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2019西班牙人对维戈塞尔塔集锦: 使用CBP/連環蛋白的抑制劑治療硬皮病.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201380054480.3

申請日:

20131021

公開號:

CN104902902A

公開日:

20150909

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/5365,A61P17/00 主分類號: A61K31/5365,A61P17/00
申請人: 株式會社棱鏡制藥
發明人: 小路弘行,小田上剛直
地址: 日本神奈川縣橫浜市
優先權: 61/716080
專利代理機構: 中國專利代理(香港)有限公司 代理人: 梅黎;林森
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201380054480.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本公開總體涉及α-螺旋模擬結構,具體涉及作為β-連環蛋白的抑制劑的α-螺旋模擬結構。本公開還涉及治療包括彌漫性系統性硬化癥和局限性系統性硬化癥的硬皮病中的應用和包含此類α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑的藥物組合物。

權利要求書

1.用于治療硬皮病的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑化合物,其具有下式(I):其中:A是-CHR-,其中?R是氫、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環烷基烷基、任選取代的雜環烷基烷基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的環烷基或任選取代的雜環烷基;G是-NH-、-NR-、-O-、-CHR-或-C(R)-,其中?R獨立地選自任選取代的烷基、任選取代的烯基和任選取代的炔基;R是任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環烷基烷基或任選取代的雜環烷基烷基;R是–W-W-Rb-R,其中?W是–(CO)-或–(SO)-;W是鍵、-O-、-NH-或任選取代的低級亞烷基;Rb是鍵或任選取代的低級亞烷基;且R是任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的環烷基或任選取代的雜環烷基;且R是任選取代的烷基、任選取代的烯基或任選取代的炔基;或其藥學上可接受的鹽。2.權利要求1的化合物,其選自:(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代六氫吡嗪并[2,1-c][1,2,4]噁二嗪-1(6H)-甲酰胺,(6S,9S)-8-((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基)甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,磷酸二氫4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,磷酸二氫4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基磷酸鈉,4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(萘-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基磷酸鈉,(6S,9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((R)-1-苯基乙基)-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((S)-1-苯基乙基)-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基-2,6-二甲基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-8-(苯并[c][1,2,5]噻二唑-4-基甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-8-(異喹啉-5-基甲基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-8-((5-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-3-基)甲基)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,和(6S,9S)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)-N-(噻吩-2-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。3.權利要求1的化合物,其選自:磷酸二氫4-(((6S,9S,9aS)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,和(6S,9S,9aS)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。4.藥物組合物,其包含權利要求1、2或3的化合物。5.治療硬皮病的方法,其包括向有需要的患者施用有效量的權利要求1、2或3的化合物。6.權利要求5的方法,其中所述硬皮病是彌漫性系統性硬化癥。7.權利要求5的方法,其中所述硬皮病是局限性系統性硬化癥。

說明書

相關申請的交叉引用

本申請要求2012年10月19日提交的美國臨時申請61/716,080的優先權,所述申請以其整體并入本文中。

公開背景

Wnt/β-連環蛋白信號傳導正成為其在人生物學的許多方面中的關鍵作用的預兆。該信號傳導途徑在胚胎發生、器官發生和維持組織和器官體內平衡中、以及還有在病理病癥諸如癌癥和其他人障礙諸如炎性障礙和纖維化中具有作用。它在幾種生理事件諸如分化、增殖、存活、氧化應激、形態發生等中也是不可或缺的。然而,該途徑的異?;罨詼嘀植±聿≈⒅幸彩敲饗緣?。

硬皮病/系統性硬化癥(SSc)是一種慢性系統性自身免疫性疾病(主要為皮膚),其特征在于纖維化(或硬化)、血管改變和自身抗體。存在兩種主要形式。局限性系統性硬化癥/硬皮病涉及皮膚表現,其主要影響手、臂和臉。彌漫性系統性硬化癥/硬皮病正在迅速發展,并且影響大面積的皮膚和一種或多種內部器官,經常是腎臟、食道、心臟和肺。

