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皇家马德里对维戈塞尔塔: 生物毒素吸附劑及其生產方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN200710135740.6

申請日:

20070810

公開號:

CN101361524B

公開日:

20111207

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A23K1/16,A23K1/17,C12P19/14,C12N1/16,C12R1/865 主分類號: A23K1/16,A23K1/17,C12P19/14,C12N1/16,C12R1/865
申請人: 安琪酵母股份有限公司
發明人: 俞學鋒,李知洪,余明華,姚娟,譚斌,朱金林
地址: 443003 湖北省宜昌市中南路24號
優先權: CN200710135740A
專利代理機構: 北京康信知識產權代理有限責任公司 代理人: 李丙林;馬淑英
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200710135740.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供一種吸附飼料毒素的產品,其包括1%-10%重量的黏土和90%-99%重量的酵母甘露寡糖。該發明提供了一種生產方法和化合物產品來吸附飼料中的毒素,該甘露寡糖為酵母細胞壁提取物和鋁硅酸鹽。該酵母細胞壁是從釀酒酵母中提取而得的。本發明制得的生物毒素吸附劑產品可以飼喂任何動物,包括,畜禽,水產,反芻動物等。當和飼料混合或作為添加劑飼喂時,該物質以較強的毒素吸附能力,降低進入動物體內的毒素量,從而提高動物生產力和健康狀況,減少毒素引起的疾病。

權利要求書

1.一種生物毒素吸附劑,其特征在于,包括1%-10%重量的黏土和90%-99%重量的酵母細胞壁酶解提取物,所述酶解提取物是通過用選自堿性蛋白酶、甘露糖酶、淀粉酶的生物酶酶解酵母細胞壁所獲得的提取物,其中含有甘露寡糖。2.根據權利要求1所述的生物毒素吸附劑,包括4%-8%重量的黏土和92%-96%重量的酵母細胞壁酶解提取物。3.根據權利要求2所述的生物毒素吸附劑,包括5%-7%重量的黏土和93%-95%重量的酵母細胞壁酶解提取物。4.根據權利要求1至3任一項所述的生物毒素吸附劑,其中,所述酵母細胞壁酶解提取物的制備原料是釀酒酵母菌株。5.根據權利要求4所述的生物毒素吸附劑,其中,所述酵母細胞壁酶解提取物的制備原料是釀酒酵母菌株Z2.2,該菌株在中國典型培養物保藏中心的保藏號為M205128。6.制備權利要求1至3任一項所述生物毒素吸附劑的方法,包括以下步驟:-提供酵母細胞壁;-由所述酵母細胞壁制備含甘露寡糖的酵母細胞壁酶解提取物,其包括:i)將所述酵母細胞壁置于蒸煮鍋中,在80-98℃下蒸煮1至2小時,ii)使用選自堿性蛋白酶,甘露糖酶,淀粉酶的生物酶進行酶解,iii)離心分離得到酶解物料,iv)濃縮所得的清液,得到濃縮物,v)干燥所述濃縮物,得到所述酵母細胞壁酶解提取物干粉;-將所述酵母細胞壁酶解提取物干粉與所述黏土混合均勻。7.根據權利要求6所述的方法,其中,所述生物酶為堿性蛋白酶。8.根據權利要求7所述的方法,其中,所述酶解是在40℃至60℃下進行15至16小時。9.根據權利要求6所述的方法,其中,所述酵母細胞壁獲自釀酒酵母的菌株,以可發酵的甘蔗糖蜜為培養基經過放大培養,然后將得到的酵母細胞溶解得到。10.根據權利要求6至9任一項所述的方法,其中,所述酵母細胞壁獲自釀酒酵母菌株Z2.2,該菌株在中國典型培養物保藏中心的保藏號為M205128。11.一種由酵母細胞壁制備酵母細胞壁酶解提取物的方法,其包括:i)將所述酵母細胞壁置于蒸煮鍋中,80-98℃下蒸煮1至2小時;ii)使用選自堿性蛋白酶,甘露糖酶,淀粉酶的生物酶進行酶解;iii)離心分離得到酶解物料;iv)濃縮所得的清液,得到濃縮物;v)干燥所述濃縮物,得到酵母細胞壁酶解提取物干粉。12.根據權利要求11所述的方法,其中,所述酶解是在40-60℃下進行15至16小時。13.根據權利要求12所述的方法,其中,所述生物酶為堿性蛋白酶。14.一種動物飼料,其含有根據權利要求1至3、和5任一項所述的生物毒素吸附劑。15.一種日糧或動物飼料的儲存方法,其特征在于,在所述日糧或動物飼料中加入根據權利要求1至3、和5任一項所述的生物毒素吸附劑。

說明書

技術領域

本發明涉及生物毒素吸附劑及其生產方法。?

