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维戈塞尔塔对莱万特: 一種枯草芽孢桿菌菌株及其應用.pdf

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一種 枯草 芽孢 桿菌 菌株 及其 應用
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摘要
申請專利號:

CN201310200215.3

申請日:

2013.05.27

公開號:

CN103266074B

公開日:

2014.09.17

當前法律狀態:

授權

有效性:

有權

法律詳情: 授權|||專利申請權的轉移IPC(主分類):C12N 1/20變更事項:申請人變更前權利人:山東蔚藍生物科技有限公司變更后權利人:山東蔚藍生物科技有限公司變更事項:地址變更前權利人:251719 山東省濱州市惠民縣經濟開發區(石廟鎮沙窩林?。┍涓筧ɡ?251719 山東省濱州市惠民縣經濟開發區(石廟鎮沙窩林?。┍涓孿?申請人變更后權利人:山東康地恩生物科技有限公司登記生效日:20131017|||實質審查的生效IPC(主分類):C12N 1/20申請日:20130527|||公開
IPC分類號: C12N1/20; A23K1/16; C12R1/125(2006.01)N 主分類號: C12N1/20
申請人: 山東蔚藍生物科技有限公司; 山東康地恩生物科技有限公司
發明人: 陳琳; 王增元
地址: 251719 山東省濱州市惠民縣經濟開發區石廟鎮沙窩林場
優先權:
專利代理機構: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201 代理人: 曾慶國
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310200215.3

授權公告號:

103266074B|||||||||

法律狀態公告日:

2014.09.17|||2013.11.06|||2013.09.25|||2013.08.28

法律狀態類型:

授權|||專利申請權、專利權的轉移|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明的目的是提供一株枯草芽孢桿菌及其在畜禽養殖中的應用,所述枯草芽孢桿菌篩選自健康仔豬的新鮮糞樣,具有很強的產淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的能力,可作為飼料添加劑應用于畜禽飼料中,能有效提高養殖動物的生產性能,應用前景廣闊。