Wnt-10b的表達在來自患有系統性硬化癥的患者的損傷皮膚活檢樣本和獲得自患有博來霉素誘導的纖維化的小鼠的樣本中增加。表達Wnt-10b的轉基因小鼠顯示皮下脂肪組織的逐漸喪失,伴隨真皮纖維化、增加的膠原沉積、成纖維細胞活化和成肌纖維細胞積累。Wnt活性與這些活檢樣本中的膠原基因表達相關。來自轉基因小鼠的移植的皮膚成纖維細胞表現出持久的Wnt/β-連環蛋白信號傳導和升高的膠原和α-平滑肌肌動蛋白基因表達。正常成纖維細胞和前脂肪細胞的Wnt-10b感染導致脂肪形成的阻斷和轉化生長因子β(TGF-β)非依賴性的纖維化基因表達的上調。

SSc與皮膚中增加的Wnt-10b表達相關。異常的Wnt-10b引起轉基因小鼠中皮下脂肪組織的損失和TGFβ-非依賴性的真皮纖維化。這些發現暗示Wnt-10b通過誘導纖維發生的轉錄程序、同時抑制脂肪生成來使間充質細胞的分化向成肌纖維細胞轉變。Wnt-10b轉基因小鼠代表了用于在纖維化的環境中研究Wnt信號傳導的新型動物模型(Wei?J等人,?Arthritis?Rheum.?63(6):1707-17,?2011)。

公開概述

本公開提出了通過施用β-連環蛋白的抑制劑治療硬皮病(包括局限性和彌漫性系統性硬化癥)的方法。本公開還提供了α螺旋模擬物β-連環蛋白抑制劑化合物和包含β-連環蛋白的抑制劑的組合物。

附圖概述

圖1.?真皮纖維化評分的概述如下:0=無顯著改變;1?=微量到最低的嚴重程度;2?=輕微的嚴重程度;3?=中等的嚴重程度;4?=顯著的嚴重程度。

公開詳述

近來,已經開發出非肽化合物,其模擬在生物活性蛋白或肽中發現的反向轉角的二級結構。例如,美國專利號5,440,013和公開的PCT申請號WO94/03494、WO01/00210A1和WO01/16135A2各自公開了構象受限的非肽類化合物,其模擬反向轉角的三維結構。此外,美國專利號5,929,237及其部分繼續申請美國專利號6,013,458公開了構象受限的化合物,其模擬生物活性肽和蛋白的反向轉角區域的二級結構。關于反向轉角模擬物,WO2007/056513和WO2007/056593中已經公開了構象受限的化合物,其模擬生物活性肽和蛋白的α螺旋區域的二級結構。

本公開提供了治療硬皮病的新的化合物、藥物組合物和方法。本發明人已經確定,抑制β-連環蛋白信號傳導是治療局限性和彌漫性系統性硬化癥這兩者的有效方法。

本發明的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑的結構和化合物公開于WO?2010/044485、WO?2010/128685、WO?2009/148192、US?2011/0092459,其各自以其整體通過引用并入本文。現在已經發現這些化合物可用于治療硬皮病。

本發明的α-螺旋模擬物β-連環蛋白抑制劑的優選結構具有下式(I):

其中

A是-CHR7-,

其中

R7是任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環烷基烷基或任選取代的雜環烷基烷基;

G是-NH-、-NR6-或-O-

其中

R6是低級烷基或低級烯基;

R1是-Ra-R10;

其中

Ra是任選取代的低級亞烷基且

R10是任選取代的雙環稠合的芳基或任選取代的雙環稠合的雜芳基;

R2是–(CO)-NH-Rb-R20,

其中

Rb是堿或任選取代的低級亞烷基;且

R20是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基;且

R3是C1-4?烷基。

這些化合物特別可用于預防和/或治療硬皮病。

本發明的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑的更優選的結構在上述式(I)中具有以下取代基:

A是-CHR7-,

其中

R7是任選被羥基或C1-4?烷基取代的芳基烷基;

G是-NH-、-NR6-或-O-

其中

R6是C1-4?烷基或C1-4?烯基;

R1是-Ra-R10;

其中

Ra是C1-4?亞烷基且

R10是任選被鹵素或氨基取代的雙環稠合的芳基或雙環稠合的雜芳基;

R2是?–(CO)-NH-Rb-R20,

其中

Rb是鍵或C1-4?亞烷基;且

R20是芳基或雜芳基;且

R3是C1-4?烷基。

這些化合物特別可用于預防和/或治療硬皮病。

本發明的最優選的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑如下:

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代六氫吡嗪并[2,1-c][1,2,4]噁二嗪-1(6H)-甲酰胺,

(6S,9S)-8-((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基)甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

磷酸二氫4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,

磷酸二氫4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,

4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基磷酸鈉,

4-(((6S,9S)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(萘-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基磷酸鈉,

(6S,9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((R)-1-苯基乙基)-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((S)-1-苯基乙基)-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基-2,6-二甲基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-8-(苯并[b]噻吩-3-基甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-8-(苯并[c][1,2,5]噻二唑-4-基甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-8-(異喹啉-5-基甲基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-8-((5-氯噻吩并[3,2-b]吡啶-3-基)甲基)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,

(6S,9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹喔啉-5-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺,和

(6S,9S)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)-N-(噻吩-2-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。

這些化合物特別可用于預防和/或治療硬皮病。

在一個最優選的實施方案中,所述化合物是:

磷酸二氫4-(((6S,9S,9aS)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯,或

(6S,9S,9aS)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-1-甲酰胺。

這些化合物特別可用于預防和/或治療硬皮病。

盡管不希望被束縛,這些化合物在治療這些病癥中的有效性部分基于這些化合物通過抑制環AMP應答-元件結合蛋白(CBP)、因此改變Wnt途徑信號傳導(已經發現其改善結果)而阻斷TCF4/β-連環蛋白轉錄途徑的能力。

“β-連環蛋白抑制劑”是一種能夠降低或妨礙β-連環蛋白活性的物質。β-連環蛋白活性包括易位至細胞核,與TCF(T細胞因子)轉錄因子結合,和共激活TCF靶基因的TCF轉錄因子誘導的轉錄?!唉?連環蛋白抑制劑”也可以干擾CBP和β-連環蛋白的相互作用。因此,β-連環蛋白抑制劑抑制或降低CBP/β-連環蛋白信號傳導和CBP/β-連環蛋白信號傳導途徑的活性,包括減少一個或多個下游信號傳導事件。

本文公開了用于治療硬皮病/系統性硬化癥的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑化合物。

疾病

如本文所使用,“治療”是指臨床干預以試圖改變被治療的個體或細胞的疾病進程,并且可以在臨床病理學的進程過程中進行。治療的治療效果,包括但不限于,預防疾病的復發,緩解癥狀,減少疾病的任何直接或間接的病態結果,降低疾病進展的速度,改善或減輕疾病狀態,和緩解或改善預后。

如本文所使用,術語“治療有效量”和“有效量”可互換用于指本發明的組合物的量,其足以導致預防硬皮病的發展或發作、或其一種或多種癥狀,以增強或改善另一種治療的效果和/或改善硬皮病的一種或多種癥狀。對于患有硬皮病的受治療者,優選的治療有效量是有效減少纖維化、血管改變和/或自身抗體的量。

