• / 115
  • 下載費用:30 金幣  

艾2019拉维斯VS维戈塞尔塔結果: 擴增造血干細胞的化合物.pdf

關 鍵 詞:
擴增 造血 干細胞 化合物
  專利查詢網所有資源均是用戶自行上傳分享,僅供網友學習交流,未經上傳用戶書面授權,請勿作他用。
摘要
申請專利號:

CN200980143651.3

申請日:

2009.10.29

公開號:

CN102203096B

公開日:

2014.09.17

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 專利權的轉移號牌文件類型代碼:1602號牌文件序號:101727024427IPC(主分類):C07D 473/34專利號:ZL2009801436513登記生效日:20160105變更事項:專利權人變更前權利人:諾華國際制藥有限公司變更后權利人:諾華股份有限公司變更事項:地址變更前權利人:英屬百慕大群島哈密爾頓變更后權利人:瑞士巴塞爾變更事項:專利權人變更前權利人:斯克里普斯研究所變更后權利人:斯克里普斯研究所|||專利權的轉移號牌文件類型代碼:1602號牌文件序號:101727024426IPC(主分類):C07D 473/34專利號:ZL2009801436513登記生效日:20160105變更事項:專利權人變更前權利人:IRM責任有限公司變更后權利人:諾華國際制藥有限公司變更事項:地址變更前權利人:英屬百慕大群島哈密爾頓變更后權利人:英屬百慕大群島哈密爾頓變更事項:專利權人變更前權利人:斯克里普斯研究所變更后權利人:斯克里普斯研究所|||授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C07D 473/34申請日:20091029|||公開
IPC分類號: C07D473/34; C07D487/04; C07D471/04; C07D519/00; C12N5/071(2010.01)I; C12N5/074(2010.01)I; C12N5/0789(2010.01)I; A61K35/14; A61K35/28; A61P35/02; A61P7/06; A61P37/00; A61P3/00; A61P25/00 主分類號: C07D473/34
申請人: IRM責任有限公司; 斯克里普斯研究所
發明人: A·博伊塔諾; M·庫克; S·潘; P·G·舒爾茨; J·泰盧; Y·萬; X·王
地址: 英屬百慕大群島哈密爾頓
優先權: 2008.10.30 US 61/109,821; 2009.09.15 US 61/242,765
專利代理機構: 北京市中咨律師事務所 11247 代理人: 安佩東;黃革生
PDF完整版下載: PDF下載
法律狀態
申請(專利)號:

CN200980143651.3

授權公告號:

||||||102203096B||||||

法律狀態公告日:

2016.01.27|||2016.01.27|||2014.09.17|||2011.11.23|||2011.09.28

法律狀態類型:

專利申請權、專利權的轉移|||專利申請權、專利權的轉移|||授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明涉及用來擴增用于移植的CD34+細胞數目的化合物和組合物。本發明進一步涉及包含擴增了的造血干細胞(HSC)的細胞群以及其在用于對具有遺傳免疫缺陷和自身免疫疾病以及各種造血系統病癥的患者進行治療以重建造血細胞系和免疫系統防御的自體或同種異體移植中的用途。

權利要求書

1.式I的化合物或其鹽:其中:G1選自N和CR3;G2、G3和G4獨立地選自CH和N;條件是G3和G4中至少1個是N;條件是G1和G2不都是N;L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-和-NR5aCH(CH3)CH2-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和C1-4烷基;R1選自氫、苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基和噻唑基;其中所述R1的苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基或噻唑基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、鹵代-C1-4烷氧基、羥基、氨基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a和-C(O)NR8aR8b的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫;R2選自-S(O)2NR6aR6b、-NR9aC(O)R9b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基和1H-吲唑基;其中R6a、R6b和R6c獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所述R2的苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基或1H-吲唑基任選地被1至3個獨立地選自羥基、鹵素、甲基、甲氧基、氨基、-O(CH2)nNR7aR7b、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b和-NR7aS(O)2R7b的基團取代;其中R7a和R7b獨立地選自氫和C1-4烷基;R3選自氫、C1-4烷基和聯苯基;并且R4選自C1-10烷基、丙-1-烯-2-基、環己基、環丙基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基和1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基;其中所述烷基、環丙基、環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可任選地被1至3個獨立地選自羥基、C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的基團取代。2.選自式Ia、Ib、Ic、Id和Ie的權利要求1的化合物:其中:L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-和-NR5aCH(CH3)CH2-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和C1-4烷基;R1選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基和噻唑-5-基;其中所述R1的苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、-S(O)0-2R8a和-C(O)OR8a的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫;R2選自-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基和1H-吲唑-3-基;其中R6a、R6b和R6c獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所述R2的苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-吲唑-3-基任選地被1至3個獨立地選自羥基、鹵素、甲氧基、氨基、-OS(O)2NR7aR7b和-NR7aS(O)2R7b的基團取代;其中R7a和R7b獨立地選自氫和C1-4烷基;R3選自氫、C1-4烷基和聯苯基;并且R4選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、仲-丁基、(S)-仲-丁基、(R)-仲-丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基和芐基;其中所述環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或芐基可任選地被1至3個獨立地選自C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的基團取代。3.權利要求2的化合物,其中L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-和-NR5aCH2CH(OH)-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和甲基;R1選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基和噻唑-5-基;其中所述R1的苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、-S(O)0-2R8a和-C(O)OR8a的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫。4.權利要求3的化合物,其中L選自-NR5a(CH2)1-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-和-NR5aCH2CH(OH)-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和甲基。5.權利要求4的化合物,其中R2選自脲、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基和1H-咪唑-4-基;其中所述R2的苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-苯并[d]咪唑-5-基任選地被羥基、甲氧基、甲基、鹵素、氨基和氨基-磺?;〈?。6.權利要求5的化合物,其中R3選自氫、甲基和聯苯基;并且R4選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、仲-丁基、(S)-仲-丁基、(R)-仲-丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基和芐基;其中所述環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或芐基可任選地被1至3個獨立地選自甲基和三氟甲基的基團取代。7.權利要求6的化合物,選自:4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-吡喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(4-氨基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-苯基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺;N-芐基-8-(聯苯基-4-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-胺;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酸酯;N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(9-異丙基-2-(吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺?;?吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;N-[2-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)脲;5-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮;N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基)甲磺酰胺;4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)苯酚;4-(2-(9-(氧雜環丁烷-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基煙酰胺;4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基氨基磺酸酯;4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(9-仲-丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(6-(苯并[b]噻吩-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;(R)-4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-3-甲基苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)吡啶甲腈;3-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異煙腈;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;3-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)吡啶甲腈;4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(異喹啉-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)-1-羥基乙基)苯酚;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)吡啶-2-醇;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(6-(2-(二乙基氨基)乙氧基)-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(2-乙基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(2-丙基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;3-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-6-醇;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-環己基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;和1-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)吡咯烷-2-酮;或它們的鹽。8.一種增加干細胞和祖細胞數目的方法;所述方法包括使干細胞與能拮抗芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質接觸。9.權利要求8的方法,其中所述的能拮抗芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質選自:(i)有機化合物,(ii)抑制芳香烴受體表達的小干擾RNA分子,和(iii)抑制芳香烴受體表達的反義寡核苷酸。10.權利要求8的方法,其中所述能拮抗芳香烴受體的活性和/或表達的物質是權利要求1的化合物。11.權利要求8的方法,其中該方法在體內、體外或離體進行。12.權利要求11的方法,其中所述干細胞是人的。13.權利要求12的方法,其中所述干細胞得自骨髓。14.權利要求12的方法,其中所述干細胞得自臍帶血。15.權利要求13或14的方法,其中所述干細胞是造血干細胞。16.一種擴增造血干細胞的方法,其包括(a)提供一種包含造血干細胞的起始細胞群和(b)在存在能拮抗芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質的情況下,在用于擴增造血干細胞的適宜條件下,離體培養所述起始細胞群。17.權利要求16的方法,其中所述能下調芳香烴受體活性的物質選自:(i)有機化合物,(ii)抑制芳香烴受體表達的小干擾RNA分子,和(iii)抑制芳香烴受體表達的反義寡核苷酸。18.權利要求17的方法,其中所述有機化合物是4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚。19.權利要求16的方法,其中芳香烴受體途徑的下游效應器選自Cyp1B1、Cyp1A1、β連環蛋白、AHRR、STAT5和STAT1。20.權利要求16的方法,其中所述能下調芳香烴受體活性的物質是權利要求1-7中任意一項的化合物。21.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群富含CD34+細胞。22.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群得自臍帶血細胞。23.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群得自一個或兩個臍帶血單元,優選得自一個臍帶血單元。24.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群得自動員的外周血細胞。25.權利要求24的方法,其中所述動員的外周血細胞得自單個哺乳動物個體。26.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群基本由從一個或兩個臍帶血單元,優選一個臍帶血單元純化的CD34+細胞組成。27.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群基本由用含有CD34抗原結合抗體片段的親核色譜柱或磁珠從一個或兩個臍帶血單元純化的CD34+細胞組成。28.權利要求16或18的方法,其中所述用于造血干細胞擴增的條件包括在存在足夠量的IL6、Flt3-L、TPO和SCF以及權利要求1化合物的情況下培養所述起始細胞群。29.權利要求16或18的方法,其中將所述權利要求1的化合物以1pM至10μM、例如10pM至100μM的濃度施用于細胞培養基中。30.權利要求16或18的方法,其中所述起始細胞群基本由從一個或兩個臍帶血單元,優選一個臍帶血單元純化的CD34+細胞組成,并且將所述起始細胞群在存在權利要求1化合物的情況下培養約3天至約90天,優選7至35天。31.權利要求16或18的方法,其中將所述起始細胞群在存在權利要求1化合物的情況下培養足以使CD34+細胞進行10至50000倍擴增的時間。32.一種用于擴增造血干細胞的試劑盒,其包含權利要求1的化合物和用于權利要求16的方法的說明,并任選地包含一種或多種下面的成分:細胞因子、生長因子和細胞生長培養基。33.權利要求32的試劑盒,其中所述一種或多種細胞因子或生長因子選自IL6、Flt3-L、SCF和TPO。34.一種可用權利要求16或18的方法獲得的或者用權利要求16或18的方法獲得的具有擴增的造血干細胞的細胞群。35.一種組合物,其包含重新混懸于適于施用給哺乳動物主體的可藥用介質中的權利要求34的細胞群。36.一種組合物,其包含具有得自一個或兩個臍帶血單元,優選一個臍帶血單元的擴增了的造血干細胞的細胞群,其中所述組合物包含至少105個細胞、107個細胞、108個細胞或109個細胞的細胞總數,并且其中總細胞的20-100%是CD34+細胞。37.權利要求36的組合物,其中所述組合物包含:總細胞的0.1%-40%表達CD34和Thy1標記;總細胞的20-80%表達CD34和CD45RA標記;細胞的10-95%是CD38+;細胞的5-70%是CD133+。38.用于哺乳動物個體同種異體造血干細胞移植的權利要求35-37中任意一項的組合物。39.用于治療患有血細胞生成受損的患者的權利要求35-37中任意一項的組合物。40.權利要求39的組合物,其中所述患者患有遺傳免疫缺陷病、自身免疫病或造血系統病癥。41.權利要求40的組合物,其中所述造血系統病癥選自急性髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、骨髓增殖性疾病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、再生障礙性貧血、單純紅細胞再生障礙、陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、范可尼貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細胞性貧血、重癥聯合免疫缺陷、Wiskott-Aldrich綜合征、嗜血細胞性淋巴組織細胞增生癥和先天性代謝缺陷。42.權利要求35-37中任意一項的組合物,其中所述組合物適于靜脈內輸注并且所述組合物包含至少104個細胞/kg給患者的輸液,優選105個細胞/kg和109個細胞/kg。43.一種治療遺傳免疫缺陷病、自身免疫病和/或造血系統病癥的方法,其包括給需要該類治療的患者施用被能下調芳香烴受體和/或AHR途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質擴增了的造血干細胞。44.權利要求43的方法,其中所述能下調芳香烴受體的活性和/或表達的物質是權利要求1的化合物。45.權利要求43的方法,其中所述施用是自體移植并且造血系統病癥選自多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、急性髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自身免疫疾病和淀粉樣變性。46.權利要求45的方法,其中所述自身免疫疾病選自全身性紅斑狼瘡和全身硬化癥。47.權利要求46的方法,其中所述施用是同種異體移植并且造血系統病癥選自急性髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、骨髓增殖性疾病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、再生障礙性貧血、單純紅細胞再生障礙、陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、范可尼貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細胞性貧血、重癥聯合免疫缺陷、Wiskott-Aldrich綜合征、嗜血細胞性淋巴組織細胞增生癥和先天性代謝缺陷。48.權利要求47的方法,其中所述先天性代謝缺陷選自粘多糖貯積癥、戈謝病、異染性腦白質營養不良和腎上腺腦白質營養不良。

說明書

擴增造血干細胞的化合物

相關申請的交叉參考

本申請要求于2008年10月30日申請的臨時專利申請號為61/109,821的美國專利申請和于2009年9月15日申請的臨時專利申請號為61/242,765的美國專利申請的優先權。這些申請的全部公開內容都被全部引入本文作為參考并用于所有目的。

發明背景

發明領域

本發明涉及用來擴增用于移植的CD34+細胞數目的化合物和組合物。本發明進一步涉及包含擴增了的造血干細胞(HSC)的細胞群以及其在用于對具有遺傳免疫缺陷和自身免疫疾病以及各種造血系統病癥的患者進行治療以重建造血細胞系和免疫系統防御的自體或同種異體移植中的用途。

背景

造血干細胞(HSC)能在個體的一生中再生所有的血液產品,在后代分化中平衡其自我更新。因為能修復移植接受者體內的血液和免疫細胞,因此,造血干細胞具有治療潛能。此外,HSC具有產生其它組織如腦、肌肉和肝的細胞的潛能。目前用人自體和同種異體骨髓移植法來治療白血病、淋巴瘤和其它一些威脅生命的疾病。對于這些操作而言,必須分離大量干細胞以確保有足夠的HSC來進行移植物植入??捎糜謚瘟頻腍SC數目是一種臨床限制因素。

本發明涉及用于擴增造血干細胞群的化合物和組合物以及它們的用途。

發明概述

在一個方面,本發明提供了式I的化合物或其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、被?;さ難萇?、單個的異構體以及異構體混合物;或該類化合物的鹽(優選可藥用的鹽)和溶劑化物(例如水合物):

其中:

G1選自N和CR3;

G2、G3和G4獨立地選自CH和N;條件是G3和G4中至少1個是N;條件是G1和G2不都是N;

L選自-NR5a(CH2)0-3-(這里的0-3是指0、1、2或3)、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-和-NR5aCH(CH3)CH2-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和C1-4烷基;

R1選自氫、苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、噠嗪基、1H-吡咯基和噻唑基;其中所述R1的苯基、噻吩基、呋喃基、1H-苯并咪唑基、異喹啉基、1H-咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、嘧啶基、1H-吡唑基、吡啶基、1H-咪唑基、吡咯烷基、吡嗪基、噠嗪基,1H-吡咯基或噻唑基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、鹵代-C1-4烷氧基、羥基、氨基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a和-C(O)NR8aR8b的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫;

R2選自-S(O)2NR6aR6b、-NR9aC(O)R9b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基和1H-吲唑基;其中R6a、R6b和R6c獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所述R2的苯基、1H-吡咯并吡啶-3-基、1H-吲哚基、噻吩基、吡啶基、1H-1,2,4-三唑基、2-氧代咪唑烷基、1H-吡唑基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并咪唑基或1H-吲唑基任選地被1至3個獨立地選自羥基、鹵素、甲基、甲氧基、氨基、-O(CH2)nNR7aR7b、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b和-NR7aS(O)2R7b的基團取代;其中R7a和R7b獨立地選自氫和C1-4烷基;

R3選自氫、C1-4烷基和聯苯基;并且

R4選自C1-10烷基、丙-1-烯-2-基、環己基、環丙基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基和1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基;其中所述烷基、環丙基、環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可任選地被1至3個獨立地選自羥基、C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的基團取代。

附圖簡要說明

圖1公開了4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚的固體形式A的PXRD圖譜。

圖2至12公開了4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚鹽的固體形式的PXRD圖譜,所述鹽分別是硝酸鹽、甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、氫溴酸鹽、乳清酸鹽、福馬酸鹽和萘二磺酸鹽。

圖13公開了4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚的無定形形式的DSC圖譜。

本發明的詳細描述

定義

作為一種基團和作為其它基團例如鹵代烷基和烷氧基的結構元素的“烷基”可以是直鏈或支鏈的。例如,烷基包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基等。C1-4-烷氧基包括甲氧基、乙氧基等。鹵代烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。

