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韦斯卡VS维戈塞尔塔: 一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法.pdf

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一種 利用 鐵皮 石斛 固體 發酵 靈芝 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310183976.2

申請日:

2013.05.17

公開號:

CN103238464B

公開日:

2014.10.08

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):A01G 1/04申請日:20130517|||公開
IPC分類號: A01G1/04; C05F5/00; C05G1/00 主分類號: A01G1/04
申請人: 紹興儒林生物科技有限公司; 江南大學
發明人: 陳乃偉; 丁重陽
地址: 312000 浙江省紹興市平江路328號13幢
優先權:
專利代理機構: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221 代理人: 應圣義
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310183976.2

授權公告號:

103238464B||||||

法律狀態公告日:

2014.10.08|||2013.09.11|||2013.08.14

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及屬于微生物發酵領域,公開了一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法。本發明方法以石斛渣為基質,進行靈芝的固體發酵,主要通過以下步驟實現:(1)斜面培養,(2)種子培養,(3)固體發酵培養,將培養好的種子按10%的接種量接種到固體發酵培養基中,發酵培養基中的干料組成為:石斛渣98%,麩皮1.9%,KH2PO40.1%,干料和水重量比1:1-2.3,pH自然,22-32℃條件下培養7-20天。本發明石斛渣通過靈芝菌的發酵和生物轉化,其中的纖維質被靈芝分解利用,產生了靈芝多糖和靈芝酸等高效的生物活性物;將石斛產品深度加工的廢棄物轉化為高附加值產品,實現了對石斛原料的全方位綜合利用。

權利要求書

權利要求書
1.   一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,其特征在于,包括以下步驟:
步驟a:斜面培養,將靈芝菌種接種到斜面培養基上,在30℃條件下培養,至菌絲體長滿斜面;
步驟b:種子培養,將斜面菌種接種到種子培養基中,在30℃,搖床轉速150轉/分鐘的條件下培養7天;
步驟c:固體發酵培養,將培養好的種子以10%的接種量接種到固體發酵培養基中,在22?32℃條件下培養7?20天,得產品。

2.   根據權利要求1所述的利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,其特征在于:所述的斜面培養基為PDA培養基,含有:土豆200 g/L,葡萄糖20 g/L,瓊脂20 g/L,pH自然,121℃滅菌20分鐘。

3.   根據權利要求1所述的利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,其特征在于:所述的種子培養基含有:葡萄糖20g/L,玉米粉20g/L,麩皮10 g/L,KH2PO4 1 g/L,MgSO4·7H2O 2 g/L,pH自然,121℃滅菌20分鐘。

4.   根據權利要求1所述的利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,其特征在于:所述的固體發酵培養基的組成:石斛渣98%,麩皮1.9%,KH2PO4 0.1%,料水重量比為1:(1?2.3),pH自然,121℃滅菌30分鐘。

