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维戈塞尔塔维拉利尔: 安普那韋增強糖皮質激素抗炎作用的醫藥新用途.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201610687345.8

申請日:

20160818

公開號:

CN106139154A

公開日:

20161123

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A61K45/06,A61K31/635,A61P29/00,A61P11/00,A61K31/573 主分類號: A61K45/06,A61K31/635,A61P29/00,A61P11/00,A61K31/573
申請人: 濱州醫學院
發明人: 蔣王林,張廣華,紀云霞,葉亮,朱海波
地址: 264003 山東省煙臺市萊山區觀海路346號
優先權: CN201610687345A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201610687345.8

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了安普那韋的藥物新用途,具體涉及安普那韋與糖皮質激素聯合使用增強糖皮質激素的抗炎作用的藥物中的應用。在上述應用中,其口服使用劑量范圍是40mg~1600mg;優選40~800mg。

權利要求書

1.一種安普那韋的醫藥新用途,具體涉及安普那韋與糖皮質激素聯合使用增強糖皮質激素的抗炎作用的藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的應用,其特征在于,安普那韋與糖皮質激素聯合使用治療急性呼吸窘迫綜合癥,增強糖皮質激素的抗炎作用。3.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,糖皮質激素為中效糖皮質激素和長效糖皮質激素。4.根據權利要求2所述的應用,其特征在于,中效糖皮質激素包括甲潑尼龍琥珀酸鈉,潑尼松龍。5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,中效糖皮質激素為甲潑尼龍琥珀酸鈉。6.根據權利要求2-5任一權利要求所述的應用,其特征在于,安普那韋的使用劑量范圍是40mg~1600mg。7.根據權利要求6所述的應用,其特征在于,安普那韋的使用劑量范圍是40mg~800mg。

說明書

技術領域

本發明屬于化學醫藥領域,具體涉及抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋與糖皮質激素聯合使用,增強糖皮質激素抗炎效應及治療急性呼吸窘迫綜合癥治療中糖皮質激素長期使用導致的耐受。

背景技術

糖皮質激素(Glucocorticoid,GC)是由腎上腺皮質分泌的一類甾體激素。糖皮質激素有快速、強大而非特異性的抗炎作用。對各種炎癥均有效。在炎癥初期,GC抑制毛細血管擴張,減輕滲出和水腫,又抑制白血細胞的浸潤和吞噬,而減輕炎癥癥狀。在炎癥后期,抑制毛細血管和纖維母細胞的增生,延緩肉芽組織的生成。而減輕疤痕和粘連等炎癥后遺癥。糖皮質激素為治療急性呼吸窘迫綜合癥和哮喘的常用藥物,但在長期使用或者大劑量應用時,出現糖皮質激素的療效下降的現象,稱為糖皮質激素耐受。糖皮質激素結合糖皮質激素受體(GR),活化的GR迅速轉位到細胞核內,轉錄激活或轉錄抑制減少基因的表達。轉錄激活的GR結合糖皮質激素反應元件(GRE),誘導抗炎靶基因的轉錄,如lipocortin-1的合成。糖皮質激素治療建議不超過14天[Steinberg KB,Hudson LD,Goodman RB,et al.Effi cacy and safety of corticosteroids for persistent acute respiratory distress syndrome.N Engl J Med 2006;354:1671-1684],原因是大劑量糖皮質激素長期使用導致糖皮質激素耐受,即糖皮質激素不能有效地與其受體糖皮質激素受體α(GRα)有效結合,即細胞漿中GRα下降。GRα的轉錄活性則被抑制,不能抑制炎癥相關基因的轉錄,導致抗炎效果減弱、耐受。

急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是指非心源性的各種肺內外致病因素導致嚴重的急性缺氧性呼吸衰竭,臨床上以呼吸窘迫、頑固性低氧血癥和非心源性肺水腫為特征。ARDS肺部的最基本病理改變是肺血管內皮和肺上皮急性彌漫性損傷及透明膜。ARDS發病危險因素既可來自肺的直接損傷,亦可來自間接損傷[The ARDS Definition Task Force,Ranieri VM,Rubenfeld GD,Thompson BT,Ferguson ND,Caldwell E,Fan E,Camporota L,Slutsky AS:Acute Respiratory Distress Syndrome:The Berlin Definition2012,307:2526–2533]。在美國,成人ARDS患者發病率為每年10萬人中有7人發病,雖然ARDS的管理有了重大進展,根據近3年的臨床研究顯示28天內有20-40%死亡,另外,還有15-20%的患者在12個月內死亡[Rosuvastatin for sepsis-associated acute respiratory distress syndrome.N Engl J Med 2014;370:2191–200.;Sweeney RM,McAuley DF.Acute respiratory distress syndrome.Lancet.2016Apr 28.pii:S0140-6736(16)00578-X.]。尋找與糖皮質激素聯合使用的藥物以改善糖皮質激素的耐受很有必要。