“芳基”是指含有六至十個環碳原子的、單環的或稠合二環的芳族環系,例如,芳基可以是苯基或萘基,優選苯基?!把欠薊筆侵稈萇苑薊畝芻?。

“雜芳基”是指其中一個或多個環成員是選自-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的雜原子或部分的芳基,其中R是氫、C1-4烷基或氮?;せ?。例如,雜芳基包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1,3]間二氧雜環戊烯、咪唑基、苯并咪唑基、嘧啶基、呋喃基、唑基、異唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。

“環烷基”是指含有所示環原子數的飽和或部分不飽和的、單環的、稠合二環的或橋連的多環環系。例如,C3-10環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基等?!霸踴吠榛筆侵溉綾舊昵胨ㄒ宓幕吠榛?,條件是所示環碳中的一個或多個被選自-O-、-N=、-NR-、-C(O)-、-S-、-S(O)-或-S(O)2-的部分替代,其中R是氫、C1-4烷基或氮?;せ?。例如,本申請描述本發明化合物時使用的C3-8雜環烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、2-氧代-吡咯烷-1-基、1,4-二氧雜-8-氮雜-螺環[4.5]癸-8-基等。

“鹵素”(或鹵代)優選表示氯或氟,但也可以是溴或碘。

本文所用的“造血干細胞”(HSC)涉及具有自我更新及分化成更成熟的血細胞的能力的未成熟的血細胞,其中所述的更成熟的血細胞包括粒細胞(例如,前髓細胞、嗜中性白細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)、紅細胞(例如,網狀細胞、紅細胞)、凝血細胞(例如,成巨核細胞、產血小板的巨核細胞、血小板)和單核細胞(例如,單核細胞、巨噬細胞)。在本說明書中,HSC被可互換地表述為干細胞。本領域已知該類細胞可能包括或不包括CD34+細胞。CD34+細胞是表達CD34細胞表面標記的未成熟細胞。認為CD34+細胞包括具有上面所定義的干細胞性質的細胞亞群。本領域眾所周知,HSC包括多向性干細胞、多能性干細胞(例如,淋巴干細胞)和/或被歸為特殊的造血細胞系的干細胞。被歸為特殊的造血細胞系的干細胞可以是T細胞系、B細胞系、樹突細胞系、朗格漢斯細胞系和/或淋巴組織-特異性的巨噬細胞系中的細胞。此外,HSC還涉及長期HSC(LT-HSC)和短期HSC(ST-HSC)。ST-HSC比LT-HSC的活力更高且增殖性更強。但是,LT-HSC具有不受限制的自我更新(即,其存活貫穿整個成人期),而ST-HSC具有有限的自我更新(即,其僅在有限時期內存活)。這些HSC中的任何一種都可用于本文所述的任何方法中。任選地,因為它們的高增殖性以及因此可迅速增加HSC及其后代的數目,ST-HSC是有用的。造血干細胞任選地得自血液產品。一種血液產品包括得自軀體或含有造血源細胞的軀體器官的產品。該類來源包括未分級的骨髓、臍帶、外周血、肝、胸腺、淋巴和脾。上述粗制或未分級的血液產品都可用本領域技術人員已知的方式富集具有造血干細胞特性的細胞。

“治療”涉及緩和或減輕疾病和/或其相伴癥狀的方法。

在細胞的上下文中的“擴增”涉及由細胞的最初細胞群開始,增加特征性的一種或一些細胞類型的數目,這些細胞群可能相同或不同。用于擴增的初始細胞可能與擴增產生的細胞不同。

“細胞群”涉及由生物來源例如血液產品或其組織分離的并得自一種以上細胞的真核哺乳動物(優選人)細胞。

在細胞群的上下文中使用的“富集的”涉及以存在的一種或多種標記物例如CD34+為基礎選擇的細胞群。

術語“CD34+細胞”涉及在其表面表達CD34標記的細胞??梢雜美緦魘較赴屏渴鹺陀獗曇塹目?CD34抗體來探測CD34+細胞和對其進行計數。

“CD34+細胞富集的”是指以存在CD34標記為基礎選擇的細胞群。因此,在選擇法后,細胞群中CD34+細胞的百分比高于基于CD34標記進行選擇步驟前初始細胞群中CD34+細胞的百分比。例如,在CD34+細胞富集的細胞群中,CD34+細胞可能占該細胞群的至少50%、60%、70%、80%或至少90%。

“臍帶血單元”涉及由單胎的臍帶收集的血液。

優選實施方案的描述

本發明涉及用于用能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質來擴增HSC群的方法和組合物。

在一個實施方案中,所述的能下調芳香烴受體的活性和/或表達的物質是式I化合物。

在一個實施方案中,式I化合物是選自式Ia、Ib、Ic、Id和Ie的化合物:

其中:

L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH2CH(OH)-和-NR5aCH(CH3)CH2-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所示L部分的右側與R2相連,例如:-NR5a(CH2)0-3-R2、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-R2、-NR5a(CH2)2NR5b-R2、-NR5a(CH2)2S-R2、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-R2、-NR5aCH2CH(OH)-R2和-NR5aCH(CH3)CH2-R2。

R1選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基和噻唑-5-基;

其中所述R1的苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、-S(O)0-2R8a和-C(O)OR8a的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫;

R2選自-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基和1H-吲唑-3-基;其中R6a、R6b和R6c獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所述R2的苯基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-吲唑-3-基任選地被1至3個獨立地選自羥基、鹵素、甲氧基、氨基、-OS(O)2NR7aR7b和-NR7aS(O)2R7b的基團取代;其中R7a和R7b獨立地選自氫和C1-4烷基;

R3選自氫、C1-4烷基和聯苯基;并且

R4選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、仲-丁基、(S)-仲-丁基、(R)-仲-丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基和芐基;

其中所述環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或芐基可任選地被1至3個獨立地選自C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的基團取代。

在另一個實施方案中,L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-和-NR5aCH2CH(OH)-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和甲基;R1選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基和噻唑-5-基;其中所述R1的苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-3-基、1H-苯并[d]咪唑-1-基、異喹啉-4-基、1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-2-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、-S(O)0-2R8a和-C(O)OR8a的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫。

在另一個實施方案中,當L是-NR5a(CH2)0-3時,其優選是-NR5a(CH2)1-3(其中這里的1-3是1、2或3)。

在另一個實施方案中,R2選自脲、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基和1H-咪唑-4-基;其中所述R2的苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、噻吩-3-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基或1H-苯并[d]咪唑-5-基任選地被羥基、甲氧基、甲基、鹵素、氨基和氨基-磺?;〈?。

在另一個實施方案中,R3選自氫、甲基和聯苯基;并且R4選自異丙基、甲基、乙基、丙-1-烯-2-基、異丁基、環己基、仲-丁基、(S)-仲-丁基、(R)-仲-丁基、1-羥基丙-2-基、(S)-1-羥基丙-2-基、(R)-1-羥基丙-2-基、壬-2-基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-2-基、苯基、四氫呋喃-3-基和芐基;其中所述環己基、2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基或芐基可任選地被1至3個獨立地選自甲基和三氟甲基的基團取代。

在另一個實施方案中,是選自下面的化合物:4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-吡喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;

N-(4-氨基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-苯基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺;N-芐基-8-(聯苯基-4-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-胺;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酸酯;N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(9-異丙基-2-(吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺?;?吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;

1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;N-[2-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)脲;5-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮;N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基)甲磺酰胺;4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)苯酚;4-(2-(9-(氧雜環丁烷-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基煙酰胺;4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基氨基磺酸酯;4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(2,4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(9-仲-丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(6-(苯并[b]噻吩-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;(R)-4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-3-甲基苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)吡啶甲腈;3-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異煙腈;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;3-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)吡啶甲腈;4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(9-異丙基-2-(異喹啉-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;

(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(4,5-二甲基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)-1-羥基乙基)苯酚;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)吡啶-2-醇;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(6-(2-(二乙基氨基)乙氧基)-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;

4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(2-乙基-1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(2-丙基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

3-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-6-醇;

N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;

N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-環己基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;和1-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)吡咯烷-2-酮。在下面的實施例和表I中對式I化合物進行了詳述。

在另一個實施方案中,是式Ia的化合物或其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、被?;さ難萇?、單個的異構體以及異構體混合物;或該類化合物可藥用的鹽和溶劑化物(例如水合物):

其中:

L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-、-(CH2)3-、-CH2OCH2-、-CH2NR5aCH2-、-NR5aC(O)CH2-和-NR5aY-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和C1-4烷基;Y是一種含有最多3個選自O、N和S的雜原子的5員雜芳基環;

R1選自氫、苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-2-基、噠嗪-3-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、1H-吡唑-1-基、噠嗪-4-基、1H-吲哚-2-基、噻唑-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吡咯-2-基和噻唑-5-基;其中所述R1的苯基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、嘧啶-4-基、嘧啶-5-基、1H-吡唑-4-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-2-基、噠嗪-3-基、吡啶-4-基、1H-咪唑-1-基、吡咯烷-1-基、吡嗪-2-基、吡啶-3-基、1H-吡唑-1-基、噠嗪-4-基、1H-吲哚-2-基、噻唑-4-基、1H-吲哚-3-基、1H-吡咯-2-基或噻唑-5-基可任選地被1至3個獨立地選自氰基、羥基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素、鹵代-C1-4烷基、鹵代-C1-4烷氧基、羥基、氨基、-C(O)R8a、-S(O)0-2R8a、-C(O)OR8a和-C(O)NR8aR8b的基團取代;其中R8a和R8b獨立地選自氫和C1-4烷基;條件是R1和R3不都是氫;

R2選自-S(O)2NR6aR6b、-NR9aC(O)R9b、-NR6aC(O)NR6bR6c、苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-氧代哌嗪-1-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、二氫吲哚-5-基、2-氧代二氫吲哚-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基和1H-咪唑-4-基;其中R6a、R6b和R6c獨立地選自氫和C1-4烷基;其中所述R2的苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基或呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、3-氧代哌嗪-1-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、二氫吲哚-5-基、2-氧代二氫吲哚-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基或1H-咪唑-4-基任選地被1至3個獨立地選自羥基、鹵素、甲基、甲氧基、氨基、-S(O)2NR7aR7b、-OS(O)2NR7aR7b和-NR7aS(O)2R7b(其中R7a和R7b獨立地選自氫和C1-4烷基)的基團或選自5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氧基、2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氨基)乙氧基)乙氧基和2-(4-(4-己-5-炔酰氨基苯甲?;?苯基氨基)-2-氧代乙氧基的單個基團的基團取代;

R3選自氫、C1-4烷基和聯苯基;并且

R4選自異丙基、異丁基、仲-丁基、1-羥基丙-2-基、環丙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基和1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基;其中所述環丙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可任選地被1至3個獨立地選自C1-4烷基和鹵代-C1-4烷基的基團取代。

在另一個實施方案中,在涉及式Ia的化合物時,L選自-NR5a(CH2)0-3-、-NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-、-NR5a(CH2)2NR5b-、-NR5a(CH2)2S-、-NR5aCH2CH(CH3)CH2-、-NR5aCH(CH3)CH2-、-(CH2)3-、-CH2OCH2-、-CH2NR5aCH2-、-NR5aC(O)CH2-和-NR5aY-;其中R5a和R5b獨立地選自氫和甲基;Y選自異唑和1,3,4-二唑。

在另一個實施方案中,當L是-NR5a(CH2)0-3時,其優選是-NR5a(CH2)1-3(其中這里的1-3是指1、2或3)。

在另一個實施方案中,R1選自氫、苯基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、呋喃-3-基、呋喃-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、吡咯烷-1-基、1H-吡唑-4-基、吡嗪-2-基、噠嗪-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡唑-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-咪唑-1-基、噻唑-4-基、1H-吡咯-2-基、噻唑-5-基和吡啶-3-基;其中所述R1的苯基、噻吩-3-基、噻吩-2-基、呋喃-3-基、呋喃-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、嘧啶-5-基、吡啶-4-基、吡啶-2-基、吡咯烷-1-基、1H-吡唑-4-基、吡嗪-2-基、噠嗪-3-基、噠嗪-4-基、1H-吡唑-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-咪唑-1-基、噻唑-4-基、1H-吡咯-2-基、噻唑-5-基或吡啶-3-基任選地被1至3個獨立地選自氰基、甲基、甲基-磺?;?、甲氧基、鹵素、羥基、羧基、乙氧基-羰基、甲基-氨基-羰基和氨基的基團取代;條件是R1和R3不都是氫。

在另一個實施方案中,R2選自氨基-磺?;?、甲基-羰基-氨基、甲基-磺?;?氨基、氨基-磺酰-氧基、脲,苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-氧代哌嗪-1-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、二氫吲哚-5-基、2-氧代二氫吲哚-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基和1H-咪唑-4-基;其中所述R2的苯基、1H-吲哚-2-基、1H-吲哚-3-基、苯并[b]噻吩-2-基、苯并[b]噻吩-3-基、苯并呋喃-2-基、苯并呋喃-3-基、噻吩-2-基、噻吩-3-基、呋喃-2-基、呋喃-3-基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、哌啶-1-基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、吡啶-4-基、1H-1,2,4-三唑-3-基、1H-1,2,4-三唑-5-基、2-氧代咪唑烷-1-基、1H-吡唑-3-基、1H-吡唑-4-基、3-氧代哌嗪-1-基、2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-5-基、1,2,3,4-四氫萘-2-基、二氫吲哚-5-基、2-氧代二氫吲哚-5-基、1H-苯并[d]咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基和1H-咪唑-4-基任選地被羥基、甲氧基、甲基、鹵素、氨基、氨基-磺?;?、5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氧基、2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氨基)乙氧基)乙氧基和2-(4-(4-己-5-炔酰氨基苯甲?;?苯基氨基)-2-氧代乙氧基取代。

在另一個實施方案中,R3選自氫、甲基和聯苯基;并且R4選自異丙基、異丁基、仲-丁基、1-羥基丙-2-基、環丙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基和1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基;其中所述環丙基、氧雜環丁烷-3-基、氧雜環丁烷-2-基、二苯甲基、哌啶-4-基、哌啶-3-基、哌啶-2-基、四氫-2H-吡喃-2-基、四氫-2H-吡喃-3-基、四氫-2H-吡喃-4-基、苯基、四氫呋喃-3-基、四氫呋喃-2-基、芐基、(4-戊基苯基)(苯基)甲基或1-(1-(2-氧代-6,9,12-三氧雜-3-氮雜十四烷-14-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基可任選地被1至3個獨立地選自甲基和三氟甲基的基團取代。

在另一個實施方案中,是選自下面的化合物:4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫-2H-吡喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-(三氟甲基)芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-甲基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(4-甲基芐基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-N-(2-(噻吩-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;N-(4-氨基苯乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(嘧啶-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-苯基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(呋喃-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(4-氟苯乙基)-9-苯基-9H-嘌呤-6-胺;N-芐基-8-(聯苯基-4-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-((4-戊基苯基)(苯基)甲基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-醇;3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酸酯;

N-(2-(2-(3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基氧基)乙氧基)乙基)-5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺;N-(4-(4-(2-(3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基氧基)乙酰氨基)苯甲?;?苯基)己-5-炔酰胺;N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-(4-羥基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-9-基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺;

4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙酸乙酯;4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲氧基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(9-異丙基-2-(吡咯烷-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(1H-咪唑-1-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噠嗪-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡嗪-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺?;?吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(2-氯吡啶-3-基)-6-異丙基-2,6-二氫咪唑并[4,5-c]吡唑-3-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲氧基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1H-吡唑-4-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(9-異丙基-2-(噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)噻吩-2-甲酸;4-(2-(2-(呋喃-2-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲氧基苯酚;N-[2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-[2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-[2-(哌啶-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)哌啶-4-醇;甲基(2S)-3-(4-羥基苯基)-2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}丙酸酯;4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)苯-1-磺酰胺;2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙烷-1-磺酰胺;4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)苯-1,2-二醇;N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;

1-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;

N-[2-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;

N-[2-({[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)丙基]乙酰胺;

4-(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)哌嗪-2-酮;

N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(2-{[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)脲;5-({[9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮;2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[2-(1H-咪唑-4-基)乙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;1-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)咪唑烷-2-酮;N-[2-(5-氨基-1H-1,2,4-三唑-3-基)乙基]-2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)吡啶-2-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-N-[3-(1H-吡唑-4-基)丙基]-9H-嘌呤-6-胺;N-[2-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)丙基]乙酰胺;4-(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)哌嗪-2-酮;2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-{2-[(3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)硫基]乙基}-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(1-苯并噻吩-3-基)-N-[3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基]-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;(2-{[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}乙基)脲;5-({[2-(1-苯并噻吩-3-基)-9-(丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基]氨基}甲基)-2,3-二氫-1H-1,3-苯并二唑-2-酮;N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-9-(丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基)甲烷磺酰胺;4-(2-(2-(吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)丙基)苯酚;4-(2-(9-(氧雜環丁烷-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基煙酰胺;6-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)-5,6,7,8-四氫萘-2-醇;