治療有效量可以以一個或多個劑量施用于患者,所述劑量足以減輕、改善、穩定、逆轉或減緩疾病的進展,或另外降低疾病的病態結果,或減輕疾病的癥狀。改善或降低不必是永久性的,但可以持續一段時間,范圍為至少一小時、至少一天、或至少一周或更長時間。有效量通常由醫師在逐案基礎上確定,并且是在本領域技術人員的技術內。當確定適當劑量以實現有效量時,通??悸羌父鲆蛩?。這些因素包括患者的年齡、性別和體重,所治療的病癥,病癥的嚴重程度,以及施用途徑,劑型和方案以及期望的結果。

如本文所使用,術語“受治療者”和“患者”可互換使用,并且是指動物,優選哺乳動物,諸如非靈長類(例如,牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)和靈長類(例如,猴和人),最優選人。

本文所述的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑可用于預防或治療疾病。具體地,本公開提供了治療處于硬皮病的風險(或易患硬皮病)的受治療者的預防性和治療性方法。因此,本方法提供了通過將有效量的α螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑施用于有需要的受治療者而預防和/或治療受治療者中的硬皮病。例如,可以向受治療者施用α螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑,以努力改善硬皮病病癥的一個或多個因素。

如本文所使用,“硬皮病”或“系統性硬化癥”被定義為自身免疫性疾病,其特征在于皮膚或內部器官內的結締組織或瘢痕組織的過度積累,伴有血管改變和自身抗體的存在。與正常、健康的皮膚或器官中的結締組織水平相比,硬皮病中結締組織/瘢痕組織的積累過多。這種纖維化經常伴有壞死和/或炎癥。β-連環蛋白信號傳導在誘導細胞外基質諸如膠原的過度產生和過量積累中發揮作用。

硬皮病的病因是未知的。硬皮病影響所有器官中的小血管(小動脈)。首先,小動脈的內皮細胞連同平滑肌細胞通過細胞凋亡死光。它們被膠原和其他纖維材料代替。炎癥細胞,特別是CD4+輔助性T細胞,滲入小動脈,并引起進一步損害。在局限性系統性硬化癥中,外部皮膚,諸如手、臂和臉,主要受影響。肺動脈高血壓可以在多達三分之一的患者中存在,并且是這種形式的硬皮病的最嚴重的并發癥。在彌漫性系統性硬化癥中,皮膚和內部器官,諸如腎臟、食道、心臟和肺,受影響。這種形式的系統性硬化癥可以致殘。這兩種形式的疾病可以威脅生命。

本發明還涵蓋在聯合治療中給予β-連環蛋白抑制劑化合物的方法。也就是說,所述化合物可以與用于治療硬皮病的其他藥劑結合、但分開使用。在這些聯合方法中,所述化合物將通常以每日1-100?mg/kg體重的日劑量結合其他藥劑給予。其他藥劑將通常以治療上所使用的量來給予。然而,具體的給藥方案將由醫師使用合理的醫學判斷來確定。

硬皮病的治療是指施用本文所述的化合物或組合物來治療患有硬皮病的受治療者。治療硬皮病的一個結果是減少過量結締組織的形成。治療硬皮病的另一個結果是減少炎癥、自身抗體和免疫細胞的滲入。治療肺纖維化的還有另一個結果是減少血管改變,諸如小動脈內皮細胞和/或平滑肌細胞的凋亡。

本文所述的α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑可以并入藥物組合物,用于單獨或聯合施用于受治療者,以用于治療或預防本文所述的障礙。此類組合物通常包括活性劑和藥學上可接受的載體。如本文所使用,術語“藥學上可接受的載體”包括與藥物施用相容的鹽水、溶劑、分散介質、包衣劑、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑等。補充的活性化合物也可以并入組合物中。

可以采用任何合適的施用途徑,用于為哺乳動物,尤其是人,提供有效劑量的本文所述的化合物。例如,可以采用口服、直腸、外用、腸胃外、眼、肺、鼻等途徑。劑型包括片劑、錠劑、分散劑、懸浮劑、溶液劑、膠囊、乳膏、軟膏、氣霧劑等。