背景技術

每年,用作動物飼料的糧食原料有很大一部分被霉菌產生的毒素污染。飼料的營養值降低和動物中毒事件都是由于糧食或其他飼料原料在儲存時滋生了霉菌,如黑曲霉,黃曲霉毒素和青霉。霉菌毒素會影響飼料的營養價值,動物的生產性能以及動物健康狀況。?

霉菌毒素的物理作用很多,從減少飼料攝入量,降低飼料轉化率到總體減低動物生長能力。霉菌毒素也會危害人體健康,因為隨著動物攝食許多毒素進入了奶或肉中。?

霉菌毒素引發的急性癥狀相對容易確認。但慢性癥狀如生產力略微降低和/或免疫抑制可能帶來較大的經濟損失。處理這些毒素的傳統方法是在飼料儲存過程中使用霉菌抑制劑來抑制霉菌的生長。但是,特別在家畜產業中,經濟條件迫使人們必須找到合理的處理方法來使用這些被霉菌污染的飼料。?

目前去除飼料中霉菌毒素的方法有很多,常規方法包括:用未污染的飼料對已被污染的飼料進行稀釋;物理分離以除去被嚴重污染的飼料;氨化或加熱使飼料脫毒。使用常規方法去除霉菌毒素存在勞動強度大,不經濟,而且對某些霉菌無效的缺點。?

一種更可行的方法是在飼料中加入能吸附毒素的物質,從而防止毒素被吸收進入動物血管。許多化學物質已經被證明能成功投入商業使用。其中,使用礦性粘土作為黏附劑最常見。?

美國專利No.5149549使用高嶺石,一種特殊的斑脫土,與飼料混合作為毒素吸附劑。?

中國專利CN02111097.2公開了一種吸附飼料中霉菌毒素的納米飼料添加劑的制備方法。它的步驟如下:1)按重量比為納米蒙脫石,氯化鈉按一定的比例,加水攪拌均勻,制成礦漿,然后在礦漿中加入葡甘露聚糖,制成毒素吸附劑產品。?

然而,使用黏土作為毒素吸附劑也有一定的限制。首先,為達到明顯的吸附毒素的效果,使用的黏附劑必須達到相當高的濃度。其次,大多數黏附劑的作用范圍也有限制,僅對黃曲霉毒素有顯著的吸附效果。?

近年來,有人提出以葡甘露糖作為毒素的吸附劑。雖然葡甘露糖對毒素具有一定的生物吸附作用,但是大多數葡甘露糖是從魔芋等植物中提取,其溶解性不佳,與霉菌毒素的接觸面積較小,對廣譜霉菌毒素的吸附效果尚不太理想。?

因此,需要一種能作用于多種毒素、以較低含量與飼料混合且具有良好吸附效果的新型毒素吸附劑。?

發明內容

本發明主要是提供一種方法來結合動物飼料中的霉菌毒素并使之失活。?

進一步的目的是提供一種方法,即將酵母細胞壁提取物和礦性黏土(如沸石,斑脫土,鋁硅酸鹽)結合起來,以吸附動物飼料中的霉菌毒素并使之失活,從而降低飼料中霉菌毒素含量。?

另一目的就是毒素吸附劑產品可在低于其它常用黏附劑使用濃度的濃度與動物飼料混合。?

為了達到以上各目的,本發明提供一種生物毒素吸附劑,包括1%-10%重量、優選4%-8%重量、更優選5%-7%重量的黏土和90%-99%重量、優選92%-96%重量、更優選93%-95%重量的酵母甘露寡糖,其中,所述酵母甘露寡糖制備自釀酒酵母菌株。?

本發明進一步提供用于制備上述生物毒素吸附劑的方法,包括以下步驟:-提供酵母細胞壁;-由所述酵母細胞壁制備甘露寡糖,其包括:i)將所述酵母細胞壁置于蒸煮鍋中,在80-98℃下蒸煮1至2小時,ii)使用選自堿性蛋白酶,甘露糖酶,淀粉酶的生物酶進行酶解,iii)離心分離得到酶解物料,iv)濃縮所得的清液,得到濃縮物,以及v)干燥所述濃縮物,得到甘露寡糖干粉;-將所述甘露寡糖干粉與所述黏土混合均勻。?