N-(2-(1H-吲唑-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)(甲基)氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-8-甲基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;1-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮;4-(3-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)丙基)苯酚;4-((((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲基)(甲基)氨基)甲基)苯酚;4-(((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲基氨基)甲基)苯酚;4-(((9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)甲氧基)甲基)苯酚;N-(2-(二氫吲哚-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-(1-甲基哌啶-4-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-(哌啶-4-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

N-(2-(1H-吲唑-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-苯并[d]咪唑-5-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)二氫吲哚-2-酮;4-(2-(9-環丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯基氨基磺酸酯;2-(4-羥基苯基)-N-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基)乙酰胺;4-(5-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)異唑-3-基)苯酚;4-(5-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)-1,3,4-二唑-2-基)苯酚;4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(1-甲基-1H-吡咯-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;和4-(2-(9-異丙基-2-(噻唑-5-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚。

在另一個實施方案中,是式1f的化合物:

其中:R2選自1H-吲哚-3-基和苯基,其任選地被羥基取代;并且R4選自異丙基、仲-丁基、二苯甲基、壬-2-基、氧雜環丁烷-3-基和四氫呋喃-3-基。

在另一個實施方案中,是選自下面的化合物:4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-二苯甲基-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(壬-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;(S)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;和(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚。

在另一個實施方案中,是式1g的化合物:

其中:

R2選自:1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基;任選地被1至2個獨立地選自鹵素、甲基和甲氧基的基團取代的1H-吲哚-3-基;和任選地被1至2個獨立地選自甲基、鹵素和羥基的基團取代的苯基;R4選自異丙基、仲-丁基、1-羥基丙-2-基、丙-1-烯-2-基、二苯甲基、壬-2-基、氧雜環丁烷-3-基和四氫呋喃-3-基;并且Ra、Rb和Rc獨立地選自氫、氰基、甲基、鹵素、-SO2CH3和三氟甲基。

在另一個實施方案中,是選自下面的化合物:4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(6-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(4-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;

4-(2-(9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(甲基磺?;?吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;

4-(2-(2-(4-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;9-異丙基-N-(2-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-(氧雜環丁烷-3-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-(1-羥基丙-2-基)-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(2-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(9-仲-丁基-6-(4-羥基-3-甲基苯乙基氨基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;5-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-2-基)煙腈;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;(S)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-仲-丁基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;5-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-2-基)煙腈;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;3-(6-(4-羥基苯乙基氨基)-9-異丙基-9H-嘌呤-2-基)異煙腈;4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚;4-(2-(9-異丙基-2-(6-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;2-氯-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;3-氟-4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚;2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇;(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(丙-1-烯-2-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;

4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-異丙基-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;

2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-9-(氧雜環丁烷-3-基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(4-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-N-(2-(4-甲基-1H-吲哚-3-基)乙基)-9H-嘌呤-6-胺;N-(2-(7-氟-1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺;和4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-9-(1-羥基丙-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-2-甲基苯酚。

在另一個實施方案中,是用式I化合物通過增加分裂數來刺激干細胞擴增的方法;所述方法包括使干細胞與式I化合物進行接觸。

在另一個實施方案中,是其中干細胞的擴增是體內、體外或離體擴增的方法。

在另一個實施方案中,是其中干細胞是人造血干細胞的方法。

在另一個實施方案中,是用本發明的方法獲得的或可用本發明的方法獲得的具有擴增的造血干細胞的細胞群。

在另一個實施方案中,是包含具有得自一個或兩個臍帶血單元,優選一個臍帶血單元的擴增了的HSC的細胞群的組合物,其中所述組合物包含至少105個細胞、107個細胞、108個細胞或109個細胞的細胞總數,并且其中全部細胞的20-100%是CD34+細胞,例如全部細胞的40-80%是CD34+。

在另一個實施方案中,是用于治療疾病或病癥的方法,對于該疾病或病癥來說,干細胞治療可以預防、治療或根除所述病癥。

預期隨著干細胞應用的進展,可以用干細胞移植治療的疾病種類將擴展。下面給出了實例的非限制性列表。

在另一個實施方案中,是如本發明概述中所定義的式I化合物或其鹽在制備治療遺傳性免疫缺陷疾病、自身免疫疾病和/或造血系統病癥的組合物中的用途。

在另一個實施方案中,其施用是針對自體移植和選自多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、急性髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自身免疫疾病和淀粉樣變性的造血系統病癥。

在另一個實施方案中,自身免疫疾病選自全身性紅斑狼瘡(SLE)和全身硬化癥。

在另一個實施方案中,施用是針對同種異體移植和選自急性髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、骨髓增殖性疾病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、再生障礙性貧血、單純紅細胞再生障礙、陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、范可尼貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細胞性貧血、重癥聯合免疫缺陷(SCID)、Wiskott-Aldrich綜合征、嗜血細胞性淋巴組織細胞增生癥(HLH)和先天性代謝缺陷的造血系統病癥。

在另一個實施方案中,先天性代謝缺陷選自粘多糖貯積癥、戈謝病、異染性腦白質營養不良和腎上腺腦白質營養不良。

在另一個實施方案中,是一種治療遺傳性免疫缺陷疾病、自身免疫疾病和/或造血系統病癥的方法,該方法包括給需要該類治療的患者施用用如本發明概述中所述化合物擴增了的造血干細胞。

在另一個實施方案中,施用是針對自體移植和選自多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、急性髓性白血病、神經母細胞瘤、生殖細胞腫瘤、自身免疫疾病和淀粉樣變性的造血系統病癥。

在另一個實施方案中,自身免疫疾病選自全身性紅斑狼瘡(SLE)和全身硬化癥。

在另一個實施方案中,施用是針對同種異體移植和選自急性髓性白血病、急性淋巴細胞白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴細胞白血病、骨髓增殖性疾病、骨髓增生異常綜合征、多發性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤、何杰金病、再生障礙性貧血、單純紅細胞再生障礙、陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、范可尼貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細胞性貧血、重癥聯合免疫缺陷(SCID)、Wiskott-Aldrich綜合征、嗜血細胞性淋巴組織細胞增生癥(HLH)和先天性代謝缺陷的造血系統病癥。

在另一個實施方案中,先天性代謝缺陷選自粘多糖貯積癥、戈謝病、異染性腦白質營養不良和腎上腺腦白質營養不良。

實用性

HSC是能再生所有血細胞的原始細胞。在發育期間,造血從胎兒的肝臟轉移到骨髓,然后,在成人期,骨髓一直是造血部位。一旦在骨髓中建立了造血,HSC在骨腔中就不再隨機分布。相反,發現他們就存在于骨內膜表面附近。離骨表面的距離越遠,更成熟干細胞的數目就越多。最后,在接近骨的中心縱軸時,發生成熟細胞的終末分化。

不管是得自成人、臍帶血、胎兒或胚胎源,干細胞數目擴增都對血液學以及腫瘤疾病和病癥的移植及其它治療具有重大影響,至少可以增加安全性和降低花費。如本文方法中所述,可以離體增加HSC數。目前,由于缺乏足夠的干細胞,自體供體移植的約25%被阻止,因此,增加干細胞數目的方法很重要。此外,需要同種異體移植的患者中不足25%可找到組織相容性的供體。目前存在臍帶血銀行,該銀行覆蓋了廣闊的一般種群的種族構成,但是,由于對于成人領受者而言,樣品中干細胞數不足,這些銀行目前僅局限于在兒童中應用。增加干細胞數目的方法使得臍帶血可用于成人患者,從而擴展了同種異體移植的應用。本發明的化合物還可用于擴增臨床有用的祖細胞數,例如,用于快速移植物移入和降低嗜中性白細胞減少的持續時間。

因此,提供了一種增加HSC數目的方法。本文所用的HSC的增加是指主體具有至少一種以上HSC,10%的增加、20%的增加、30%的增加或更高。HSC可能由CD34+細胞的子集組成,可以通過對細胞群中CD34+細胞數目進行計數來直接測量HSC的增加并且,任選地,如下面實驗部分描述的那樣通過分析集落形成單位(CFU)評估CD34+細胞的分化性質來進行測量:與未擴增的對照相比,CD34+細胞培養物的數目增加至少10%,優選20%或30%或更高提示HSC擴增。收獲HSC擴增了的種群,例如由主體的骨髓樣品或培養物進行收獲。收獲HSC被定義為細胞的取出或分離。其可以用許多方法來完成,所述方法如酶法、非酶法、離心法、電學方法或以尺寸大小為基礎的方法,或者優選地,通過用培養基(例如細胞在其中進行培養的培養基)或緩沖液沖洗細胞來進行。將細胞任選地進行收集,分離,和進一步擴增,從而產生更大的HSC群和分化后代。

一種制備HSC擴增種群的方法包括使能下調AHR和/或AHR下游效應器的活性和/或表達的物質,例如本發明化合物與含有HSC和任選的HSC支持細胞的混合物的起始細胞群(即未擴增的細胞群)接觸。該步驟離體、體內和/或體外進行。如本文所述,任選地將擴增了的HSC種群施用于主體。對于離體擴增而言,用于HSC擴增的該類物質,例如本發明化合物可以在DMSO或一些其它適宜載體中配制,從該細胞上“洗滌下來”和將細胞轉移到例如擴散緩沖液中。例如,一種DMSO制劑可在60%DMSO/40%水溶液中含有0.3mg/ml本發明化合物。因此,提供了為主體提供擴增了的HSC種群的方法,該方法包括給該主體施用本文所述的擴增了的HSC種群或用本文所述的方法制備的擴增了的HSC種群。任選地用該擴增了的HSC種群來制備血細胞。任選地將該血細胞施用給需要的主體。任選地,該主體是由其獲得未擴增的HSC種群或HSC和HSC支持細胞混合物的同一主體。

本文所用的術語HSC支持細胞涉及在一種或多種HSC附近天然發現的細胞,從而由HSC支持細胞釋放的因子通過擴散到達HSC。HSC支持細胞包括但不限于淋巴網狀內皮間質細胞。本文所用的淋巴網狀內皮間質細胞包括但不限于存在于淋巴組織中的、不是淋巴細胞或淋巴細胞前體或祖代的所有細胞類型。因此,淋巴網狀內皮間質細胞包括成骨細胞、上皮細胞、內皮細胞、間皮細胞、樹突細胞、脾細胞和巨噬細胞。淋巴網狀內皮間質細胞還包括通常不像淋巴網狀內皮間質細胞那樣發揮功能的細胞,如成纖維細胞,其在遺傳上已經改變從而在其細胞表面上分泌或表達HSC(包括其后代)的維持、生長或分化所需的因子。淋巴網狀內皮間質細胞任選得自一塊淋巴組織的分解。該類細胞能在體外或體內支持包括其后代在內的HSC的維持、生長或分化。在提到淋巴組織時,其包括骨髓、外周血(包括動員的外周血)、臍帶血、胎盤血、胎兒肝臟、胚胎細胞(包括胚胎干細胞)、源自主動脈-性腺-中腎的細胞和淋巴軟組織。本文所用的淋巴軟組織包括但不限于諸如胸腺、脾、肝、淋巴結、皮膚、扁桃體、腺樣增殖體和派伊爾氏斑之類的組織以及它們的組合。

淋巴網狀內皮間質細胞在完整淋巴組織中為包括其后代在內的HSC的維持、生長或分化提供了支持微環境。該微環境包括由含有淋巴網狀內皮細胞基質的各種細胞類型表達的可溶性細胞表面因子。一般而言,淋巴網狀內皮間質細胞提供的支持的特征在于接觸依賴性和非接觸依賴性兩方面。

就HSC而言,淋巴網狀內皮間質細胞例如是自體的(自我的)或非自體的(非自我的,例如,異源的、同種異體的、同基因的或異基因的)。本文所用的“自體的”涉及得自相同主體的細胞。本文所用的“同種異體的”涉及得自遺傳上不同的相同種屬的細胞。本文所用的“同基因的”涉及與所比較的細胞遺傳學相同的不同主體的細胞。本文所用的“異基因的”涉及不同種屬的細胞。淋巴網狀內皮間質細胞得自例如器官/組織已經發展到可支持HSC的維持、生長或分化的階段(即成熟階段)后的任何時間的人或非人主體的淋巴組織。由其獲得淋巴網狀內皮間質細胞的淋巴組織通常決定了譜系定型HSC保證,產生了分化后代的譜系特異性。

HSC(及其后代)與淋巴網狀內皮間質細胞的共同培養通常在現有技術已知的條件下(例如,溫度,CO2和O2含量,營養培養基,持續時間等)進行。足以增加細胞數目的時間是本領域技術人員可以容易確定的時間,并且將根據所接種細胞的最初數目而變化。根據實驗需要改變最初引入的(和隨后接種的)HSC和淋巴網狀內皮間質細胞的數量。本領域技術人員可根據需要容易地確定理想數量。

文中所用的“主體”是指個體。因此,主體包括例如家養動物,如貓和狗、家畜(例如,牛、馬、豬、綿羊和山羊)、實驗室動物(例如,小鼠、兔子、大鼠和豚鼠)、哺乳動物、非人的哺乳動物、靈長類、非人的靈長類、嚙齒類、鳥類、爬行動物、兩棲動物、魚類和任何其它動物。主體任選地是哺乳動物如靈長類動物或人。

擴增造血干細胞的方法

因此,本發明涉及一種擴增造血干細胞的方法,其包括(a)提供含有造血干細胞的起始細胞群和(b)在存在能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質的情況下,在擴增造血干細胞的適宜條件下離體培養所述起始細胞群。

芳族烴(二惡英)受體(AHR)是一種已知在動物體內并且可能在人體內介導大量毒性和致癌作用的細胞溶質配體活化的轉錄因子(Safe?S?2001Toxicol?Lett?120:1-7)。由于其配體對AHR的活化,許多解毒基因被轉錄誘導,包括那些編碼I期異生素代謝酶,如細胞色素P450?CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和CYP2S1以及II期酶UDP-葡萄糖苷酸轉移酶UGT1A6、NAD(P)H-依賴性苯醌氧化還原酶-1(NQO1)、醛脫氫酶ALDH3A1、以及一些谷胱甘肽-S-轉移酶的基因。

在一個實施方案中,能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質選自:(i)有機化合物;(ii)能下調AHR表達的小干擾RNA(siRNA)分子;和(iii)能下調AHR表達的反義寡核苷酸。

在一個特定的實施方案中,所述擴增造血干細胞的方法包括(a)提供一種包含造血干細胞的起始細胞群和(b)在存在能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質的情況下,在擴增造血干細胞的適宜條件下離體培養所述起始細胞群,其中所述的能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質不是α-萘黃酮或3′-甲氧基-4′-硝基黃酮。

在現有技術中已經對抑制AHR活性的有機化合物(在本文也被稱為AHR拮抗劑)進行了描述,例如2-甲基-2H-吡唑-3-甲酸(2-甲基-4-鄰-甲苯基偶氮基苯基)酰胺(CH223191)、α萘黃酮、白藜蘆醇(Nutr.Metab.Cardiovasc.Dis.,2003年4月;13(2):104-13)、3’-甲氧基-4′-硝基黃酮(Biochem.Pharmacol.,2007年5月15日;73(10):1622-34,Epub?2007年1月30日)和6-甲基-1,3,8-三氯二苯并呋喃(Cancer?Res.,2004年4月15日;64(8):2889-97)。AHR活性的抑制劑是指將在活化條件下觀察到的AHR轉錄活性降低至少10%、20%、30%、50%、60%、70%、80%或至少90%的化合物。一種測量AHR抑制活性的實驗是例如實施例中所述的二惡英-誘導的AHR依賴性熒光素酶受體基因試驗。在一個實施方案中,AHR活性的抑制劑是在該二惡英-誘導的AHR依賴性熒光素酶受體基因試驗中測量時,具有低于10μM,優選低于5μM的EC50的化合物。

AHR是調節人體內多種基因轉錄的轉錄因子。在一個實施方案中,AHR途徑的下游效應器是一種在轉錄水平下由AHR直接調節的基因。該類基因的實例選自Cyp1B1、Cyp1A1和AHRR。AHR也在除其在異生素酶誘導中充分定性了的作用外的途徑中發揮作用。已經表明AHR的異生素配體調節β連環蛋白、STAT5、STAT1、HES-1、c-Myc、C/EBP、PU.1、β-連環蛋白、p21、P27、pRb、脫氧核苷酸基轉移酶、CXCR4以及其趨化因子配體CXCL12(SDF-1)。

