的在鹽酸左旋多巴甲酯制備成的藥物制劑中,鹽酸左旋多巴甲酯在制劑中的含量為10wt%~90wt%。

所述的藥物制劑的制備方法為將鹽酸左旋多巴甲酯直接做成制劑,或者分別或/和輔料混合后做成制劑,然后進行包裝即得。

所述的藥物組合物的給藥劑量根據給藥對象、給藥途徑或藥物的制劑形式不同進行變化,但以保證該藥物組合物在哺乳動物體內能夠達到有效的血藥濃度為前提。

鹽酸左旋多巴甲酯(LDME),其分子式為C10H13NO4.HCL,化學名稱為L-3,4-二羥基苯基丙氨酸甲酯鹽酸,分子量為247.68,CAS?No.?是1421-65-4,來源于Sigma-Aldrich?Co.LLC.公司。

本發明技術方案通過腹腔注射給藥法來研究LDME能否對膠原誘導方法建立類風濕關節炎小鼠(CIA)有治療作用,同時測定腫瘤壞死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)和IL-6等炎癥因子表達變化,以期為探討LDME治療類風濕關節炎提供實驗依據。

本發明通過40只DBA/1j小鼠被隨機分為5組,即正常組(Control)、模型組(Vehicle)、陽性對照組(甲氨蝶呤,2mg/kg;MTX)、LDME高劑量組和LDME低劑量組,LDME高劑量組的給藥劑量為100mg/kg,LDME低劑量組的給藥劑量為25mg/kg。于二次免疫前一天(第20天)至第70天LDME組分別按100mg/kg和25mg/kg連續給藥,MTX組每2天按2mg/kg給藥,Control和Vehicle組按10ml/kg給予飲用水。定期觀察各組實驗小鼠一般情況,記錄小鼠足掌厚度、關節炎評分;各組于第70天處死動物保留血清和后肢關節標本,分別行影像學、組織學和分子生物學檢測。采用單因素方差分析對各組數據進行統計學分析。

本發明結果表明,Control組小鼠活動靈活,精神狀態良好,飲水和食量正常,關節活動自如。Vehicle組小鼠精神萎靡,飲水和食量減少,關節活動有明顯障礙,四肢關節明顯腫大、持續水腫、皮膚充血、皮溫升高,關節活動度小。LDME低劑量組小鼠精神狀態一般,飲水和攝食情況好于Vehicle組,關節活動受限,部分關節紅腫,行走能力得到部分恢復。LDME高劑量組和MTX組小鼠飲食情況明顯好于Vehicle組,精神狀態較好,關節稍有紅腫,無明顯活動障礙。Vehicle組小鼠足掌初次免疫后第21天開始逐漸腫脹,至第42天時腫脹程度達最高,與Control組比較,差異有統計學意義(p<0.05)。LDME低劑量組,小鼠足掌腫脹進展緩慢,初次免疫第42天后,小鼠足掌腫脹程度逐漸減輕,末次測量時,小鼠足掌腫厚度與Vehicle組比較,差異有統計學意義(p<0.05)。Vehicle組關節炎評分于第42天達到高峰;MTX組在D38天關節炎評分顯著降低;LDME高劑量組和LDME低劑量組分別在第36、第42天顯著抑制CIA小鼠關節病變。micro-CT掃描結果顯示,LDME低劑量組:骨質表面十分毛糙,關節間隙縮窄嚴重,關節結構破壞較嚴重,較Vehicle組稍有好轉;LDME高劑量組和MTX組:骨質表面基本完整,關節間隙幾乎正常,關節結構清晰可見。組織學染色結果顯示Control組關節軟骨排列規則,染色均勻;關節面完整,軟骨呈粉紅淡染色,骨質呈深紅色,關節間隙正常,滑膜組織結構光滑,未見滑膜增生及炎性細胞浸潤現象。Vehicle組主要表現為:滑膜組織顯著增生,出現大量炎癥細胞浸潤,新生血管明顯增多;軟骨細胞排列紊亂,關節軟骨和骨質被嚴重破壞,軟骨面毛糙凹凸不平,關節間隙消失。LDME高劑量組、LDME低劑量組和MTX治療組可不同程度減輕以上病理變化,表現為滑膜組織輕度增生,炎性細胞浸潤減少,新生血管減少,軟骨損傷程度明顯減輕。ELISA結果顯示LDME能降低CIA小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,提示對炎癥因子的調節作用可能是LDME治療類風濕性關節炎的重要機制。