在上述方法中,所述酵母細胞壁可以獲自市售的釀酒酵母,優選獲自申請人篩選的釀酒酵母菌株Z2.2(安琪保藏號,其拉丁文類名為Saccharomyces?cerevisiae?Hansen,中國典型培養物保藏中心的保藏號為M205128),以可發酵的甘蔗糖蜜為培養基經過放大培養,然后將得到的酵母細胞溶解得到。?

本發明制得的生物毒素吸附劑產品可以飼喂于任何動物,包括,畜禽,水產,反芻動物等。當和飼料混合或作為添加劑飼喂時,該物質以較強的毒素吸附能力,降低進入動物體內的毒素量,從而?提高動物生產力和健康狀況,減少毒素引起的疾病。本發明制得的生物毒素吸附劑產品也可用于日糧的儲存。?

具體實施方式

定義?

“結合物”是指用酵母細胞壁提取物-甘露寡糖與黏土復合后得到的產品,其是根據本發明目的所提供的毒素吸附劑,所以有時被稱為毒素吸附劑。?

發明人出人意料地發現:酵母細胞壁提取物和礦性黏土混合后,具有非常好的吸收飼料中毒素的功能。因此本發明提供一種酵母甘露寡糖和礦性黏土的結合物,以及制備該結合物的方法。?

用于本發明結合物的黏土可以是任何一種可以商購的能夠加入到飼料中的產品,包括但不局限于沸石,斑脫土,鋁硅酸鹽??梢允褂檬惺鄣牧>對?0-100微米范圍的鋁硅酸鹽。?

本發明使用的酵母細胞壁提取物可以制備自任何酵母細胞,包括啤酒酵母,面包酵母和釀酒酵母。?

在本發明的一個實施方式中,酵母甘露寡糖制備自申請人自主培育的釀酒酵母專用菌種Z2.2(安琪保藏號),其拉丁文類名為Saccharomyces?cerevisiae?Hansen,該菌株于2005年10月25日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)(武漢大學),保藏號為M205128。該酵母甘露寡糖為灰色,無味粉狀產品,溶于水。本文將在后面詳細說明其制備。?

根據本發明的結合物優選包括1%-10%的黏土和90%-99%的酵母甘露寡糖,更優選包括4%-8%的黏土和92%-96%的酵?母甘露寡糖,最優選包括5%-7%的黏土和93%-95%的酵母甘露寡糖。?

為得到本發明的所述結合物,可以先將自制的酵母甘露寡糖與上述黏土以常規方法混合,使得該結合物中各成分保持均勻性。?

由上述方法得到的結合物以干燥、自由流動的粉末為宜,便于直接加入飼料中或作為添加劑混入日糧中。?

下面詳細說明酵母細胞壁提取物——酵母甘露寡糖的制備。?

??????????????????提供酵母細胞壁

本發明中所用的酵母細胞壁提取物,可以制備自市售的普通酵母細胞,也可以使用申請人公司自主培育的酵母菌株Z2.2(安琪保藏號)。以處理過的可發酵甘蔗糖蜜為液態培養基,經過若干次放大培養使活性酵母富集,然后經過離心洗滌,沖洗酵母,形成一個酵母乳。申請人培育的該菌株已于2005年10月25日保藏在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)(武漢大學),保藏號為M205128,分類命名為Saccharomyces?cerevisiae?Hansen。用于放大培養的培養基為:12巴林培養液,該培養通常30℃下進行,pH4.2-5.4。通風情況:開始時不通風,當發酵罐開始自然升溫時,微量通風,或采用間接通風。培養時間:12-36h,培養時間長短取決于接種量大小。級間接種量:1%-5%,其中以2%-4%最為常見,也即級間擴大倍數以25%-50%倍最為常見。培養后的離心和沖洗皆采用常規的方法。?

??????????????????酵母細胞壁提取物的制備

然后將酵母細胞溶解。溶解可以是自溶或水解,期刊文獻中提到的任何一種方法都可以用來溶解酵母細胞。在本發明中,酵母細?胞的自溶在約50℃的溫度下進行。溶解后,將得到的細胞壁離心洗滌數次,以除去胞內物和濃縮細胞壁。?