在一個特定的實施方案中,能下調芳香烴受體的活性和/或表達的物質是本發明概述中所定義的化合物。

在另一個實施方案中,能下調芳香烴受體的活性和/或表達的物質是能下調AHR蛋白表達或AHR的一種或多種下游效應器的蛋白表達的反義寡核苷酸或小干擾RNA分子(siRNA)。

可用于有效抑制AHR蛋白表達的反義寡核苷酸的設計必需以這樣的方式來進行,即,該寡核苷酸與細胞內所指定的mRNA以抑制其翻譯的方式特異結合。適用于設計和合成與AHR?mRNA、基因組DNA和/或其啟動子或其它控制序列特異性結合的反義寡核苷酸的序列可得自公開的AHR,特別是人AHR的序列。此外,也可以采用以解釋所述靶mRNA和寡核苷酸中結構變動的能量學的熱力學循環為基礎的、用于確定對其靶mRNA具有最高的預測親合力的算法。

可如下那樣完成用于本發明的RNAi分子的合成:首先,向AUG起始密碼子的下游掃描AHR?mRNA序列(或一種或多種其下游效應器)中的AA-二核苷酸序列。每次出現的AA和19個3’-毗鄰核苷酸被記錄為潛在的siRNA靶位。然后,用任何序列對比軟件將潛在的靶位與適宜的基因組數據庫(例如人,小鼠,大鼠等)進行比對。過濾出與其它編碼序列表現出顯著同源性的推定靶位。然后,優選的序列是那些包括低G/C含量的序列,特別是具有低于55%的G/C含量的序列。然后,沿著靶基因的長度選擇一些靶位。在例如(Tilesi等人,Curr.Opin.Mol.Ther.11:156,2009)中描述了用于確定siRNA的推定靶位的方法或算法。能下調AHR表達的siRNA分子的實例有:AHR?111S、5’GCG?GCA?TAG?AGA?CCG?ACT?TAA?TTTCAA?GAG?AAT?TAA?GTC?GGT?CTC?TAT?GCC?GCT?TTT?TTG?G?3’;AHR?111AS、5’CGC?GCC?AAA?AAA?GCG?GCA?TAG?AGA?CCG?ACTTAA?TTC?TCT?TGA?AAT?TAA?GTC?GGT?CTC?TAT?GCC?GC?3’;AHR242S、5’GGC?TTC?TTT?GAT?GTT?GCA?TTA?ATT?CAA?GAG?ATT?AATGCA?ACA?TCA?AAG?AAG?CCT?TTT?TTG?G?3’;AHR?242AS、5’CGCGCC?AAA?AAA?GGC?TTC?TTT?GAT?GTT?GCA?TTA?ATC?TCT?TGAATT?AAT?GCA?ACA?TCA?AAG?AAG?CC?3’。

本領域技術人員將根據所面對的應用來選擇包含造血干細胞的起始細胞群。在現有技術中已經描述了含有造血干細胞的細胞的多種來源,包括骨髓、外周血、新生兒臍帶血、胎盤或其它來源如肝臟,特別是胎兒肝臟。

首先,使所述細胞群經歷富集或純化步驟,包括以特定的細胞標記為基礎進行細胞的陰性和/或陽性選擇,以便提供起始細胞群。以特定細胞標記為基礎分離所述起始細胞群的方法可以使用熒光活化的細胞分選(FACS)技術(也被稱為流式細胞計量術)或者結合了可與特定的細胞表面標記相互作用的抗體或配體的固體或不溶性底物。例如,可以使細胞與含有抗體的固體底物(例如小珠的柱,燒瓶,磁性顆粒)接觸并除去任何未結合的細胞。當使用含有磁性或順磁性小珠的固體底物時,可以用磁力分離器容易地分離與該小珠結合的細胞。

在一個實施方案中,以所需細胞標記表型(例如,CD34+、CD133+、CD90+)或根據染料如堿性蕊香紅的流量、Hoechst或醛脫氫酶活性來富集所述起始細胞群。在一個特定的實施方案中,所述起始細胞群富含CD34+細胞。用于使血細胞群富集CD+34細胞的方法包括Miltenyi?Biotec銷售的試劑盒(CD34+直接分離試劑盒,Miltenyi?Biotec,Bergisch,Gladbach,德國)或Baxter(Isolex?3000)銷售的試劑盒。

得自單胎的臍帶血的數量常常不足以治療成人或較大的兒童。使用本發明化合物或能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質的擴增法的一個優點是,其使得能夠僅由一個臍帶血單元產生足夠數量的造血干細胞。

因此,在一個實施方案中,起始細胞群得自已經富集了CD+34細胞的新生兒臍帶血細胞。在一個相關的實施方案中,所述起始細胞群得自一個或兩個臍帶血單元。

在另一個實施方案中,起始細胞群得自已經富集了CD34+細胞的人動員的外周血細胞。在一個相關的實施方案中,所述起始細胞群得自僅由一個患者分離的人動員的外周血細胞。

所述起始細胞群可優選地包含至少50%的CD34+細胞,在一些實施方案中,包含高于90%的CD34+細胞,并且可以包含105至109個有核細胞。

起始細胞群可直接用于擴增,或者可以被冷凍和儲存以便在隨后使用。

培養用于造血干細胞擴增的起始細胞群的條件可以根據起始細胞群、所需的最終細胞數和所需HSC的最終比例來進行變化。

在一個特定的實施方案中,使用得自富含CD34+細胞的臍帶血細胞的起始細胞群,其培養條件包括使用現有技術中通常已知的用于造血干細胞擴增的其它細胞因子和生長因子。該類細胞因子和生長因子非限制性地包括IL-1、IL-3、IL-6、IL-11、G-CSF、GM-CSF、SCF、FlT3-L、血小板生成素(TPO)、促紅細胞生成素以及其類似物。本文所用的“類似物”包括具有與天然存在形式的生物學活性一樣的生物學活性的細胞因子和生長因子的任何結構變型,非限制性地包括與天然存在的形式相比具有增強或降低的生物學活性的變型或細胞因子受體激動劑如對抗TPO受體的激動劑抗體(例如,如專利公開WO?2007/145227等中詳述的VB22B?sc(Fv)2)。選擇細胞因子和生長因子組合來擴增HSC和祖細胞,同時限制終末分化細胞的產生。在一個特定的實施方案中,一種或多種細胞因子和生長因子選自SCF、Flt3-L和TPO組成的組。在一個特定的實施方案中,至少TPO是在用于HSC擴增的適宜條件下在無血清培養基中進行應用的。在一個相關的實施方案中,在擴增HSC的方法中將IL6、SCF、Flt3-L和TPO的混合物與本發明化合物或能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質聯用。

人IL6或白介素-6(也被稱為B-細胞刺激因子2)已有記載(Kishimoto,Ann.review?of?Imm.23:12005)并且可商業獲得。人SCF或干細胞因子(也被稱為c-kit配體)、肥大細胞生長因子或Steel因子已有記載(Smith,MA等人,ACTA?Haematologica,105,3:143,2001)并且可商業獲得。Flt3-L或FLT-3配體(也被稱為FL)是一種與flt-3受體結合的因子。其已有記載(Hannum?C,Nature?368(6472):643-8)并且可商業獲得。TPO或血小板生成素(也被稱為成巨核細胞生長因子(MGDF)或c-Mpl配體)已有記載(Kaushansky?K(2006).N.Engl.J.Med.354(19):2034-45)并且可商業獲得。

HSC的擴增可以在基礎培養基中進行,該培養基補加有上述細胞因子和生長因子的混合物。一種基礎培養基典型地含有氨基酸、碳源、維生素、血清蛋白(例如白蛋白)、無機鹽、二價陽離子、緩沖劑和任何適于HSC擴增的其它元素。適于擴增HSC的方法的該類基礎培養基的實例非限制性地包括無血清擴增培養基(StemCell?Technologies,Vancouver,加拿大)、H3000-Defined?Medium(StemCell?Technologies,Vancouver,加拿大)、SCGM(CellGenix,Freiburg,德國)、-34SFM(Invitrogen)。

在一個實施方案中,在適于HSC擴增的濃度下,在所述起始細胞群擴增方法期間施用本發明化合物或能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質。在一個特定的實施方案中,所述化合物或AhR調節劑在1pM至100μM,例如10pM至10μM或100pM至1μM的濃度下施用。

在一個其中起始細胞群基本由得自一個或兩個臍帶血單元的CD34+富集的細胞組成的特定的實施方案中,使細胞在用于HSC擴增的條件下生長約3天至約90天,例如7至2天和/或直至獲得指定倍數的擴增和獲得特性細胞群。在一個特定的實施方案中,使細胞在用于HSC擴增的條件下生長至多21天、14天或7天。

在一個實施方案中,在足以達到至少105、106、107、108或109個CD34+細胞的絕對數目的時期內對起始細胞群進行培養。在另一個實施方案中,將所述起始細胞群培養足以使CD34+細胞擴增10至50000倍,例如擴增100至10000倍的時間。

所述擴增法后獲得的細胞群可以在不進行進一步純化的情況下使用或者可以對其進行進一步純化或選擇。

然后,可以對該細胞群進行洗滌以除去本發明化合物或任何能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的其它物質和/或細胞培養的任何其它組分,并將其重新混懸于用于短期應用的適宜細胞混懸培養基中或將其重新混懸于長期儲存培養基,例如適于深低溫保藏的培養基中。

用擴增法獲得的具有擴增的HSC的細胞群和治療組合物

本發明進一步提供了一種可用上述擴增法獲得或用上述擴增法獲得的具有擴增的HSC的細胞群。在一個特定的實施方案中,將該類細胞群重新混懸于適于施用于哺乳動物主體的可藥用培養基中,從而提供一種治療組合物。

本發明概述中所定義的化合物或能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質能夠使HSC,例如僅得自一個臍帶血單元或得自兩個臍帶血單元的HSC擴增,從而提供在數量上或性質上適于對需要其的人類患者進行有效的短期和長期植入的細胞群。本發明特別是涉及一種含有具有擴增了的HSC的細胞群的組合物,所述HSC得自至多一個或兩個臍帶血單元,其中所述治療組合物含有至少105、106、107、108或109個細胞的細胞總量,同時總細胞的20-100%,例如40-80%是CD34+細胞。在一個相關的實施方案中,所述組合物包含的總細胞的0.1-40%,例如0.1-10%是CD34+Thy1+且總細胞的20-80%是CD34+CD45RA+。在一些特定的實施方案中,所述組合物包含的細胞的10-95%是CD38+且細胞的5-70%是CD133+。

治療組合物的用途

本發明進一步提供了用于哺乳動物個體的同種異體或自體干細胞移植的具有擴增的HSC的細胞群或其組合物。

這里所涉及的個體是例如,骨髓供體或具有衰竭或有限的血細胞水平或者有此風險的個體。任選地,該個體是骨髓收獲前的骨髓供體或骨髓收獲后的骨髓供體。該個體任選地是骨髓移植的領受者。本文所述的方法特別是可用于具有有限骨髓儲量的個體如中老年個體或進行免疫消耗治療或骨髓根除治療如化療(例如用于治療白血病或淋巴瘤)前的個體。與對照血細胞水平相比,該個體任選地具有降低的血細胞水平或有形成降低的血細胞水平的風險。本文所用的術語“對照血細胞水平”涉及在改變個體體內血細胞水平的事件前或在基本不存在改變個體體內血細胞水平的事件的情況下,個體體內血細胞的平均水平。改變個體體內血細胞水平的事件包括,例如,貧血、創傷、化療、骨髓移植和放療。例如,該個體具有貧血或失血,例如由于創傷造成的失血。

在化療、放療或骨髓移植前、同時或之后施用擴增的HSC種群或含有具有擴增的HSC的細胞群的組合物。該個體任選地具有衰竭的骨髓,所述衰竭的骨髓與例如特征在于骨髓損失或衰竭骨髓的先天性、遺傳性或獲得性綜合征有關。因此,該個體任選地是需要血細胞生成的個體。該個體任選地是骨髓供體或具有衰竭的骨髓或有衰竭的骨髓風險的個體。

造血干細胞操作可用作化療或放療的補充治療。例如,使HSC定位到外周血中,然后將其由將要進行化療的個體分離出來,并且在治療后,將細胞回輸。因此,該個體是經歷或預期經歷免疫細胞衰竭治療如化療、放療的個體或作為骨髓移植供體的個體。骨髓是體內最有生殖力的組織之一,因此,常常是化療藥物和放療首先損害的器官。結果是,在化療或放療期間血細胞的產生被迅速破壞,然后必須終止化療或放療,以便在患者重新用化療進行治療前使造血系統重新補充血細胞供給。因此,如本文所述,任選地給需要額外血細胞的個體施用用本文所述方法制備的HSC或血細胞。

提供了用本發明化合物或能下調芳香烴受體和/或芳香烴受體途徑的下游效應器的活性和/或表達的物質擴增的HSC或者具有如上所述的擴增HSC的組合物和能夠體內、體外或離體增強HSC增殖的治療(例如小分子,抗體等)和任選的至少一種可藥用的賦形劑或載體的組合物。能增強HSC增殖的治療是指:對抗TPO受體的激動劑抗體(例如,如專利公開WO2007/145227中詳述的VB22B?sc(Fv)2等);細胞因子如SCF、IL-6、Flt-3配體、TPO或TPO擬似物(例如,如WO/2007/022269;WO/2007/009120;WO/2004/054515;WO/2003/103686;WO/2002/085343;WO/2002/049413;WO/2001/089457;WO/2001/039773;WO/2001/034585;WO/2001/021180;WO/2001/021180;WO/2001/017349;WO/2000/066112;WO/2000/035446;WO/2000/028987;WO/2008/028645等中所述);粒細胞集落刺激因子(G-CSF);粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF);前列腺素或前列腺素受體激動劑(例如,前列腺素E2受體-1(EP-I)激動劑、前列腺素E2受體-2(EP-2)激動劑、前列腺素E2受體-3(EP-3)激動劑和前列腺素E2受體-4(EP-4)激動劑,如專利公開WO/2008/073748中詳述);四亞乙基五胺(TEPA);Notch-配體(Delta-1);和/或WNT激動劑。此外,用間質干細胞(MSC)培養干細胞還阻止了移植物抗宿主疾病(GVHD)并可幫助干細胞擴增??梢越玀SC和干細胞以整體培養物的形式進行移植。

“可藥用的”是指在生物學或其它方面沒有不利影響的材料,即,該材料可以被施用于個體或細胞而不會造成不利的生物學作用或以有害方式干擾包含它的藥物組合物中的其它組分。對載體或賦形劑進行選擇以將活性成分的降解最小化并將其在個體或細胞中的不利副作用最小化。

該組合物可以以任何常規方式進行配制以用于本文所述的方法中。施用是通過本領域普通技術人員已知有效的任何途徑進行的。例如,該組合物被口服施用、胃腸外(例如靜脈內)施用、肌內注射、腹膜內注射、經皮施用、體外施用、鼻內施用或局部施用。

優選的施用方法是靜脈輸注。輸注細胞的數目將考慮一些因素如性別、年齡、體重、疾病或病癥的類型、病癥的階段、所需細胞在細胞群中的百分比和產生治療益處所需的細胞數量。在一個特定的實施方案中,該組合物通過靜脈輸注被施用并且包含至少104個細胞/kg,如果需要,105至5.107個細胞/kg或更多。在一個特定的實施方案中,被輸入的細胞全部得自由單胎獲得的擴增了的臍帶血細胞。

用于將含有細胞的組合物輸注到患者體內的可藥用載體典型地包括具有5%HAS的緩沖鹽水或未進行補加的基礎培養基或現有技術中已知的培養基。

對于口服施用而言,該組合物采取例如用可藥用的賦形劑通過常規方法制備的片劑或膠囊形式,所述可藥用的賦形劑如粘合劑(例如,預膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素);填充劑(例如,乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣);潤滑劑(例如,硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化硅);崩解劑(例如,馬鈴薯淀粉或羥乙酸淀粉鈉);或濕潤劑(例如,月桂基硫酸鈉)??梢雜孟鐘屑際踔兄謁苤姆椒ǘ云兩邪???詵┯玫囊禾逯萍量剎扇±縟芤?、糖漿或混懸液的形式,或者它們可以以在使用前用水或其它適宜基質組建的干產品的形式存在。該類液體制劑是用可藥用添加劑通過常規方法制備的,所述可藥用添加劑是例如助懸劑(例如,山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂);乳化劑(例如,卵磷脂或阿拉伯膠);非水性基質(例如,杏仁油、油性酯類、乙醇或分餾的蔬菜油類);和防腐劑(例如,對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。該制劑任選地酌情包含緩沖鹽、矯味劑、著色劑和甜味劑。

