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西班牙人vs维戈塞尔塔录像: 一種血紅蛋白穩定保存的方法.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201510218439.6

申請日:

20150428

公開號:

CN104873959A

公開日:

20150902

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A61K38/42,A61P7/08 主分類號: A61K38/42,A61P7/08
申請人: 天津工業大學
發明人: 李鳳娟,張釋元,劉洋,候依萍,黃雪雪,蔣坤
地址: 300160 天津市河東區成林道63號
優先權: CN201510218439A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201510218439.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及的是一種血紅蛋白穩定保存的方法,其特征在于它包括以下步驟:取適量的人血加入3-6倍體積的生理鹽水(0.9%NaCl溶液),在4℃,2800轉的條件下離心,15-30分鐘。得到含白細胞,血漿蛋白和血小板的上清液并將其擠出,保留下層壓積紅細胞,重復上述洗滌過程3-5次以,直至上層清液基本無色,以最大限度除去紅細胞以外的其他物質,得到潔凈壓積紅細胞。取一定量的壓積紅細胞,加入等體積的滅菌高純去離子水進行5-15分鐘的預脹,最后加入2倍體積的水低滲10-20分鐘,10000轉速下離心30-60分鐘,離心后上清液為血紅蛋白溶液。將純化血紅蛋白溶液分裝入10ml樣品瓶中調整血紅蛋白的濃度在4%-15%,pH在7.5-9.5,4℃保存,樣品穩定保存6個月以上。

權利要求書

1.一種血紅蛋白穩定保存的方法,其特征在于它包括以下步驟:取適量的人血加入3-6倍體積的生理鹽水(0.9%NaCl溶液),在4℃,2800轉的條件下離心,15-30分鐘;得到含白細胞,血漿蛋白和血小板的上清液并將其擠出,保留下層壓積紅細胞,重復上述洗滌過程3-5次以,直至上層清液基本無色,以最大限度除去紅細胞以外的其他物質,得到潔凈壓積紅細胞;取一定量的壓積紅細胞,加入等體積的滅菌高純去離子水進行預脹,最后加入2倍體積的水低滲10-20分鐘,10000轉速下離心30-60分鐘,離心后上清液為血紅蛋白溶液;將純化血紅蛋白溶液分裝入10ml樣品瓶中,4℃保存,樣品穩定保存6個月以上。2.根據權利要求1所述的一種血紅蛋白穩定保存的方法,調整血紅蛋白的濃度在4%-15%。3.根據權利要求1所述的一種血紅蛋白穩定保存的方法,調整血紅蛋白的pH在7.5-9.5。

說明書

(一)技術領域:

本發明涉及生物醫藥領域,特別是一種血紅蛋白穩定保存的方法。

(二)背景技術:

以輸入全血為主要手段的傳統輸血方式在醫療救護方面發揮了極為重要的作用,但同時其自身也存在難以克服的各種缺點,主要表現在:輸入前需進行交叉配型、存在多種病毒交叉感染的危險、血源緊張、貯存期較短且需要特殊的設施。為了解決上述矛盾,人們早在19世紀末就開始了有關紅細胞代用品的研究。紅細胞代用品是指具有擴充血容積、維持血管內外滲透壓平衡并且有載氧功能,用以代替人紅細胞的各種氧載體的總稱。血液代用品的研制經歷了從最初無載氧功能的血管擴容劑,如:高滲鹽溶液、羥乙基淀粉溶液、明膠等到目前具有攜氧功能的各種載體溶液。目前正在研制的以血紅蛋白為基礎各類產品與全血比較具有諸多優點,如:來源廣泛、安全潔凈、可長期保存、輸入人體前無需進行交叉配型,特別適用于戰爭、自然災害、以及其他突發事件中大量出血病人的急救。血紅蛋白是人體內的物質,它的溶液作為紅細胞代用品比化學合成物質更具優越性。

目前已有5家以血紅蛋白為基礎的產品完成或接近完成了III期臨床研究,取得了明顯的進展。在制品的研究過程中,保持樣品的穩定性居于非常重要的地位。調整制品的濃度及酸堿環境,保證血紅蛋白溶液穩定保存,可見異物和不溶性微粒檢測合格。

(三)發明內容:

本發明的目的在于提供一種血紅蛋白的穩定保存方法,它針對上述情況,發明一種操作簡便、成本低廉、高效的血紅蛋白的保存方法。

本發明的技術方案:血紅蛋白的穩定保存方法,其特征在于它包括以下步驟:

1、取適量的人血加入3-6倍體積的生理鹽水(0.9%NaCl溶液),在4℃,2800轉的條件下離心,15-30分鐘。得到含白細胞,血漿蛋白和血小板的上清液并將其擠出,保留下層壓積紅細胞,重復上述洗滌過程3-5次以,直至上層清液基本無色,以最大限度除去紅細胞以外的其他物質,得到潔凈壓積紅細胞。

2、取一定量的壓積紅細胞,加入等體積的滅菌高純去離子水進行5-15分鐘的預脹,最后加入2倍體積的水低滲10-20分鐘,10000轉速下離心30-60分鐘,離心后上清液為血紅蛋白溶液。

3、調整血紅蛋白的濃度在4%-15%,pH在7.5-9.5,于4℃貯存。

(四)具體實施方式:

以下將通過具體實施方式的形式再對本發明的上述內容做進一步的詳細說明,但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅局限于以下的具體實施方式,凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

實施例1洗血

取適量的人血加入3-6倍體積的生理鹽水(0.9%NaCl溶液),在4℃,2800轉的條件下離心,15-30分鐘。得到含白細胞,血漿蛋白和血小板的上清液并將其擠出,保留下層壓積紅細胞,重復上述洗滌過程3-5次以,直至上層清液基本無色,以最大限度除去紅細胞以外的其他物質,得到潔凈壓積紅細胞。

實施例2預脹

取一定量的壓積紅細胞,加入等體積的滅菌高純去離子水進行預脹,預脹時間定為2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,28,30分鐘,分別于400倍顯微鏡下觀察不同預脹時間細胞形態,根據細胞的圓潤程度確定最佳預脹時間。

實施例3低滲破膜

向預脹好的紅細胞中加入2倍體積的水低滲破膜,時間定為3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,50分鐘,分別于400倍顯微鏡下觀察不同破膜時間細胞形態,根據細胞的破裂程度、純化血紅蛋白的濃度、破膜液過濾的難易程度確定最佳破膜時間。之后再10000轉速下離心30-60分鐘,離心后上清液為血紅蛋白溶液。

實施例4穩定保存

將純化血紅蛋白溶液分裝入10ml樣品瓶中,調整血紅蛋白的濃度在7%、,pH在7.8,檢測保存10天、20天、30天、60天、90天、120天、150天、180天的可見異物和不溶性微粒。

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一種 血紅蛋白 穩定 保存 方法
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