該動物實驗證實鹽酸左旋多巴甲酯(LDME)對類風濕關節炎有一定的防治作用,可使關節破壞和炎癥反應得到抑制,可作為類風濕關節炎的藥物干預的一種新手段。

有益效果:本發明提供的鹽酸左旋多巴甲酯在制備防治類風濕關節炎的藥物中的應用,具有以下優點:

1.?鹽酸左旋多巴甲酯具有高效防治類風濕關節炎的用途,能夠顯著減輕癥狀,如關節腫脹、關節炎評分,且能減輕關節破壞,降低炎性因子分泌;

2.?鹽酸左旋多巴甲酯對類風濕關節炎療效確切,為將鹽酸左旋多巴甲酯開發為新藥提供了強有力的依據。

3.?本發明發掘了鹽酸左旋多巴甲酯新的藥用前景,開拓了一個新的藥用領域;鹽酸左旋多巴甲酯是臨床上用于改善帕金森病癥狀的常用藥物,服用方便,毒副作用小,長期服藥無危害。

附圖說明

圖1為Control組、Vehicle組、MTX組、LDME高劑量組、LDME低劑量組中小鼠后肢足掌厚度變化圖。

圖2為Control組、Vehicle組、MTX組、LDME高劑量組、LDME低劑量組中小鼠關節炎評分圖。

圖3為Control組、Vehicle組、MTX組、LDME高劑量組、LDME低劑量組中小鼠micro-CT檢測結果圖。

圖4為Control組、Vehicle組、MTX組、LDME高劑量組、LDME低劑量組中小鼠膝關節組織病理改變圖。

圖5為Control組、Vehicle組、MTX組、LDME高劑量組、LDME低劑量組中小鼠血清ELISA檢測結果圖。

具體實施方式

實施例1

一、材料與方法

1.?材料

1.1?試劑及實驗設備

1.1.1?主要藥品及試劑

鹽酸左旋多巴甲酯(LDME)、二甲亞砜(DMSO)、過氧化氫、乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物(EDTA)購自Sigma,美國;牛Ⅱ型膠原、不完全弗氏佐劑(IFA)、完全弗氏佐劑(CFA)購自Chondrex,美國;甲醇、鹽酸、冰乙酸、氨水、無水乙醇、95%乙醇、多聚甲醛購自上海峰化學試劑有限公司;Cole氏蘇木素染色液(常規染色)、伊紅染色液購自北京索萊寶科技有限公司;TNF-α、IL-1β、IL-6酶聯免疫吸附試驗檢測試劑盒,購自Biosource,美國。

1.1.2?主要儀器

Micro-CT(SkyScan?1176,比利時)、石蠟切片機(Leica?2135,德國)、烤片機(Leica?1120,德國)、石蠟包埋機(BMJ-Ⅱ,中國,常州)、Axio?imager.MI正置顯微鏡(Zeiss,德國)、酶標儀(Biotec,美國)、Sim-F140制冰機(Sanyo,日本)、手術器械一套等。

1.2?實驗動物

雄性DBA/1j小鼠,40只,體重20-25g,6-8周齡,購自北京華阜康生物科技股份有限公司。實驗動物均在蘇州大學SPF級實驗房內飼養,室溫(23±1)℃,相對濕度(55±10)%,間隔照明,自由攝食及飲水,適應性飼養一周后使用。