該組合物被配制成用于通過注射例如快速推注或連續輸注進行胃腸外施用。用于注射的制劑以單位劑型存在,例如位于安瓿或多劑量容器中,其中含有或不含加入的防腐劑。該組合物采取諸如位于油性或水性基質中的混懸液、溶液或乳劑的形式,并且可包含配制劑如助懸劑、穩定劑和/或分散劑?;蛘?,活性成分為在使用前用適宜基質例如無菌無熱原的水組建的粉末形式。一般而言,水、適宜的油、鹽水、葡萄糖水溶液、和相關的糖溶液以及二醇類如丙二醇或聚乙二醇類是用于胃腸外溶液的適宜載體。用于胃腸外施用的溶液包含例如活性成分的水溶性鹽、適宜的穩定劑和如果需要的話的緩沖物質。單獨或聯合的抗氧劑如硫酸氫鈉、亞硫酸鈉或抗壞血酸是適宜的穩定劑?;谷窩〉厥褂媚仕峒捌溲魏鴕葉匪囊宜崮?EDTA)。此外,胃腸外溶液還任選地含有防腐劑如苯扎氯銨、尼泊金甲酯或丙酯和氯丁醇。在Remington:藥學科學和實踐(The?Science?andPractice?of?Pharmacy),第21版,David?B.Troy編輯,Lippicott?Williams?&Wilkins(2005)中描述了適宜的藥用載體,其被全文引入至少用于藥物載體和組合物相關材料的參考。

該組合物任選地被配制為儲庫制劑。該類長效制劑任選地通過植入被施用。因此,例如,將該組合物用適宜的聚合物或疏水性材料(例如以位于可接受油中的乳劑形式)或離子交換樹脂配制,或者將其配制為難溶的衍生物,例如難溶鹽的形式。在手術植入同時或植入后,與植入物一起應用或包埋該組合物。

此外,用標準藥學方法來控制作用的持續時間。這些方法包括控釋制劑和適宜的大分子,例如,聚合物、聚酯、聚氨基酸、聚乙烯、吡咯烷酮、乙烯醋酸乙烯酯、甲基纖維素、羧甲基纖維素或硫酸魚精蛋白。調整大分子的濃度以及混入方法以便控制釋放。任選地將所述物質混入到高分子材料如聚酯、聚氨基酸、水凝膠、聚(乳酸)或乙烯醋酸乙烯酯共聚物的顆粒中。除被混入外,還任選地用這些物質來將所述化合物捕獲到微囊中。

用于本文所述方法中的組合物任選地被配制為持續和/或定時釋放制劑。所述持續和/或定時釋放制劑可以用本領域普通技術人員眾所周知的持續釋放手段或傳遞裝置制得。用該組合物來提供一種或多種活性成分的緩慢或持續釋放,使用例如羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質、凝膠、可滲透的膜、滲透系統、多層包衣、微粒、脂質體、微球或其組合,以不同比例使用來提供所需的釋放特性。選擇適宜的持續釋放制劑來進行使用本文所述組合物的應用。因此,使用適于持續釋放的適于口服施用的單位劑型,例如但不限于片劑、膠囊、軟膠囊、囊形片、粉末。

該組合物任選地由控釋系統傳遞。例如,用靜脈輸注、可植入的滲透泵、脂質體或其它施用方式來施用該組合物。將控釋系統放置在靶點附近。

任選地,希望局部施用該組合物,即,將該組合物施用到需要治療的區域。例如,通過注射將該組合物施用到例如長骨的骨髓中。例如,通過在手術期間局部輸注、局部應用(例如在手術后與傷口敷料一起應用)、注射、導管、栓劑或植入物來完成局部施用。植入物是多孔的、非多孔的或凝膠狀的材料,包括膜,如Sialastic膜或纖維。

通過任何可用于藥物聯用的常規手段,以單個治療活性成分形式或以活性治療成分的聯合來施用本文所述的藥物組合物。它們任選地被單獨施用,但是一般與藥用載體一起施用,所述藥用載體是以所選施用途徑和標準藥學實踐為基礎來進行選擇的。

本文所述的化合物以可藥用的形式被提供,所述可藥用的形式包括可藥用的鹽及其衍生物。術語“可藥用的形式”涉及通常安全、相對無毒并且在生物學或其它方面不會有不利影響的包括本文所述化合物的組合物。這些組合物任選地包括在所用劑量和濃度下對與之接觸的細胞或個體無毒的可藥用載體或穩定劑??梢┯迷靨宓氖道ɑ撼寮寥緦姿嵫?、檸檬酸鹽和其它有機酸;抗氧劑,包括抗壞血酸;低分子量(低于約10個殘基)的多肽;蛋白,如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白;親水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸如甘氨酸、谷酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸;單糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精類;螯合劑如EDTA;糖醇如甘露醇或山梨醇;成鹽的抗衡離子如鈉;和/或非離子表面活性劑如TWEENTM(Uniqema,United?Kingdom)、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM(BASF,德國)。

術語“可藥用的酸性鹽和衍生物”涉及保留所述生物學效力和性質并且在生物學或其它方面沒有不利影響的本文所述式I化合物的鹽和衍生物??梢┯玫難衛纈夢藁岷陀謝嶁緯?,所述無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等,有機酸如醋酸、丙酸、羥乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸等。

用本領域技術人員已知的方法增強含有式I化合物或其可藥用鹽或酯的組合物的化學穩定性。例如,以有效增強式I化合物穩定性的量向含有該化合物的組合物中加入聚乙氧基化山梨醇的鏈烷酸酯(聚山梨醇酯)。

在配制用于人的劑量范圍時,任選地使用由細胞培養試驗和動物研究獲得的數據。該類化合物的劑量優選地位于包括很少毒性或沒有毒性的體循環濃度范圍內。根據所用劑型和所用施用途徑,該劑量在這一范圍內變化。對于所提供方法中所用的任何化合物而言,首先由細胞培養試驗估算治療有效劑量。

本文還提供了一種包裝或試劑盒,其包含一個或多個填充有一種或多種本文所述成分的容器。在需要時,該類試劑盒任選地包含溶液和緩沖液。該試劑盒任選地包括用上述方法制備的擴增了的干細胞群或者可含有用于制備擴增的HSC群的容器或組合物。本發明特別是提供了一種用于離體擴增造血干細胞的試劑盒,其包含本發明概述中所定義的化合物和在HSC擴增法中使用該類化合物的說明以及任選的一種或多種細胞因子或生長因子,或者用于細胞生長的培養基,特別是上述用于造血干細胞生長的培養基。該試劑盒可進一步包含用于檢測細胞產生的抗體,如抗-CD34、抗-CD133、抗-CD38、抗-CD45RA和/或抗-Thy1抗體。在一個特定的實施方案中,該試劑盒進一步包含一種或多種選自IL6、FLT3-L、SCF和TPO的細胞因子或生長因子。該包裝或試劑盒任選地含有使用說明。

還提供了一種用于提供有效量本發明化合物以增加個體體內的HSC的試劑盒,其包含一個或多個用于在一定時期內使用的化合物劑量,其中試劑盒中本發明化合物劑量的總數量等于足以增加個體體內HSC的有效量。該時期為約一天至數天或數周或數月。因此,該時期為至少約5、6、7、8、10、12、14、20、21、30或60天或更久或一天至90天之間的任何天數。

本發明化合物的制備方法

本發明還包括制備本發明化合物的方法。在終產物中需要存在反應性官能團例如羥基、氨基、亞氨基、巰基或羧基的情況中,在所述反應中必須?;し從π怨倌芡乓員苊餛湓詵從χ脅幌M牟斡???梢愿荼曜疾僮魘褂貿9姹;せ?,例如,參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“有機化學中的?;せ?Protective?Groups?in?Organic?Chemistry)”,John?Wiley和Sons,1991。

下面的反應流程圖1-5詳述了本發明化合物的制備。本領域普通技術人員將意識到,遵循下面詳述方法的指導,可以用已知的轉換任選地對基團R1、R2、R3、R4和L1中的任何一種進一步進行修飾以獲得所需的最終的式I化合物。

式I化合物可根據下面的反應流程圖1來進行制備:

反應流程圖1

其中G1、G2、G3、G4、R1、R2和R4如本發明概述中式I所定義,且式I的L在該反應流程圖中被定義為-NH-L1-,其等于例如-NR5a(CH2)0-3-,其中R5a是氫且和-(CH2)0-3-是L1。

式I化合物可以通過將式2化合物與式3化合物在存在適宜催化劑(例如,Pd2(dba)3等)的情況下,在存在適宜配體(例如,氯化1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)咪唑)、適宜堿(例如,Cs2CO3等)和適宜溶劑(例如,1,4-二惡烷)的情況下,在約80至100℃下反應2至約48小時來進行制備。式2化合物又可以通過將式4化合物與略微過量的式5的胺化合物在適宜溶劑(例如異丙醇)中在大約室溫至約80℃下反應來進行制備。式4化合物可以通過用其中X1是氯、溴、碘或磺酸酯的適宜烷基化試劑7,在存在適宜堿(例如氫化鈉或碳酸鉀)的情況下,在適宜溶劑(例如DMF)中,在約0℃至約80℃的溫度下烷基化式6的化合物來進行制備?;蛘?,該反應可以在Misunobu條件下,用適宜的醇R4-OH在存在適宜的膦(例如三苯基膦)和偶氮二甲酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯)的情況下,在惰性溶劑如THF或甲苯中在約0℃至約室溫的溫度下來進行。

其中G1是CR3且其中所有其它G基團都是N的式Ia化合物也可以用如下反應流程圖2中的程序來進行制備:

反應流程圖2

其中R1、R2、R3和R4如本發明概述中式I所定義且式I的L在該反應流程圖中被定義為-NH-L1-,其等于例如-NR5a(CH2)0-3-,其中R5a是氫且-(CH2)0-3-是L1。

式I化合物可以通過將式8化合物與式5的胺化合物在適宜溶劑(例如異丙醇)中在大約室溫至約100℃的溫度下反應來進行制備。式8化合物又可以通過將式9化合物與式3化合物在存在適宜催化劑(例如,Pd(Ph3P)4、Pd2(dba)3等)的情況下,任選地在存在適宜配體(例如,氯化1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)咪唑)、適宜堿(例如,Cs2CO3等)和適宜溶劑(例如,1,4-二惡烷)的情況下,在約80至100℃的溫度下反應2至約48小時來進行制備。式9化合物又可以通過將式10化合物與二碘甲烷、碘化亞銅(I)和烷基亞硝酸酯(例如亞硝酸異戊酯)的混合物任選地在存在惰性溶劑的情況下,在約50至100℃的溫度下反應來進行制備。式10化合物可以通過用其中X1是氯、溴、碘或磺酸酯的適宜烷基化試劑7,在存在適宜堿(例如氫化鈉或碳酸鉀)的情況下,在適宜溶劑(例如DMF)中,在約0℃至約80℃的溫度下烷基化式11化合物來進行制備?;蛘?,該反應可以在Mitsunobu條件下,用適宜的醇R4-OH在存在適宜膦(例如三苯基膦)和偶氮二甲酸酯(例如偶氮二甲酸二乙酯)的情況下,在惰性溶劑如THF或甲苯中,在約0℃至約室溫的溫度下來進行。

式II化合物是其中R1是N-連接的雜環基或N-連接的雜芳基的式I化合物的子集,其可以如下面反應流程圖3中詳述的那樣來進行制備:

反應流程圖3

G1、G2、G3、G4、R1、R2和R4如本發明概述中式I所定義并且式I的L在該反應流程圖中被定義為-NH-L1-,其等于例如-NR5a(CH2)0-3-,其中R5a是氫且-(CH2)0-3-是L1。式II化合物可以通過將式2化合物與式20化合物在存在過量環狀胺或攜帶NH的雜環(例如,被取代的吡唑、被取代的咪唑等)的情況下,在約50℃至約250℃的溫度下反應約1至約24小時來進行制備,該反應任選地在存在堿如氫化鈉或DBU的條件下進行。

其中G1是CR3并且所有其它G基團都是N的式10化合物也可以用如下反應流程圖4中的程序來進行制備:

反應流程圖4

其中R3和R4如本發明概述中式I所定義。式10化合物可以根據J.Med.Chem,1972,456和J.Med.Chem.,1992,4180中所述的操作來進行制備。將式21的原酸酯化合物與式22的化合物反應,任選地在存在酸如醋酸的情況下反應,在大約室溫至約150℃的溫度下反應約1至約24hr。式22的化合物又可以通過將式23的化合物與式24的伯胺化合物反應來進行制備,反應任選地在存在酸如pTSA或堿如三乙胺或DBU的情況下、在約50至約200℃的溫度下進行。

式IV的化合物可以如下面反應流程圖5中詳述的那樣來進行制備:

反應流程圖5

其中G1、G2、G3、G4、R1和R2如本發明概述中式I所定義且式I的L在該反應流程圖中被定義為-NH-L1-,其等于例如-NR5a(CH2)0-3-,其中R5a是氫且-(CH2)0-3-是L1。R20和R21獨立地選自氫和C1-4烷基。其中R21是氫的式IV化合物可以通過用適宜的還原劑如氫化鋁鋰或二異丁基氫化鋁,在適宜溶劑如THF或甲苯中,在約-78℃至約50℃的溫度下處理式III化合物來進行制備。該反應進行約0.5至約16hr以反應完全。其中R21是低級烷基的式IV化合物可以通過用烷基鋰或格氏試劑,在適宜溶劑如醚或四氫呋喃中,在約-78℃至約50℃的溫度下處理式III化合物來進行制備。該反應進行約0.5至約16hr以反應完全。

在下面實施例中可以找到式I化合物合成的詳述實例。

制備本發明化合物的另外的方法

可以通過將本發明化合物的游離堿形式與可藥用的無機或有機酸反應來將本發明化合物制備為可藥用的酸加成鹽?;蛘?,可以通過將本發明化合物的游離酸形式與可藥用的無機或有機堿反應來將該化合物制備為可藥用的堿加成鹽?;蛘?,可以用起始材料或中間體的鹽來制備本發明化合物的鹽形式。

例如,4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(下面的實施例1)的鹽形式的合成如下:

甲磺酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在50℃下溶解于12ml丙酮中。向其中滴加甲磺酸(0.137g;1.40mmol)。迅速發生結晶。使該白色混懸液在冷卻下歷經30分鐘冷卻至室溫。將該結晶漿液在室溫下攪拌18小時,過濾。將固體用丙酮(6ml)分三份洗滌,然后首先將其在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約233℃,具有98g/J的熔化焓。所制備的物質表現出0.2%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.4%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的甲磺酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的甲磺酸鹽:6.4、6.7、18.3、18.6、26.9;在另一個實施方案中,其包含如下的粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):6.4、6.7、10.3、12.9、16.4、18.3、25.8、26.5、26.9。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖3中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的甲磺酸鹽。

甲苯磺酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在50℃下溶解于12ml丙酮中。向其中滴加對-甲苯磺酸單水合物(0.271g;1.40mmol)在丙酮(1.2ml)中的溶液。將該溶液在50℃下接種,迅速反應結晶。使該混懸液在冷卻下歷經約30分鐘冷卻至室溫并將其攪拌約18小時。在過濾后,將該固體用6ml丙酮分三份進行洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約233℃,具有88g/J的熔化焓。所制備的物質表現出0.2%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.4%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的甲苯磺酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的甲苯磺酸鹽:6.2、13.3、16.7、19.5、25.4;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰:6.2、7.6、12.4、13.3、15.1、16.7、17.7、19.5、20.2、24.6、24.9、25.4、25.6。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖4中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的甲苯磺酸鹽。

硫酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在約55℃下溶解于10ml丙酮和1ml水中。滴加硫酸(0.280g;2.79mmol)在1ml水中的溶液。迅速發生結晶。使該混懸液在冷卻下歷經約30分鐘冷卻至室溫,攪拌約18小時,過濾。將濾餅用6ml丙酮分三份洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約224℃,具有91g/J的熔化焓。所制備的物質表現出低于0.05%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.2%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的硫酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的硫酸鹽:6.5、6.8、10.7、13.5、26.4、27.6;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):6.5、6.8、10.7、13.1、13.5、18.6、18.8、20.8、26.4、27.1、27.6。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖6中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的硫酸鹽。

乙磺酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在50℃下溶解于12ml丙酮中。滴加乙磺酸(0.155g;1.40mmol)。迅速發生結晶。使所得白色混懸液歷經30分鐘冷卻至室溫。將該混懸液在室溫下攪拌約18小時,過濾。將固體用6ml丙酮分三份洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約231℃,具有76g/J的熔化焓。所制備的物質表現出0.6%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.05%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的乙磺酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的乙磺酸鹽:6.3、9.9、18.4、25.3、26.1;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):6.3、9.9、17.1、17.9、18.4、19.0、22.0、25.3、26.1、27.1。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖8中所示粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的乙磺酸鹽。