采用的活性成分的有效劑量可以根據所采用的具體化合物、施用模式、所治療的病癥和所治療的病癥的嚴重程度而變化。此類劑量可以由本領域技術人員容易地確定。

當治療或控制本文所述的化合物指示的硬皮病和/或其他疾病時,在本文所述的化合物以約0.01毫克至約100毫克/千克動物體重的日劑量施用、優選作為單一日劑量或以一天兩至六次的分開劑量或以緩釋形式給予時,通?;竦昧釗寺獾慕峁?。對于大多數大型哺乳動物,總的日劑量為約1.0毫克至約1000毫克。在70?kg成年人的情況下,總的日劑量將通常為約1毫克至約500毫克。對于特別有效的化合物,用于成年人的劑量可低至0.1?mg。在一些情況下,日劑量可以高達1克。劑量方案可以在該范圍內或甚至在該范圍之外調整,以提供最佳治療響應。

口服施用將通常使用片劑或膠囊進行。片劑和膠囊中劑量的實例是0.1?mg、0.25?mg、0.5?mg、1?mg、2?mg、5?mg、10?mg、15?mg、20?mg、25?mg、30?mg、40?mg、50?mg、100?mg、200?mg、250?mg、300?mg、400?mg、500?mg和750?mg。其他口服形式也可以具有相同或相似的劑量。

本文還描述了包含本文所述的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。本文所述的藥物組合物包含作為活性成分的本文所述的化合物或藥學上可接受的鹽,以及藥學上可接受的載體和任選的其他治療成分。如果施用前藥,藥物組合物還可以包含前藥,或其藥學上可接受的鹽。

組合物可以適合于口服、直腸、外用、腸胃外(包括皮下、肌內和靜脈內)、眼部(眼)、肺(鼻或口腔吸入)或鼻施用,盡管在任何給定情況下最合適的途徑將取決于所治療的病癥的性質和嚴重程度以及活性成分的性質。它們可方便地以單位劑型呈現,并且通過藥學領域中任何眾所周知的方法來制備。

在實際應用中,本文所述的化合物可以作為活性成分根據常規藥物配合技術與藥用載體直接混合而組合。所述載體根據對于施用、例如口服或腸胃外(包括靜脈內)所期望的制劑形式,可以采取多種多樣的形式。在制備作為口服劑型的組合物時,可以采用任何常用的藥物介質,諸如,例如水、二醇類、油類、醇類、調味劑、防腐劑、著色劑等(在口服液體制劑的情況下,諸如,例如懸浮液、酏劑和溶液劑);或載體,諸如淀粉、糖類、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等(在口服固體制劑的情況下,諸如,例如粉劑、硬和軟膠囊和片劑),其中固體口服制劑相比于液體制劑是優選的。

因為其易于施用,所以片劑和膠囊代表了最有利的口服劑量單位形式,在這種情況下,采用固體藥物載體。如果需要,片劑可以通過標準水性或非水性技術包衣。此類組合物和制劑應當含有至少0.1%的活性化合物。這些組合物中活性化合物的百分比當然可以改變,并且可以合宜地為所述單位的重量的約2%至約60%。此類治療上有用的組合物中活性化合物的量是將獲得有效劑量的量?;钚曰銜鏌部梢宰魑繅禾宓渭粱蚺縹砑獵詒悄謔┯?。

片劑、丸劑、膠囊等還可以含有粘合劑,諸如黃蓍膠、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠;賦形劑,諸如磷酸二鈣;崩解劑,諸如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸;潤滑劑,諸如硬脂酸鎂;和甜味劑,諸如蔗糖、乳糖或糖精。當劑量單位形式是膠囊時,除了上述類型的材料以外,它可以含有液體載體、諸如脂肪油。