2.?實驗方法

2.1?小鼠膠原誘導性關節炎模型的建立和評價

2.1.1?小鼠膠原誘導性關節炎模型的建立

(1)乳化劑的制備:將一定量的牛II型(CII)膠原溶于10?mM的冰乙酸中,配置成濃度為2mg/mL的溶液,4℃攪拌過夜。將完全溶解的膠原溶液與完全弗式佐劑(不完全弗式佐劑)等體積混合,使用三通管將二者完全混勻,使之充分乳化,制成含膠原濃度為lmg/mL的乳劑。乳化劑需要現配現用,并應放置于冰面上以防溫度升高導致膠原變性。

(2)將小鼠放入固定器中露出尾巴,左手輕輕捏住小鼠尾根部,右手持微量注射器在距尾根部靠下1.5-2.0cm處進針,皮內注射100μL乳化劑。如果在推注過程中有乳化劑溢出,則應選擇新的注射點進行補充注射適量的乳化劑。

(3)第一次免疫注射3周后取相同劑量的乳化劑加強注射一次。注:本次乳化劑的制備使用不完全弗式佐劑與膠原混合制成。

(4)第二次加強免疫之后4-5天小鼠會出現不同程度的紅腫,至初次免疫38天左右達到高峰,一般45天左右可達95%以上成模率。

2.1.2?實驗分組及給藥

將所有實驗動物采用隨機數字表法分成5組(每組8只),即正常組(Control)、模型組(Vehicle)、陽性對照組(甲氨蝶呤,2mg/kg;MTX)、LDME組分為高(H-LDME)和低(L-LDME)兩個劑量組,其給藥劑量分別為100mg/kg和25mg/kg。于二次免疫前一天(第20天)至第第70天LDME組分別按100mg/kg和25mg/kg連續給藥,MTX組每2天按2mg/kg給藥,Vehicle組經腹腔注射生理鹽水0.1ml/kg/d,Control組小鼠常規飼養,不予處理。

2.1.3?小鼠膠原誘導性關節炎模型的評價

(1)小鼠后足足掌厚度測量:從D21起,使用游標卡尺對小鼠同側的后足足掌厚度進行測量,每周測量2次,每次重復測量3次,取平均值。所有測量由兩名實驗者獨立完成。

(2)關節炎癥及腫脹程度評分:從D21起,對各組大鼠關節腫脹程度進行評分,每周評測2次,每次重復測量3次,取平均值。各關節病變程度按5級評分法進行評價,每個肢體最高分為4分,每只小鼠最高為16分。具體評分標準如下:0分:無紅腫;1分:小趾關節輕度紅腫;2分:趾關節和足跖關節腫脹;3分:踝關節以下的足爪腫脹;4級:包括踝關節在內的全部足爪均出現腫脹,功能完全喪失。

2.3?標本采集

小鼠眼眶靜脈叢采血,小鼠處死前以眼眶靜脈叢采血法采血0.25ml,具體方法如下:取內徑為1.0-1.5mm的玻璃毛細管,用之前折斷成1-1.5cm長的毛細管,1%肝素溶液浸泡,干燥后使用。左手將小鼠固定后,向下壓迫頸部兩側,右手持毛細管采血,接入準備好的容器中。采血后紗布輕壓止血。標本以3000g離心10min,得到血清-70℃保存。

小鼠關節標本:各組動物均腹腔注射10%水合氯醛麻醉,仰臥外固定于小鼠操作架上,開胸暴露心臟,經心尖向左心室插管灌注,剪開右心耳,結扎降主動脈后開放生理鹽水沖洗至右心耳流出清涼液體,再以4%中性多聚甲醛200~300ml灌注,至動物四肢抽搐、變硬。灌注完畢后迅速取出雙側后肢,剔除顱底附著軟組織,保留膝關節和足趾關節,-70℃保存。