氫溴酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在65℃下溶解于6ml?DMF中。滴加氫溴酸48%(0.235g;1.40mmol)。使該溶液歷經約30分鐘冷卻至室溫。在55℃下對其進行接種,緩慢發生結晶。將該混懸液在室溫下攪拌約18小時,過濾。將該固體用4ml?DMF/水1∶1和6ml水洗滌。將該鹽首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約285℃,具有119g/J的熔化焓。所制備的物質表現出1.0%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。未觀察到吸水。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的氫溴酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的氫溴酸鹽:7.0、25.9、26.8、27.9;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):7.0、11.4、13.3、21.4、23.4、25.9、26.4、26.8、27.9。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖9中所示粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的氫溴酸鹽。

乳清酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)和乳清酸(0.222g;1.40mmol)在85℃下溶解于7.8ml?NMP(1-甲基-2-吡咯烷酮)中。將該溶液冷卻至60℃并歷經約5分鐘向其中滴加6ml水。使所得白色混懸液歷經約30分鐘冷卻至室溫并將其攪拌18小時。在過濾后,將濾餅用分成兩份的4ml?NMP/水1∶1和分成三份的6ml水洗滌。將該固體首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約240℃,具有130g/J的熔化焓。所制備的物質表現出低于0.05%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到1.7%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的乳清酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的乳清酸鹽:7.1、16.3、19.2、23.5、25.6、26.9;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):7.1、14.4、16.3、18.6、19.2、21.7、23.0、23.5、25.6、26.9、28.7。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖10中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的乳清酸鹽。

半富馬酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在65℃下溶解于18ml甲醇中。加入富馬酸(0.164g;1.40mmol)和6ml甲醇。使該溶液歷經約30分鐘冷卻至室溫。在60℃下加入一些晶種,緩慢發生結晶。將該混懸液在室溫下攪拌18小時,過濾。將該固體用分成三份的6ml甲醇洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約232℃,具有83g/J的熔化焓。所制備的物質表現出低于0.05%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.3%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的半富馬酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的半富馬酸鹽:7.2、8.7、14.4、15.8、17.4、19.0、23.7;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):7.2、8.7、10.8、14.4、15.8、17.4、17.8、19.0、20.1、23.7、27.5。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖11中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的半富馬酸鹽。

苯磺酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在50℃下溶解于12ml丙酮中。滴加苯磺酸(0.225g;2.79mmol)在1.2ml丙酮中的溶液。在48℃下加入晶種,緩慢發生結晶。使該混懸液歷經約30分鐘冷卻至室溫。將該結晶漿液在室溫下攪拌約18小時,過濾。將該鹽用分成三份的6ml丙酮洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約219℃,具有的熔化焓92g/J。所制備的物質表現出0.3%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到約0.05%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的苯磺酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的苯磺酸鹽:6.2、7.7、17.7、25.5;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):6.2、7.7、15.2、16.7、17.1、17.7、19.8、20.2、24.9、25.2、25.5。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖7中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的苯磺酸鹽。

萘二磺酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)和0.259g?1,5-萘二磺酸(0.70mmol)在87℃下溶解于9ml?DMF中。使該澄清的溶液歷經約30分鐘冷卻至室溫。在65℃下加入晶種,緩慢發生結晶。將該混懸液在室溫下攪拌約18小時,過濾。將該固體用分成兩份的4ml?DMF/水1∶1和分成三份的6ml水洗滌。將該鹽首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質的熔點為約304℃,具有83g/J的熔化焓。在107℃下觀察到寬的吸熱現象,其可能歸因于失水。所制備的物質表現出6.1%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到低于0.05%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的萘二磺酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的萘二磺酸鹽:6.4、9.6、13.1、15.7、16.1、26.0;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):9.6、13.1、15.7、16.1、16.4、20.4、20.9、23.7、26.0、26.9。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖12中所示粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的萘二磺酸鹽。

鹽酸鹽:將4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚游離堿(0.60g;1.40mmol)在55℃下溶解于12ml丙酮中。滴加鹽酸37%(0.138g;1.40mmol)。迅速發生結晶。使該白色混懸液歷經約30分鐘冷卻至室溫并將其攪拌18小時。過濾后,將該固體用分成三份的6ml丙酮洗滌,然后首先在50℃/約10mbar下干燥約3小時,然后在80℃/約10mbar下干燥約16小時。該物質在約162℃下表現出放熱現象,具有-13.8J/g的焓。這種現象可歸因于固體轉化成更穩定的形式。然后,在約259℃下觀察到吸熱現象,具有99.7J/g的焓。所制備的物質表現出0.6%的干燥失重。在相對濕度(80%rh)下暴露24小時后,通過熱重量分析來估算吸水量。觀察到0.3%的吸水量。

在另一個實施方案中,本發明提供了實施例1化合物的鹽酸鹽。在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的實施例1化合物的鹽酸鹽:6.1、7.0、19.8、26.1;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):6.1、7.0、18.1、19.8、24.7、26.1、27.0、27.7。

在另一個實施方案中,本發明提供了具有本文圖5中所示的粉末X-射線衍射圖的實施例1化合物的鹽酸鹽。

本發明化合物的游離酸或游離堿形式可以分別由相應的堿加成鹽或酸加成鹽制得。例如,可以通過用適宜的堿(例如氫氧化銨溶液,氫氧化鈉等)處理來將酸加成鹽形式的本發明化合物轉化成相應的游離堿??梢醞ü檬室說乃?例如鹽酸等)處理來將堿加成鹽形式的本發明化合物轉化成相應的游離酸。實施例1化合物的硝酸鹽可以用本領域技術人員已知的方法制備。在本文圖2中公開了其粉末X-射線衍射圖。

未被氧化形式的本發明化合物可以通過在適宜的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、二惡烷水溶液等)中,在0至80℃下用還原劑(例如,硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理,由本發明化合物的N-氧化物來進行制備。

本發明化合物的前體藥物衍生物可以用本領域普通技術人員已知的方法(例如,進一步的細節見Saulnier等人,(1994),Bioorganic?and?MedicinalChemistry?Letters,第4卷,第1985頁)來進行制備。例如,可以通過將未衍生化的本發明化合物與適宜的氨基甲?;約?例如,1,1-酰氧基烷基氯甲酸酯、對-硝基苯基碳酸酯等)反應來制備適宜的前體藥物。

本發明化合物被?;さ難萇錕梢雜帽玖煊蚱脹際躒嗽幣閻姆椒ɡ粗票?。在T.W.Greene,“有機化學中的?;せ?Protecting?Groups?inOrganic?Chemistry)”,第3版,John?Wiley?and?Sons,Inc.,1999A中可以找到適用于產生?;せ乓約敖涑サ募際醯南晗該枋?。

在本發明的方法中,本發明化合物可方便地被制備為或形成溶劑化物(例如,水合物)形式。本發明化合物的水合物可方便地通過用有機溶劑如二惡英、四氫呋喃或甲醇由含水/有機溶劑混合物重結晶來進行制備。

可以通過將本發明化合物的外消旋混合物與光學活性拆分試劑反應形成一對非對映異構的化合物,分離該非對映異構體并回收光學純的對映異構體來將本發明化合物制備為其單個的立體異構體形式。雖然可以用本發明化合物共價的非對映異構衍生物來進行對映異構體的拆分,但優選使用易解離的絡合物(例如,結晶性的非對映異構體鹽)。非對映異構體具有不同的物理性質(例如,熔點,沸點,溶解度,反應性等),因此可利用這些差異容易地進行分離??梢雜蒙追ǘ苑嵌雜騁旃固褰蟹擲?,或者優選地,根據溶解度差異通過分離/拆分技術來對非對映異構體進行分離。然后,用不會產生外消旋的任何實際方法,與拆分試劑一起回收光學純的對映異構體??梢栽贘ean?Jacques,Andre?Collet,Samuel?H.Wilen,“對映異構體,外消旋體和拆分(Enantiomers,Racemates?and?Resolutions)”,John?WileyAnd?Sons,Inc.,1981中找到適用于由其外消旋混合物拆分化合物立體異構體的技術的更詳細的描述。也可以用手性色譜技術,特別是用使用手性固定相的HPLC或SFC色譜法來將本發明化合物制備為其單個的立體異構體。

本文所附的粉末X-射線衍射光譜是用Bruker?D8?Vario儀器以傳遞幾何學,輻射CuKα(30kV,40mA)、掃描范圍2°-40°(2θ值)、步時90.3s來獲得的。實施例1的無定形物質的差示掃描量熱法(DSC)是用儀器PerkinElmer?DSC7在40℃/min的加熱速率下進行的。

總之,式I化合物可以用涉及如下步驟的方法來進行制備:

(a)反應流程圖1-5的那些方法;和

(b)任選地將本發明化合物轉化成可藥用的鹽;

(c)任選地將本發明化合物的鹽形式轉化成非鹽形式;

(d)任選地將本發明化合物的未被氧化形式轉化成可藥用的N-氧化物;

(e)任選地將本發明化合物的N-氧化物形式轉化成其未被氧化的形式;

(f)任選地將本發明化合物的單個異構體由其異構體混合物拆分出來;

(g)任選地將本發明化合物未被衍生化的形式轉化成其可藥用的前體藥物衍生物;和

(h)任選地將本發明化合物的前體藥物衍生物轉化成其未被衍生化的形式。

在對起始材料的制備沒有進行特別描述的情況中,這些化合物是已知的或者可以用與現有技術中已知的或下文實施例中所公開的方法類似的方法來進行制備。

本領域技術人員將意識到上面的轉化反應僅僅是制備本發明化合物方法的代表,可類似地使用其它眾所周知的方法。

實施例

用下面的實施例對本發明進一步進行非限制性舉例說明,這些實施例舉例說明了本發明式I化合物(實施例)的制備。

實施例1

4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚

2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)的合成:在室溫下攪拌的同時,在2小時內向溶解于無水DMF(5.0mL)中的2,6-二氯-9H-嘌呤(a)(6.0mmol)中緩慢加入氫化鈉(7.8mmol)。加入2-碘丙烷將該混合物攪拌16hr。將該混合物濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用己烷/EtOAc(20∶1至3∶1)進行洗脫,從而以白色固體形式得到標題化合物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ8.15(s,1H),4.91(m,1H),1.63(d,6H)。

4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:將2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(1.1mmol)與溶解于i-PrOH(6ml)中的酪胺(1.16mmol)混合并將該混合物攪拌一夜。將該反應混合物濃縮,將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用己烷/EtOAc(5∶1至1∶2)進行洗脫,從而以白色固體形式得到標題化合物。1H?NMR(500MHz,CDCl3):δ9.21(br,1H),8.49(s,1H),7.80(s,1H),7.10(d,2H),6.73(d,2H),4.87(m,1H),4.03(t,2H),3.01(t,2H),1.68(d,6H);HRMS(EI)C16H18ClN5O(M+H+)的計算值:332.1273,實測值:332.1278。

4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(d)的合成:向一個火焰干燥的Schlenk燒瓶中裝入4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(0.62mmol)、硫茚-3-硼酸(0.94mmol)、pd2(dba)3(0.062mmol)、Cs2CO3(1.25mmol)和氯化1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)咪唑(0.125mmol)。將該燒瓶抽真空,用N2回填并加入無水1,4-二惡烷(2mL)。將該燒瓶密封并將該反應混合物在80℃下攪拌24小時。將該反應混合物濃縮并直接用硅膠柱色譜進行純化,用己烷/EtOAc(20∶1至1∶4)進行洗脫,從而以淡黃色固體形式得到標題化合物。

或者,實施例1的合成可如下那樣進行:

2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)的合成:向一個圓底燒瓶中裝入6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(實施例15c制得的,3.31g,0.0103mol)、苯并[b]噻吩-3-基硼酸(2.74g,0.0154mol)和四(三苯基膦)鈀(0)(1.19g,0.0103mol)。向該混合物中加入甲苯(80ml)、乙醇(25ml)和碳酸鈉水溶液(2M,21ml)。將該燒瓶密封并將該反應混合物在90℃下攪拌1h。向冷卻了的混合物中加入水,將其用乙酸乙酯萃取。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用20至50%EtOAc的己烷溶液進行洗脫,從而以固體形式得到標題化合物,將其用1∶1的甲醇/水重結晶。1H?NMR(400MHz,DMSO-d6):δ=9.15(d,1H),8.85(s,2H),8.17(d,1H),7.62(t,1H),7.53(t,1H),5.06(m,1H),1.71(d,6H);MS?m/z?329.0(M+1)。

4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:在一根壓力管中,將2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(2.2g,0.0067mol)混懸于無水2-丙醇(70mL)中。加入酪胺(1.01g,0.0074mol)。將該管密封并在85℃下加熱16hr。再加入一些酪胺(0.50g,0.0037mol)并將該混合物在85℃下加熱48hr。將該反應濃縮。向殘余物中加入碳酸氫鈉水溶液,將其用EtOAc萃取。將所合并的有機提取物用硫酸鈉干燥,過濾,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用50至85%EtOAc的己烷溶液進行洗脫得到固體。將該固體用甲醇研磨,從而以米白色固體形式得到標題化合物。

或者,實施例1的合成可如下那樣進行:

2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)的合成:在10℃下,在攪拌的情況下,歷經1hr,向溶解于無水DMF(5.0L)中的2,6-二氯-9H-嘌呤(a)(998g,5.28mol)中加入氫化鈉(60%分散體,254g,6.35mol)。加入2-碘丙烷(1595g)并將該混合物在室溫下攪拌24hr。加入水(5.0L),收集所得固體沉淀并用水(500ml)和庚烷(2x2.5L)洗滌。將該粗品固體用乙酸異丙酯(2.1L)結晶,從而以固體形式得到標題化合物。

4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:在50℃下,將2,6-二氯-9-異丙基-9H-嘌呤(500g)分批加入到攪拌中的酪胺(593g)、三乙胺(262g)和i-PrOH(5.0L)的混合物中。將該混合物在該溫度下攪拌4hr,然后將該反應混合物濃縮。向殘余物中加入乙酸異丙酯(6.0L)并用20%檸檬酸溶液(2.0L)和水(2.0L)洗滌。將有機層濃縮至干燥,然后加入乙醇(2.0L)并再次將其濃縮至干燥。將該粗品固體用乙醇(3.2L)結晶,從而以固體形式得到標題化合物。

4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(d)的合成:將4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(950g)、硫茚-3-硼酸(561g)、二氯二(三苯基膦)鈀(II)(10.1g)、碳酸鉀(791g)、水(3.25L)和DMA(3.25L)的混合物在氮氣氣氛下攪拌10min。然后,將該進行著攪拌的混合物在70℃下加熱14h。加入乙酸乙酯(6.5L)和水(3.25L),將該混合物在50℃下用硅藻土(125g)過濾,用乙酸乙酯(1.0L)清洗。進行層分離,將水層在50℃下再用乙酸乙酯(7.5L)萃取。將所合并的有機層用水洗滌(3x2.5L),然后蒸餾以除去約2.5L的溶劑。加入四氫呋喃(2.5L)和與硫代硅膠結合的二氧化硅(200g)。將該混合物在70℃下攪拌16hr,然后過濾,用乙酸乙酯(1.0L)洗滌濾墊。在大氣壓下將所合并的濾液濃縮至約5L的體積,然后使該混合物冷卻。收集所得固體并用乙酸乙酯洗滌(2x1.0L),從而得到標題化合物。

可以用甲苯/乙醇混合物將實施例1的化合物重結晶并在室溫下用NaHCO3水溶液對其進行洗滌。

在另一個實施方案中,本發明提供了晶形A的實施例1的化合物,其中晶型A包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):12.1、16.9、18.9、21.3;在另一個實施方案中,其包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角):12.1、15.9、16.9、17.3、18.9、21.3、22.1、23.6、24.4、27.3。

在另一個實施方案中,本發明提供了包含如下粉末X-射線衍射峰(2-θ°角)的固體形式A的實施例1的化合物:9.0、12.1、13.0、13.1、13.6、14.4、14.7、15.1、15.9、16.9、17.3、17.7、18.0、18.9、19.0、20.1、21.3、22.1、22.3、22.6、22.8、23.4、23.6、24.4、25.3、26.3、26.5、27.3、27.8、28.2、29.5、29.7、30.4、30.7、31.0、31.4、32.2、32.8、33.3、34.3、35.5、36.4、37.5、38.4、39.0、39.4。

本文圖1中表示了實施例1化合物,晶型A的粉末X-射線衍射峰。在DSC(差示掃描量熱法)坩堝中,通過將該化合物加熱至熔化和退火/冷卻,來制備實施例1化合物的無定形物質。在該冷卻循環中,可觀察到玻璃轉化,但是在再加熱循環中,玻璃轉化在70-75℃下更具特征。在本文的圖13中表示了其DSC圖。