臨床上抗HIV蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)安普那韋(Amprenavir)是一種新的抗反轉病毒蛋白酶抑制劑,具有抗HIV-1和HIV-2蛋白酶作用,可阻斷HIV成熟所必需的蛋白質前體分裂,干擾病毒的生長過程,繼而釋放出未成熟的不具有傳染性的病毒分子。長期應用本品,通??山檔脫械腍IV病毒負荷,增加CD4細胞的計數,降低感染艾滋病的機會,提高生活質量,延長生命,但抗HIV蛋白酶抑制劑與糖皮質激素聯合使用,預防或治療糖皮質激素長期使用導致的耐受的藥理作用未見報道。本發明人通過大量的研究發現抗HIV蛋白酶抑制劑與糖皮質激素聯合使用,可以明顯抑制靶細胞細胞漿中GRα的下降,減少糖皮質激素長期使用導致的耐受,增強ARDS治療中糖皮質激素的抗炎效應?;詿?,本發明人發明了抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋與糖皮質激素聯合使用,減少糖皮質激素長期使用導致的耐受,從而增強糖皮質激素的療效,延長糖皮質激素的使用。

發明內容

本發明提供了抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋與糖皮質激素聯合使用,治療急性呼吸窘迫綜合癥治療中糖皮質激素長期使用導致的耐受,增強糖皮質激素的抗炎作用的藥物中的應用。

本發明提供的抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋與糖皮質激素聯合使用,抑制在急性呼吸窘迫綜合癥治療中靶細胞細胞漿中GRα的下降治療糖皮質激素長期使用導致的耐受。

本發明提供的糖皮質激素包括中效糖皮質激素和長效糖皮質激素。

本發明提供的長效糖皮質激素包括可以為地塞米松、丙酸氟替卡松。

本發明提供的中效糖皮質激素可以為甲潑尼龍琥珀酸鈉(甲強龍),潑尼松龍

本發明提供的中效糖皮質激素優選甲潑尼龍琥珀酸鈉(甲強龍)。

本發明提供的安普那韋使用劑量范圍是100mg~2400mg,優選100mg~1200mg

具體實施例

實驗例1抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋對LPS刺激肺微血管內皮細胞的GRα和磷酸化NF-κB的影響

1.1藥品與試劑

DMEM培養基為Gibco公司產品,新生牛血清為杭州四季青公司產品

LPS(Sigma公司產品,購買于大連美侖生物技術有限公司)

安普那韋(純度99.2%,購買于上海翰香生物科技有限公司)

GRα抗體(Glucocorticoid Receptor(D8H2)Rabbit mAb,cellsignal公司,貨號:3660s)

人肺微血管內皮細胞(中科院細胞庫)

甲強龍(注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉,輝瑞制藥生產,500mg/瓶)

1.2實驗方法與結果

當肺微血管內皮細胞生長融合至70%-80%,換新鮮培養液,將傳代的人肺微血管內皮細胞分組包括:(1)陰性對照組;(2)甲強龍處理組(30μM作用時間96h);(3)甲強龍處理組(30μM作用時間96h)+安普那韋(1μM作用時間96h);(4)甲強龍處理組(30μM作用時間96h)+安普那韋(3μM作用時間96h);(5)甲強龍處理組(30μM作用時間96h)+安普那韋(10μM作用時間96h);培養的細胞裂解,以總蛋白提取試劑及細胞核提取試劑提取總蛋白和細胞核組分,BCA蛋白測定試劑盒(Pierce公司)測定蛋白濃度后,取50μg樣品蛋白進行10%的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,分別加入GRα抗體,β-actin作內參,Westernblot檢測細胞胞漿中GRα蛋白表達。以LPS未刺激組作為對照,計為相應蛋白的100%,分析抗HIV蛋白酶抑制劑+甲強龍與單純甲強龍處理組對GRα的表達差異,組間進行T檢驗。