2.4?Micro-CT分析

初次免疫后第70天處死小鼠,取出小鼠后爪,10%多聚甲醛固定48小時后采用顯微CT?(SkyScan?1076)對所有標本進行掃描,掃描的各項參數設置如下:空間分辨率9μm,電壓70?kV,電流141?μA,掃描時間1750ms,掃描完成后,利用自帶的軟件對小鼠踝關節進行分析并構建標本的三維重建圖像。

2.5?組織病理組織學檢測

2.5.1小鼠關節病理切片制作

(1)固定、脫鈣:D70處死小鼠,取出后爪,用4%多聚甲醛固定48小時,然后置于10%EDTA脫鈣液中脫鈣1個月,2d換液1次,

(2)脫水、浸蠟:將脫鈣后的標本使用流水沖洗30-60min,然后進行脫水、浸蠟,具體流程見表:

(3)包埋:在包埋機上進行包埋,將小鼠膝關節剖面平按于包埋盒底并貼緊,待石蠟凝固后推出蠟塊,制成固體蠟塊。

(4)切片、展片、烤片:將修整好的蠟塊進行切片,用旋轉切片機將樣品切成厚度為4-5μm的連續切片,以正面放入展片機中水浴展片(水溫43℃),展片時要盡量平整、無皺褶,用干凈的載玻片榜片,撈片完成后將切片置于烤片機上進行烤片(溫度60℃)4小時,防止氣泡產生。

2.5.2?蘇木素-伊紅染色(H&E染色)

H&E染色法,是形態學最常用的染色方法,同時也是石蠟切片技術里常用的染色法之一。通過這種染色方法可以觀察到各種組織或細胞的形態結構。

實驗步驟:

(1)60℃烘箱烤片30min。

(2)石蠟切片置于二甲苯Ⅰ、Ⅱ,各15min。

(3)無水乙醇Ⅰ、Ⅱ,95%乙醇Ⅰ、Ⅱ,90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5分鐘。

(4)蘇木素染色1-3min,自來水沖洗1min。

(5)1%鹽酸乙醇分化20秒。

(6)1%稀氨水返藍30秒,自來水沖洗1min。

(7)伊紅染色3分鐘,自來水洗5min。

(8)常規脫水、透明(80%乙醇5min,90%乙醇5min,95%乙醇5min,無水乙醇5min,二甲苯透明Ⅰ10min,二甲苯透明Ⅱ10min)。

(9)中性樹膠封片。

(10)顯微鏡下觀察染色效果:細胞核呈藍色,細胞漿、結締組織等呈紅色。

2.6?酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測TNF-α、IL-1β和IL-6

ELISA檢測血清中TNF-α、IL-1β和IL-6。

參照ELISA試劑盒說明書,具體步驟如下:

(1)????設立標準孔8孔,每孔中先各加入樣品稀釋液100?μl,第一孔再加標準品100?μl,混勻后用移液器吸出100?μl,移至第二孔,如此反復作對倍稀釋至第7孔,最后,從第7孔中吸出100?μl棄去,使之體積均為100?μl。第8孔為空白對照。

(2)????加樣:待測樣品孔中每孔各加入上清液100?μl,將反應板置于37℃×120?min;

(3)????用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干,每孔中加入第一抗體工作液50ul,將反應板充分混勻后置37?℃×60?min。

(4)????用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干,每孔加酶標抗體工作液100ul,將反應板置于37?℃?120?min;

(5)????用洗滌液將反應板充分洗滌4~6次,向濾紙上扣干,每孔中加入底物工作液100ul,?置于37?℃暗處反應5~10?min;

(6)????每孔中加入50ul終止液混勻,用酶標儀在450nM處測吸光值;

(7)????以標準品?1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0?pg/ml之OD值在半對數紙上作圖,畫出標準曲線;根據標準曲線公式換算出血清中檢測指標含量。

2.7?統計學分析

結果數據采用SPSS11.0統計軟件分析,數據用均數±標準差()表示,多組比較選用單因素方差分析(one-way?ANOVA?檢驗),兩兩比較在總體方差齊的條件下,選用LSD及Dunnett-t法進行分析。p<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