實施例15

4-(2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚

2-氨基-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)的合成:在室溫下,將氫化鈉(1.5g60%位于礦物油中的分散體,38mmol)歷經10min分批加入到進行著攪拌的2-氨基-6-氯-9H-嘌呤(5.34g,31.5mmol)在無水DMF(50mL)中的混懸液中。在45min后,將該混合物在冰浴上冷卻,然后加入2-碘丙烷。除去冷卻浴并使該進行著攪拌的混合物歷經16h升溫到室溫。將該混合物在冰上冷卻,然后加入水。將該混合物濃縮,將殘余物用熱乙酸乙酯處理。將冷卻了的混合物過濾并將濾液濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用0至50%EtOAc的己烷溶液進行洗脫,從而以固體形式得到標題化合物。1H?NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(s,1H),5.17(s,2H),4.71-4.66(m,1H),1.57(d,6H)。MS?m/z?212.1(M+1)。

6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(c)的合成:在室溫下,將6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-2-胺(2.68g,12.7mmol)溶解于THF(64mL)中。加入碘(1.61g,6.25mmol)、CH2I2(10.6ml)和CuI(1.27g,6.66mmol)。將該混合物在室溫下攪拌5min。加入亞硝酸異戊酯(5.33mL)。將該反應混合物回流45min,然后冷卻至室溫。加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將該混合物用EtOAc萃取三次。將所合并的有機相用鹽水洗滌,用MgSO4干燥,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用0至30%乙酸乙酯的己烷溶液進行洗脫,從而以固體形式得到標題化合物。1H?NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),4.95-4.88(m,1H),1.65(d,6H)。MS?m/z?323.0(M+1)。

6-氯-2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤(d)的合成:向一個圓底燒瓶中裝入6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(1.2g,3.7mmol)、吡啶-3-硼酸1,3-丙二醇環酯(0.91g,5.6mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(430mg,0.37mmol)。向該混合物中加入甲苯(60ml)、乙醇(6ml)和碳酸鈉水溶液(2M,15ml)。將該燒瓶密封并將該反應混合物在80℃下攪拌4h。向冷卻了的混合物中加入水,將其用乙酸乙酯萃取(50mlx3)。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用30至70%EtOAc的己烷溶液進行洗脫,從而以固體形式得到標題化合物。1H?NMR(400MHz,CD3OD)δ9.60(d,1H),8.90-8.87(m,1H),8.68(s,1H),8.67(d,1H),7.63-7.60(m,1H),5.12-5.05(m,1H),1.74(d,6H)。MS?m/z?274.1(M+1)。

4-(2-(吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(e)的合成:在一根壓力管中,將6-氯-9-異丙基-2-(吡啶-3-基)-9H-嘌呤(300mg,1.1mmol)混懸于無水2-丙醇(40mL)中。加入酪胺(300mg,2.2mmol)。將該管密封并將其加熱至85℃達16hr。將該反應濃縮并將殘余物用硅膠柱色譜進行純化,用0至70%EtOAc的己烷溶液進行洗脫,從而以固體形式得到標題化合物。

實施例123

4-(2-(9-異丙基-2-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚

向一根微波反應管中裝入4-(2-(2-氯-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(30mg,0.091mmol)、2-甲基-1H-咪唑(59mg,0.73mmol)和0.5mlNMP。將該密封的管在微波輻射下在240℃下加熱2hr。將該反應混合物用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例128

4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚

4-(2-(2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(b)的合成:將6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(a)(1.0g,3.1mmol)、酪胺(0.64g,4.65mmol)、三乙胺(0.63g,6.2mmol)和2-丙醇(30mL)的混合物在85℃下加熱2hr。將該反應混合物濃縮并加入飽和碳酸氫鈉水溶液。將該混合物用乙酸乙酯萃取(50mlx3)。將所合并的有機層用硫酸鈉干燥,過濾,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化(用25至75%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z?424.1(M+1)。

4-(2-(2-(5-氯吡啶-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:遵循實施例15d的操作,使4-(2-(2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(b)與5-氯吡啶-3-基硼酸進行反應。將該粗品用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例134

4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯

4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(b)的合成:遵循實施例128b的操作,使4,6-二氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(US3399196)(a)(0.184g,0.795mmol)與酪胺進行反應。將該殘余物粗品用硅膠色譜進行純化(用25至75%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z?332.1(M+1)。

4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:遵循實施例15d的操作,使4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(b)與5-氟吡啶-3-基硼酸進行反應。將該殘余物粗品用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例141

4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯

2,4-二氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(b)的合成:遵循實施例15b的操作,使2,4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.5g,2.67mmol)與2-碘丙烷進行反應。將該殘余物粗品用硅膠色譜進行純化(用15至25%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z?230.2(M+1)。

4-(2-(2-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:遵循實施例128b的操作,使2,4-二氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(b)(0.278g,1.21mmol)與酪胺進行反應。將該殘余物粗品用硅膠色譜進行純化(用25至75%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z?331.1(M+1)。

4-(2-(2-(5-氟吡啶-3-基)-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(d)的合成:遵循實施例15d的操作,使4-(2-(2-氯-7-異丙基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基氨基)乙基)苯酚(20mg,0.06mmol)與5-氟吡啶-3-基硼酸進行反應。將該殘余物粗品用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例153

(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚

(R)-2,6-二氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤(b)的合成:在-78℃下,將5,7-2,6-二氯-9H-嘌呤(400mg,2.12mmol)、(S)-四氫呋喃-3-醇(88mg,2.5mmol)和三苯基膦(1.0g,3.8mmol)在無水THF(30mL)中的溶液用偶氮二甲酸二異丙酯(856mg,4.23mmol)進行處理。使該反應加溫至室溫并將其攪拌16hr。加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將該混合物用乙酸乙酯進行萃取。將有機層合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(用10至80%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而得到一種白色固體,其由被三苯基膦氧化物污染的標題化合物組成。MS?m/z?258.0(M+1)。

(R)-4-(2-(2-氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:遵循實施例128b的操作,使(R)-2,6-二氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤(b)和酪胺進行反應。將該粗品反應混合物用反相制備HPLC進行純化。MS?m/z?360.1(M+1)。

(R)-4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚的合成:遵循實施例15d的操作,使(R)-4-(2-(2-氯-9-(四氫呋喃-3-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(c)與苯并[b]噻吩-3-基硼酸(22.3mg,0.125mmol)進行反應。將該殘余物粗品用反相制備HPLC進行純化,從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例157

2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇

2-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(b)的合成:將2,6-二氯-9H-嘌呤(5.0g,26.5mmol)、2-溴代丙酸甲酯(5.3g,31.7mmol)和碳酸鉀(11.0g,79.4mmol)在無水DMF(100mL)中的混合物在100℃下加熱15h。加入飽和碳酸氫鈉水溶液并將該反應液用乙酸乙酯進行萃取(150mlX3)。將有機層合并,用鹽水洗滌,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(用10至80%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以白色固體形式得到標題化合物。MS?m/z?275.0(M+1)。

2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(c)的合成:將2-(2,6-二氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(b)(600mg,2.2mmol)、色胺(420mg,2.6mmol)和2-丙醇(30mL)的混合物在85℃下在一根密封管中加熱16h。將該反應混合物冷卻至室溫并濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(用10至80%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以白色固體形式得到標題化合物。MS?m/z?360.1(M+1)。

2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(d)的合成:向一根150ml的壓力管中裝入2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(c)(300mg,0.75mmol)、5-氟吡啶-3-基硼酸(159mg,1.1mmol)、四(三苯基膦)-鈀(0)(87mg,0.075mmol)、K3PO4(638mg,3.0mmol)和無水二惡烷(15mL)。將該壓力管用氮氣凈化,然后將該反應混合物在130℃下在攪拌的情況下加熱6h。向冷卻了的該混合物中加入水,將該混合物用乙酸乙酯進行萃取(50mlx3)。將所合并的有機層用鹽水洗滌,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(用10至80%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而得到被少量三苯基膦氧化物污染的標題化合物。MS?m/z?460.1(M+1)。

2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇的合成:將氫化鋁鋰(230mg,6.1mmol)分批加入到0℃的2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙酸甲酯(282mg,0.61mmol)在無水THF(15mL)中的溶液中。使該進行著攪拌的反應混合物歷經2h加溫至室溫,然后小心加入水。將該混合物用EtOAc進行萃取(50mlx3)。將有機級分合并,用鹽水洗滌,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠柱色譜進行純化(0至5%溶劑B的二氯甲烷溶劑;溶劑B=2M氨的甲醇溶液),從而得到部分純化的標題產物。將其進一步用制備TLC進行純化(5%溶劑B的二氯甲烷溶液),從而以白色固體形式得到標題化合物。

實施例157R&157S

(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇&

(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-

用使用21x250mm?Lux-Cellulose-2(Phenomenex)手性柱的制備手性HPLC將(R/S)-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇分離成其單個的對映異構體。制備3mg/ml的外消旋體在甲醇中的溶液并每次注射0.5ml溶液將其負載到所述的柱上。用85/7.5/7.5己烷/乙醇/甲醇以20mL/min的流速對該柱洗脫25min。分別在20min和22.5min洗脫下峰1和2。分析色譜是在4.6x100mm?Lux_Cellulose-2(Phenomenex)手性柱上進行的,用90/5/5己烷/乙醇/甲醇以1mL/min的速率洗脫20min。分別在17.45和18.14min洗脫下峰1和2。

實施例157R

(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-

(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-(1-(芐氧基)丙-2-基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺(b)的合成:依次遵循實施例153b(用2,6-二氯-9H-嘌呤和(S)-1-(芐氧基)丙-2-醇作為反應物)、實施例153c(用色胺作為反應物)和實施例153d(用5-氟吡啶-3-基硼酸作為反應物)的操作,得到標題化合物。

(R)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-醇(c)的合成:在-78℃下,將(R)-N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-9-(1-(芐氧基)丙-2-基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-6-胺(b)(0.15g,0.29mmol)在DCM(10ml)中的溶液用位于DCM(10ml)中的BCl3(1M,2.9ml,2.9mmol)處理2hr。加入1N氫氧化鈉水溶液,將該混合物用DCM萃取。將所合并的有機提取物用硫酸鈉干燥,過濾,濃縮并將殘余物用硅膠柱色譜進行純化(用5%MeOH的DCM溶液作為洗脫劑),從而得到標題化合物。MS?m/z432.2(M+1)。

實施例157S

(S)-2-(6-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基氨基)-2-(5-氟吡啶-3-基)-9H-嘌呤-9-基)丙-1-

遵循實施例157R的操作,但是用(R)-1-(芐氧基)丙-2-醇代替(S)-1-(芐氧基)丙-2-醇,制得標題化合物。MS?m/z?432.2(M+1)。

實施例161

4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯

4,6-二氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(b)的合成:遵循實施例15b的操作,使4,6-二氯-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(J.Het.Chem.1965,196-201)(0.19g,1.0mmol)與2-碘丙烷進行反應。將殘余物用硅膠色譜進行純化(用25至35%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z?230.2(M+1)。

4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:將4,6-二氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶(b)(40mg,0.17mmol)、酪胺(120mg,0.86mmol)和2-丁醇(2mL)的混合物在微波輻射下在140℃下加熱8hr。將該混合物濃縮并將殘余物用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。MS?m/z?331.1(M+1)。

4-(2-(6-(5-氟吡啶-3-基)-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚(d)的合成:向一個5ml的微波反應小瓶中裝入4-(2-(6-氯-1-異丙基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-4-基氨基)乙基)苯酚(c)(17mg,0.051mmol)、5-氟吡啶-3-基硼酸(72mg,0.51mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(36mg,0.031mmol)。向該混合物中加入甲苯(1ml)、乙醇(0.5ml)和碳酸鈉水溶液(2M,0.5ml)。將該小瓶密封并將該反應混合物在140℃下在微波輻射下攪拌2小時。向冷卻了的該混合物中加入水,將其用乙酸乙酯萃取(5mlx3)。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用反相HPLC進行純化(C18柱,用ACN-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

實施例177

4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯

5,7-二氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(b)的合成:遵循實施例15b的操作,使5,7-二氯-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(J.Med.Chem.,2007,50,828-834)(0.118g,0.624mmol)與2-碘丙烷進行反應。將該粗品混合物用硅膠色譜進行純化(用25至35%乙酸乙酯的己烷溶液作為洗脫劑),從而以固體形式得到標題化合物(占多數)和異構產物的混合物。MS?m/z?230.2(M+1)。

4-(2-(5-氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚(c)的合成:將含有5,7-二氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(b)(40mg,0.17mmol)、酪胺(120mg,0.87mmol)和2-丙醇(2mL)的混合物在密封小瓶中在140℃下加熱72hr。將該混合物濃縮并將殘余物用制備型TLC進行純化(1∶2己烷/乙酸乙酯洗脫劑),從而以米白色固體形式得到標題化合物。MSm/z?331.1(M+1)。

4-(2-(5-(5-氟吡啶-3-基)-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚(d)的合成:遵循實施例161d的操作,使4-(2-(5-氯-3-異丙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-7-基氨基)乙基)苯酚(c)(15mg,0.047mmol)與5-氟吡啶-3-基硼酸進行反應。將該殘余物粗品用制備型TLC進行純化(1∶1己烷/乙酸乙酯洗脫劑),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

通過重復上面實施例中所述的操作,使用適宜的起始材料,得到如表1中鑒定的下面的式I化合物。

表1

如下面實施例中所述,還制備了與本發明化合物有關的親合探針化合物。

實施例210

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氨基)酸酯

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-氨基己酸酯(e)的合成:向3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-(叔-丁氧基羰基氨基)己酸酯(a)(80mg,0.117mmol)在DCM(20ml)中的溶液中加入TFA(5ml)。將該反應在室溫下攪拌3hr。將其濃縮。加入碳酸鈉水溶液并將該混合物用DCM進行萃取。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮,從而得到油狀物形式的產物。MS?m/z?582.2(M+1)。

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰氨基)己酸酯的合成:向(+)-生物素(35mg,0.14mmol)和Et3N(36mg,0.35mmol)在DMF(1ml)中的溶液中加入HATU(90mg,0.24mmol)。將該混合物攪拌10min,然后將其加入到(3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-氨基己酸酯(b)(68mg,0.12mmol)在DMF(1ml)中的溶液中。將該反應混合物在室溫下攪拌16hr,然后將其濃縮。將殘余物用反相HPLC進行純化(C18柱,用MeOH-H2O?0.05%TFA進行洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。實施例210在所述%CD34+試驗中表現出2.1μM的EC50值。

實施例211

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-(叔-丁氧基羰基氨基)己酸酯

2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)的合成:遵循實施例15d的操作,使6-氯-2-碘-9-異丙基-9H-嘌呤(3.31g,0.0103mol)與苯并[b]噻吩-3-基硼酸進行反應。將該粗品用硅膠色譜進行純化(用20至50%乙酸乙酯的己烷溶液進行洗脫),從而以固體形式得到標題化合物。MS?m/z329.0(M+1)。1H?NMR(400MHz,DMSO-d6):δ=9.15(d,1H),8.85(s,2H),8.17(d,1H),7.62(t,1H),7.53(t,1H),5.06(m,1H),1.71(d,6H)。

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-醇(c)的合成:遵循實施例15e的操作,使2-(苯并[b]噻吩-3-基)-6-氯-9-異丙基-9H-嘌呤(b)(80mg,0.243mmol)與血清素進行反應。將該反應混合物濃縮,然后加入碳酸氫鈉水溶液。將該混合物用乙酸乙酯進行萃取。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(0至5%MeOH的DCM溶液洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。MS?m/z?469.2(M+1)。

3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-基6-(叔-丁氧基羰基氨基)己酸酯(d)的合成:向3-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-醇(55.5mg,0.119mmol)和6-(叔-丁氧基羰基氨基)己酸(30mg,0.113mmol)在DMF(3ml)中的溶液中加入Et3N(24mg,0.237mmol)和HATU(90mg,0.237mmol)。將該混合物在室溫下攪拌16hr,然后將其濃縮。加入水并將該反應混合物用乙酸乙酯進行萃取。將有機級分合并,用硫酸鈉干燥,濃縮。將殘余物用硅膠色譜進行純化(0至5%MeOH的DCM溶液洗脫),從而以米白色固體形式得到標題化合物。

使用適宜的起始材料,通過重復上面實施例中所述的操作,得到如下面表2中鑒定的親合探針:

表2

試驗

用下面的試驗來評估本發明化合物促進造血干細胞(HSC)擴增的活性。

對初級成人CD34+人造血干細胞(HSC)進行培養和篩選以確定促進HSC擴增的本發明化合物。就是否存在所需表型(CD34表達)對細胞進行分析。本發明化合物以劑量依賴性方式促進了HSC擴增。