各種其他材料可以作為包衣存在或用于改變劑量單位的物理形式。例如,片劑可以用蟲膠、糖或這兩者包衣。除了活性成分以外,糖漿或酏劑可以含有,蔗糖作為甜味劑,對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯作為防腐劑,染料和調味劑諸如櫻桃或橙調味劑。

適于透皮施用的藥物制劑可以作為意欲保持與接受者的表皮緊密接觸很久時間段的分離的貼片來呈現。例如,活性成分可以如Pharm.Res.,?3(6):318?(1986)中通常所述、通過離子電滲療法從貼片遞送。

適于局部施用的藥物制劑可以配制為軟膏、乳膏、懸浮液、洗液、粉劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑。對于眼睛或其他外部組織(例如口和皮膚)的治療,制劑優選作為外用軟膏或乳膏施用。當配制于軟膏中時,活性成分可以與石蠟或水混溶性軟膏基質一起采用?;蛘?,活性成分可以與水包油乳膏基質或油包水基質配制在乳膏中。

本文所述的化合物也可以腸胃外施用。這些活性化合物的溶液或懸浮液可以在合適地與表面活性劑或表面活性劑的混合物混合的水中制備,所述表面活性劑諸如羥丙基纖維素、聚山梨醇酯80和中鏈和長鏈脂肪酸的甘油單酯和甘油二酯。分散液也可以在甘油、液體聚乙二醇及其在油類中的混合物中制備。在一般的儲存和使用條件下,這些制劑含有防腐劑以防止微生物的生長。

適合于注射用的藥物形式包括無菌水溶液或分散液和用于臨時制備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。在所有情況下,所述形式必須是無菌的,而且必須是達到存在易可注射性的程度的液體。它必須在制備和儲存的條件下是穩定的,并且必須在防止微生物諸如細菌和真菌的污染作用下保存。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇)、其合適的混合物和植物油的溶劑或分散介質。

本公開通過以下非限制性實施例進一步說明。

實施例

本研究的目的是在博來霉素誘導的真皮纖維化的鼠模型中評價測試品化合物A(α-螺旋模擬的β-連環蛋白抑制劑化合物)的效果?;銜顰是磷酸二氫4-(((6S,9S,9aS)-1-(芐基氨基甲?;?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-1H-吡嗪并[2,1-c][1,2,4]三嗪-6-基)甲基)苯基酯。陰性和陽性對照品分別是磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和地塞米松(DEX,已知用于治療硬皮病)。

劑量制備。測試品的高劑量(0.5?mg/mL)給藥溶液通過混合4?mL測試品(20?mg/mL的原液)與36?mL?PBS來制備。低劑量(0.05?mg/mL)給藥溶液通過混合4?mL高劑量測試品給藥溶液(0.5?mg/mL)與36?mL?PBS來制備。DEX給藥溶液(1?mg/mL)通過混合1?mL?DEX原液(3?mg/mL)與2?mL?PBS來制備。測試和陽性對照品每周制備一次,等分并在4℃避光儲存。

四十五只約6周齡的雌性C3H/HeJ近交系小鼠(小家鼠(Mus?musculus))獲得自Jackson?Laboratory?(Bar?Harbor,?Maine),用于本研究中。選擇小鼠用于研究,因為這些動物是經常用于意欲給人使用的藥物的臨床前評價中的可接受的物種。

通過六周每天一次將博來霉素(0.1?mL中0.1?U)皮下注射到每只小鼠背上的限定區域,來局部誘導真皮纖維化。測試和對照品通過每天兩次腹腔內注射來施用,從第14天開始(即,博來霉素注射開始后兩周)。對于第1-4組的小鼠,測試/對照品施用(BID,IP)四周,從第14天開始(即博來霉素開始注射后兩周),每天兩次進行施用。第1組接受200?μL/小鼠的陰性對照品(PBS)。第2和3組分別接受劑量為0.5和5?mg/kg的低和高劑量測試品給藥溶液(0.05和0.5?mg/mL化合物A)。第4組接受劑量為1?mg/kg的DEX給藥溶液(1?mg/mL)。對第2-4組的動物,以10?mL/kg的劑量體積施用劑量,并且個體動物的劑量體積基于最近體重每周一次重新計算。在兩個組群中,向動物施用博來霉素和測試和對照品,其中給藥錯開一天。組群A由每組中的前五只動物構成,[x01?-?x05,其中x表示研究組編號(1、2、3或4)]。組群B由剩余動物(x06?–?x10)構成。參見表1。