表1安普那韋對LPS刺激肺微血管內皮細胞的GRα的影響(n=5)

組別 GRα(%) 正常對照組 100±14 LPS刺激組 25±6 LPS+甲強龍組 14±4* LPS+甲強龍+安普那韋1μM組 28±8**# LPS+甲強龍+安普那韋3μM組 39±6**## LPS+甲強龍+安普那韋10μM組 53±8**##

*,p<0.05,**,p<0.01,與LPS刺激比較;#,p<0.05,##,p<0.01,與LPS+甲強龍組比較

實驗例2抗HIV蛋白酶抑制劑安普那韋對LPS導致的急性呼吸窘迫綜合征(ALI/ARDS)模型大鼠的影響

2.1藥品與試劑

LPS(Sigma公司產品,購買于大連美侖生物技術有限公司)

安普那韋(純度99.5%,購買于上海翰香生物科技有限公司)

甲強龍(注射用甲潑尼龍琥珀酸鈉,輝瑞制藥生產,500mg/瓶)

GRα抗體(GlucocorticoidReceptor(D8H2)RabbitmAb,cellsignal公司,貨號:3660s)

實驗動物:SPF級Sprague Dawley大鼠,雄性,體重150g-200g,山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供,動物合格證號為:SYXK(魯)20030020。

2.2實驗方法與結果

2.2.1內毒素二次打擊ARDS大鼠模型制備、分組及給藥

雄性大鼠70只,體重180-220g,取60只腹腔注射LPS 2mg/kg,16小時后10%水合氯醛麻醉,分離氣管,氣管內滴入LPS生理鹽水溶液,體積0.2mL/只,劑量:5mg/kg。隨機分為6組,即模型組、甲強龍肌肉注射20mg/kg組,甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥4mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥20mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥80mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥160mg/kg組。另外取10只大鼠作為對照組。氣管內滴入LPS24小時開始給藥,連續給藥5天,每日給藥1次,末次給藥結束24小時,處死動物,取肺,稱重,測定肺系數,取一葉肺,HE染色制備病理片,進行病理評分,病理評分根據參考文獻[Matute-Bello,G.et al.Acute Lung Injury in Animals Study Group.An official American Thoracic Society workshop report:features and measurements of experimental acute lung injury in animals.Am J Respir Cell Mol Biol 44,725-738(2011).]進行評分。比較安普那韋加甲強龍組與模型組及單純甲強龍組的差異。組間進行T檢驗。

2.2.2實驗結果

表2結果顯示甲強龍肌肉注射20mg/kg組可明顯減少ARDS模型大鼠的肺系數,降低肺病理評分(與模型組比較,p<0.05或p<0.01);甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥4mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥20mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥80mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥160mg/kg組明顯減少ARDS模型大鼠的肺系數,降低肺病理評分(與模型組比較,p<0.01);與甲強龍肌肉注射20mg/kg組比較,甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥5mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥20mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥80mg/kg組、甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥160mg/kg組明顯減少ARDS模型大鼠的肺系數,降低肺病理評分(與甲強龍組比較,p<0.05或p<0.01),說明安普那韋與甲強龍聯合使用,明顯增強甲強龍的抗ARDS作用。甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥160mg/kg組減少ARDS模型大鼠的肺系數,降低肺病理評分與甲強龍肌肉注射20mg/kg+安普那韋灌胃給藥80mg/kg組比較,無顯著性差異。

表2安普那韋對ARDS模型大鼠肺系數和肺病理的影響(n=10)

組別 肺系數 肺病理評分 對照組 0.48±0.04 --- 模型組 1.14±0.10 0.85±0.08 甲強龍組 1.02±0.08* 0.71±0.08** 甲強龍+安普那韋4mg/kg組 0.91±0.10**# 0.60±0.10**# 甲強龍+安普那韋20mg/kg組 0.79±0.10**## 0.48±0.10**## 甲強龍+安普那韋80mg/kg組 0.69±0.08**## 0.33±0.06**## 甲強龍+安普那韋160mg/kg組 0.68±0.09**## 0.32±0.07**##

*,p<0.05,**,p<0.01,與模型組比較;#,p<0.05,##,p<0.01,與甲強龍組比較。

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增強 糖皮質激素 作用 醫藥 用途
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