培養基:StemSpan?SFEM培養基是補加有下面的人重組細胞因子、基質(DMSO)或本發明化合物的無血清培養基(StemCell?Technologies,Vancouver,BC):血小板生成素、白介素-6、Flt-3配體和干細胞因子(全部得自R&D?Systems,Minneapolis,MN),這些細胞因子的終濃度均為50ng/mL。

人細胞培養:得自正常供體的新鮮的人leukophoresed?G-CSF動員的外周血、得自成人骨髓的CD34+細胞和低溫保存的人臍帶血CD34+細胞購自AllCells(Berkeley,CA)。用磁力細胞分揀(MACS,Direct?CD34Progenitor?Cell?Isolation?Kit,Miltenyi?Biotec,Bergisch?Gladbach,Germany)由leukophoresed?G-CSF動員的外周血富集人CD34+細胞并將其低溫保存。用流式細胞計量術檢查,CD34+細胞的純度高于90%。在解凍后,用臺盼藍排除法檢測到的細胞活力高于70%。將解凍了的細胞離心并重新混懸于StemSpan培養基中,然后將其等分并立即進行培養。將細胞以104個細胞/mL的數量涂到384孔板(Greiner?Bio-one,Monroe,NorthCarolina)中達7天,每孔50μL培養基。每隔7天,將細胞轉移到更大孔板中并加入新鮮培養基以將細胞密度保持在104至5×105個細胞/mL之間。將細胞在37℃下,在5%CO2中培養。為了移植,將細胞在75cm2燒瓶中培養,然后將細胞移植到小鼠體內。在21天后,與基質相比,在1微摩爾的濃度下,4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)、4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-仲-丁基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物2,表1)和N-(2-(1H-吲哚-3-基)乙基)-2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺(化合物9,表1)使得自1000mPB?CD34+HSC的CD34+CD45RA-細胞的數目產生了大于10倍的增加。以劑量響應形式(1nM至10μM)對本發明化合物進行分析以確定在50%的細胞中產生所需作用的有效濃度(EC50)。本發明化合物增加了CD34+細胞的總數和/或百分比,具有低于10μM的EC50。結果如上面表1和實施例中所示。

培養基中集落形成單位(CFU-C)試驗:以每mL臍帶血5周和mPB?3周培養物1000個細胞和每mL?CB?3周和mPB?1周培養物100個細胞的數量將單核細胞加入到MethoCult?SF?H4436,無血清甲基纖維素培養基中,該培養基在Iscove’s?MDM中含有甲基纖維素、牛血清白蛋白、2-巰基乙醇、L-谷氨酰胺、人轉鐵蛋白(離子飽和的)、重組人胰島素和重組人細胞因子:干細胞因子、GM-CSF、IL-3、IL-6、G-CSF和促血細胞生成素(StemCellTechnologies)。給MethoCult補加下面的人重組細胞因子:血小板生成素和Flt-3配體(R&D?Systems),終濃度均為50ng/mL。在攪拌后,將該混合物分配到三個35-mm的培養皿中。將該培養皿在37℃下,在含有5%CO2的潮濕空氣中培養14天。在該培養期的終點,在40X放大率下,在倒置顯微鏡下對骨髓和紅細胞系統的集落進行計數。如下那樣計算該擴增培養物的CFU-C含量:每三個培養皿的得分集落的數目×總單核細胞數/輸入細胞數。最多一周,通過用每毫升細胞的數目乘以培養物體積來測定總單核細胞。從第1周開始,也考慮傳代的數目。在mPB?CD34+細胞培養21天后,與基質相比,用濃度為1微摩爾的4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)處理的培養物在成集落細胞數方面產生了大于10倍的增加。與對照相比,使用得自第5周培養物的用4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)以1微摩爾的濃度處理的1x103個CBCD34+細胞時,其在集落形成單位方面表現出>10倍的增加。用4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)處理的細胞產生了更混雜的集落,在紅細胞集落方面具有>10倍的增加,在粒細胞/巨噬細胞集落方面具有>10倍的增加,并且在巨噬細胞集落方面具有>10倍的增加。用4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)處理的細胞也產生了混雜的粒細胞/紅細胞/單核細胞/巨噬細胞集落,在得自未處理培養物的集落中沒有觀察到這些集落。

鵝卵石區形成細胞(CAFC)試驗:將FBMD-1基質細胞供養在25-cm2燒瓶中并在1/3融合后用胰蛋白酶對其進行處理。由于這種未被轉化的細胞系會發生老化,因此在后期逐漸喪失了其支持CAFC細胞生長的潛能,所以所用的所有飼養細胞都低于20代。為了支持96-孔板中的CAFC生長,每孔接種1×103個基質細胞。在含5%CO2的潮濕空氣中,在37℃下,將該培養物維持在補加了10%胎牛血清(FCS)、2.5%馬血清(HS)、1%L-谷氨酰胺、1%青霉素-鏈霉素和1×10-5M氫化可的松的Iscove’s培養基中。在間質層達到融合后,將它們用已經用基質或本發明化合物培養了5天的CD34+HSC進行接種。以8次系列1∶3稀釋(從25,000個細胞/孔開始)加入MNC,每個細胞劑量10個孔。在第4周,測定間質層下具有至少一個有至少五個細胞的黑暗期(phase-dark)造血克隆(鵝卵石區域)的孔的稀釋物。在1微摩爾的測試濃度下,在培養5天后,4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)在得自mPBCD34+HSC的鵝卵石區形成細胞的數目方面激發產生的增加比僅用DMSO處理的對照培養物高2倍。

表面抗原分析:將細胞用染色培養基(含有FBS(2%)和EDTA(2mM)的Hanks緩沖鹽溶液)洗滌并用所示初級軛合抗體對其進行染色(4℃下30分鐘)。用之前所述的緩沖液對細胞進行洗滌并用BD?LSR?II流式細胞器(Becton?Dickinson,San?Jose,CA)對其進行分析。用488-nm氬氣和633-nmHeNe激光束作為激發光源,以最多1000個細胞/秒的速率使細胞流通。用對數擴增測量104個細胞的發射并用FlowJo軟件(TreeStar?Inc.Ashland,OR)對其進行分析。使用用初級軛合的同類型對照抗體染色的細胞來測定背景熒光。

CD34+細胞亞型的測定:由細胞培養物的等分試樣測定CD34+細胞亞型的百分比。將細胞用APC抗-Thy1.1、PerCP抗-CD34、PECy7抗CD45RA、FITC抗CD38和PE抗-CD133抗體染色以測定CD34+Thy1.1+、CD34+CD45RA-、CD34+CD38-、CD133+CD38-和CD34+CD133+細胞。CD34、CD38、Thy1.1和CD45RA的抗體購自Becton?Dickinson,CD133的抗體購自Miltenyi?Biotec。這些亞型的FACS分析結果是以總種群的百分比形式給出的。培養物中各細胞群的絕對數是由細胞的總數乘以各種群的百分比來進行計算的。用CB?CD34+細胞開始,在5周后,用1微摩爾4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)處理的細胞的培養物中的細胞總數平均比對照培養物高2倍。更重要的是,4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)培養的細胞的>50%是CD34+,相比而言,基質培養的細胞中的CD34+<10%,其比對照的CD34+細胞擴增高10倍,比輸入細胞的擴增高10,000倍。此外,存在1微摩爾的4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)同時增加了CD34+亞群——CD34+CD45RA-、CD34+CD38-、CD133+CD38-和CD34+CD133+的百分比和總數,使得各亞型產生了高于30倍的凈擴增。

人CD34+細胞向NOD.CB17-Prkdcscid小鼠(NOD/SCID)的移植:為了對CD34+細胞及所培養的其后代的體內種群恢復能力進行評估,將未進行培養的CD34+細胞或用基質或試驗化合物培養4天(mPB)或21天(CB)后的培養CD34+細胞的后代通過眼眶后途徑靜脈內注射到用亞致死量進行了輻射(3.0Gy)的8至10周大的NOD/SCID(對于mPB?HSC實驗而言)或NOD/SCIDgc-/-(對于CB?HSC實驗而言)小鼠體內。為了對移植物移入進行監測,每周眼眶后取血并用紅細胞溶解溶液(Qiagen,Valencia,CA)對其進行處理以除去紅細胞,用染色培養基洗滌,用流式細胞計量術進行分析。通過探測血液中的抗-人CD45+細胞來測量移植物移入。在移植10周后,將小鼠處死;由肱骨和脛骨收集BM。將BM細胞用染色培養基洗滌并用抗人抗體染色。在培養后,如之前所述,將該混懸液用紅細胞溶解溶液(Qiagen,Valencia,CA)處理以除去紅細胞,用染色培養基洗滌,用流式細胞計量術分析。在移植物移入10周后,得自用1微摩爾濃度的4-(2-(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-基氨基)乙基)苯酚(化合物1,表1;實施例1)培養的mPB和CB的HSC在人細胞百分比方面產生了統計學顯著的增加。

目標鑒定

為了確定本發明化合物擴增未分化狀態HSC的機理,分析用實施例1和活性稍低(~20倍)的實施例1的類似物(2-(苯并[b]噻吩-3-基)-N-(3-(3,5-二甲基-1H-吡唑-4-基)丙基)-9-異丙基-9H-嘌呤-6-胺)處理24小時的mPB-派生的CD34+細胞的全基因組轉錄特性。在用實施例1處理時,在所分析的>50,000個探針組中,僅有5個基因被上調超過3倍,無活性類似物也對大多數基因產生了一定程度的誘導。此外,用1μM實施例1處理時,5個基因的下調>70%。用無活性類似物處理時,所有基因都以劑量依賴性方式被下調并且沒有任何一種受到顯著影響。實施例1處理抑制最高的兩種基因(細胞色素P450?1B1[CYP1B1]和芳香烴受體抑制因子[AHRR])受芳香烴受體(AHR)轉錄調節。因此,本發明化合物可作為AHR信號轉導的拮抗劑。

用qPCR進一步測定了實施例1化合物阻斷mPB-派生的CD34+細胞中2,3,7,8-四氯二苯并-對-二惡英(TCDD,二惡英)介導的CYP1B1?mRNA表達的能力。用TCDD(3nM)處理使得CYP1B1?mRNA水平比基質對照(0.01%甲苯)增加了4.5倍。實施例1以劑量依賴方式抑制了這種增加,表明本發明化合物可拮抗AHR信號轉導。為了測定實施例1在AHR轉錄中的作用,對實施例1抑制二惡英誘導的AHR依賴性熒光素酶受體基因試驗的能力進行分析。當用于表達人AHR的細胞上時,包含實施例1(1μM)完全消除了二惡英-誘導的AHR依賴性轉錄。實施例1的滴定顯示了127nM的EC50,表明實施例1是一種有效的AHR拮抗劑。有趣的是,實施例1在鼠科動物細胞中僅微弱抑制了二惡英誘導的轉錄并且對大鼠細胞沒有活性,表明實施例1選擇性地抑制人AHR。其與實施例1對鼠科動物HSC沒有活性有關,并且可以解釋實施例1的物種選擇性。最后,實施例1對鼠科動物或大鼠細胞僅具有弱的激動活性,并且在人細胞中不能誘導AHR依賴性轉錄。

為了進一步探查AHR信號在HSC中的作用,對兩種其它AHR拮抗劑(α-萘黃酮和CH-223191)進行了分析。當與mPB-派生的CD34+細胞一起培養7天時,兩種化合物在CD34+細胞數目方面都導致了劑量依賴性的增加:包含1μM?CH223191提供了2.2倍的CD34+細胞擴增;0.75μM?α-萘黃酮提供了1.9-倍的CD34+細胞擴增,而0.75μM實施例1提供了3.4倍的總CD34+細胞擴增。為了表明AHR在實施例1誘導的HSC擴增中的直接作用,用含有共表達GFP的shRNA-靶向AHR的慢病毒載體顆?;蚨哉詹《敬砣薈B-派生的CD34+HSC。在轉導后48小時,通過細胞分選對CD34+GFP+細胞進行純化,用qPCR測定AHR水平。在轉導后,兩種AHR靶向shRNA都導致AHR表達降低(sh111為81%,sh242為51%)。在缺乏GFP的細胞中或在用對照病毒轉導的細胞中沒有看到這些降低。具有降低的AHR表達的CB-派生的CD34+細胞表現出與用實施例1處理的具有CD34+持續表達的細胞類似的表型。這些數據表明,用本發明化合物抑制AHR活性足以促進HSC的離體擴增。

由人新生兒臍帶血擴增HSC的方法

所用培養基是補加有如下重組人細胞因子的StemSpan?SFEM(StemCell?Technologies,Cat.#09650):TPO、IL6、Flt3配體和SCF,其終濃度均為50ng/mL。培養基是在當天使用時新制備的。

在培養基中稀釋化合物:使用本發明化合物的10,000x濃縮液進行稀釋。分兩步將化合物加到培養基中。第一步是1∶100稀釋(在一個1.5mL離心管[USA?Scientific,Cat#1615-5500]中將10μL?10,000x濃縮液加入到990μL完全培養基(含有細胞因子)中)從而產生化合物在培養基中的100倍溶液。第二步是用將用于開始細胞培養的培養基進行1∶100稀釋??梢愿萜甏?CB)CD34+細胞的輸入數量改變培養物的體積。例如,將1x106個CB?CD34+細胞接種到20mL培養基(5x104個細胞/mL)中。在這種情況中,將200μL?100倍的實施例1溶液加入到位于50mL錐形管(BectonDickinson,Cat#352098)中的20mL培養基中以達到終濃度(見表3)。

細胞培養開始:用純化的人CB?CD34+細胞來進行離體擴增實驗。在解凍后,用臺盼藍排除法分析,細胞活力高于50%。將解凍的細胞用培養基(無細胞因子或本發明化合物如實施例1的化合物)稀釋并將其在300g下在25℃下離心8分鐘。在吸取上清液后,將沉積物用適宜體積的培養基(5x104個細胞/mL,表3)重新混懸,然后將其注射(22號針,Air-Tite產品;20mL注射器,BD?cat#309661)到AFC袋(表5)中用于直接培養。將細胞在37℃下在5%CO2中培養。

向細胞培養物中加入培養基:對于最多80mL的培養基體積而言,使用上面的操作(用培養基稀釋化合物)。對于高于80mL的培養基體積而言,首先在10mL錐形管(Corning,Cat#430052,表4)中進行1∶100稀釋。第二步是在無菌容器(BD?Falcon,Cat#354015)中用所述培養基進行1∶100稀釋,將其加入到AFC袋(22號針,Air-Tite產品;60mL注射器,BD?cat#309653)中。

表3.用于開始臍帶血派生的CD34+細胞擴增的實施例1的稀釋液

表4.用于將培養基加入到臍帶血派生的CD34+細胞擴增的實施例1的稀釋液

表5.American?Fluoroseal?Corporation袋的體積限制

??AFC袋目錄號
??最佳擴增的體積(mL)
??袋的最大體積(mL)
??1PF-0007
??7
??7
??2PF-0032
??32
??32
??2PF-0072
??71
??130
??2PF-0118
??118
??245
??2PF-0197
??179
??580
??2PF-0225
??225
??665
??2PF-0270
??270
??960
??2PF-750C
??750

可以用相同的方案由得自用于自體移植物移植的患者的動員的外周血細胞開始。

也可制備一種適于以輸注形式靜脈內給藥的組合物,該組合物包含具有擴增了的HSC的細胞群。為了制備用于輸注的細胞,通過在300g下離心10分鐘來使培養的細胞成團并將其以106至108個細胞/ml的濃度重新混懸于由5%HAS(Baxter)組成的輸注緩沖液中。

應當清楚的是,本文所述的實施例和實施方案僅僅是為了進行說明,本領域技術人員根據這些說明可以進行許多變形或改變,這些變形或改變都被包括在本發明的主旨和范圍以及所附權利要求書的范圍內。本文所引用的所有公開物、專利和專利申請都被引入本文作為參考用于所有目的。

   內容來自專利網维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn轉載請標明出處

關于本文
本文標題:擴增造血干細胞的化合物.pdf
鏈接地址://www.vmyqew.com.cn/p-6419585.html
關于我們 - 網站聲明 - 網站地圖 - 資源地圖 - 友情鏈接 - 網站客服 - 聯系我們

[email protected] 2017-2018 www.vmyqew.com.cn網站版權所有
經營許可證編號:粵ICP備17046363號-1 
 


收起
展開
债市怎么赚钱的 玩狼人杀当房主赚钱 盛达娱乐苹果 像天天头条一样可以赚钱的软件 挖矿赚钱软件苹果手机游戏 钓鱼模拟世界怎么赚钱 捕鱼大亨2018免费下载 现在加盟利安赚钱吗 哪个证挂出去最赚钱 通乳师赚钱么 神武天策容易赚钱吗 河南麻将下载 碳粉厂赚钱吗 50个赚钱 赌博麻将app 剑侠情缘2做武器赚钱吗