表1.?研究設計的總結

使小鼠在第42天(即,博來霉素注射六周和測試/對照品治療四周后)安樂死。對每只小鼠進行完整的肉眼尸檢,并且記錄任何肉眼可見的異常。在尸體剖檢中,收獲來自博來霉素注射區域的皮膚組織和肺。將這些組織各自分為兩半;一半固定在10%中性緩沖的福爾馬林(NBF)中,用于在測試機構的組織病理學分析;另一半儲存在-80℃下,用于可能的附加分析。

將來自每只小鼠的福爾馬林固定的皮膚和肺組織處理用于組織病理學。將組織脫水,包埋在石蠟中,并以3-至5-μm厚度切片。將切片用蘇木精/伊紅和Masson三色染色,并覆蓋蓋玻片(cover-slipped)。評估載片的真皮纖維化和真皮炎癥。由委員會認證的獸醫病理學家經由光學顯微鏡進行評估。真皮纖維化和炎癥使用如下行業標準的5分評分系統進行評分:0=無顯著改變;1?=微量到最低的嚴重程度;2?=輕微的嚴重程度;3?=中等的嚴重程度;4?=顯著的嚴重程度。

計算和描述統計(平均值,標準偏差(SD),和平均值的標準誤差(SEM))使用EXCEL(Office?2007;?Microsoft,?Redmond,?WA)進行。在合適的地方,推理統計分析使用PRISM?(Version?5.0;?GraphPad?Software,?Inc.,?San?Diego,?CA)進行,所述PRISM使用了單因素方差分析(ANOVA)、隨后Tukey-Kramer后檢驗或非參數檢驗(Kruskal-Wallis、隨后Dunn后檢驗)。組織病理學嚴重程度評分使用非參數檢驗來分析。0.05或更低的P值(P≤0.05)被認為是統計學上顯著的。當未確定P值時,檢查結果,差異被視為非顯著的(NS;?P?>?0.05)。

在研究過程中,所有組中都看到平均體重的降低(11%至22%)。第4組的動物顯示體重的最大降低;第2組的動物顯示體重的最小降低,盡管在處死時治療組之間的差異不是統計學顯著的(P>?0.05)。第1-4組的動物中這些體重的降低被認為是由于每天給予博來霉素導致的。第4組的動物中觀察到的更大的降低大概反映了用博來霉素和DEX這兩者給予的組合。

結果。在所有組中都看到代表博來霉素誘導的真皮纖維化和炎癥的損傷。膠原和纖維化的增加在真皮中是明顯的,并且由分離了附屬結構的致密膠原的顯著沉積組成。多病灶真皮和真皮下炎癥(由巨噬細胞和淋巴細胞以及降低數目的嗜中性粒細胞和嗜曙紅細胞形成)連同充血是明顯的。表皮變化包括棘層肥厚和角化過度,與角化細胞的增殖。定性地,用測試品治療似乎略微減少了兩個測試品治療組中的真皮纖維化的量。

用化合物A治療注射了博來霉素的小鼠沒有顯著影響真皮炎癥評分。然而,當將媒介物治療的小鼠與用DEX(P?<?0.05)或用任一劑量的化合物A治療的小鼠(P?<?0.01;圖1)比較時,觀察到真皮硬化評分的顯著降低。

總之,用化合物A治療改善了真皮纖維化。

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使用 CBP 連環 蛋白 抑制劑 治療 硬皮病
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