說明書

說明書一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法
技術領域
本發明涉及屬于微生物發酵領域,尤其涉及了一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法。
背景技術
石斛又名石斛蘭,原產地主要分布于亞洲熱帶和亞熱帶,澳大利亞和太平洋島嶼,全世界約有1000多種。在中國的76種石斛屬植物中,有近40種作藥用。其中,鐵皮石斛是石斛中的極品,被列為“中華九大仙草之首”。鐵皮石斛的嫩莖經加工炮制,扭成螺旋狀或彈簧狀,曬干,稱為鐵皮楓斗。
近年來,隨著綠色消費的興起,特別是人們對人工合成化學品安全性問題的關注,促使天然產物在國際學術界日益得到重視。鐵皮石斛作為一種具有廣泛經濟用途和優良保健作用的天然藥食同源食品越來越受到關注,以鐵皮石斛為原料生產的保健品暢銷歐美及東南亞沿海發達地區。但是,隨著鐵皮石斛的過度開發利用,造成資源嚴重破壞,如何實現石斛資源的綜合利用和可持續利用迫在眉睫。
如何利用現代生物技術實現對鐵皮石斛活性物質的深度和廣度開發,實現對石斛原料的全方位綜合利用,已經成為提升鐵皮石斛產業核心競爭,促進鐵皮石斛產業健康可持續發展的共性關鍵問題。
鐵皮石斛產品的深度加工過程中必然會產生一些以纖維質為主的殘渣,如何實現對這些加工下腳料的高效利用,是實現鐵皮石斛深度綜合利用的重要組成,但目前尚無這方面的研究報道。
發明內容
本發明提供了一種利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,石斛渣通過靈芝菌的發酵和生物轉化,使得其中的纖維質被靈芝分解利用,產生靈芝多糖和靈芝酸等高效的生物活性物,可將石斛產品深度加工的廢棄物轉化為高附加值產品。
為了解決上述技術問題,本發明通過下述技術方案得以解決:
本發明所述的靈芝菌種為本領域常用的靈芝菌,如可以是購自中國普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)的CGMCC No. 5.535。
利用鐵皮石斛渣固體發酵靈芝的方法,包括以下步驟:
步驟a:斜面培養,將靈芝菌種接種到斜面培養基上,在30℃條件下培養,至菌絲體長滿斜面;
步驟b:種子培養,將斜面菌種接種到種子培養基中,在30℃,搖床轉速150轉/分鐘的條件下培養7天;
步驟c:固體發酵培養,將培養好的種子以10%(體積/質量)的接種量接種到固體發酵培養基中,在22?32℃條件下培養7?20天,得產品。
作為優選,所述的斜面培養基為PDA培養基,含有:土豆200 g/L,葡萄糖20 g/L,瓊脂20 g/L,pH自然,121℃滅菌20分鐘。
作為優選,所述的種子培養基含有:葡萄糖20g/L,玉米粉20g/L,麩皮10 g/L,KH2PO4 1 g/L,MgSO4·7H2O 2 g/L,pH自然,121℃滅菌20分鐘。
作為優選,所述的發酵培養基的組成:石斛渣98%,麩皮1.9%,KH2PO4 0.1%,料水重量比為1:(1?2.3),pH自然,121℃滅菌30分鐘。
本發明中靈芝多糖的測定采用苯酚?硫酸測定,靈芝酸的測定采用分光光度法。上述方法在眾多的著作和國內外學術期刊論文中均有詳細的表述。
本發明由于采用了以上技術方案,具有顯著的技術效果:
本發明原料石斛渣通過靈芝菌的發酵和生物轉化,其中的纖維質被靈芝分解利用,產生了靈芝多糖和靈芝酸等高效的生物活性物;將石斛產品深度加工的廢棄物轉化為高附加值產品,有效實現了對石斛原料的全方位綜合利用。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細描述:
在下面所述的所有具體實施例中,斜面培養基為土豆培養基(PDA培養基),組成(單位克/升):土豆200,葡萄糖20,瓊脂20,pH自然,121℃滅菌20分鐘。靈芝多糖和靈芝酸的含量均為每一百克干物質所含靈芝多糖和靈芝酸的量,即質量百分比,其他如無特殊說明,均為本領域常用方法。
實施例1
(1) 斜面培養:將靈芝菌種接種到斜面培養基(即PDA培養基)上,在30℃環境下培養大約7天時間,至菌絲體長滿斜面;
(2) 液體種子培養,將斜面菌種接種到裝有80 mL種子培養基的250毫升的三角瓶中,種子培養基組成(單位克/升):葡萄糖20,玉米粉 20,麩皮 10,KH2PO4 1,MgSO4·7H2O2,pH自然,121℃滅菌20分鐘,在搖床轉速150轉/分鐘,30℃條件下培養7天;