權利要求書

權利要求書
1.   一種枯草芽孢桿菌,其特征在于,所述的枯草芽孢桿菌的保藏編號為CCTCC NO: M 2013222。

2.   權利要求1所述的枯草芽孢桿菌作為飼料添加劑的應用。

3.   一種微生物制劑,所述的微生物制劑包含有權利要求1所述的枯草芽孢桿菌。

4.   權利要求3所述的微生物制劑,其特征在于,所述的微生物制劑為權利要求1所述的枯草芽孢桿菌的菌粉。

5.   權利要求4所述的微生物制劑的應用方法,是將所述的微生物制劑按質量百分比為0.2%?0.8%添加至畜禽飼料中。

說明書

說明書一種枯草芽孢桿菌菌株及其應用
技術領域
本發明屬于微生物篩選、應用技術領域,具體涉及一種枯草芽孢桿菌菌株及其應用。
背景技術
在畜禽類養殖中,抗生素因能有效的減少畜禽的發病率,提高畜禽生長效率而被廣泛應用于畜禽飼料中。但抗生素濫用引起的問題日益受到關注,例如耐藥性病原菌增加,畜禽產品藥殘超標、影響畜禽腸道內微生態平衡和畜禽食品安全性等。對此歐盟已全面禁止飼料中使用抗生素促生長飼料添加劑。為了應對這些問題,采用益生菌微生態制劑來替代抗生素成為當前畜禽養殖的熱點。
益生菌在其生長代謝過程中,會分泌產生多種酶類,如淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶等,這些酶的產生可提高飼料利用率,提高動物生長性能。其次益生菌其自身作為一種單細胞蛋白,也可作為動物營養的一部分,促進動物生長。因此,微生態制劑作為一種新型的無毒副作用、無耐藥性、無殘留的抗生素替代品具有廣闊的研究和開發前景。但制備微生物制劑首先需要篩選出具有良好效果的益生菌。
發明內容
本發明的目的是提供一株枯草芽孢桿菌及其在畜禽養殖中的應用,所述枯草芽孢桿菌篩選自健康仔豬的新鮮糞樣,具有很強的產淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的能力,可作為飼料添加劑應用于畜禽飼料中,以彌補現有技術的不足。
本發明一方面提供了一株枯草芽孢桿菌,該菌株命名為枯草芽孢桿菌BW2(Bacillus subtilis BW2),已于2013年5月20日保藏于中國武漢 武漢大學的中國典型培養物保藏中心,其保藏編號為CCTCC NO: M 2013222。
本發明的枯草芽孢桿菌BW2應用于飼料添加劑領域。
本發明的另一個方面提供一種包含上述枯草芽孢桿菌BW2的微生物制劑。
上述的微生物制劑為枯草芽孢桿菌BW2的菌粉,按質量百分比為0.2%?0.8%的比例添加至畜禽飼料中。
本發明的枯草芽孢桿菌BW2具有很高的產酶能力,可作為飼料添加劑應用于畜禽飼料中,能有效提高養殖動物的生產性能,應用前景廣闊。
具體實施方式
實施例1 枯草芽孢桿菌BW2分離篩選及鑒定:
1、菌株初篩
采集健康仔豬新鮮糞樣6份,分別稱取5g樣品,加入45mL無菌水,制備成懸液,經80℃水浴處理殺死非芽孢營養體后,涂布于LB平板上,37℃培養48小時,獲得48株芽孢桿菌。
2、產酶芽孢桿菌篩選
1)α?淀粉酶檢測:
淀粉培養基:蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g、蒸餾水1000ml、瓊脂粉20g。
將分離到的菌株點種到培養基上,37℃培養24?48小時,在培養基表面滴加適量碘液使均勻布滿整個平板,如果菌落周圍出現無色透明圈,說明淀粉已被水解。
2)蛋白酶檢測:
牛奶培養基:脫脂牛奶50ml、蒸餾水50ml、瓊脂粉1.5g。
將分離到的菌株點種到牛奶培養基,37℃培養24?48小時,如果菌落周圍有透明圈產生說明酪蛋白已經被水解。
3)纖維素培養基:營養瓊脂+0.5%CMC。
將分離到的菌株點種到纖維素培養基,37℃培養24?48小時,用0.1%剛果紅溶液染色30分鐘,再用1moL/L氯化鈉脫色20分鐘左右,如果菌落周圍出現透明水解圈,說明CMC已經被水解。
4)經過產酶實驗,篩選得到一株淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶產量均較高的菌株,對此菌株進一步鑒定分析。
3、芽孢桿菌分類學鑒定
采用分子生物學的方法對篩選得到的高產酶菌株進行鑒定,測得其16s rDNA序列,在GenBank核酸數據庫中進行blast比對,通過序列比對確認為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis),命名為枯草芽孢桿菌BW2(Bacillus subtilis BW2),并于2013年5月20日保藏于中國武漢 武漢大學的中國典型培養物保藏中心,保藏編號為CCTCC NO: M2013222。.
實施例2:枯草芽孢桿菌BW2產酶實驗
1、α?淀粉酶檢測:
淀粉培養基:蛋白胨10g、牛肉膏5g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g、蒸餾水1000ml、瓊脂粉20g。
將分離到的菌株點種到培養基上,37℃培養24?48小時,在培養基表面滴加適量碘液使均勻布滿整個平板,如果菌落周圍出現無色透明圈,說明淀粉已被水解。測量透明圈直徑與菌落直徑的比值。
2、蛋白酶檢測:
牛奶培養基:脫脂牛奶50ml、蒸餾水50ml、瓊脂粉1.5g。
將分離到的菌株點種到牛奶培養基,37℃培養24?48小時,如果菌落周圍有透明圈產生說明酪蛋白已經被水解。測量透明圈直徑與菌落直徑的比值。
3、纖維素培養基:營養瓊脂+0.5%CMC。
將分離到的菌株點種到纖維素培養基,37℃培養24?48小時,用0.1%剛果紅溶液染色30分鐘,再用1moL/L氯化鈉脫色20分鐘左右,如果菌落周圍出現透明水解圈,說明CMC已經被水解。測量透明圈直徑與菌落直徑的比值。
枯草芽孢桿菌BW2的產酶情況如下表所示:

由表中可以看出,枯草芽孢桿菌BW2具有很強的產淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶能力,三種酶的透明圈直徑與菌落直徑比均在5.0左右,因此本發明篩選的枯草芽孢桿菌BW2在動物微生態的應用上有很大的潛力。
實施例3:枯草芽孢桿菌BW2菌粉的制備
1、種子液制備:挑一環新鮮的枯草芽孢桿菌BW2菌泥,接種于100mLLB培養基中(500mL三角瓶裝液100mL),37℃、200rpm培養12?16h即成種子液;
2、發酵培養:將上述種子液以5?10%接種量接種至滅菌營養肉湯培養基中,37℃、200rpm培養28?32h,鏡檢芽孢產率在95%以上時停止發酵培養;
3、菌粉制備:將發酵液離心(8000rpm,5min)收集菌體,加入糊精攪拌混勻,真空冷凍干燥,制成菌量為500?1000億/g的枯草芽孢桿菌BW2菌粉。
實施例4:枯草芽孢桿菌BW2對肉雞生產性能的影響
將240只生長良好、體重相近的21日齡肉雞隨機分為2組,每組6個重復,每個重復20只,Ⅰ組為對照組,飼喂普通商品日糧,Ⅱ組為實驗組,在普通商品日糧基礎上添加質量百分比為0.2%的枯草芽孢桿菌BW2粉劑。試驗期為21天,測量肉雞的平均日增重和料肉比。實驗結果如下表所示:
組別平均日增重(g)料肉比62.42±4.731.57±0.08b65.28±4.691.41±0.09a
由上表中試驗結果可以看出,21日齡肉雞飼養21天以后,Ⅱ組(實驗組)肉雞平均日增重比Ⅰ組(對照組)增加2.86g,肉雞料肉比降低0.13,與Ⅰ組(對照組)差異顯著(P<0.05)。本試驗結果表明日糧中添加枯草芽孢桿菌BW2能顯著提高肉雞的生產性能,降低日糧成本,增加經濟收益??薟菅挎吒司鶥W2在肉雞飼料中添加有很好的應用前景?!  ∧諶堇醋宰ɡ鴚ww.www.vmyqew.com.cn轉載請標明出處

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