將得到酵母細胞壁在蒸煮鍋中,溫度80-98℃下蒸煮1-2小時,然后降溫至40-60℃、調節PH值為7-8,再加入適宜比例的生物酶,過程中使用的酶選自堿性蛋白酶、甘露糖酶和淀粉酶或者它們混合物,優選堿性蛋白酶。在一個具體實施例中,使用1-4‰的堿性蛋白酶和1-4‰的甘露糖酶,在40-60℃下酶解15-16小時。然后經過離心分離,濃縮清液,噴霧干燥所得的清液,得到吸濕性的水溶性粉末甘露寡糖。不同工藝調整可使甘露寡糖含量達到40%-50%以上。?

????????????????????結合物的提供

將上述得到的甘露寡糖與適用的黏土按照前面所述的比例混合。該混合可以采用常規的方法進行。例如:機械攪拌混合。?

本發明得到的生物毒素吸附劑產品可以加入到任何配合飼料或寵物飼料中。也可以作為添加劑與飼料或糧食混合。直接混成飼料時,加入量可以為:0.25--4kg該物質/每噸飼料。較優化的量為:0.5-3kg/噸飼料。最優量為:1-2kg/噸飼料。本發明制得的化合物可以飼喂于任何畜禽,水產,反芻動物,應用范圍較廣。?

實施例?

實施例1??制備?

將300g釀酒酵母(大連興和酵母有限公司,中國)在約50℃的溫度下自溶,將得到的細胞壁在離心機中以6000轉/分鐘的速度離心,以除去胞內物和濃縮細胞壁。將得到酵母細胞壁在蒸煮鍋中,溫度?80-98℃下蒸煮1.5小時,然后降溫至40-60℃、調節PH值為7-8,再加入1-4‰重量(基于釀酒酵母質量)的堿性蛋白酶和1-4‰的甘露糖酶在43℃下酶解15-16小時。然后經過離心分離,濃縮清液,噴霧干燥所得的清液,得到吸濕性的水溶性粉末甘露寡糖。噴霧干燥得到甘露寡糖含量達到40%-50%的干燥粉末。將該干燥粉末與鋁硅酸鹽按98∶2的重量比均勻混合,得到生物毒素吸附劑(產品1)。?

實施例2制備?

將300g釀酒酵母(以申請人公司培育的釀酒菌株M205128經放大培養得到)在約50℃的溫度下自溶,將得到的細胞壁在離心機中以6000轉/分鐘的速度離心,以除去胞內物和濃縮細胞壁。將得到酵母細胞壁在蒸煮鍋中,溫度80-98℃下蒸煮2小時,然后降溫至40-60℃、調節PH值為7-8,再加入1-4‰重量(基于釀酒酵母質量)的堿性蛋白酶和1-4‰的甘露糖酶在60℃下酶解15-16小時。然后經過離心分離,濃縮清液,噴霧干燥所得的清液,得到吸濕性的水溶性粉末甘露寡糖。噴霧干燥得到甘露寡糖含量達到48%的干燥粉末。將該干燥粉末與鋁硅酸鹽分別按98∶2、96∶4、92∶8、95∶5、94∶6的重量比均勻混合,相應得到生物毒素吸附劑產品2、產品3、產品4、產品5、和產品6。?

實施例3體外吸附試驗?

將1mg上述產品1至6加入到含有多種霉菌毒素的受污染肉雞飼料(經粉碎)2g中、攪拌1小時。分別采用液相色譜法檢測飼料中黃曲霉毒素,玉米赤霉烯酮毒素,赭曲霉毒素,桔青霉毒素。以等量的鈣鋁酸鹽作對照,測得的結果列于表1中。?

表1生物毒素吸附劑對原料中霉菌毒素吸附效果?

實驗結果顯示:本發明中的結合物與對照品相比對黃曲霉毒素具有較強的吸附能力,其吸附率(尤其是對黃曲霉毒素)與產品中的甘露寡糖含量基本呈正相關。尤其值得注意的是,利用本申請人自行篩選的菌株作為原料而值得的產品,與使用市售的釀酒酵母制得的產品相比,表現出較高的吸附活性。另有應用試驗結果顯示:酵母甘露寡糖和礦性黏土結合物,能有效除去被污染飼料中的毒素,同等吸附率條件下,該吸附劑發生作用所需濃度比其它常用吸附劑都低。?

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生物 毒素 吸附劑 及其 生產 方法
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