(3) 固體發酵培養,取培養好的種子10 mL接種到裝有100 g(干料重)發酵培養基的500 mL的三角瓶中。發酵培養基組成:干料100g(石斛渣98g,麩皮1.9g,KH2PO4 0.1g),料水重量比1 : 1,121℃滅菌30分鐘;22℃條件下培養10天,發酵結束測得多糖含量為1.31%,靈芝酸含量為0.297%。
靈芝多糖含量的具體測定按照以下方法進行:
發酵結束后固體培養物(含石斛渣和靈芝菌絲體)自然風干,粉碎,過40目篩。精密稱取靈芝菌絲1.0 g,加入30倍量的蒸餾水,95 ℃浸提3 h,抽濾得濾液,加水定容至100 mL。精密吸取10 mL,加入40 mL無水乙醇混勻,4 ℃醇沉過夜,8000 r/min離心5 min,棄去上清液,沉淀用80%的乙醇潤洗3~4次,沉淀于60 ℃烘干,制得多糖樣品。用50 mL蒸餾水溶解,吸取樣品2 mL,然后加入體積分數為6%的苯酚溶液1 mL,再加入濃硫酸5 mL,迅速振蕩均勻。室溫下靜置20 min,于490 nm處測定吸光度,計算多糖含量。
靈芝酸的具體測定按照以下方法進行:
齊墩果酸標準液配制:精確稱取干至恒重的齊墩果酸10 mg,置于50 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度。
標準曲線繪制:準確吸取標準液0.00 、0.10 、0.20 、0.30 、0.40 、0.50 、0.60 、0.70 mL于8只具塞磨口試管中,水浴加熱(50~60度)揮去溶劑。在每只試管中分別加0.30mL 5% 香草醛?冰醋酸溶液,1.0mL 高氯酸,密封。于70℃水浴恒溫加熱25min,取出后立即冰水冷卻,加冰醋酸10.00mL,搖勻,于550nm 處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標,齊墩果酸質量(ug)為橫坐標作圖。
發酵結束后固體培養物(含石斛渣和靈芝菌絲體)自然風干,粉碎,過40目篩。取1g烘干的菌絲用10倍氯仿索氏提取8h,重復3次,合并浸提液,減壓濃縮轉移至50 mL容量瓶內,定容。準確吸取樣品液2mL,水浴加熱(50~60度)揮去溶劑。然后加0.30ml 5%香草醛?冰醋酸溶液,1.0mL高氯酸,密封。于70℃水浴恒溫加熱25min,取出后立即冰水冷卻,加冰醋酸10.00mL,搖勻,于550nm 處分別測定吸光度。根據標準曲線計算靈芝酸含量。
實施例2
發酵培養基料水重量比1 : 1.2,121℃滅菌30分鐘;25℃條件下培養10天,其他條件同實例1,發酵結束測得多糖含量為1.85%,靈芝酸含量為0.472%。
實施例3
發酵培養基料水重量比1 : 1.2,121℃滅菌30分鐘;28℃條件下培養15天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為2.75%,靈芝酸含量為0.518%。
實施例4
發酵培養基料水重量比1 : 1.4,121℃滅菌30分鐘;22℃條件下培養20天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為2.97%,靈芝酸含量為0.317%。
實施例5
發酵培養基料水重量比1 : 1.4,121℃滅菌30分鐘;32℃條件下培養7天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為2.45%,靈芝酸含量為0.334%。
實施例6
發酵培養基料水重量比1 : 1.8,121℃滅菌30分鐘;30℃條件下培養10天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為3.06%,靈芝酸含量為0.481%。
實施例7
發酵培養基料水重量比1 : 2.3,121℃滅菌30分鐘;25℃條件下培養20天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為2.71%,靈芝酸含量為0.402%。
實施例8
發酵培養基料水重量比1 : 1.4,121℃滅菌30分鐘;30℃條件下培養15天,其他條件同實例2,發酵結束測得菌絲體多糖含量為3.42%,靈芝酸含量為0.481%。
實施例9
發酵培養基料水重量比1 : 1.8,121℃滅菌30分鐘;28℃條件下培養15天,其他條件同實例1,發酵結束測得菌絲體多糖含量為2.11%,靈芝酸含量為0.514%。
總之,以上所述僅為本發明的較佳實施例,凡依本發明申請專利范圍所作的均等變化與修飾,皆應屬本發明專利的涵蓋范圍。

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