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维戈塞尔塔对毕尔: 一種發形霞水母過氧化物還原酶及其編碼基因與應用.pdf

摘要
申請專利號:

维戈塞尔塔vs皇家社会 www.vmyqew.com.cn CN201310188702.2

申請日:

2013.05.21

公開號:

CN103255113B

公開日:

2015.01.14

當前法律狀態:

有效性:

法律詳情: 授權|||實質審查的生效IPC(主分類):C12N 9/08申請日:20130521|||公開
IPC分類號: C12N9/08; C12N15/53; C12N15/70; A61K38/44; A61K48/00; A61P39/06; A61P17/16; A23L3/3571 主分類號: C12N9/08
申請人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
發明人: 張黎明; 阮增良; 柳國艷; 周永紅; 張博; 常銀龍; 鄭杰民; 王倩倩
地址: 200433 上海市楊浦區翔殷路800號
優先權:
專利代理機構: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268 代理人: 趙青
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310188702.2

授權公告號:

103255113B||||||

法律狀態公告日:

2015.01.14|||2013.09.18|||2013.08.21

法律狀態類型:

授權|||實質審查的生效|||公開

摘要

本發明屬于生物醫藥技術領域,目前尚未見對水母過氧化物還原酶的有關研究報道。本發明提供了一種發形霞水母過氧化物還原酶,所述的發形霞水母過氧化物還原酶,具有如SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列組成的蛋白質。本發明還提供了發形霞水母過氧化物還原酶的編碼基因,具有如SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。同時,本發明還提供了發形霞水母過氧化物還原酶及其編碼基因在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑、抗衰老藥物等中的應用。本發明具有較大的臨床應用價值。

權利要求書

權利要求書
1.   一種發形霞水母過氧化物還原酶,其特征在于,所述的發形霞水母過氧化物還原酶具有如下(?。┗潁áⅲ┑牡鞍字剩?BR>(ⅰ)具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列組成的蛋白質;
(ⅱ)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列經取代、缺失和/或添加一個或幾個氨基酸且同等功能的由(?。┭萇牡鞍字?。

2.   根據權利要求1所述的一種發形霞水母過氧化物還原酶,其特征在于:所述的發形霞水母過氧化物還原酶具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列,該蛋白含有信號肽,為分泌蛋白,定位于細胞外,分子量27.9kDa,等電點為6.3。

3.   一種如權利要求1所述的發形霞水母過氧化物還原酶的編碼基因,其特征在于,該編碼基因為如下(ⅰ)或(ⅱ)的DNA分子:
(ⅰ)具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;
(ⅱ)與SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列同源性在80%以上的核苷酸序列。

4.   根據權利要求3所述的所述的一種發形霞水母過氧化物還原酶的編碼基因,其特征在于:所述的發形霞水母過氧化物還原酶的編碼基因,該核苷酸序列全長884bp,包含一個744bp的開放閱讀框。

5.   一種如權利要求2所述的發形霞水母過氧化物還原酶的制備方法,其特征在于,該方法包括如下步驟:
(A)構建發形霞水母觸手組織cDNA文庫;
(B)對上述發形霞水母觸手組織cDNA文庫重組克隆的序列進行測定和分析,獲得一個編碼過氧化物還原酶的核苷酸序列;
(C)構建發形霞水母過氧化物還原酶的表達質粒,重組工程菌;
(D)發形霞水母過氧化物還原酶的表達;
(E)重組發形霞水母過氧化物還原酶的純化。

6.   根據權利要求5所述的發形霞水母過氧化物還原酶的制備方法,其特征在于:所述步驟(A)中的發形霞水母觸手組織cDNA文庫通過如下方法構建:
a)抽提發形霞水母觸手組織總RNA;
b)分離mRNA,合成發形霞水母觸手組織cDNA;
c)將上述cDNA插入pUC19質粒載體,再轉化至大腸桿菌DH5α中,涂布于LB培養基平板進行藍白斑篩選,即構建成發形霞水母觸手組織cDNA文庫。

7.   根據權利要求5所述的發形霞水母過氧化物還原酶的制備方法,其特征在于:所述步驟(C)中的構建發形霞水母過氧化物還原酶的表達質粒,重組工程菌,具體步驟為:
a)設計并合成PCR引物如下:
上游引物如SEQ ID NO:3所示,
下游引物如SEQ ID NO:4所示,
PCR反應條件為:95℃保溫5min;95℃保溫30sec,55.5℃保溫30sec,68℃保溫1min,30個循環;68℃保溫5min;
b)酶切回收后的PCR產物及pET24a原核表達質粒;
c)利用兩個酶切位點將編碼序列連接到pET24a載體上,構建重組表達質粒,然后轉化到大腸桿菌Rosetta獲得重組工程菌。

8.   根據權利要求5所述的發形霞水母過氧化物還原酶的制備方法,其特征在于:所述步驟(D)中的發形霞水母過氧化物還原酶的表達條件為:12℃,0.5mM IPTG,150rpm/min下誘導10小時。

9.   一種如權利要求1或2所述的發形霞水母過氧化物還原酶在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。

10.   一種如權利要求3所述的發形霞水母過氧化物還原酶的編碼基因在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。

關 鍵 詞:
一種 發形霞 水母 過氧化物 還原酶 及其 編碼 基因 應用
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