1.?實驗動物一般情況

實驗過程中無小鼠死亡。Control組小鼠活動靈活,精神狀態良好,飲水和食量正常,關節活動自如。Vehicle組小鼠精神萎靡,飲水和食量減少,關節活動有明顯障礙,四肢關節明顯腫大、持續水腫、皮膚充血、皮溫升高,關節活動度小。L-LDME組小鼠精神狀態一般,飲水和攝食情況好于Vehicle組,關節活動受限,部分關節紅腫,行走能力得到部分恢復。H-LDME組和MTX組小鼠飲食情況明顯好于Vehicle組,精神狀態較好,關節稍有紅腫,無明顯活動障礙。

2.?LDME對CIA小鼠足掌厚度的影響

從初次免疫后第21天開始,對各組小鼠右側后足進行足掌厚度的測量,每周測量2次。Vehicle組小鼠足掌初次免疫后第21天開始逐漸腫脹,至第42天時腫脹程度達最高,與Control組比較,差異有統計學意義(p<0.05)。LDME治療組,小鼠足掌腫脹進展緩慢,初次免疫第42天后,小鼠足掌腫脹程度逐漸減輕,末次測量時,小鼠足掌腫厚度與Vehicle組比較,差異有統計學意義(p<0.05)。見圖1。

3.?LDME對CIA小鼠關節炎評分的影響

Vehicle組小鼠二次免疫后后肢關節出現紅腫、變形,關節炎評分于D42天達到高峰;MTX組在D38天關節炎評分顯著降低;LDME(高劑量和低劑量)分別在D36,D42顯著抑制CIA小鼠關節病變,與Vehicle組比較,差異有統計學意義(p<0.05)。見圖2。

4.?LDME對CIA小鼠關節破壞的影響

Micro-CT掃描結果顯示,Control組:骨質表面光滑,關節間隙正常,關節結構完整,骨質未出現破壞現象;Vehicle組:骨質表面凹凸不平,關節結構破壞嚴重,關節間隙完全消失;L-LDME組:骨質表面十分毛糙,關節間隙縮窄嚴重,關節結構破壞較嚴重,較模型組稍有好轉;H-LDME和MTX組:骨質表面基本完整,關節間隙幾乎正常,關節結構清晰可見。見圖3。

5.?各組小鼠關節組織病理改變

Control組關節軟骨排列規則,染色均勻;關節面完整,軟骨呈粉紅淡染色,骨質呈深紅色,關節間隙正常,滑膜組織結構光滑,未見滑膜增生及炎性細胞浸潤現象。Vehicle組主要表現為:滑膜組織顯著增生,出現大量炎癥細胞浸潤,新生血管明顯增多;軟骨細胞排列紊亂,關節軟骨和骨質被嚴重破壞,軟骨面毛糙凹凸不平,關節間隙消失。LDME和MTX治療組可不同程度減輕以上病理變化,表現為滑膜組織輕度增生,炎性細胞浸潤減少,新生血管減少,軟骨損傷程度明顯減輕。見圖4。

6.?LDME對CIA小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的影響

Vehicle組小鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明顯高于正常組,由表可見經過LDME治療后,H-LDME組IL-1β和IL-6的含量明顯降低,而TNF-α在各治療組中均顯著降低,與Vehicle組比較,差異有統計學意義(p<0.05;見圖5)。上述結果提示對炎癥因子的調節作用可能是LDME治療類風濕性關節炎的重要機制。

結論:LDME能夠顯著降低CIA小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,明顯抑制CIA小鼠關節炎癥,且能顯著減少CIA小鼠炎癥關節破壞。LDME對CIA小鼠有明顯的療效,為臨床類風濕性關節炎的藥物治療提供了新的選擇。

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鹽酸 左旋多巴甲酯 制備 防治 類風濕 關節炎 藥物 中的 應用
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